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Resumen
Palabras clave: microalgas, intensidad de luz, nitrógeno orgánico disuelto (DON), biomasa,
nutrientes, clorofila, aminoácidos, Cuemanco
Introducción
Las microalgas son de gran importancia ya que forman parte de la base de la cadena
alimenticia, representan un porcentaje muy notable de productores en cuerpos de agua. Es
donde se lleva a cabo no menos del 50% del total de la fotosíntesis que se realiza en nuestro
planeta (Palomino, A et al, 2010), contribuyendo con el 80% de biomasa y producción
primaria, por lo que se utilizan como indicadores de productividad primaria en los sistemas
acuáticos (Lemos y Boll, 2005). Su crecimiento y distribución está controlado por varios
factores, tanto físicos (luz, temperatura, corrientes), como biológicos (índices de crecimiento,
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Algunos aminoácidos, son oxidados mediante una enzima específica que se encuentra en la
superficie celular de algunas especies de microalgas, para producir extracelularmente H2O2 y
NH4+. Posteriormente el NH4+ es absorbido, mientras que el resto de los productos quedan
en el exterior, esto implica un evidente ahorro energético para las células fitoplanctónicas, ya
que de esta manera se evitan tener dispuesto un sistema de transporte para cada aminoácido
o forma de nitrógeno orgánica a utilizar (Berman, 1999).
La luz solar directa (mediodía en los trópicos) es de aproximadamente 1700 μmol. fotones
m-2 s –1 (CMAR). El tiempo de exposición a la luz (fotoperiodo) es un factor muy importante
que tiene efecto sobre los ciclos de vida y actividades metabólicas de las microalgas, tanto en
cultivos como en la naturaleza. En condiciones naturales la mayoría de algas se establecen en
periodos alternos de luz: oscuridad, sin embargo la mayoría de los laboratorios de microalgas
se mantiene en constante iluminación, debido a que esta favorece la división celular (López
E.; J. A., 2009). La luz constituye un factor fundamental en todo cultivo de microalgas, tanto
para sí misma como por sus interrelaciones con otros parámetros. Representa la fuente de
energía para la fotosíntesis, y tanto la intensidad luminosa como la longitud de onda y el
fotoperiodo afectan al crecimiento y metabolismo microalgal. (González, A., 2000).
En condiciones normales las microalgas están sometidas a periodos de luz/oscuridad y esta
alternativa generalmente se utiliza en su cultivo. Muchos aspectos de la fisiología microalgal
fluctúan en un ciclo de 24 horas, esta periodicidad según Sournia, 1974 en: Abalde et al 1995
citados por González, A., (2000), se observa en: La división celular, que en muchas especies
la mayoría de las células se dividen en un momento determinado del día o del la noche, lo
que favorece su sincronización; al parecer la división nocturna ocurre en muchas especies; la
Capacidad fotosintética, que con frecuencia observa que las tasas máximas de fotosíntesis se
producen en la mañana y las mínimas en las noches; la Absorción de nutrientes, donde las
tasas de absorción de N y P son mayores durante el día que durante la noche, lo que refleja
la influencia de la luz sobre la absorción; la Bioluminiscencia, generalmente se detecta un
pico nocturno de bioluminiscencia en las especies que la poseen (dinoflagelados).Estos
ritmos circadianos diarios persisten bajo condiciones ambientales constantes. La adaptación
de las microalgas a variaciones extremas en la intensidad de luz, es decir, a la luz y sombra es
un fenómeno muy conocido y caracterizado por cambios en el contenido intracelular de
pigmentos, generalmente acompañados en cambios en la respuesta fotosintética y en la
composición bioquímica. Los periodos de luz/oscuridad se ajustan para el cultivo de cada
especie en particular. La introducción de un ciclo celular es un importante adelanto ya que el
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ciclo día-noche es quizás el factor cíclico ambiental más importante en la mayoría de los
sistemas; y por último la Longitud de onda, en cuanto a la calidad de luz (longitud de onda)
se sabe que tiene efectos marcados sobre el crecimiento y varios procesos metabólicos, y
puede afectar también a la composición bioquímica. (González, A., 2000)
Esta investigación fue realizada con el fin de conocer si la luz y la oscuridad actúan como
factores limitantes en el consumo de nitrógeno orgánico disuelto (DON), para el crecimiento
de comunidades de microalgas, logrando el objetivo anterior mediante la estimación de
biomasa en comunidades de microalgas recolectadas en la zona lacustre de Xochimilco, en
las cuales se estimó el consumo de DON por métodos colorimétricos. Teniendo como
hipótesis de trabajo que la luz limitada modifica la asimilación del nitrógeno orgánico
disuelto en las microalgas y por ello nuestro tratamiento con una intensidad de 0 μmol.
fotones m-2 s –1 será el que tenga un menor incremento en la producción de clorofila.
Metodología
Área de estudio
El antiguo Canal de Cuemanco se encuentra ubicado a un costado de la pista olímpica de
remo y canotaje, a 300 mts del embarcadero de Cuemanco, atrás del Centro de
Investigaciones Biológicas y Acuícolas de Cuemanco.
Fig.1 Ubicación de la parte del Canal de Cuemanco de donde se obtuvieron las muestras de microalgas.
http://maps.google.com.mx/maps?hl=es&ie=UTF8&q=ubicacion+del+canal+de+cuemanco. (29/NOV/2010)
Trabajo de Campo
Se recolectaron 10 litros de agua del canal que se encuentra localizado en el centro de
investigación biológica y acuícola de Cuemanco (CIBAC), con una lejanía de 5m de la orilla
aproximadamente y una profundidad de 1 metro, con ayuda de una botella Van dorn de un
litro de capacidad.
Preparación de cultivos
En el laboratorio de análisis biogeoquímicos, el agua recolectada fue filtrada con un tamiz de
7cm de diámetro 0.6/1.22mm para retirar todos los consumidores y evitar que fueran
consumidas las microalgas. Ya filtrada el agua, se preparó una solución de nutrientes,
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Se dejaron crecer en cajas forradas por dentro de blanco con medidas de 50cm de ancho,
30.7cm de alto y con una profundidad de 29.2cm. Se cubrió la abertura de la caja con una
bolsa negra, colocando focos ahorradores en medio de la caja. Se utilizaron cuatro cajas con
las mismas medidas para los cultivos en botellas de 100ml, utilizando en una caja 20 watts (54
μmol. fotones m-2 s –1), en otra 25 watts (66 μmol. fotones m-2 s –1) y 32 watts (108 μmol.
fotones m-2 s –1) y la última caja no se le coloco foco y se dejo en obscuridad.
Cada foco emitía una intensidad de luz que asimilaba el promedio de la luz emitida en un día
(CMAR), teniendo así que cada foco ahorrador representaba:
54 μmol. fotones m-2 s –1 – 3.17%
66 μmol. fotones m-2 s –1 – 3.88%
108 μmol. fotones m-2 s –1 – 6.35%
Las intensidades mencionadas son las que se utilizaron para realizar el experimento.
Ya que pasaron los días y se observó el crecimiento en las botellas, en frascos transparentes
con capacidad de 100ml, se vertió 50 ml de microalgas (con nutrientes) y 50 ml de un
tratamiento de Nitrógeno Orgánico Disuelto (DON) que constó de una preparación de 6 L
agua desionizada con 0.04 g de Asparigina (D-asparagine 99% Sigma Aldrich) y 0.08 g de
Cisteína (L-cysteine, 97% (96% ec/6LC) aldrium), está concentración tomada de datos de
tablas de requerimientos de microalgas en el canal nacional, los aminoácidos fueron pesados
con una báscula de marca ADAM, Pw245 max 250 g de 0.0001 g, para ser destinadas al
análisis de nutrientes y biomasa (60 botellas respectivamente), en las cuatro diferentes
intensidades de luz (20 w, 25 w, 32 w y 0 w), las observaciones fueron diarias durante 5 días.
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Diseño experimental
B N B N B N B N
3 3 3 3 3 3 3 3
Fig. 2. Diagrama de flujo con número de replicas utilizadas en las muestras de biomasa y nutrientes en cada
intensidad de luz. Abreviaturas: B= Biomasa; N= Nutrientes.
El Hach se programó con la opción 351 Nitrato y se iniciaron las mediciones de las
muestras, donde el blanco fue agua destilada.
Se tomaron 15 ml de la muestra 1 con ayuda de una pipeta, esto fue depositado en un vaso
de precipitado de 50 ml, posteriormente se agregó el reactivo Nitra ver 6 y se agitó la muestra
durante 3 minutos, se dejó reposar 2 minutos; después del tiempo de reposo de esta, se
tomaron 10 ml con una pipeta y se vaciaron en las celdas para Hach 16 x 100 mm, donde se
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agregó el reactivo Nitra ver 3, se tapó la celda y se agitó el contenido durante 30 segundos; y
se dejó reposar en un periodo de 15 minutos (esto se repitió con cada muestra).
Por último se midió la concentración / absorbancia de NO3 de las muestras contenidas en las
celdas con el Hach DR 2800.
*Los lapsos de tiempo entre cada reacción y reposo fueron medidos con el Hach DR 2800.
Resultados
Las microalgas encontradas se clasifican dentro de las Chlorophytas, y todos los grupos de
este clado contienen clorofilas a y b, y almacenan las sustancias de reserva como almidón en
sus plastos (Castro et al, 2010). Se encontraron especies pertenecientes a los generos:
Pediastrum , Scenedesmus y Chroococcus, también se pudo observar en poca cantidad
diatomeas, mostrando una coloración parda y estas son las que contienen clorofila c (Tabla
1).
Tabla 1. Especies encontradas en las muestras de microalgas (Chlorophytas) cultivadas con el tratamiento de
Nitrógeno Orgánico Disuelto (DON).
Nombre Imagen Nombre Imagen
Scenedesmus
Pediastrum dúplex
quadricauda
Pediastrum
Chroococcus spp
clathratum
Diatomeas
Biomasa-Nutrientes
7|Página
0.035 0.7
0.025 0.5
0.02 0.4
0.015 0.3
0.01 0.2
0.005 0.1
0 0
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5
0 μmol
-2 –1
Grafica 1. Biomasa-Nutrientes en la intensidad de 0 μmol. fotones m s durante cinco días de observación, las
barras representan la media vs el error estándar.
0.04 0.8
0.035 0.7
Nutrientes (mg NO 3 L -1 )
0.03 0.6
Biomasa (mg/L -1 )
0.025 0.5
0.02 0.4
0.015 0.3
0.01 0.2
0.005 0.1
0 0
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5
108 μmol
-2 –1
Grafica 2. Biomasa-Nutrientes en la intensidad de 108 μmol. fotones m s durante cinco días de observación,
las barras representan la media vs el error estándar.
En la grafica 2, se observa que el tratamiento con una intensidad luminosa de 108 μmol.
fotones m-2 s –1, presenta un declive para la clorofila a en el día 2, sin embargo para los días 3,
4 y 5 este pigmento indicador de biomasa tiene una tendencia al incremento. La clorofila b y
c se muestran mucho más estables que la clorofila a. En los nutrientes se observa una
pequeña diferencia de 0.02 en cuanto al crecimiento del día 3 al 4, siendo el día 5, el día de
mayor concentración de nutrientes con un valor de 0.315 mg NO3 L-1, lo que nos indica que
es el día donde existe menor utilización de DON por parte de las comunidades de
microalgas de este cultivo.
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0.025 0.5
0.02 0.4
0.015 0.3
0.01 0.2
0.005 0.1
0 0
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5
66 μmol
-2 –1
Grafica 3. Biomasa-Nutrientes en la intensidad de 66 μmol. fotones m s durante cinco días de observación,
las barras representan la media vs el error estándar.
Nutrientes (mg NO 3 L -1 )
0.03 0.6
Biomasa (mg/L -1 )
0.025 0.5
0.02 0.4
0.015 0.3
0.01 0.2
0.005 0.1
0 0
Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5
54 μmol
-2 –1
Grafica 4. Biomasa-Nutrientes en la intensidad de 54 μmol. fotones m s durante cinco días de observación,
las barras representan la media vs el error estándar.
Concentración de pigmentos
2
s –1 (mg/L- 2 s –1 (mg/L- 2 s –1 (mg/L- 2 s –1 (mg/L-
1 1 1 1
Días ) ) ) )
1 0.0244 0.0211 0.0221 0.0240
2 0.0120 0.0154 0.0109 0.0151
3 0.0167 0.0161 0.0175 0.0222
4 0.0200 0.0232 0.0280 0.0264
5 0.0251 0.0270 0.0297 0.0330
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2 –1 2 –1 2 –1
2
s –1 s s s
-1 -1 -1
(mg/L ) -1
(mg/L ) (mg/L ) (mg/L )
1 0.0079 0.0101 0.0071 0.0077
2 0.0076 0.0097 0.0068 0.0094
3 0.0093 0.0098 0.0106 0.0141
4 0.0071 0.0088 0.0113 0.0098
5 0.0091 0.0095 0.0105 0.0116
Por lo anterior se puede apreciar que el incremento de biomasa no está relacionado con la
asimilación de nutrientes, y que la asimilación de DON no está relacionada con la intensidad
de luz, pues en ninguna intensidad de luz en particular el comportamiento de asimilación fue
alto.
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Discusión
Los resultados observados de biomasa y asimilación de nitrito indican que existió una
asimilación en los días 1, 2, 3 y 4 de este nutriente, posiblemente ocasionado por el
agotamiento de los nutrientes de la solución inicial compuesta de triple 17 y urea; la
respuesta del decremento de la biomasa del día 2 pudo haber sido a que en muchos grupos
algales el agotamiento de nutrientes provoca un descenso en el contenido pigmentario
(Boussiba, S.; Richmond, A.E., 1980); esto es porque para el buen desarrollo de las especies
de microalgas, es necesario un abastecimiento suficiente de nitrógeno (Microbial L.,2005); el
uso de DON ésta relacionado a condiciones que limitan la luz como las altas
concentraciones de compuestos inorgánicos disueltos encontrados en el medio, la capacidad
de utilizar sustratos orgánicos representa una ventaja selectiva para las algas (Nilsson et al.
1991, y Flothman Werner, 1992 citado por Linares F. 2005).; sin embargo, poco se sabe
sobre la dinámica del nitrógeno orgánico disuelto (DON) (Tyler Fayetteville A. et al, 2001
citado por Linares F. 2006); el nitrógeno puede ser un nutriente esencial limitante para el
crecimiento de las microalgas, pero es generalmente un limitante secundario (después del
fósforo) en los ambientes carbonatados, lo cual implica que tenga relación con la producción
de biomasa (Pugibet, E., et al 2006); el efecto de la asimilación de DON en el tratamiento de
0 µmol no tuvo relación con la biomasa, ya que como se aprecia en los resultados, el que no
existiera una asimilación(día 5), la biomasa siguió aumentando; lo mismo ocurrió para el
tratamiento de 54 μmol. fotones m-2 s –1, que obtuvo una deficiente asimilación y presentó un
incremento mayor de biomasa que en los demás tratamientos; es importante resaltar que
estos cultivos fueron seminaturales, al no aislar las bacterias de las comunidades de
microalgas, estos organismos tienen importantes consecuencias para los ecosistemas
acuáticos, debido a su relevante papel en los ciclos de la materia en general, y del N en
particular(Varela M., 2004), los resultados de mayor concentración de DON en 0 μmol.
fotones m-2 s –1 puede estar vinculada a que las bacterias oxidantes y reductoras del nitrato,
(Ciclo del nitrógeno, 15/Noviembre/2010); mientras que los resultados de mayor
concentración en los demás tratamientos posiblemente pueden deberse a que la población
microalgal fue muriendo con respecto a los días; y esta la presencia de altas concentraciones
de materia orgánica disuelta puede inhibir de forma indirecta a las bacterias nitrificantes.
Específicamente, Rice y Panchol (1972,1973 ciatdo en Nutrientes y gases: Nitrogeno), han
reportado que productos en descomposición inhiben la oxidación aeróbica de amoniaco a
nitrato.
En lo que se refiere a la influencia que tiene la luminosidad sobre la relación del efecto de
DON en la biomasa, el tratamiento que estuvo bajo la intensidad de luz de 54 μmol. fotones
m-2 s –1, fue el que presentó el mayor crecimiento de biomasa durante los 5 días, con
incrementos promedio en la clorofila-a de 0.121 mg/L, clorofila-b 0.010 mg/L y de clorofila-c
de 0.005 mg/L. Las microalgas suelen tener incremento de la densidad celular en función de
la intensidad luminosa (Bermúdez, J. et al 2002)¸en sentido opuesto Jorgensen(1969) hace
referencia de que la respuesta de microalgas a cambios en la radiación se relaciona con el
incremento en el contenido pigmentario a bajas intensidades lumínicas; lo que fue opuesto a
los resultados de la intensidad de 0 μmol. fotones m-2 s –1 que presentó menor crecimiento de
biomasa con concentraciones de clorofila, con valores promedio para clorofila a de 0.019
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mg/L, para la clorofila b fue de 0.008 mg/L y para la clorofila c de 0.003 mg/L; y contra dice
a los resultados de absorción de Tyler Fayetteville, et al 2001(citado por Linares F. 2006),
donde no hubo diferencias entre las tasas de asimilación de aminoácidos en la claridad u
oscuridad para cualquiera de las especies de microalgas; la biomasa de microalgas contiene
aproximadamente un 50% de carbono de base seca (Sanchez Mirón citado por Gómez F.,
2003), que deriva de la fotosíntesis; por lo que la tasa de fotosíntesis y biomasa aumenta con
la intensidad luminosa, alcanzándose el nivel de saturación a intensidades variables en
función de la especie, después de lo cual, la intensidad se hace limitante y provoca la
disminución del crecimiento (González, A., 2000). Los tratamientos que estuvieron a las
intensidades de 66 μmol. fotones m-2 s –1 y 108 μmol. fotones m-2 s –1, presentaron una
producción de biomasa estable que incrementaban en función del tiempo, sin embargo a
pesar de ser intensidades de luz alta no pudieron rebasar la producción de clorofila del
tratamiento de 54 μmol. fotones m-2 s –1, esto posiblemente a que las intensidades de luz
elevadas con frecuencia son inhibitorias para el crecimiento microalgal, produciendo
fotoinhibición(Ruyters, 1984 en: Abalde et al., 1995 et al citado por González, A., 2000); en
microalgas se ha establecido que varias enzimas se encuentran bajo el control de la luz
(Ruyters, 1984 en: Abalde et al. 1995 citado por González, A., (2000).
En lo que se refiere a la relación de diferentes intensidades luminosas con la biomasa de
microalgas en el cultivo de DON, de acuerdo al análisis de varianza, se tiene que la
luminosidad no es un factor que influya en la utilización de este nutriente para el incremento
de la biomasa.
Y nuevamente se comprueba que la existe una asimilación de aminoácidos que ya sido
demostrada tanto en el fitoplancton y microalgas bentónicas (Flynn y Butler, 1986; Antia et
al, 1991;. Nilsson y Sundback, 1996 citado por Linares F. 2006).
Conclusiones
Bajo dosis limitadas de nitrógeno inorgánico como NO3– y NH4+, las microalgas pueden llegar
a utilizar el nitrógeno orgánico para llevar a cabo sus distintas actividades metabólicas, sin
embargo la contribución que ofrece DON a estos organismos es relativamente reciente e
inexplorada.
Por lo que nuestra hipótesis de trabajo, la cual sugería que la luz limitada modifica la
asimilación del nitrógeno orgánico disuelto en las microalgas y por ello nuestro tratamiento
con una intensidad de 0μmol tendría un menor incremento en la producción de clorofila,
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Recomendaciones
En base a nuestros estudios puede sugerirse la medición de oxigeno disuelto, para asociarlo
de manera directa a la tasa fotosintética y con esto el consumo de DON; tomar en cuenta los
factores que pueden llegar a ser variables en la dinámica del DON, como lo son el pH y
temperatura; así como tener acceso a el equipo necesario para mediciones de concentración
de nutrientes y clorofila.
Literatura Citada
* Jorgensen, E,G, (1969). “The adaptacion of plankton algae. IV, Light adaptation of
different algalspecies”. Physiol. Plantarum, 22:1307-1315
15 | P á g i n a
* Linares F, (2005) “Effect of dissolved free amino acids (DFAA) on the biomass and
production of microphytobenthic communities”. J Environ Mar Biol Ecol., Go¨teborg
University, Page.:469-478.
* Linares, F., Sundba¨ck, K. (2006), “Uptake of dissolved free amino acids (DFAA) by
microphytobenthic communities”. Aquat. Microb. Ecol., Go¨teborg University, Page.:175-
184
* Lugo, H. (2006). “Planeación del Agua. Un enfoque social y sistémico. Agua un derecho
social”. México. Primera edición IPN. pps. 29-33.
* Palomino, A.; Estrada, C.; López, J. (2010), “Microalgas: potencial para la producción de
biodiesel”. IV Congresso Brasileiro de Mamona e, Colombia. págs.: 149-157.
*Pugibet, E.; Vega M.; Geraldes, F, (2006), “Managing freshwater inflows to estuaries”,
extraído el 15 de November de 2010 de
http://www.crc.uri.edu/download/25_monitoreo_samana_final_es.pdf.
Anexos
PH 8.33 7.29 -
Total 0.003794644 59
Dentro de los
grupos 0.5443672 16 0.03402295
Total 0.576165 19