Análisis con microscopio electrónico de transmisión ( tem)

Las muestras del bolsillo epitelial se caracterizaban por extensas fimbrias de adhesión,
formación de biofilm bacterial y transmigración de linfocitos. La inmersión bacteriana tanto
por fagocitos especializados (leucocitos) como inespecializados (células epiteliales) era
evidente en el bolsillo epitelial.
Mediante el mecanismo de cierre de internalización bacteriana las fimbrias son
particularmente la única parte bacteriana que toca la membrana celular del epitelio.

Este último se invaginó profundamente para engullir a la bacteria, es decir, formó una taza
fagocítica. La formación de una vacuola por la membrana epitelial fue claramente la última
etapa de la internalización.

Ni ondulaciones de la membrana o adhesiones mediadas por adhesinas afrimbrilares fueron

observadas. La masiva internalización era frecuentemente acompañada por apoptosis de las
células fagocitadoras del bolsillo epitelial.

La apoptosis se caracterizó por alteraciones específicas, tales como: desprendimiento

celular, abultamientos de la membrana celular y condensación nuclear así como la
fragmentación que culminó en la formación de cuerpos apoptóticos.
Rara vez se observaron núcleos en las capas más superficiales de las células. Estos dos
últimos puntos fueron concluyentes. El glicocálix bacteriano en las células epiteliales
fundamentales no estaba ennegrecido debido a la impermeabilidad de la membrana
epitelial al rojo de rutenio. En contraste , el glicocálix de algunas bacterias dentro de las células
apoptóticas estaba bastante ennegrecido.

Discusión

El presente estudio ofrece, por primera vez, evidencia ultraestructural of fimbriaeinduced

zippering internalization in periodontitis.

Además, nuestros resultados confirman informes anteriores , que sólo la adhesión mediada
por fimbrias ha sido observada en la periodontitis. La adhesión en la cavidad oral del ser
humano es crucial para la supervivencia microbiana , ya que los microbios se adhieren a
una superficie hospedera para poder soportar el flujo de la saliva, la masticación, y el estrés
producto de la deglución, respiración, el hablar, etc

La adhesión se produce gracias a la no unión covalente entre adhesinas bacterianas y

receptores expresados en las membranas de las células eucariotas.

Dependiendo en donde se encuentren las adhesinas, que puede ser en la superficie

externa de la bacteria o en los apéndices (fimbrias o pili) ligados a ella, podemos encontrar
dos tipos morfólicos de adhesión: adhesión mediada por fimbrias y adhesión mediada por
adhesinas “afimbriales”.

Las fimbrias (pili) son largas, delgadas y filamentosas macromoléculas multiméricas

unidas a la superficie bacteriana. En conjunto las fimbrias forman adicionalmente una
superficie rica en polisacáridos, que cubre la pared celular conocida como el glicocálix.
Éste está situado en la periferia de la membrana externa de las bacterias gram-negativas y
en el peptidoglicano de las gram-positivas.

Desde el punto de vista citoquímico, las fimbrias bacterianas son glicoproteínas. Debido a
que su parte carbohidratada no puede ser teñida por tinción microscópica electrónica de
rutina, el glicocálix no pueden ser fácilmente estudiado en TEM a menos que se utilicen
técnicas especiales de tinción.
En el presente estudio, la técnica RR-OsO4 para la visualización de las fimbrias
bacterianas, fue utilizada conforme a lo solicitado en biopsias orales humanas
(22-24),. Esta técnica se basa en la capacidad de la parte carbohidratada de las fimbrias
para ser semiselectivamente teñida por el colorante catiónico rojo de rutenio.
La gran habilidad para diferenciar de este método se debe a la combinación de las
características tanto morfológicas como histoquímicas resultantes de la aplicación de la
técnica de RR-OsO4 a muestras de tejido.

A diferencia de los hongos (24), las bacterias orales son incapaces de

penetrar la membrana de la célula huésped por sí solas. Por lo tanto,
la invasión bacteriana es denominada correctamente como
internalización.
En el caso del mecanismo de cierre , la internalización es inducida
por las fimbrias bacterianas, pero es completada por las células
huésped. Por lo tanto las fimbrias de los Porphyromonas gingivalis.
unidas a microesferas de látex permiten la internalización de estos
últimos. El mecanismo de cierre de entrada se puede dividir en tres
etapas sucesivas (2):

Contacto y adhesión: este paso es independiente del citoesqueleto de actina y

sólo implica la adhesina bacteriana y su receptor y da lugar a la
agrupación de los receptores;
• La formación de la taza fagocítica: este paso es desencadenado por
las señales transitorias que ocurren después de la formación del
primer complejo adhesina-receptor y la propagación alrededor del
microbio invasor. Estas señales inducen la polimerización de la
actina y la extensión de la membrana;
• Cierre de la taza fagocítica y retracción así como despolimerización de la
actina.
Las integrinas b1 se identifican como receptores epiteliales humanos
de fimbrias P. gingivalis. Curiosamente, la afinidad de las integrinas a su ligando
puede ser alterada por señales provenientes del interior de la célula, (señalización
de adentro hacia afuera) proceso conocido como activación de las integrinas.
Por lo tanto, la señalización de adentro hacia fuera de las células epiteliales
gingivales podría ser el factor crucial en la patología periodontal, sin
embargo, futuras investigaciones en biología molecular serán las
encargadas de determinar esto.

La internalización de las bacterias las protege de la inmunidad del huésped.

Mediante la alteración de la permeabilidad de la membrana de las
células epiteliales para el rojo de rutenio (10, 13) y algunas alteraciones
celulares características, nos han permitido demostrar en un nivel
ultraestructural que la internalización induce apoptosis de las células
epiteliales fagocitadotas en la periodontitis.

La apoptosis observada en las capas epiteliales superficiales en la periodontitis ha

sido sugerida como un proceso relevante para el mantenimiento de la homeostasis
inmunológica local en los sitios de competencia bacteriana crónica. Supresión bacteriana
en el epitelio de la vejiga por exfoliación como consecuencia de la internalización ha sido
demostrada en un modelo animal. P. gingivalis y otros patógenos periodontales también
han sido encontrados en personas sanas de periodontitis, ahora la interrogante que surge es
saber si la supresión por apoptosis ocurre en las grietas de estas personas.
Probablemente, la apoptosis inducida por la internalización podría ser importante para la
patogénesis de la periodontitis.

La evidencia ultraestructural presentada para la internalización de las

bacterias en la periodontitis ha demostrado que la adherencia
bacteriana al
epitelio gingival humano en la periodontitis es un requisito previo
para la invasión. En consecuencia, La terapia antiadhesiva podría ser
de interés clínico. La detección de que la internalización-induce
apoptosis proporciona nuevas perspectivas sobre la patogénesis de la
periodontitis.