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ANALISIS INSTRUMENTAL
• Ópticas
• Electroanaliticas.
Para cualquier técnica la FER debe generar una radiación que sea lo
suficientemente potente para ser detectada y medible fácilmente. Además esa
FER debe ser estable y la potencia Po , potencia incidente, debe ser constante
durante un determinado tiempo. Es decir, durante el tiempo de duración del
análisis. Generalmente las FER están conectadas a una fuente reguladora de
potencia. Dentro de las FER hay de dos clases:
• Continuas
• De línea
Las FER continuas son aquellas que emiten radiación en forma continua en un
todas las longitudes de onda de la región espectral. Es decir son aquellas que
presentan un espectro de emisión que es una banda que va generalmente
desde la zona del UV (aproximadamente 190- 350 nm) hasta 800nm (visible). A
mayor longitud de onda esta el IR.
La emisión debe ser en un amplio rango de longitudes de onda. Suelen usarse
en técnicas que involucran moléculas como absorción, fluorescencia y
fosforescencia molecular.
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descarga colisionan con las moléculas del gas y provocan la excitación hacia
niveles energéticos superiores de los electrones del gas. Cuando esos
electrones vuelven a su estado fundamental lo hacen emitiendo radiación
continua en la zona del UV. Tienen espectro continuo en la zona del UV
Eso además hace que el máximo de emisión se desplace hacia la zona del
visible .
Fuentes de línea
Las FER de línea se caracterizan porque emiten un número limitado de bandas
muy estrechas de radiación y cada una de esas bandas de radiación abarca un
intervalo muy pequeño de longitudes de onda. Se dice que emiten líneas, un
rango muy chiquito de longitudes de onda. En los gráficos se ven líneas
(bandas muy estrechas). Este tipo de fuente se utiliza en las técnicas que
involucran átomos (absorción atómica, en emisión atómica no se usa FER)
LASER
Hay un tercer tipo de fuente, ni continúa ni de líneas, que es el láser. El láser es
una fuente de energía radiante muy intensa, que emite radiación en un ancho
de banda muy estrecho pero en forma continua. Son fuentes que presentan
una elevada resolución y suelen usarse mucho en la técnica Raman, absorción
molecular e IR
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Selector de banda
Dentro de los SB tenemos los filtros y los monocromadores
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Redes de Reflexion
El haz incide en el espejo colimador, que genera haces paralelos que inciden
en el sistema dispersivo (por ejemplo una red de reflexión. El Angulo de
incidencia es distinto al Angulo inicial) cuando la radiación incide en la red se
produce un fenómeno de difracción (fenómeno que genera la dispersión de la
radiación) y esa radiación va contra el segundo espejo y sale por la rendija de
salida, siendo lo mas estrecha posible. La cantidad de dientes de la red varia la
aliad, van desde 300 a 2500 dientes.
Prismas
En los instrumentos que tiene prisma también hay una rendija de entrada, una
lente colimadora , pero el fenómeno de dispersión ocurre por un proceso de
refracción (desvío de la dirección). Luego pasa por una lente focalizadora
(movil) hacia la ventana de salida. Hoy en día los instrumentos tienen redes. El
material del prisma varia según el uso, los prismas de cuarzo se usan en el UV
y de vidrio se usan en el visible, lo cual constituye una limitación.
Cubetas
Hay de muchos tipos y formas, según la región de trabajo (redondas,
cuadradas, de flujo, etc.)
En el UV generalmente las cubetas son de cuarzo o sílice fundido, en la región
del visible pueden ser de vidrio o plástico.
En el IR son de un vidrio especial o cubetas que tienen una ventana de NaCl
cristalino. Se seleccionan según región. Las cubetas no deben tener
imperfecciones y deben estar limpias.
Detectores
Dispositivos que tienen la función de detectar la energía radiante que les llegue
y traducirla en una señal que sea fácilmente medible, esta señal generalmente
es eléctrica. Deben tener ciertas características: deben ser estables e un
amplio intervalo de longitudes de onda, una elevada sensibilidad en la región
de trabajo, además deben presentar una elevada relación señal-ruido
(R=señal/ruido). La señal eléctrica que se genera en el detector debe ser
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Fotoeléctricos.
Son los que se utilizan en el UV , en el visible y en el IR cercano
Térmicos: se respuesta se basa en el poder calorífico que brinda la radiación
(esto se vera mas adelante),se utilizan generalmente en la zona del IR.
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Grupos B
Los otros dos tipos de detectores se basan en que cuando absorben la
radiación electromagnética provocan la promoción de electrones de la capa de
conducción a la banda de valencia, generando huecos positivos y e- que dan
lugar a una fotocorriente.
Fotodiodos: están formados por unos dispositivos que esta recubierto por un
material semiconductor. Este dispositivo esta colocado sobre una placa de
vidrio o de cuarzo y todo el conjunto esta dentro de un recipiente al vacío.
Generalmente como el material semiconductor se suele utilizar silicio o
germanio , cualquiera de los dos tienen cuatro electrones en la capa de
valencia , quiere decir que cuando se van a fabricar el detector , el fotodiodo,
colocan ese material semiconductor y a su vez le agregan como impurezas en
algunos casos Galio y en otros casos Arsénico, con el objeto de aumentar la
capacidad conductora del material. Cuando se le agrega (dopaje) As, estamos
frente a un semiconductor tipo n, cuando se le agrega Galio es de tipo p.
Registrador
Es uno dispositivo que decodifica la señal que llega y permite su lectura,
pueden ser analógicos, digitales, incorporados o no.
Esquemas
Existen diferentes tipos de instrumentos:
I-Simple haz
II-doble haz (b) en el espacio
III doble haz temporal (c)
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Simple Haz:
Es el mas sencillo. La conformación esa una FER, SB, Cubeta, Detector,
Registrador. Se dice simple haz porque de la FER, llega a la muestra
solamente un haz de radiación.
Este tipo de instrumento se calibra con blanco (de reactivo o agua destilada) El
0%T es automático, luego se pone la cubeta y se lleva a 100%T.
No conviene usarlo para hacer barrido espectral porque no hay forma de
compensar las fluctuaciones de la FER. Cuando se calibra habría que hacerlo
con el blanco para cada longitud de onda, es poco practico.
Son instrumentos sencillos, se usan para mediciones puntuales, no para hacer
curva espectrometricas
Doble Haz:
Se caracterizan en que cuando la radiación emergente del SB se divide en dos
haces, de tal manera que una parte de la radiación pasa a través de una
cubeta de referencia y la otra parte a la través de la muestra. Hay dos cubetas
(una de referencia donde va el blanco y otra con la muestra)
Doble haz temporal: a la salida de la FER hay una espejo rotatorio que hace
que la radiación pase a través de la cubeta de referencia y de la muestra
alternativamente, las señales van llegan a un único detector, se amplifica y
registra. La cuña óptica disminuye la potencia de la radiación que pasa través
de la cubeta de referencia para tener una intensidad semejante a la que
proviene de la muestra. Sino existiese la cuña, la radiación de la FER que pasa
por la cubeta no perdería potencia. En cambio si disminuye la potencia e la
muestra entonces la cuña achica la diferencia entre las intensidades de las
señales.
Arreglo de diodos
Hay un tercer grupo de instrumentos llamados instrumento multicanal o arreglo
de diodos.
Son instrumentos que tienen una conformación óptica muy sencilla pero tienen
la característica de que pueden o permiten detectar en forma simultanea
lectura en toda la región del espectro.
Registra lecturas en todas las longitudes de onda, permitiendo obtener mucha
información rápidamente.
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Esta formad por una FER seguida por la cubeta de la muestra, luego un SB fijo
y el detector que en este caso son diodos supuestos linealmente (muchos
diodos n-p soportados por un chip)
La radiación que incide sobre la muestra es policromatica, una vez que la
atraviesa el SB dispersa la radiación en sus diferentes longitudes de onda que
llegan a los diodos. Es tan rápido el proceso que la radiación policromatica no
alcanza a destruir la muestra (en caso de que la muestra sea plausible de ser
destruida por la radiación).
Procesos luminiscentes
• Fluorescencia molecular
• Fosforescencia molecular
• Quimioluminiscencia
Son técnicas de emisión. Las primeras dos también se conocen como tecnicas
fotoluminiscentes. Son técnicas donde las moléculas son excitadas por la
acción de una fuente de energía radiante.
En la quimiluminicencia las moléculas son excitadas a través de una reacción
química.
En ambos casos la excitación genera la señal analitica.
Son tecnicas mas selectivas, ya que no todas las moleculas tiene propiedades
luminiscentes.
Fundamento de la tecnica
Al aplicar radiación se excita a las moléculas de tal forma que los electrones
saltan a estados de energía superiores
Cuando una molécula es excitada absorbe energía, que le permite a los
electrones absorber energía. Los electrones tratan siempre de deshacerse de
ese exceso de energía volviendo al estado fundamental. Esta energía en
exceso se puede perder en diferentes procesos:
Procesos no radiantes
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Fluorescencia molecular
Fosforescencia molecular
Cruce entre sistemas: este proceso no radiante suele darse cuando por algún
motivo (por ejemplo un solapamiento entre diferentes niveles vibracionales de
estados electrónicos excitados singulete-triplete) los electrones pasan de un
estado excitado , singulete, a un estado excitado, triplete, que se forma con
energía transitoria, inestable, donde los electrones tienen los spines
desapareados, no siguen el principio de Pauli.
Pero aun en este estado triplete puede haber un exceso de energía que se
pierde por relajación vibracional de manera que los electrones queden en el
nivel vibracional mas bajo de ese estado triplete y de allí vuelvan al
fundamental emitiendo energía.
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Conversion externa
Puede darse otro proceso no radiante que es el proceso de conversión externa.
Ese proceso involucra la transferencia de energía entre las moléculas que son
excitadas y las moléculas del solvente. Ese proceso provoca una disminución
en la intensidad de fluorescencia y se conoce con el nombre de QUENCHING
La disminución en la intesidad tambien puede deberse a la disociación y
predisociación.
c(luz)
ΛE=hν = h ,a mayor longitud de onda menor ΔE
λ
Teoricamente toda molecula que absorbe energia puede ser luminiscente, para
estimar o determinar esto existe un parametro “rendimiento cuantico” que esta
presente en ambas técnicas
Kf
Φf =
Kf -KCES +KIE +KCI +KPD +KD
Este parámetro nos da una idea cualitativa para poder interpretar como pueden
influir factores estructurales y el entorno químico en la intensidad de
fluorescencia o fosforescencia. Este parámetro relaciona las distintas
velocidades relativas de los distintos procesos radiantes y no radiantes.
• Kf= velocidad relativa de fluorescencia
• Krv: relajación vibracional
• Kces= cruce entre sistemas
• Kce=conversión externa
• Kci=conversión interna
• Kpd= pre disociación
• Kd= disociación
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Tipo de transiciones
Uno de los factores fundamentales para que una molécula sea fluor o
fosforescente es el tipo de transiciones que presenta. Generalmente las
molecular que presentan fluorescencia son moléculas que presentan
transiciones π→π* y las que presentan fosforescencia son moléculas con
transiciones n→π* .
Como a veces esto es impredecible (si tiene o no características de fosfo o
fluorescente) se hacen siempre determinadas consideraciones. Se sabe que
generalmente para las moléculas que tengan este tipo de transiciones se parte
de que la energía de excitación ocurre a longitudes de onda partir de 250nm
hasta aproximadamente 380nm. Es decir en la región del UV. A menores
longitudes de onda, en el UV lejano, la energía es tan alta que puede darse el
proceso de la disociación de la molécula, en este caso son moléculas que
tienen transferencia σ→σ*
Susituyentes
La presencia de sustituyentes pueden variar la intensidad de fluorescencia,
fundamentalmente cuando los sustituyentes son halógenos. En los aromáticos
halogenados se produce conversión externa y eso disminuye la intensidad.
También hay moléculas que tiene grupos C=O o algún heteroatomo como N, S
donde predominan las transposiciones n →π* y esto hace que la molécula
tenga características fosforescentes.
Rigidez
Es importante la estructura en el sentido de la rigidez. Entre fluoreno y bifenilo,
por ejemplo, el grupo –CH2- en el fluoreno le brinda mayor rigidez haciendo
que tenga mayor eficiencia que aquellas que no son rígidas (se mueven). Si se
mueven están favorecidos los choques entre moléculas y por lo tanto la
conversión interna, lo cual disminuye la intensidad.
Temperatura. Debe ser óptima de tal manera que se eviten choques entre
moléculas y se vean favorecidas la conversión externa, ya que esto disminuye
la intensidad de fluorescencia
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O2 y atomos pesados
Otro factor a tener en cuanta es la presencia de átomos pesados.
Se debe elegir el solvente adecuado para evitar que estos átomos pesados
favorezca la conversión externa y disminuya la fluorescencia (por ejemplo
cuando se usa como solvente bromuro de isopropilo).
Otro factor es la presencia de O2 disuelto, en algunos casos la presencia de O2
puede generar una oxidación de las moléculas y esto hace que cambie la
estructura de las moléculas y disminuya la intensidad de fluorescencia
FER
Siempre hay una FER que provoca la excitación de las moléculas. Las FER
que se utilizan en la técnica de fluorescencia y fosforescencia molecular son
fuentes continuas. Son aquellas que emiten en un amplio rango de longitudes
de onda, el espectro que se obtiene es una banda.
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En las lámparas usadas en estas técnicas la potencia que emiten tiene que ser
de mayor intensidad que en absorción molecular.
Dentro de las FER mas comunes utilizadas están: lámparas de Xe, lámpara de
Hg a baja presión y la lámpara de Hg a alta presión. Cualquiera de las tres son
tubos de vidrio donde adentro hay gas a baja presion (salvo de la Hg a alta
presion) y tienen filamentos de los distintos componentes. Cuando se genera la
descarga electrica emiten radiación. La lampara de Hg a alta presion emite
lineas intensas de radiación en forma continua.
Selector de banda
Los selectores de banda que puede tener los fluorimetros son filtro de
interferencia, el espectrofluorimetro tiene monocromadores de red.
Cubetas
Las cubetas son de cuarzo o de vidrio, pero la característica que tienen que
presentar es que todas las caras sean transparentes (a diferencia de las de
absorción molecular).Esto se debe a que lo que vamos a medir es un señal de
fluorescencia y esta se emite en toda dirección y sentido.
Detectores
Los detectores pueden ser de cualquiera de los vistos de tipo fotoelectrico,
PMT, diodos dispuestos linealmente, etc. El detector esta colocado a 90º
respecto de la radiación incidente porque solo se necesita la señal de
fluorescencia, no la relación P/Po. Colocando el detector en cualquier otro
ángulo se asegura que lo que llega al detector es solo la señal de fluorescencia
y no hay perdida por absorción. Se necesita otro selector de banda para que al
detector solo llegue la λem.
Instrumento en fosforescencia
En fosforescencia molecular el instrumento tiene muy pocas diferencias.
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F=K´Po (1-10-εbc )
2.303εbc ( 2.303εbc ) 2 ( 2.303εbc ) 3
F=K´Po - +
1! 2! 3!
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Es una técnica muy selectiva, muy sensible y tiene la ventaja de que es una
técnica simple. Ocurre cuando una reacción química genera una especie, esa
especie esta excitada y cuando vuelve a su estado fundamental lo hace
emitiendo radiación. Esa radiación puede ser transmitida o transportada a otra
especie que luego emite radiación.
Se la define como emision de radiación electromagnética generada a traves de
una reaccion quimica, la emision ocurre en el visible y en el IR
A + B
←→ C
C* ← → C + hν → P ←
→ P*
P* ← → P + hν
Son dos caminos para legar a la emision, reaccion en medio adecuado (con
oxidante fuerte y catalizador) o transferencia d energia
A +B reaccionan, me dan una especie excitada (los electrones de C* están en
un nivel excitado) cuando vuelven lo hacen emitiendo radiación
Hν puede ser transferida a otra especie (P) provocar la excitación y cuando
vuelve al estado inicial lo hace emitiendo.
Luminometro
Solo consiste en tener un recipiente donde .. Se produce la reacción y se mide
directamente la señal que emite. Se necesita un recipiente donde se coloca la
muestra y un detector (solo detectar emisión de radiación que se genera).
Generalmente es un PMT
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Lo que hay que tener en cuenta es que la reacción ocurre muy rápidamente y
hay que medir en el momento que se logro la máxima intensidad de
quimioluminiscencia. Uno tiene que buscar el TM, porque cuando se va a hacer
una curva de calibrado, si se toma el tiempo incorrecto la intesidad es menor y
la curva ya no es tan buena. El tiempo es un parámetro muy importante (tiempo
donde se produce la máxima señal). Se debe realizar previamente un grafico
de señal función del tiempo, eso hace a la sensibilidad del metodo.
Condiciones operacionales
Se debe trabajar con soluciones testigos. Hay que controlar las variables
experimentales u operacionales . Hay determinados componentes o reactivos
que tienen características luminiscentes (siempre se usan), tiene la
característica de provocar componentes luminiscentes. El que más se usa es
luminol (a) y luciferina , este en medio alcalino en presencia de O2, tiene la
característica de formar un componente que es el 3-aminoftlalato y emitir
radiación característica a 420-425 nm. Esta intensidad de radiación a esta
longitud de onda se ve modificada por la presencia de algunos metales , por
ejemplo Cu, Fe, V, Co, ya que disminuyen la intensidad de la señal. Uno puede
determinar pequeñas cantidades de metales con estas técnicas.
Para hacer la determinación cuantitativa , se preparan testigos con distintas
concentraciones se hace la curva de calibrado y se da un resultado como
intervalo de confianza,
Con cualquiera de las tres técnicas se pueden hacer determinación de
compuestos orgánicos, inorgánicos, en pequeñas cantidades ya que son muy
sensibles y selectivas
Espectroscopia atómica
Se basa en la absorción o emisión de energi radiante por parte de átomos.
Esos átomos generan absorción o emisión que da origen a espectros de
bandas estrechas, que son aproximadamente de 10-5 a 10-2 nanómetros.
El λ+Δλ es mucho mas chico que en emision o absorción molecular
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energéticos y como consecuencia trae que haya una dispersión con respecto a
la longitud de onda de absorción.
Efecto doppler: ocurre cuando usamos como atomizador a la llama. Los
átomos de la especie en estudio por efecto térmico chocan debido al
movimiento en el interior de la llamada provocan el ensanchamiento en la
banda
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Proceso de atomizacion
Transporte de la muestra: en solución, es aspirada a través de un capilar y
transportada a traves de un tubo plastico de diametro pequeños hacia el interior
del nebulizador. La velocidad con que ingresa la muestra y los testigos debe
mantenerse siempre igual y debe ser reproducible (preparados de igual
manera). Una vez que llegan al nebulizador este transforma la solución en finas
gotas (spray), de tamaño homogéneo muy chiquitas, de tal manera que antes
de que llegan a la llama, el propio nebulizador, a traves del spoiler, es el
encargado de desechar aquellas gotas que no son homogéneas, las de mayor
tamaño. Una vez que el spray homogeneo llega a la llama (optima) ocurren tres
procesos.
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Introducccion de la muestra.
El equipo tiene una entrada para el capilar donde se introduce la muestra, esta
llega al nebulizador, se forma el spray y de allí es introducida por la parte
inferior de la antorcha de plasma hacia el cono superior que es donde se
producen los tres procesos ya vistos.
Condiciones operacionales
Una de las variables que uno debe controlar es como generar ese plasma,
regular la generacion de la radiofrecuencia. Si es muy baja o no es la optima el
plasma que se genera es un plasma con forma de lagrima y hay perdida de
muestra, no llega toda la zona de combustión maxima
La forma adecuada del plasma es como lo indica el dibujo B donde esa
antorcha tiene como una inflexión de tal manera que no deja que se escapen
las gotitas. De esta manera llega mayor cantidad de muestra.
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Como ese horno esta conectado a esos contactos eléctricos la muestra sufre
un proceso de atomización debido a un calentamiento provocado por
resistencias eléctricas (electrotérmico).
Dentro de ese horno ocurren los tres procesos ya vistos (evaporación del
solvente, volatilización o calcinación y atomización)
La evaporación del solvente ocurre a temperaturas alrededor de los 100ºC,
luego hay una etapa de calcinación que comprende entre 350 y 1500ºC. en la
ultima fase, la atomización, las temperaturas son mayores , de 1500 hasta
3000ºC, donde se logra la atomización completa de la muestra.
Este ciclo se va programando según el tipo de muestra que se tiene. Hoy en
día los equipos tardan entre 3 o 4 segundos en lograr la atomización completa.
Ventajas
Desventajas:
• Es un método muy caro
• Si por algún motivo el ciclo no es completo (no se logra la atomización
completa) y dentro del horno quedan moléculas que pueden absorber la
radiación o pueden dispersarla, conduciendo a errores.
Emisión atómica
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Generación de hidruros
Se usa cuando se quiere determinar pequeñas cantidades, trazas de Arsénico,
Selenio, Bismuto, antimonio, plomo y con la técnica de absorción atómica
propiamente dicha no se puede cuantificar.
Lo que se hace es tratar a la muestra con NaBH4 en medio acido, de tal
manera que se forme un hidruro y ese hidruro tiene la característica de ser
volátil, puede ser arrastrado por un gas y llevado directamente hacia un
atomizador. En el atomizador se descompone el hidruro y se originan los
átomos neutros en estado gaseoso de ese elemento.
3BH4 - + 3H+ + 4H3 AsO3 → H3 BO3 + 9H3 As + 3H2 O
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Ventajas:
El analito es arrastrado de la matriz y esto hace que disminuyan las posibles
interferencias por la matriz.
Vapor frío
Se utiliza para determinar pequeñas cantidades de Hg en solución. El equipo
es semejante al anterior pero se mezcla la solución de mercurio con una
solución de cloruro estañoso Cl2Sn en presencia de algún oxidante fuerte
(H2SO4 o HNO3). De esta manera esto se agita y el ion mercurio se convierte en
vapor metálico (vapor de Hg) y es arrastrado por un gas inerte hacia la cubeta
de absorción y de allí se mide directamente a la longitud de onda
característica del Hg que es 264nm
2) Otra que puede ocurrir es, sobre todo en el horno de grafito, que quede
algún metal (St,Ti) que a determinada temperatura forman óxidos con las
paredes de los hornos refractarios y esos óxidos emitan en la zona donde
emite el analito y que también enmascaren la señal a cuantificar. Este tipo de
interferencia se trata de eliminar aumentando la temperatura hasta que los
óxidos sean inestables y no interfieran en la medición.
Efecto matriz
En absorción o emision atómica es importante controlar la interferencia
provocada por la matriz del compuesto, es decir por los otros componentes
presentes. Este caso se presenta cuando debido a la presencia de compuestos
en la matriz interfieren con la muestra. Por ejemplo el Ca2+ en leche, en la
leche hay otros componentes, se debe separa al Ca2+ y atomizarlo todo, de otra
manera el resto de los constituyentes interfiere.
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Quimicas
Las interferencias químicas generalmente ocurren cuando no se tuvo en cuenta
o no se controlaron correctamente las condiciones operacionales
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Espectrometría de absorción en IR
Generación de un IR
La radiación proviene de zona del IR cercano-1500nm [E:hc/v] cuanto mayor es
la longitud de onda menor es la energía: la radiación que proviene de esa zona
no es muy intensa (como si lo es la UV. y visible).
Esa radiación no alcanza para producir transiciones electrónicas, es decir, solo
alcanza para generar cambios en las energías rotacionales y vibracionales. Es
decir que la absorción a partir de moléculas en esta zona es bastante selectiva:
no todas las moléculas son capaces de absorber radiación a esta longitud de
onda, porque para que se produzca esta absorción de energía las moléculas
deben tener un momento dipolar distinto de 0.
La absorción cambia cuando el momento bipolar de la molecula es distinto de
cero. Las moléculas no son rígidas, sino que tienen un movimiento alrededor
de un eje imaginario (movimientos vibracionales de tensión o deformación).
Eso genera un cambio en cada molécula que esta relacionado con la densidad
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de carga que hay alrededor de cada átomo y la distancia que hay entre ambos
centro de cargas.
Ejemplo HCL
H -CI
ó+ ó-
Cuando la radiación que proviene de una fuente de energía incide sobre una
molécula y la frecuencia de esa radiación coincide con al frecuencia vibracional
y rotacional propias de la molécula, se origina un cambio en el momento dipolar
de la molécula yeso produce la absorción de energía radiante. Entonces ese
cambio de momento es lo que va a medir.
Condiciones
Esa característica la tienen las moléculas formadas por heteratomos (en
general). Mientras que las moléculas homopolares (O2, N2) tienen un momento
dipolar igual a cero: esas no absorben en el IR.
El cambio de momento bipolar en estas tecnicas es irreversible.
Los espectros de moléculas sencillas son simples (con pocos picos) mientras
que en las moléculas mas complejas hay muchas bandas, que pueden
superponerse haciendo mas difícil la determinación.
La condición para que, la molécula absorba en al región IR es tener un
momento diferente de cero, entonces al momento de ser irradiada la molécula
ese momento cambie (se perturbe).
Instrumentos
Lo que existen actualmente son Dispersivos y no dispersivos.
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Inteferómetro
El interferómetro es que el reemplaza al monocromador y la diferencia que
tiene con este es que solo permite que pase una rango estrecho de longitudes
de onda pero no ocurre el proceso de dispersión sino que aca hay movimientos
de espejos que permiten que llegue radiación a la muestra a diferentes
longitudes de onda
Funcionamiento
Llega radiación de la FER, pasa por el espejo colimador (para que vayan en
forma paralela), los rayos llegan al cortador del haz y parte de ellos se reflejan
y esa radiación que se refleja incide en el espejo móvil, otra parte de la
radiación atraviesa el cortador del haz y llega al espejo fijo. Entonces cuando,
por movimientos mecánicos, se va moviendo el espejo móvil de tal manla que
ambos espejos quedan a igual distancia del divisor del haz, ambas radiaciones
(las de los dos espejos) quedan en fase y se produce interferencia constructiva
que aumenta la intensidad de esa radiación que luego pasa por la muestra a
una determinada longitud de onda. El funcionamiento del cortador es similar al
del filtro de interferencia
Mientras que si las distancias de ambos espejos son diferentes, la radiación no
esta más en fase y al detector le van llegan diferentes señales en función de la
distancia entre los espejos.
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Inteferograma
Es la señal en función de la distancia de los espejos. Como el barrido es muy
amplio, el interferograma es como en b, el algoritmo desarma eso y lo
transforma en una señal que se puede leer como el (a) (fotocopia 2).
2) Globar
Es una varilla cilíndrica de aproximadamente 50mm de longitud y 5 mm de
diámetro. Esa varilla de es carburo de silicio y esta rodeada de una resistencia
que hace que se alcanzen temperaturas que van desde 1300 a 1800 K
emitiendo asi en forma continua en el IR
3) Filamento incandescente
Es un alambre en forma de espiral de Ni y Cr. Alcanza temperaturas de hasta
1000K.
4) Arco de mercurio.
Es una lámpara que utilizan los instrumentos que permiten trabajar en la región
del IR lejano. Consiste en un tubo de cuarzo que tiene vapor de mercurio a baja
presión. Cuando pasa la electricidad (cuando se conecta) ese vapor de
mercurio se ioniza originando un plasma y ese plasma emite una radiación
continua en la región del IR lejano.
5) Lámpara de Tungsteno
Es la misma que vimos en absorción molecular. Se usa en IR cercano.
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Cubetas o celdas
Son recipientes que presentan ventanas que son transparentes a la radiación
IR. Esas ventanas pueden ser de NaCI, NaBr, KBr,CeBr
Selectores de banda
Según el instrumento: sistema dispersivo(monocromadores)
Sistema no dispersivo: interferómetro.
Detectores
La característica principal de los detectores de IR es que su respuesta depende
del poder calorífico de la radiación
Hay tres tipos de detectores
• Neumático de golay
• Termocuplas
• Bolometros
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Técnicas electroanalíticas
Reacción electroquímica
Definición: es la responsable de las transformaciones químicas que sufren las
especies debido al paso de corriente eléctrica a trabes de los electrodos y del
movimiento o transporte de especies cargadas o no desde la disolución hacia
los electrodos.
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• Conveccion
• Migración
• Difusión
Alrededor de los electrodos se forma una doble capa difusa. Esta se forma por
un primer reordenamiento. Luego de aplicar un potencial . si aumenta el
potencial la doble capa se hace mas gruesa y esto hace que los electrones no
puedan alcanzar la interfase , allí no hay proceso faradicos y no se produce
redox. Se dice que el electrodo esta polarizado. La capa es la responsable de
que existan dos procesos que dan origen a dos tipos de corrientes (Faradicas y
no faradicas)
En una celda electroquímica siempre se produce una corriente porque hay una
transferencia de electrones desde el seno de la solución hacia el electrodo.
Pero esa cantidad de corriente esta gobernada y limitada por distintos
procesos. Esos proceso se denominas faradicos y no faradicos.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Proceso de polarizacion
Son los procesos que ocurren cuando hablamos de la polarizacion de un
electrodo: ocurren distintos procesos antes de llegar a la polarizacion o
despolarizacion del electrodo.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
en los cambios de energía libre para una reacción dentro de una celda
electroquímica.
0.0591 [red]
ΔP = E = E0 - log reaccion en el electrodo
n [ox]
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Potenciometria
La técnica que utiliza estas celdas es la potenciometria
• Utiliza celdas galvanicas
• Utiliza dos electrodos : uno de referencia y otro indicador
• Utiliza soluciones electrolíticas
•
Una técnica potenciometrica se basa en relacionar la concentración de una
especie con la medida del potencial que se genera entre un electrodo indicador
y un electrodo de referencia.
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}1
0
/Cu2+ 0.0591 [red]
ΔP = E = E0Cu - log
n 14 2[ox]
43
0
Cuando la concentración molar del anion (Cl-) es mayor que 1M este electrodo
se comporta como electrodo de referencia.
Si no, es un electrodo anionico ([Cl-]<1M).
↓ electrodos ↓
↓ indicadores ↓ referencia
↓ metalicos membrana
6 44 7 4 48
1era especie
2da especie
redox
Electrodo de calomel
Otro electrodo muy frecuente es el de calomel. Este electrodo es un tubo de
vidrio que en su interior tiene una pasta de Hg que esta en contacto con una
solución de Hg2Cl2. Esa pasta de cloruro mercurioso esta saturada y con una
elevada concentración de KCl.
En el extremo inferior del tubo tiene una orificio poroso que esta en contacto
con la solucion de CLK (es de tipo anionico , [Cl-]>1M ) y además en la parte
interna hay un alambre de platino que es el que hace el contacto.
Este electrodo de calomel saturado (ECS) es que el que se usa como
referencia y tiene un E=0.268V
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Titulacion potenciometrica
Una de las aplicaciones prácticas es la titulacion potenciometrica: consiste en
medir el potencial de una celda galvanica luego del agregado de alicuotas de
un agente valorado, trabajando a corriente nula
Electrodos de membrana
El otro tipo de electrodos indicadores que existen son electrodos selectivos de
cationes y moleculas.
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Las tres características fundamentales que debe cumplir una membrana son:
• Minima solubilidad (dada por la composición con grandes moleculas)
• Conductividad eléctrica (dada por los iones monovalentes)
• Reactividad selectiva al analito en estudio. La membrana tiene que
poder interactuar de manera selectiva con el analito.
Hay dos tipos de membrana que se utilizan en este tipo de electrodo: las
membranas cristalinas, las no cristalinas y dentro de esta ultima tenemos las
membranas de vidrio, las formadas por líquidos y las movilizadas por líquidos
rígidos.
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→ Na + V− H
H + + V − Na + ←
V: acido salicilico.
Electrodo selectivo a pH
El potencial limite esta dado por la diferencia de potencial de los potenciales a
cada lado de la membrana (cada uno responde a la ecuación de Nersnt). Este
es el parámetro analítico que da una idea del pH de la solución.
En esa solución externa hay solución de H+ cuya concentración o actividad no
conocemos pero del lado interno hay una concentración de protones conocida
y constante.
El potencial limite queda en función de la actividad de la especie en disolución
(es que el no se conoce).
pH=-log(a) , Eb=L-0,059pH potencial limite en función del pH para un electrodo
selectivo a pH.
El potencial limite es el parámetro analítico que me va dar el pH de la solución.
Es decir, el potencial de un electrodo indicador de este tipo, será igual al
potencial limite, responsable del pH, mas un potencial de referencia interno
mas un cierto potencial de asimetría (este potencial de asimetría es muy chico
y se debe a las distintas tensiones en la estructura de la membrana)
Eind= Eb + Eref2 + Easi
Eb=Eind - Eref
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Potencial de asimetría.
Es un potencial muy pequeño y se debe a las diferencias de tensiones en la
estructura de la membrana, generada fundamentalmente por desgaste. Es
despreciable.
Coeficiente de selectividad k
Esta variable esta involucrada dentro de la ecuación del potencial limite de
membrana -log (a1KA,B,b1)-. Este coeficiente de selectividad representa la
relacion que existe entr la respuesta de dos iones que estan presentas en la
misma disoclucion. Es el grado de interferencia que genera un ion sobre otro.
Indica cuanto interfiere la otra especie con respecto al electrodo del analito (B
interfiere con con el electrodo selectivo a A, por ejemplo)
Toma valores de 0 a 20 o 30 y es un dato que viene tabulado por el fabricante.
Si el coeficiente tiende a 0 indica que el ion no interfiere en la medicion
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Analisis Instrumental ИиФерИх
En este caso los electrodos son semejantes al anterior con la única diferencia
en que la membrana ya no es de plástico son que son membranas de cloruro
de polivinilo y esto hace que la membrana sea mas flexible y eso hace que el
coeficiente de selectividad sea menor. Con estos eléctrodos se pueden hacer
medidas directas de diferentes cationes y aniones. Cuando se calibra el
instrumental se lo hace con su solución patrón preparada por uno mismo.
Quiere decir que uno va a conocer esas soluciones patrones entonces va a
permitir conocer la concentración de la muestra.
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Otros electrodos.
Existen electrodos selectivos a moléculas. Hay de dos tipos
• Electrodos selectivos a moléculas gaseosas
• Electrodos selectivos a moléculas orgánicas
Voltamperometria
Estas técnicas abarcan un conjunto de técnicas que permiten obtener
información de una especie a través de la medición de corriente en función de
un potencial aplicado. Se mide intensidad de corriente en función de un
potencial aplicado. El grafico generado generalmente es sigmoidal
Dentro de estas técnicas tenemos
Clasica
polarografia Por pulsos
Voltamperometria de barrido lineal
voltamperometria hidrodinamica Titulacion amperometrica
Sensores quimicos
Se estudiaran la polarografia clasica, la voltamperometria hidrodinámica para
titulaciones amperometrica y voltamperometria hidrodinámica para sensores
químicos.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Microelectrodos
Electrodo de disco
Es una varilla de teflón que en la parte inferior tiene una plaquita o disco con
características conductoras, Este disco a su vez esta conectado a un hilo de Pt
que sirve como conexión.
El disco puede estar recubierto de diferente materiales (Pt, Hg, Au, C grafito) y
según sea ese material va a presentar diferentes potenciales dependiendo
también del electrolito soporte donde esta sumergido (fotocopia 1).
Generalmente este electrodo se utiliza en la voltamperometria hidrodinámica
empleando sensores químicos. Se suele usar también en polarografias por
pulsos
Electrodos de gota de Hg
Hay otro microelectrodos mas usados que son los microelectrodos de gotas de
Hg. Son tubos de vidrio que tiene un deposito, reservorio, donde se coloca el
Hg y en esa gotita de Hg es donde se produce la electrolisis. Las gotas deben
ser chiquitas y homogéneas para mantener la reproducibilidad del resultado.
Este tipo de electrodos de gota se usa mucho en polarografia clásica y en
titulaciones amperometricas.
Se trabaja con microeletrodos porque uno debe trabajar también en
condiciones de polarización por concentración.
Polarografia Clasica.
En esta técnica se usa una celda de polarografia (los tres electrodos, el analito
y la solución de electrolito soporte). Dentro de esa celda polarografica pueden
ocurrir tres tipos de movimiento (conveccion, difusión y migración) que dan
lugar a respetivas corrientes. En esta técnica la única que debe existir es la de
difusión en la interfase electrodo disolución.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Polarograma tipo
Es un grafico de intensidad de corriente versus potencial
La curva B corresponde al electrolito soporte, que tiene un potencial de
reducción mucho mas negativo que la especie a determinar. Esta característica
del electrolito soporte es una condiciones operacional
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Permite tener una idea cualitativa para poder identificar o diferenciar distintos
analitos. Como se ve en la fotocopia, cambiando el pH o el electrolito soporte
pueden diferenciarse analitos en una mezcla.
Voltamperometria hidrodinámica.
Hay dos tipos de voltampermetria hidrodinamica: la titulacion amperometrica y
los sensores químicos.
Una característica de estas técnicas es que se trabaja en agitación, es decir,
que la corriente de conveccion junto a la difusión serán parte de la medición. La
única corriente eliminada es la de migración, mediante el uso del electrolito
soporte.
Titulación amperométrica
Se basa en medir la intensidad de corriente de una solución a medida que se
van agregando alícuotas de un agente valorado trabajando a potencial
constante. Se miden corrientes de conveccion y de difusión.
Se usa una celda amperometrica. Esta consta de: tres electrodos (referencia,
auxiliar y el de trabajo, que en este caso se usa goteo de Hg), una bureta
desde donde se agrega el agente valorado y un vaso de precipitado que
contiene la disolución del analito y el electrolito soporte.
Tiene además un generador de potencial conectado.
Condiciones operacionales.
• Se debe trabajar en agitación.
• No debe haber O2 disuelto
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Sensores quimicos
Esta variedad de voltamperometria hidrodinamica permite hacer
determinaciones directas cuantitativas usando sensores químicos. Hay
sensores químicos:
• Para moléculas gaseosas (CO2 disuelto por ejemplo)
• Para moléculas orgánicas, también llamados biosensores (por ejemplo
para glucosa)
Método de redisolución
Este método consta de tres pasos: Electrodepocision, redisolución y
determinación mediante barrido lineal de potencial.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Ejemplo:
Si se tiene una mezcla de Pb y Cd, se busca primero el potencial de reducción
de ambos, se preparan testigos con Cd y Pb, juntos, y registrando los picos
máximos se hace la curva de calibrado
Grafico.
Conductimetria
Las técnicas conductimetricas permiten medir la conductividad de una solución
electrolítica y esa conductividad esta dada por todos los iones presentes en la
disolución. Ese valor de conductividad va a depender de todos los iones
presentes en la disolución. Esto quiere decir que dependerá de la movilidad de
los iones cuando se aplica una diferencia de potencial
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Mediciones directas
Se pueden hacer determinaciones directas de conductividad, se puede usar en
varias cosas, por ejemplo:
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Titulación conductimetrica
Para esta titulación se utiliza una celda como la indicada en el esquema c. los
electrodos están a igual distancia, hay un termómetro para asegurarse una
temperatura constante y una bureta con el agente valorado
Dentro de las acido base están: las de acido y base fuertes, las de acido débil
con base fuerte, las de acido y bases débiles y generalmente se utilizan, como
en potenciometría, cuando la solución presenta turbidez o coloración y no se
puede aplicar un método colorimétrico.
También se usan mucho para determinar las constante de equilibrio de ácidos
o bases débiles
Es importante tener en cuanta que la concentración del agente valorante debe
ser similar o levemente superior a la del analito.
Cromatografía
Es una técnica de separación que se basa en separar diferentes analitos que
forman parte de una muestra para pode cuantificarlos posteriormente.
Clasificación y tipo de cromatografías
Teniendo en cuenta como esta formada la fase estacionaria y la fase movil (los
analitos estan en la fase estacionaria) se la puede clasificar en
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A)Cromatografía plana
En papel y en capa fina. Donde la fase estacionaria se coloca sobre una placa
o papel.
Este tipo de cromatografía generalmente se usa para análisis cualitativo.
La fase estacionaria son sólidos, en el caso del papel es un papel de filtro en el
que se siembra la muestra y luego se le hace pasar el solvente que revela la
macha y esta mancha se mide. La capa fina es de vidrio y silica y funcionan de
la misma manera.
B)Cromatografía en columna
Se divide en
Cromatografía gaseosa : dos tipos CG solida (CGS) y CG liquida (CGL), esta
ultima es mas usada.
En esta cromatografia la fase movil es un gas y la fase movil puede ser un
solido o un liquido impregando en un solido.
Cromatografia liquida
La fase movil es un liquido y la fase estacionaria es un solido o un liquido que
tiene diferentes propiedades:
• En algunos casos donde la F.E tiene características polares, la
separacion ocurre por un fenomeno de adsorcion
• En otros casos lo solidos son intercambiadores iónicos, dan lugar a la
cromatografia liquida de intercambiadores iónicos
• En otros casos los sólidos son tales que permiten la separecion en
funcion del tamaño de la moléculas, este tipo se denomina cromatografia
liquida de exclusión.
• Otros sólidos san lugar a la cromatografia liquida de adsorción, todo
depende de las características de la FE.
Siempre existe una cierta relación entre ambas fases. El soluto que va a
separarse tiene que tener una determinada constante de distribución entre
ambas fases K=Cs/Cm. La adsorción es un fenómeno de afinidad entre el
soluto y la fase estacionaria.
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Para que exista una buena resolución de los picos, uno tiene que tener en
cuenta algunos parámetros:
Eficacia de la columna: esta variable esta relacionada con la constante de
distribución de cada una de las especies que constituyen la muestra. Brinda
una idea acerca de como cada especie se distribuye en la fase móvil y en la
fase estacionaria. Este parámetro de eficacia de la columna se indica con la
1α-1
letra V R= N
4α
L
V= , donde L es la longitud de la columna y Tr el tiempo de retención
Tr
A partir del cromatograma, donde uno conoce Tr y L, puede determinar la
eficacia de la columna.
Factor de selectividad o separación: este es otro parámetro importante para
lograr una buena separación. Este factor relaciona las constante de distribución
de los distintos analitos. Se le llama α. Además da una idea de las posiciones
relativas de cada uno de los analitos. También se puede calcular a través del
K a (Tra -Tm )
cromatograma ya que α= = , Tm, y los tiempos de retención se
K b (Trb -Tm )
obtienen desde el cromatograma.
Cromatografia gaseosa
Hay de dos tipos:
Cromatografia gaseosa liquida, CGL, donde la fase móvil es un gas y la fase
estacionaria es un liquido.
Cromatografia gaseosa solida, CGS, donde la fase móvil es un gas y la fase
estacionaria es un sólido.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Características que debe tener la muestra para poder se cuantificada por CG.
Los compuestos deben estar en estado gaseoso
No deben descomponerse a la temperatura de separación
No deben descomponerse ni adsorberse en la fase estacionaria (no tienen que
quedar retenidos)
Tiene que ser fácilmente detectables
Cromatrografo gaseoso
Tiene un tuvo de gas que contiene a la fase móvil (carrier), tiene válvulas
reguladoras que regulan la salida del gas (flujo constante y conocido)
El gas: debe ser químicamente inerte, su flujo debe ser constante y conocido.
Para elegirlo se tiene en cuenta:
que debe tener una buena afinidad con el analito,
Cual es la fase estacionaria
Que tipo de detector que se utilizara
Teniendo esto en cuenta se elige el gas, generalmente se usan N2, H2, CO2,
He, Ar.
Sistemas de inyección
Jeringas: la inyección debe hacerse rápido para una buena reproducibilidad y
resolución. No se usa mas este método.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Detectores
Detector de ionizacion en llama (FID).
Es el mas común y versátil
Se basa en la capacidad de conductividad eléctrica que tienen la fase móvil.
Esta formada por una quemador o mechero y en la parte superior de ese
quemador tiene un electrodo colector de electrones. Al llegar el gas inerte y el
analito se ionizan y generan electrones que son colectado dando lugar a una
corriente Es una corriente muy débil (10-10 – 10-12 A) por lo tanto necesita un
amplificador de corriente. Esa corriente es proporcional a la concentración del
analito
Detector de conductividad termia (TCD)
Este tipo de detector se basa en que un filamento de tungsteno (W) libera calor
cuando circula a través de el un gas.
El detector tiene una cámara en cuyo interior hay un alambre en forma de
espiral por donde circula corriente. Cuando a través de ese espiral circula el
gas , se ioniza, genera una corriente eléctrica y esta se detecta.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Aplicaciones.
Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en análisis
farmacéutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioquímica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una técnica cara por las
columnas y el mantenimiento.
Cromatografía liquida
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Aplicaciones.
Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en análisis
farmacéutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioquímica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una técnica cara por las
columnas y el mantenimiento.
Electroforesis
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Esta técnica utiliza para la separación tubos capilares que tiene la función de
actuar como celdas electroforeticas . con el empleo de estos tubos capilares
disminuye notablemente el efecto del movimiento por conveccion y permite
entonces una buena separación de los componentes, en formas mas eficiente y
rápida. La diferencia con la convencional es que la migración o separación de
especies se realiza cando están sometidas a una campo eléctrico de elevado
voltaje.
En los extremos del capilar se encuentran los electrodos , que son los
encargados de generar ese movimiento de migración dentro del capilar. Esa
velocidad de migración depende de la viscosidad de esa solución que depende
de la relación carga/tamaño, del tampón, etc.
A ese tubo , de pequeño diámetro, se le hace una ventana que se coloca cerca
del detector
Electromigracion: ocurre debido a ese campo eléctrico aplicado que hace que
las partículas que están cargadas se muevan a una velocidad que es
proporcional al campo eléctrico aplicado. Se la llama velocidad electroforetica.
El campo depende de la longitud de capilar (Lc) y del potencial que uno aplica
(V)[Lc/V] . estas partículas se van separar , van a tener una determinada
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Estos parámetros dependen del potencial que uno este aplicando. Para poder
calcular estos parámetros uno lo hace a través de los gráficos de señal en
función de tiempo (electroferograma). De este se puede sacar información
cualitativa o cuantitativa (la llamada screening es cualitativa.)
En este tipo de técnica uno puede aplicar un voltaje de tal manera que las
especies que están cargadas positivamente vayan hacia el cátodo y las que
están cargadas negativamente hacia el ánodo y uno ten el detector ubicado
cerca del cátodo.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Es fundamental controlar:
• pH de la solución tampón
• La fuerza iónica de la solución tampón (si es muy alta el flujo
electrosmotico disminuye, suelen usarse buffers con fuerza iónica
intermedia).
• Temperatura de trabajo: generalmente se trabaja a temperatura
constante, que puede variar entre 15 y 25 ºC
Una vez que ingreso la muestra al capilar, esta circula dentro del capilar con la
solución buffer, llega al detector donde se registra la señal . el detector puede
ser un detector óptico, cualquiera de los vistos, o un detector electroquímico o
un conductimetrico.
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