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Definición de cromatografía
Se utiliza el término general de lecho para definir las distintas formas en que
puede encontrarse la fase estacionaria. Las separaciones cromatográficas se
consiguen mediante la distribución de los componentes de una mezcla entre
la fase fija y la fase móvil. La separación entre dos sustancias empieza
cuando una es retenida más fuertemente por la fase estacionaria que la otra,
que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil. las retenciones
mencionadas pueden tener su origen en dos fenómenos de interacción que
se dan entre las dos fases y que pueden ser :
Cromatografía en papel
Fue desarrolla por Martin. Tiene como soporte un papel de celulosa. Adquirió
una gran extensión por su sencillez y presenta la ventaja de poder utilizar
miligramos y microgramos, además presenta la opción de utilizar tanto la
técnica descendente ( en columna, etc...) como la técnica ascendente.
Cromatografía de gel-filtración
Fodin y Porath en 1958 descubren que usando como fase estacionaria geles
se consigue separar polímeros sintéticos de alto peso molecular.
Cromatografía de afinidad.
Ideada por Porath en 1967, usando como fuente un péptido o proteína unida
covalentemente a un ligando y se utiliza para la separación de moléculas
proteicas.
Cromatografía de gas.
Análisis frontal
Es la parte del registro que corresponde a la fase móvil pura (gas portador, ).
Es la distancia paralela a la línea de base, entre las dos laderas del pico,
tomada a la mitad de la altura del pico.
t'i = ti - t0
VR = tR-Fm
Vm = tm ⋅ Fm
V'R = VR - Vm
o lo que es lo mismo:
α > 2 se obtiene una mala separación ya que son necesarios periodos muy
largos para realizarla.
12.- Eficiencia
hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehído
aldehído < ester < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amidas
Adsorbentes
• Celulosa
• Almidón
• Azucares
• Gel de sílice (silicagel)
• Óxido de aluminio (alúmina)
• Carbón activo (carbón en polvo)
• Kieselguhr
Silicagel
Alúmina
Preparación de placas.
Eter de petróleo.
Eter dietílico.
Ciclohexano.
Acetato de etilo.
Tetracloruro de carbono.*
Piridina.
Benceno.*
Etanol.
Cloroformo.*
Metanol.
Diclorometano.
Agua.
Ácido acético.
*compuestos cancerígenos.
• Precio.
• Pureza.
• No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad).
• No utilizar compuestos muy volátiles.
• Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).
Otra técnica para realizar la elección del eluyente consiste en sembrar varias
muestras distanciadas suficientemente, y aplicar con un tubo capilar distintos
eluyentes sobre el centro de cada muestra. Esto permite desarrollar cada
eluyente radialmente por capilaridad, de forma que se aprecie el eluyente
con el cual la separación se realiza de una manera más eficaz.
Desarrollo de la cromatografía
Localización de sustancias
• Métodos químicos.
• Métodos físicos.
Métodos químicos
Métodos físicos.
Constantes Rf Y Rx
Cromatografía bidimensional