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CURSO DE MEDICINA
BIOQUÍMICA MÉDICA
OBS. Para serem submetidas ao aquecimento as vidrarias precisam ser Pirex .
PROTOCOLO I
Objetivo:
Observar os efeitos de agentes hábeis em modificar as interações não covalentes que
ocorrem entre os resíduos de aminoácidos que compõem duas proteínas. Para isso, será
utilizada a albumina, que sofrerá tratamentos, nos quais onde será observado seu efeito.
Tipos de tratamentos utilizados:
- Alteração de pH
- Modificação na temperatura
- Solventes orgânicos
- Altas concentrações de sais.
Procedimento:
Fazer as adições necessárias, em cada tubo, como indicado na tabela.
Observar as amostras contra a luz, centrifugar durante 3 min. a 3000rpm. Desprezar
o sobrenadante e adicionar 2,0 ml de tampão PBS pH 7,4. Agitar e observar novamente os
tubos contra a luz.
Questões:
1) Quais foram os resultados obtidos nos tubos de ensaio durante os diferentes
tratamentos que as proteínas foram submetidas? Explique.
2) Qual a importância do tampão adicionado aos tubos de ensaio após se descartar o
sobrenadante?
3) Em qual tubo é possível recuperar a atividade biológica da proteína. Explique.
PROTOCOLO II
MATERIAL
NOTAS:
A) INFLUÊNCIA DO pH
REAGENTES 1 2 3
Reagente de Uso 1 mL 1 mL 1 mL
(Enz.)
Tampão A 1 mL - -
Tampão B - 1 mL -
Tampão C - - 1 mL
Substrato (Glicose) 100 µL 100 µL 100 µL
(microlitros)
Agite levemente. Coloque em banho-maria 37ºC por 10 min. Marque o tempo a partir da
adição da glicose. Após 8 min, observe a coloração dos tubos.
B) INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO DO SUBSTRATO
REAGENTES 4 5 6 7 8 9
Reagente de Uso 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
(Enz.)
Tampão B (fosfato) 500 µL 450 µL 400 µL 300 µL 200 µL -
q.s.p.
Substrato (Glicose) 20 µL 50 µL 100 µL 200 µL 300 µL 500 µL
Agite levemente. Coloque em banho-maria 37ºC por 10 min. Marque o tempo a partir da
adição da glicose. Após 8 min, observe.
C) INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA
REAGENTES 10 11 12
Reagente de Uso (Enz.) 1 mL 1 mL 1 mL
COLOQUE OS TUBOS NAS
SEGUINTES 4ºC 37ºC 70ºC
TEMPERATURAS
Marque o tempo a partir da adição da glicose. Após 8 min, observe a coloração dos tubos
sem retirá-los das respectivas cubas.
Processo de fermentação
Objetivo:
Observar as células de leveduras Sacharomyces cerevisae incubadas em diferentes
condições.
Material:
- células de Sacharomyces cerevisae (Fermento biológico seco). Pesar 5g/ erlenmeyer
- agitador de bandeja
- solução de sacarose 10% ou glicose 10%
- erlenmeyer de 250ml e balões de borracha
Procedimento:
Preparar as amostras conforme tabela abaixo.
Sacarose Levedura Água Ferver Resultados
Erlenmeyers
(ml) 5g (ml) 15min obtidos
1 - 5 50 não
2 50 - - não
3 50 5 - não
4 50 5 - sim
Fechar os erlenmeyers com os balões de borracha vedando bem a boca do vidro e levá-los
ao agitador de bandeja durante 30min. Observar e descrever o resultado.
Questões:
1. O que você observou nos erlenmeyers incubados com leveduras?
2. Como você acha que está a concentração de glicose no início e no final do
experimento? Faça um gráfico para ilustrar a sua resposta.
3. Quais são os produtos formados pelas leveduras durante este processo de
fermentação que ocorreu nos erlenmeyers?
4. Explique resumidamente a via bioquímica da fermentação da glicose neste processo,
evidenciando as principais enzimas envolvidas.
ESTUDO DIRIGIDO I
1) A estrutura dos aminoácidos é composta por uma porção amina e carboxil semelhante
entre os 20 tipos de aminoácidos e o radical ou substituinte confere a identidade de cada
um. Em alguns aminoácidos o radical também pode sofrer ionização. Nesse caso, como isso
interfere na capacidade tamponamento desta molécula? Explique.
Aminoácido pK1 (COOH) pK2 (NH2) pKR (radical) pHI (ponto isoelétrico)
Glicina 2,3 9,6 - 6,0
metionina 2,3 9,2 - 5,8
ác. aspártico 2.1 9,8 3,9 3,0
ác. glutâmico 2,2 9,7 4,3 3,2
Histidina 1,8 9,2 6,0 7,6
Lisina 2,2 9,2 10,5 9,8
Arginina 2,2 9,0 12,5 10,8
3) Dos aminoácidos da tabela acima, qual pode participar melhor do tamponamento celular
(pH variando de 6,5 a 7,2, dependendo da célula) , quando compondo a estrutura de
proteínas.
2) Quais são os tipos de interação e ligação química que ocorre nas proteínas? Relacione
estas forças com os níveis estruturais protéicos.
Cpd 3
6) A sensibilidade pouco comum de asiáticos à bebidas alcoólicas tem uma base bioquímica.
Em japoneses e chineses, muito menos álcool é necessário para produzir uma
vasodilatação, que resulta em rubor facial e aceleração dos batimentos cardíacos, do que é
necessário para produzir este quadro clínico em europeus. Os efeitos fisiológicos se devem
ao acetoaldeído gerado pela enzima álcool desidrogenase hepática a partir do álcool
ingerido. O acetaldeído é normalmente removido por uma aldeído desidrogenase
mitocondrial (enzima) que o converte em acetato. Em alguns asiáticos, a forma normal da
aldeído desidrogenase mitocondrial, que tem um baixo Km para acetoaldeído, está ausente.
Esses indivíduos têm somente a forma citosólica desta enzima que apresenta um alto km
(baixa afinidade para o acetoaldeído). Diante destes fatos, explique por que o efeito descrito
acima acontece nos indivíduos asiáticos.
ESTUDO DIRIGIDO IV
OH O O OH O CH2OH
H H H O H
H H H
O OH H H OH
OH H OH H
H H OH O
CH2OH
H OH H OH H OH OH H
lactose sacarose
3) Por que alguns mamíferos conseguem extrair a energia contida na celulose enquanto
outros não são capazes?
6) O colesterol pode modular a fluidez de membranas biológicas. Como ele exerce essa
função?
ESTUDO DIRIGIDO V
3) Comente como o metabolismo é regulado, tanto em nível tecidual como em nível celular.
ESTUDO DIRIGIDO VI
1) Através da veia porta, o fígado recebe mais que 90% do sangue que passou pelo trato
intestinal, contendo portanto, os nutrientes que foram absorvidos. Logo após uma
alimentação rica em carboidratos, a concentração de glicose sangüínea pode aumentar
até 10 mM. A enzima que catalisa a primeira reação da via glicolítica transforma
glicose em glicose 6-P e pode apresentar duas isoformas, a glicoquinase e a
hexoquinase. A primeira está presente no fígado e possui um Km = 10 mM e a
segunda está presente nos tecidos extra-hepáticos e possui um Km = 0.1 mM. Discuta
a importância fisiológica deste resultado.
3) Explique por que a glicólise pode ocorrer tanto em aerobiose quanto em anaerobiose,
enquanto o ciclo de Krebs funciona apenas na presença de oxigênio.
1) Hans Krebs, um talentoso cientista uniu vários resultados observados por ele e outros
cientistas e concluiu que em uma suspensão muscular, o piruvato (3 carbonos) ou
acetato (2 carbonos), quando incubados com oxaloacetato (4 carbonos) formam
citrato (um composto com 6 carbonos). Eles já haviam observado que fornecendo
fumarato, succinato ou malato, havia a formação de oxaloacetato. Com o fornecimento
de citrato, também havia a formação de oxaloacetato. Com base nestes resultados,
Hans Krebs, deduziu o ciclo, o que fez com que o ciclo do ácido tricarboxílico fosse
também chamado ciclo de Krebs. Observe e discuta de onde vem os carbonos que
alimentam o ciclo e o que é formado a cada volta .
2o 0,75
3o O,90
6) Explique os possíveis danos que uma célula pode sofrer com uma deficiência da enzima
glicose 6-fosfato desidrogenase.
CASOS CLÍNICOS I
CASO CLÍNICO II
1) A aspirina (ácido acetil salicílico) é uma droga que tem sido amplamente usada para
diminuir a febre, dor e a inflamação. Ela também é eficaz em impedir a coagulação
excessiva do sangue, que pode levar a ataques cardíacos e derrames. Todos esses
efeitos devem-se ao fato da aspirina inibir não-competitivamente a atividade da
ciclooxigenase, bloqueando assim, a formação de prostaglandinas e,
conseqüentemente de tromboxano A2 , um potente agregador plaquetário.
a) Explique o que é uma inibição não-competitiva e correlacione com os outros tipos de
inibição.
b) Represente graficamente a atividade da ciclooxigenase na ausência e presença do
inibidor (aspirina).
c) Explique como a aspirina inibe a ciclooxigenase.
2) No tempo das grandes navegações era comum a tripulação chegar ao seu destino
com hematomas espontâneos pelo corpo, sangramento das gengivas e nos casos
mais graves perda dos dentes. Com o tempo foi observado que o retorno da
alimentação obtida em terra fazia com que esses sintomas desaparecessem.
Constatou-se que suco de limão acelerava o processo de cura. Mais tarde, atribuiu-
se a cura desta doença ao ácido ascórbico e por isso a doença foi denominada de
escorbuto. O escorbuto se instala quando não ocorre uma modificação pós-
traducional no processo de formação do colágeno funcional, na qual a vitamina C
tem um papel fundamental na atividade da enzima responsável por este passo
metabólico. Pesquise e responda:
a) Qual a enzima responsável por este passo metabólico em questão e qual a função do
ácido ascórbico nesta enzima?
b) Qual o motivo do sangramento nas gengivas durante a manifestação do escorbuto?
c) Explique o que é uma modificação pós-traducional?
Responda:
a) Explique o resultado da biópsia, ressaltando o possível problema deste paciente.
b) Por que o exercício intenso resulta em produção de lactato em indivíduos normais,
enquanto o mesmo não era observado no paciente?
2) Um paciente com 2 anos de idade chega ao hospital local com fraqueza muscular e após
exames clínicos detectou-se hiperamonemia, cardiopatia, défict respiratório e
hipoglicemia. Diante dos resultados obtidos suspeitou-se de deficiência da cartinina-
acilcarnitina translocase que foi confirmado posteriormente. O médico prescreveu como
tratamento uma dieta pobre em ácidos graxos de cadeia longa, uma dieta suplementada
com triacilgliceróis de cadeia curta e média e evitar jejum prolongado. Explique os sinais
apresentados e o fundamento do tratamento prescrito.