Tema 15.

Biotecnología y microorganismos

EL MUNDO MICROBIANO

- Microbiología: ciencia que estudiar los microorganismos.

- El mundo microbiano está formado por:

FORMAS ACELULARES FORMAS CELULARES

- Priones: PROCARIOTAS EUCARIOTAS

o Formados por proteínas
o Causan enfermedades en -Arqueobacterias -Algas unicelulares
mamíferos
- Viroides: -Bacterias (autótrofas y -Protozoos
o Formados por ARN heterótrofas)
o Causan enfermedades en -Hongos
plantas
- Virus:
o Formados por ácidos nucleicos
(ADN, ARN)
o Proteínas (cápsida)
o Otros (enzimas)
o Son parásitos obligados de

1. FORMAS ACELULARES: Virus

- Formas acelulares microscópicas formadas básicamente por ácido nucleico rodeado de una estructura proteica.
Son parásitos intracelulares.

- Estructura:

o Puede contener ADN o ARN, pero solamente uno de los dos tipos.

 Tanto el uno como el otro puede estar formado por una cadena (monocatenario) o con dos
(bicatenario).
 Pueden ser moléculas circulares o lineales.

o Envoltura proteica que recibe el nombre de CÁPSIDA, la cual rodea al ácido nucleico.

o Y algunos virus poseen una MEMBRANA LIPOPROTEICA, de la misma estructura que una membrana
plasmática celular, que envuelve a la
cápsida.

o Algunos poseen enzimas, como

pueden ser las polimerasas o
transcriptasas inversas, para
transcribir el acido nucleico vírico.

- La partícula viral que abandona la célula y

puede vivir en el medio extracelular se
denomina VIRIÓN.
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- Su tamaño es de 10 a 100nm, mucho más pequeño que una bacteria.

- Clasificación:

o Según el tipo de ácido nucleico que portan: RETROVIRUS, son aquellos que llevan ARN monocatenario
y NO ADN que contienen enzimas transcriptasas inversas, capaz de transcribir su propia molécula de
ARN en una copia de ADN, ya en el interior de la célula afectada, y es esta copia de ADN la que dirige la
reproducción del virus.

o Según el tipo de célula infectada: BACTERIÓFAGOS, o lo que es lo mismo FAGOS, que infectan
bacterias.

- Ciclo vital de un virus:

o La multiplicación vírica es el único objetivo de los virus.

o 2 fases: extracelular e intracelular.

 Extracelular: el virión no presenta ninguna actividad, como partícula inerte.

 Intracelular: el virión se autorreplica, aprovechando la materia y procesos de la célula infectada.

o Exiten diversos procedimientos por el que un virus se introduce dentro de una célula, pero en
general son:

 FIJACIÓN: virus se fija a la membrana de la célula. Existen proteínas de reconocimiento en la

membrana y cápsida del virus. Se denomina ESPECIFICIDAD de la infección, esto es, cada
virus solamente afecta a una determinada especie celular.
 ENTRADA: virus penetra en la célula perforando la membrana plasmática o fusionándose con
ella.
 ECLIPSE: tras la entrada, el virus desaparece aparentemente, pero realiza acciones de
importancia.
• Desensamblaje de la cápsida y liberación del ácido nucleico.
• Síntesis de proteínas que se realizará a partir de la producción de ARNm. Estas
proteínas (a parte de otras que ya lleva el virión) serán utilizadas para la replicación del
ácido nucleico viral.
 ENSAMBLAJE: montaje de los componentes del virus, una vez fabricados. Es un proceso
esspontáneo.
 LIBERACIÓN: partículas víricas salen de la célula por,
• Lisis, la infección provoca la muerte de la célula, o bien, las enzimas de los virus rompen
la membrana celular.
• Exocitosis o gemación, no se provoca la muerte rápida de la célula. Retrovirus.

- Ciclo vitales víricos:

o Ciclo lítico: es el descrito anteriormente y termina con la lisis celular, con la muerte de la célula.

o Ciclo lisogénico: aquel en que los virus son capaces de permanecer en estado latente en la célula que
parasitan gracias a la integración de su ADN en el ADN celular. Cuando se separa el ADN vírico puede
hacerlo generando oncogenes.

o Ciclo de los retrovirus: el virus del SIDA pertenece a este grupo. Realizan lo que se conoce como
transcripción inversa.
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1.a FORMAS ACELULARES: Viroides y Priones

- Formas acelulares parasitarias de menor tamaño que los virus y que pueden considerarse como precursores de
los mismos, antes de que adquieran la cápsida que garantiza la superviviencia en la fase extracelular.

o VIROIDES: se tratan de moléculas de ARN circular que carecen de cualquier protección.

 Causan enfermedades en vegetales.
o PRIONES: se tratan de simplemente proteínas defectuosas que causa la enfermedad de las vacas locas.

2. FORMAS CELULARES: Bacterias

- CLASIFICACIÓN.

Según la forma:

-Cocos. Tienen aspecto redondeado, pueden aparecer

aisladas o en grupos. Si forman grupos de dos se
llaman diplococos, si se agrupan formando cadenas
se llaman estreptococos, si lo hacen de forma
arracimada se denominan estáfilococos, si forman
masas cúbicas se llaman sarcinas.

- Bacilos. Son alargadas y cilíndricas, tienen forma

de bastoncillos.

-Espirilos. Tienen forma de espiral; si la espiral es

poco apretada se denomina espiroqueta.

-Vibrios. Tienen forma de coma.

ELEMENTOS ESTRUCTURALES DE LAS BACTERIAS

Pueden Cápsula bacteriana
Faltar Otras estructuras Flagelos
Pelos y Fimbrias
Pared Bacteriana (Peptidoglucano o Mureína)
BACTERIAS Membrana Plasmática
Hialoplasma
Citoplasma Orgánulos (sin Ribosomas (70S)
membrana) Inclusiones
ADN bacteriano (cromosoma bacteriano)

- ESTRUCTURA.
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•Cápsula
Es una envoltura gruesa y gelatinosa que rodea externamente a la pared de algunas bacterias. Está formada
por diversos glúcidos complejos y en menor proporción proteínas. Suelen presentarla las bacterias patógenas. Protege
a las bacterias que la poseen de la desecación

•Pared bacteriana
Es una envoltura rígida que rodea externamente a la membrana plasmática.

Según la estructura de la pared celular se pueden o no teñir con el método de tinción ideado por el microbiólogo
danés Gram, lo que nos permite diferenciar dos grupos: Gram + y Gram -.
En ambas la pared está formada por mureína que es un peptidoglicano, es decir formado por cadenas de
polisacáridos, que se suceden alternativamente, estás cadenas se disponen paralelas y se unen mediante cadenas
peptídicas cortas.

o Las Gram positivas se tiñen con el método Gram. En ellas la pared es monoestratificada, está formada por
una capa muy gruesa de peptidoglucanos (mureína) que tiene asociadas proteínas y polisacáridos.

o Las Gram negativas no se tiñen con el método de Gram. En ellas la pared es biestratificada, está formada
por una capa de peptidoglicanos y sobre ella hay otra capa que se denomina membrana externa (con
estructura similar a la membrana plasmática) y una capa interna.

- TIPOS.

- Independientemente del tipo de nutrición que presenten, dentro de las bacterias podemos distinguir dos grupos según que
necesiten o no oxígeno para vivir:

- Las bacterias autótrofas son o fotosintéticas o quimiosintéticas.

- Las bacterias heterótrofas son :

-Aerobias: necesitan oxígeno

-Anaerobias: no necesitan oxígeno, dentro de ellas podemos diferenciar dos grupos:

-Anaerobias estrictas, no sólo no necesitan oxígeno, sino que les resulta tóxico.
-Anaerobias facultativas: pueden vivir sin oxígeno, pero si existe lo utilizan.

- REPRODUCCIÓN.

- Las bacterias se reproducen asexualmente por bipartición. El resultado son dos células con idéntica información
genética.
- Existen procesos que contribuyen al aumento de variabilidad genética. A intercambio de ADN, conocido como
recombinación genética horizontal.

o Transducción: el intercambio de ADN conducido por un virus bacteriófago.

o Transformación: trasnferencia de ADN desde el medio, sin que sea necesario el contacto entre las
células receptora y donadora.
o Conjugación: transferencia de un fragmento de ADN, en forma de plásmido, con contacto entre las
células a través de los pelos o pili o fimbrias.
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BIOTECNOLOGÍA
(Utilidad de virus y bacterias)

1. ¿Qué es la biotecnología?

Enfoque multidisciplinario que involucra varias disciplinas y ciencias, entre ellas biología, genética,
etc, donde se usan organismos vivos o compuestos obtenidos de organismos vivos con el fin de obtener productos de
valor para el hombre.

2. ¿Qué es la ingeniería genética?(Biotecnología)

Es la manipulación del material genético (ADN) de los organismos vivos, a través de un conjunto de técnicas, con
el fin de modificar las características de un individuo, o bien, fabricar nuevos productos.

3. Algunos conceptos que has de saber…

- CLONACIÓN: proceso mediante el cual a través de vectores de clonación se obtiene muchas copias idénticas de
un fragmento de ADN.

- VECTOR DE CLONACIÓN: moléculas que sirven para transferir genes. Y estos son los vectores que se usan:

o Bacteriófagos.
o Plasmidos.
o Retrovirus.

- PLÁSMIDO: fragmentos de ADN extracromosómicos circulares que aparecen en el citoplasma de algunos

procariotas, se replican independientemente del ADN bacteriano, no contienen información vital para la bacteria y
son transmisibles. Por ello, se usan en ingeniería genética.

- TERAPIA GÉNICA: tratamiento médico que consiste en la transferencia de material genético, usando vectores
virales inocuos,químicos o físicos, a una célula o grupos de células específicas con el objetivo de reemplazar un
gen defectuoso o dotar a las células de una nueva función beneficiosa.

o In vivo, introducen los genes directamente en células del tejido.

o Ex vivo, aíslan previamente las células diana, que tras su manipulación, son reintroducidas en el paciente
(terapia celular).

- CÉLULAS MADRE: células indiferenciadas que pueden tanto dividirse indefinidamente produciendo nuevas
células madre, como diferenciarse en varios tipos celulares especializados como células sanquíneas, etc.

o Células madre embrionarias.

o Células madre adultas (reemplazan células que mueren en el organismo, como células sanguíneas, o
células de la piel).
 Aplicación: Terapia celular frente a trasplantes.

- ADN RECOMBINANTE: cualquier molécula de ADN formada por la unión de segmentos de ADN de origen
diferente.

- ORGANISMO MODIFICADOS GENÉTICAMENTE O TRANSGÉNICOS: organismos que contienen un gen

procedente de otro organismo, a lo que llamamos transgén (cuidado!!, es diferente a un organismo mutante!)
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4. LA MANIPULACIÓN DEL ADN

► ADN recombinante y clonación celular.

El ADN recombinante se utiliza en ingeniería genética para la síntesis de proteínas como la insulina,
en el desarrollo de organismos transgénicos y en la amplificación del ADN.

La técnica consiste en aislar el gen deseado, introducir el gen seleccionado en el interior de un vector
y éste, a su vez, dentro de una célula, denominada célula anfitriona. Aprovechando la maquinaria celular, el
gen se expresa, sintetizándose así la proteína codificada en el gen. Además, al dividirse la célula, las nuevas
células formadas contienen ese gen que también sintetizan esa proteína. Se genera un grupo celular que
contiene un genoma distinto.

● Las etapas en la producción de ADN recombinante son las siguientes:

1. El primer paso consiste en aislar pequeños fragmentos de ADN que contengan los genes a clonar.

Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debe separarse y concentrarse.

o Partimos de células con núcleo, que deben ser lisadas (rotas).

o Las proteínas estructurales, enzimas, ARN y restos moleculares deben separarse del ADN.

o El ADN obtenido se concentra y se fragmenta por acción de las enzimas de restricción.

o Se aísla el ADN que se desea clonar.

2. Preparación de un vector de clonación

Los vectores de clonación son pequeños elementos genéticos (moléculas de ADN) utilizados para
recombinar y replicar genes que faciliten el transporte de segmentos d ADN a otra célula (plásmidos son los
más usados).

▪ Cortar el vector con enzimas de restricción, las mismas enzimas que se utilizaron para cortar el ADN que
se quiere insertar.

▪ Unir el vector y el ADN que se va a clonar mediante los llamados extremos cohesivos, o pegajosos, o
escalonados.

3. Unión del ADN con el vector de clonación. Formación del ADN recombinante

En esta etapa se produce la unión covalente del vector y el ADN inserto mediante una ligasa.

4. Introducción del ADN recombinante en la célula anfitriona

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Para la clonación (replicación del ADN recombinante) se necesita la maquinaria celular. Por ello, hay que
introducir el ADN recombinante en una célula anfitriona.

Los tipos de células anfitrionas son:

o Células bacterianas: son las más utilizadas, ya que tienen una alta velocidad de replicación, un bajo
coste de mantenimiento de las colonias y son fácilmente manipulables.

o Células eucariotas: aunque las células eucariotas son, en general, difíciles de mantener se usan
levaduras y células tumorales:

5. Propagación del cultivo

Se induce la división de células anfitrionas, de forma que se producen también copias de ADN y plásmido
recombinante y, por ello, la clonación. Primero se efectúa una siembra en placas Petri con agar como medio
de cultivo. Se dejan crecer las colonias.

► Localización y secuenciación de un gen.

Una vez conseguida la formación de clones de ADN, si no se han identificado sus genes, se realiza a
través del método de la sonda de ADN. Por la cual se usa un fragmento de ADN sencillo marcado con
fluorescencia y que es complementario a la secuencia del gen que se desea detectar, por lo cual se unirán y se
expondrán a una película fotográfica.

Seguidamente, conocido el gen, se procede a su secuenciación. El orden en que están colocados los
nucleótidos del ADN. Se puede incluso hasta identificar las regiones que son secuencias codificadoras de
proteínas, y a partir de ella se puede deducir la secuencia de aminoácidos de la proteína codificada.
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► PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)

Una vez conocido un gen, se puede hacer millones de copias del mismo, sin necesidad de incluirlo
en un ADN recombinante.

Se usa para ello una reacción en cadena que origina millones de copias de un segmento de ADN.
Necesita de un ADN muestra, cantidad suficiente de nucleótidos, cebadores y una ADN polimerasa que
resiste el calor, ya que se tiene que aumentar la temperatura para desnaturalizar la cadena de ADN e iniciar
las copias.

NOTA: se suele usar bastante clones de ADNc, es decir, ADN transcrito inversamente del ARNm maduro. Ya que
como sabemos, los ARNm no maduros tienen exones e intrones heredados del ADN molde, es decir, secuencias que
no codifican para proteínas. Para obtener secuencias que codifican a proteínas específicas es más fácil utilizar el
ADNc libre de intrones, todo el ADN se transcribe y traduce a proteínas. Proceso más sencillo y rápido.

5. APLICACIONES EN MEDICINA
Las aplicaciones de la ingeniería genética en biomedicina aumentan espectacularmente. Entre ellas
destacan:

1) Fabricación de productos farmacéuticos. En la actualidad, una de las técnicas de ingeniería genética más
empleada consiste en la producción de sustancias humanas por bacterias a las que se les ha introducido el gen
correspondiente. Entre las sustancias que ya se obtienen mediante esta técnica están algunas hormonas como la
insulina (Se consiguió introducir en una bacteria el gen que codifica para la síntesis de la insulina. Esta bacteria
produce Insulina humana vital para la regulación del metabolismo de los glucidos en el organismo), hormona del
crecimiento y proteínas de la sangre tienen un interés medico y comercial enorme.

2) Terapia génica.

6. APLICACIONES EN ANIMALES Y PLANTAS

 Inmunología Tema 15. Biotecnología y microorganismos

Las técnicas de ingeniería genética se aplican a la agricultura y a la ganadería para obtener mayores
cosechas y mejores alimentos con plantas y mayor cantidad y calidad en la cría de ganado, etc.

♦ Plantas transgénicas. Las aplicaciones agrícolas tienen como objetivo:

▪ Conseguir plantas resistentes a herbicidas.

▪ Conseguir plantas resistentes a los insectos.

▪ Conseguir plantas más resistentes a enfermedades

▪ Mejorar del producto, más calidad y características nuevas.

♦ Animales transgénicos. Los mejores resultados se han obtenido con peces, como el salmón, la
carpa y la lubina. A individuos de estas especies se les ha añadido el gen de la hormona del
crecimiento, lo que produce un aumento de tamaño del pez en muy poco tiempo. En el salmón se ha
introducido otro gen, "el anticongelante". Así puede ser criado en aguas muy frías.

A destacar los animales knock-out, en los que se ha inhibido la expresión de un gen. Han permitido
averiguar la función de numerosos genes. Un ejemplo, ratones knock-out.

7. LOS MICROORGANISMOS EN LA BIOTECNOLOGÍA

Hay tres tipos de microorganismos, los patógenos, NO patógenos y oportunistas.

o Los oportunistas son los que cuando el sistema inmunitario decae causas enfermedades como el hongo
Candida albicans.
o Los patógenos son los que causan mayores enfermedades y pueden causar más infecciones (proliferación
de microorganismos patógenos en alguna parte del cuerpo de un ser vivo). La virulencia indica el grado
de capacidad o incapacidad que tiene un microorganismo para producir una enfermedad. Y una toxina es
una molécula tóxica para el organismo sintetizada por microorganismos.

7.1 LOS MICROORGANISMOS EN LA MEJORA DEL MEDIO AMBIENTE

Una de las aplicaciones con más desarrollo en los últimos años es la biorremediación, que se basa en la
utilización de organismos vivos para eliminar contaminantes ambientales (como el petróleo y sus derivados). Uno de los
más extendidos es la siembra de bacterias del género Pseudomonas después de una marea negra.

7.2 LOS MICROORGANISMOS EN LA INDUSTRIA

También se usan los microorganismos en biotecnología, es decir para uso industrial. Destacamos los
microorganismos en la industria alimentaria porque, por un lado, intervienen en la elaboración de diferentes productos, y
por otro, se intentan controlar al aplicar técnicas de conservación de alimentos.

- Los microorganismos en la elaboración de productos:

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A. Fermentación láctica: proceso bioquímico realizado por bacterias lácticas que transforma la glucosa
procedente de la lactosa de la leche en ácido láctico. Esta acidificación hace coagular la leche y producir
yogur. Se realiza por bacterias a 37ºC durante 8 horas.

B. Fermentación acética: transformación del etanol en ácido acético, a partir del vino u otras bebidas a vinagre.
Bacterias acetobacter.

C. Fermentación alcohólica: transformación de la glucosa en etanol y CO2, por levaduras (hongos) del género
Saccharomyces.

a. Ejemplos: a partir del mosto de uva se produce vino. A partir del jugo de manzana se produce sidra.
Para hacer pan (se disipa el etanol y el CO2 forma la esponjosidad del producto)

- La conservación de alimentos y los microorganismos:

Los alimentos alteran sus propiedades o se degradan por una serie de reacciones químicas espontáneas activadas por
enzimas entre otros. Sabemos que la elevación de la temperatura por encima de los 70ºC aproximadamente desnaturaliza
proteínas y enzimas, por lo que se disponen de métodos físicos de conservación de alimentos, entre los que destacamos:

- Esterilización: proceso que elimina toda forma de vida, incluidas las esporas. Una de las formas es de manera
física mediante la aplicación de calor, superior a los 100ºC, (y la otra manera de forma química por ejemplo con
formol).

- Pasteurización: se usan temperaturas inferiores a 100ºC. Pero sus alimentos deben mantenerse refrigerados (a
diferencia de la esterilización) ya que no ha muerto toda la flora bacteriana.

- Efecto del frío: las bajas temperaturas inhiben la actividad y multiplicación bacteriana.