PRODUCCION DE METABOLITOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS

TEMA 6. PRODUCCIÓN DE AMINOÁCIDOS

Producción de metabolitos primarios y secundarios

Metabolitos primarios…son moléculas de bajo peso molecular

que intervienen, bien como productos finales o intermediarios,
en las distintas rutas anabólicas y catabólicas

aminoácidos, vitaminas, nucleotidos,

alcoholes, ácidos orgánicos

1) Son necesarios para el crecimiento del microorganismo que

los produce.
2) Se producen como productos únicos
3) Son producidos por todos los microorganismos (son
universales).
4) La producción no puede perderse fácilmente por
mutación espontánea
Producción de metabolitos primarios y secundarios

Metabolitos secundarios….. se producen cuando la velocidad

de crecimiento es baja, no tienen pues una función esencial
en el crecimiento

antibióticos, toxinas, alcaloides,

pigmentos

1) Generalmente se producen como mezclas de productos

muy relacionados químicamente entre sí.
2) La producción puede perderse fácilmente por mutación
espontánea
3) Cada uno de estos productos es producido por un grupo
muy reducido de organismos
latencia exponencial estacionaria muerte

Trofofase
(metabolismo
Primario)

Idiofase
(metabolismo
secundario). Solo
observado en
algunos
microorganismos
Producción de metabolitos primarios: AMINOÁCIDOS

Uso comercial de los aminoácidos

…en la industria alimentaria …..>90%
1) Como aditivos de piensos y de alimentos
2) Potenciadores del sabor
2) Antioxidantes.
3) Edulcorantes

…en la industria química… <10%

1) Manufactura de polímeros
2) Manufactura de pieles sintéticas
3) Fabricación de cosméticos
4) En la fabricación de herbicidas

…en medicina
PRODUCCION DE AMINOACIDOS

Extracción de aa de hidrolizados de proteínas, (L-cisteína, L-leucina,

L-tirosina).
Por síntesis química. D, L-alanina, D, L-metionina, D, L-triptófano, D,
L-glicina.

Por producción microbiologica.

1) Biotransformación directa. (L-glutámico, L-lisina)

2) Por conversión de un producto intermediario barato

vía biosíntesis. Ej. La glicina es convertida en serina.

3) Enzimas o células inmovilizadas producidas por

microorganismos; ejemplo: la amino acilasa específica de
Aspegillus orizae para separar una mezcla de aa D, L que ha
sido acetilada químicamente (met, ala, gly).
Regulación de la biosintesis de aminoácidos por retroalimentación (feedback)
Glutamato ( ) Prolina ( )

Enzima
activa

Enzima
inactiva

Regulación de la biosíntesis de aminoácidos por represión

Inactivo Represor
argR

Activo + arginina

argC argB argH

Promotor Genes estructurales

 A
A A

()
X X X
B
B B

C C
C
D G
A A A A E F H
P3
P1
P1 P2 P1 P2 P2
REGULACION POR REGULACION
ISOENZIMAS CONCERTADA

REGULACIÓN
ACUMULATIVA
Metabolitos primarios…

I- ALTERACION DE LA REGULACION POR

RETROALIMENTACION…
1) Alteración de la acumulación de productos finales
Ornitina, Lisina, Valina
Mutantes auxótrofos
2) Mutantes resistentes a la regulación por
retroalimentación
Lisina y Treonina, Isoleucina
Mutantes resistentes análogos

II- ALTERACION DE LA PERMEABILIDAD…

L-glutámico
Producción de metabolitos primarios
I- ALTERACION DE LA REGULACION POR
RETROALIMENTACION…
1) Alteración de la acumulación de productos finales….
……se acumula un producto intermediario

Enzima a Enzima b Enzima c Enzima d

A B C D E

Enzima a Enzima b Enzima c Enzima d

A B C D E
Producción de metabolitos primarios

I- ALTERACION DE LA REGULACION POR

RETROALIMENTACION…
1) Alteración de la acumulación de productos finales

Superproducción de L-ornitina por Corynebacterium glutamicum.

Mutante auxótrofo para Arginina

Glutámico N-Acetil-Glutamil-P N-Acetil Ornitina Citrulina

Mutación

N-Acetil Glutámico Semiladehido N-Acetil Glutámico ORNITINA

ARGININA Arginosuccinato
Producción de metabolitos primarios

I- ALTERACION DE LA REGULACION POR

RETROALIMENTACION…
1) Alteración de la acumulación de productos finales
se acumula otro producto final

P1 Superproducción

A B

P2

Superproducción de L-lisina por Corynebacterium glutamicum en

mutantes auxótrofos para metionina, treonina e isoleucina
Obtención de mutantes auxótrofos
mutagénesis penicilina
Etil
metano
sulfonato

Medio mínimo +ARGININA -ARGININA

MM+ ARGININA
MM+ARGININA
MM+ARGININA
I- ALTERACION DE LA REGULACION POR
RETROALIMENTACION…
1) Alteración de la acumulación de productos finales
Ornitina, Lisina, Valina
Mutantes auxótrofos
2) Mutantes resistentes a la regulación por
retroalimentación de rutas ramificadas
Lisina y Treonina, Isoleucina
Mutantes resistentes análogos
Mutantes resistentes a la regulación por retroalimentación (rutas
ramificadas)
Biosíntesis de lisina en Escherichia coli
ASPARTATO
1
aspartokinasa
3
2
ASPARTIL FOSFATO

SEMIALDEHIDO ASPARTICO
ACIDO
DIHIDRODIPICOLINICO HOMOSERINA

TREONINA
ACIDO
DIAMINOPIMELICO
METIONINA ISOLEUCINA
LISINA
Mutantes resistentes a la regulación por retroalimentación (rutas
ramificadas)
Biosíntesis de lisina en Escherichia coli represión
retroalimentación
ASPARTATO
1
aspartokinasa
3
2
ASPARTIL FOSFATO

SEMIALDEHIDO ASPARTICO
ACIDO
DIHIDRODIPICOLINICO HOMOSERINA

TREONINA
ACIDO
DIAMINOPIMELICO

METIONINA ISOLEUCINA
LISINA
Mutantes resistentes a la regulación por retroalimentación (rutas
ramificadas)
Biosíntesis de lisina en Corynebacterium glutamicum
represión
ASPARTATO retroalimentación
aspartokinasa Mutantes resistentes
a AEC
ASPARTIL FOSFATO

SEMIALDEHIDO ASPARTICO
Homoserina
ACIDO deshidrogenasa
DIHIDRODIPICOLINICO HOMOSERINA

TREONINA
ACIDO
DIAMINOPIMELICO

METIONINA ISOLEUCINA
LISINA
Mutantes resistentes a la regulación por retroalimentación (rutas
ramificadas)
Biosíntesis de lisina en Corynebacterium glutamicum

Características de los microorganismos

superproductores de lisina:
1.Mutantes con un bloqueo en la homoserina deshidrogenasa
(auxotrofos de treonina, metionina e isoleucina)
2. Mutantes homoserina deshidrogensa hipersensible a la
inhibición por treonina.
3. Mutantes resistentes a AEC (s-β-aminoetil-L-cisteína).

NH2-(CH2)2-CH2-CH2-CHNH2-COOH Lisina

NH2-(CH2)2-S-CH2-CHNH2-COOH S-aminoetil cisteina AEC

Mutantes
regulatorios,
retrocruzamiento
con la cepa parental
para mejorar su
crecimiento
 Ruta de biosíntesis de lisina
Glucosa

Fosfoenol piruvato
Leucina

Ciclo TCA Acido oxalacético

L-aspartato
Aspartokinasa
Se puede aumentar LysC
la producción de L-Aspartil fosfato
lisina aumentando Threonina
la producción de
Semialdehido aspartico
oxalacetato
precursor del
Isoleucina
aspartato, mediante
la amplificación de L-Lisina
la piruvato
carboxilasa (pyc)
Mutantes resistentes a la regulación por retroalimentación (rutas
no ramificadas)
Biosíntesis de prolina en Serratia marcensens

(1) (2) (3)

L-Glutámico ----------- B -------------------- C ---------- D -------------- Prolina
Glutamato glutámico No pirrolina-S
kinasa semialdehido enzimática carboxilato
deshidrogenasa reductasa
Mutantes resistentes a la regulación por retroalimentación (rutas
no ramificadas)
prolina 3,4-dehidroprolina Acido 4-tiazolidin carboxilico

Para superproducir prolina

1) Se aislaron mutantes resistentes a 3,4-dehidroprolina (análogo de prolina).
2) Se inactivó el gen que codifica la enzima la prolina oxidasa.
3) Serratia marcensens se cultivo en medio con alta concentración de sales

Cuando una ruta esta regulada a varios niveles, la cepa productora debe
llevar una mutación cada nivel.
 Corynebacterium glutamicum

Metabolitos primarios…

II- ALTERACION DE LA
PERMEABILIDAD…L-glutámico

Uso: potenciador del sabor

Microorganismo: Corynebacterium glutamicum,
Brevibacterium, Microbacterium y Artrobacter

Características de los microorganismos

superproductores de glutamato:
1. Deficiencia en la α–cetoglutarato deshidrogenasa
2. Incremento en la glutamato deshidrogenasa
3. Requerimiento nutricional de biotina
glutamato
Metabolitos primarios…

II- ALTERACION DE LA PERMEABILIDAD…

L-glutámico

NADPH2 NADP
COOH CO2 COOH NH3
COOH
CH2 NADP NADPH2 CH2
CH2
HC-COOH CH2 CH2
HC-OH Isocitrato Glutamato
C=O HC-NH2
Deshidrogenasa Deshidrogenasa
COOH (descarboxilación COOH (aminación COOH
oxidativa) reductiva)
isocitrato α-cetoglutarato glutamato
 Glucosa Metabolitos primarios…
CO2 L-glutámico
Pirúvico Acetil CoA
CO2 CO2 Piruvato
carboxilasa
Enzima
málica Citrato
Oxalacetato CICLO
TCA
Malato Acetil CoA Aconitato
Malato sintasa

Glioxilato
Fumarato Isocitrato liasa
Isocitrato

Isocitratp
Succinato deshidrogenasa
Descarbox.
Succinil CoA CO2
α-cetoglutarato
α-cetoglutarato
NH4
deshidrogenasa
Glutamato
 Metabolitos primarios…
Biosíntesis de ácidos grasos
L-glutámico
Concentración de Biotina:
1-5 μg/ml: excreción de glutamato
15 μg/ml: (no hay excreción de
glutamato)

Acetil-CoA carboxilasa
PRODUCCIÓN DE AMINOÁCIDOS CON ENZIMAS…
L-Aspártico

Aspartasa
L-Aspártico Acido fumárico + NH3
1mM Keq =20mM

Aspartasa
L-Aspártico 2M ácido fumárico + 2M NH3