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Manuales Departamentales

Programa Académico, objetivos del curso, contenido temático y


manual de prácticas de laboratorio

Bioquímica y
Biología Molecular
Primer año

Departamento de Bioquímica
Facultad de Medicina
Universidad Nacional Autónoma de México
Cd. Universitaria, D.F. agosto de.

1
FACULTAD DE MEDICINA
MANUALES DEPARTAMENTALES

Obra general ISBN: 968-36-2767-6


Este volumen ISBM: 970-32-1866-0

© 2004
Nueva edición revisada y estructurada.

© 2005 primera reimpresión.

© 2006 primera reimpresión.

Derechos reservados conforme a la ley.


Facultad de medicina, UNAM.

Folio CAPES: 008/2005

El contenido de este Manual esta protegido por la Ley de


Derecho de Autor y no puede ser reproducido, total o
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cualquier otro, sin el permiso escrito del Comité Asesor de
publicaciones de la Facultad de Medicina de la Universidad
Autónoma de México.

El cuidado editorial estuvo a cargo del Comité Asesor de


Publicaciones de la Facultad de Medicina, UNAM.

El contenido de este Manual es responsabilidad de sus


Autores ya que constituye un auxiliar en la enseñanza.

2
FACULTAD DE MEDICINA

Dr. Enrique Luis Graue Wiechers Director


Dra. Rosalinda Guevara Guzmán Secretario General
Dr. Pelayo Vilar Puig Jefe de la División de Estudios de Posgrado
e Investigación
Dr. Juan José Mazón Ramírez Secretaria de Enseñanza Clínica, Internado
y Servicio Social
Dra. Irene Durante Montiel Secretaria Técnica del H. Consejo Técnico
Dr. Melchor Sánchez Mendiola Secretario de Educación Médica
Dr. Ricardo Valdivieso Calderon Secretario de Servicios Escolares
Dr. Luis Felipe Abreu Hernández Secretario de Planeación
Lic. Raúl A Aguilar Tamayo Secteraría Jurídica y de Control Administrativo
Dr. Guillermo Robles Díaz Coordinador de Investigación
Dra. Teresa Fortoul vG Coordinadora de Ciencias Básicas
Dr. Arturo Ruíz R. Coordinador de Servicios a la Comunidad
Secretario Administrativo
C.P. Francisco Cruz Ugarte

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
Dr. Edgar Zenteno Galindo Jefe del Departamento de Bioquímica

M. en C. Alicia Cea Bonilla Coordinadora de Enseñanza de Bioquímica


y Biología Molecular
Dr. Raúl Chávez Sánchez Coordinador de Enseñanza de Inmunología
Dr. Guillermo Mendoza Hernández Coordinador de Investigación
M. en C. Rebeca Milán Chávez Coordinadora del Laboratorio de Prácticas

3
Colaboradores

OBJETIVOS DEL CURSO metabolismo del colesterol, estructura y metabolismo


Guillermo Álvarez Llera de las lipoproteínas, regulación del metabolismo de
Patricia del Arenal Mena lípidos).
Alicia Cea Bonilla
Haydée Torres Guerrero (modificaciones
Leonor Fernández Rivera Río
postraduccionales).
Rebeca Milán Chávez
Sara Morales López Aída Uribe Medina (características de la materia viva).
Celia Virginia Sánchez Meza Alejandro Zentella Dehesa (virus, oncogenes y
transformación).
SYLLABUS
Guillermo Álvarez Llera (agua, ciclo de Krebs, oxidación de
los aminoácidos, química y metabolismo de INTRODUCCIÓN AL MANUAL DE PRÁCTICAS
carbohidratos, química y metabolismo de lípidos). DE LABORATORIO Y CASOS DE CORRELACIÓN
BIOQUÍMICA Y PRÁCTICA MÉDICA
Patricia del Arenal Mena (ciclo celular).

Alicia Cea Bonilla (fundamentos del metabolismo, Alicia Cea Bonilla (potenciometría y electroforesis).
proteínas, enzimas y coenzimas, estructura de Rebeca Milán Chávez (gota).
carbohidratos, metabolismo de carbohidratos, Celia Virginia Sánchez Meza.
regulación de la glucemia, regulación del metabolismo
de lípidos, síntesis y degradación de fosfolípidos, ELABORACIÓN O REVISIÓN DE LAS PRÁCTICAS
regulación e integración metabólica, biología DE LABORATORIO
molecular).

Leonor Fernández Rivera Río (nucleótidos). 1. Soluciones. Celia Virginia Sánchez Meza y Rebeca
Milán Chávez.
Óscar Flores Herrera (figuras: ciclo energético, vías que
siguen los protones en las levaduras, ciclo de Krebs y 2. Regulación del equilibrio ácido-base después de
esquema de un potenciómetro). ejercicio muscular intenso y de la ingestión de
bicarbonato de sodio. Concepción González López,
Alberto Hamabata Nishimuta (aspectos básicos de
Celia Virginia Sánchez Meza y Juan Luis Rendón
fisicoquímica, niveles de regulación de la expresión
Gómez.
genética).
3. Titulación de un aminoácido con una base y aplicación
Noemí Meraz Cruz (síntesis y degradación de fosfolípidos,
de la ecuación de Henderson-Hasselbalch. Leonor
regulación del metabolismo de lípidos).
Fernández Rivera Río y Celia Virginia Sánchez Meza.
Rebeca Milán Chávez (equilibrio hidroelectrolítico).
4. Estudio general de las proteínas corporales. Celia
Sara Morales López (agua, química y metabolismo de Virginia Sánchez Meza y Rebeca Milán Chávez.
carbohidratos, química y metabolismo de lípidos).
5. Cinética enzimática. Efecto de la concentración del
Celia Virginia Sánchez Meza (tabla periódica, enlaces, sustrato en la velocidad de la reacción enzimática.
fundamentos del metabolismo, equilibrio Celia Virginia Sánchez Meza, Rebeca Milán Chávez y
hidroelectrolítico, proteínas, radicales libres, Jesús Antonio Oria Hernández.
descarboxilación del piruvato, regulación de la
glucemia, síntesis y degradación de fosfolípidos,

4
6. Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto Milán Chávez.13. Huella génica. Rebeca Milán Chávez
de los inhibidores de la cadena de transporte de y Eugenia Flores Robles
electrones y de los desacoplantes. Juan Pablo Pardo
14. Determinación de glucosa en sangre total. Rebeca
Vázquez y Federico Martínez Montes.
Milán Chávez y Eugenia Flores Robles
7. Efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata.
15. Integración Metabólica. Rebeca Milán Chávez y
Leonor Fernández Rivera Río.
Eugenia Flores Robles.
8. Radicales libres (lipoperoxidación). José Gutiérrez y
La revisión y la actualización de los Objetivos del curso se
Celia Virginia Sánchez Meza.
realizó en colaboración con el proyecto: Mejoramiento de la
9. Estudio general del metabolismo de los carbohidratos. Enseñanza de la Bioquímica y Biología Molecular (EN-
Celia Virginia Sánchez Meza y Rebeca Milán Chávez. 206603) del Programa de Apoyo a Proyectos
Institucionales para el Mejoramiento de la Enseñanza
10. Determinación de lípidos y lipoproteínas plasmáticas.
(PAPIME), siendo el responsable del proyecto el doctor
Celia Virginia Sánchez Meza.
Federico Martínez Montes.
11. Determinación de la transaminasa glutámico-pirúvica
sérica. Ma. Eugenia García Salazar y Celia Corrección y cuidado de la edición: Edgar Zenteno
Virginia Sánchez Meza. Galindo, Alicia Cea Bonilla, Rebeca Milán Chavez y
12. Estudio general del metabolismo de los compuestos Eugenia Flores Robles.
nitrogenados. Celia Virginia Sánchez Meza y Rebeca

5
CONTENIDO
PROGRAMA ACADÉMICO
B.1. Estructura 48
I. Misión de la Facultad de Medicina 8I B.2. Digestión y absorción 48
C. Metabolismo energético 50
II. Introducción 10 C.1. Glucólisis 51
III. Datos generales de la asignatura 12 ----- C.2. Papel de la mitocondria en las funciones
oxidativas 51
IV. Objetivos de aprendizaje 12 C.3. Descarboxilación del piruvato 52
V. Metodología educativa 12 C.4. Ciclo de los ácidos tricarboxílicos (ciclo
de Krebs) 52
VI. Estructura del curso 13 C.5. Cadena de transporte de electrones
VII. Lineamientos de evaluación 18 (cadena respiratoria) 54
C.6. Fosforilación oxidativa 55
VIII. Obligaciones de los profesores y C.7. Radicales libres 56
alumnos 25 D. Otras vías metabólicas de los carbohidratos.
58
IX. Bibliografía 25 D.1. Gluconeogénesis 58
D.2. Glucogenólisis y glucogénesis 59
D.3. Vía del fosfogluconato (ciclo de las
pentosas) 60
D.4. Regulación de la glucemia 60
Unidad Temática 1: Estructura molecular E. Lípidos 62
E.1. Estructura 62
I. Lógica molecular de la vida E.2. Digestión, absorción y transporte 62
A. Características de la materia viva 27 F. Metabolismo de lípidos 64
B. Niveles de la organización celular 27 F.1. Oxidación de los ácidos grasos (ß-
B.1 Bioelementos 27 oxidación) 65
B.2 Moléculas precursoras y F.2. Síntesis y utilización de los cuerpos
macromoléculas 27 cetónicos 65
B.3 Estructuras, orgánulos, células, tejidos y F.3. Síntesis de ácidos grasos 66
Organismos 29 F.4. Síntesis y degradación de triacilgliceroles
66
II. Aspectos fisicoquímicos del funcionamiento F.5. Síntesis y degradación de fosfolípidos 67
celular F.6. Metabolismo del colesterol 68
A. Aspectos básicos de fisicoquímica aplicados F.7. Estructura y metabolismo de las
a la bioquímica 31 lipoproteínas 69
B. Agua 33 F.8. Regulación y alteraciones del
C. Equilibrio hidroelectrolítico y ácido-base 35 metabolismo de lípidos 70
D. Aminoácidos y proteínas 37 G. Metabolismo de los compuestos
D.1. Aminoácidos 37 nitrogenados . 72
D.2. Proteínas 37 G.1. Aminoácidos y proteínas 72
E. Enzimas y coenzimas 40 G.2. Nucleótidos 74
E.1. Características de un sistema enzimático40 H. Regulación e integración metabólica 76
E.2. Cinética enzimática 40
E.3. Aspectos médicos de la Unidad Temática III: Biología Molecular
enzimología 40
IV Biología Molecular
Unidad Temática II: Metabolismo A. Organización del genoma 80
B. Flujo de la información genética 83
III. Metabolismo y bioenergética B.1. Flujo de la información genética 83
A. Fundamentos del metabolismo celular 46 B.2. Síntesis del DNA (duplicación) 83
B. Carbohidratos 48 B.3. Transcripción 85

VI
B.4. Traducción 86 concentración del sustrato en la velocidad
C. Mutaciones y reparación del DNA 89 de la reacción enzimática 148
D. Niveles de regulación de la expresión Práctica 6. Efecto de la insulina sobre la Glucemia
genética 90 de la rata. 152
E. Virus, oncogenes y transformación 93 Práctica 7. Estudio del bombeo de protones
F. Técnicas de manipulación del DNA 95 por levaduras; efecto de los inhibidores
de la cadena de transporte de electrones
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO y de los desacoplantes 153
Práctica 8. El efecto del etanol sobre la lipoperoxi-
I. Conceptos teóricos iniciales dación 156
El método científico 79 Práctica 9. Estudio general del metabolismo
El Sistema Internacional de Unidades (SI) 81 de carbohidratos 157
Matemáticas para el laboratorio 85 Práctica 10. Determinación de lípidos y lipopro-
Notación científica o exponencial 85 teínas plasmáticas 162
El método del factor unitario en los cálculos 86 Práctica 11. El efecto del tetracloruro de carbono
Logaritmos 86 sobre las transaminasas 170
Gráficas 88 Práctica 12. Estudio de los productos finales
Algunos métodos utilizados en bioquímica 89 del metabolismo nitrogenado 171
Centrifugación 89 Práctica 13. Huella génica 178
Potenciometría 91 Práctica 14. Determinaión de glucosa en sangre
Electroforesis 93 total. 183
Soluciones 96
Manejo de material biológico 101 Práctica 15. Integración metabólica 186
Medidas de seguridad 103
III. Casos de correlación bioquímica y práctica
II. Experimentos
médica
Caso 1. Cólera 195
Práctica 1. Soluciones 133
Caso 2. Oclusión intestinal. Acidosis metabólica.
Práctica 2. Regulación del equilibrio ácido-base
Deshidratación grave 196
después de ejercicio muscular intenso y de la
Caso 3. Hipoglucemia secundaria a intoxicación
ingestión de bicarbonato de sodio 137
Alcohólica 198
Práctica 3. Titulación de un aminoácido
Caso 4. Cetosis por inanición. Obesidad 199
con una base y aplicación de la ecuación
Caso 5. Hipercolesterolemia y aterosclerosis 200
de Henderson y Hasselbalch. Determinación
Caso 6. Gota 202
del pK1 y del pK2 140
Práctica 4. Estudio de las proteínas corporales 142
Práctica 5. Cinética enzimática. Efecto de la

VII
PROGRAMA ACADÉMICO

I. Misión de la Facultad de Medicina

“Formar a los líderes de las próximas • Calidad académica. Que significa


generaciones de médicos mexicanos y contribuir a favorecer la formación más allá de la
establecer un sistema de salud capaz de preservar simple información en sus estudiantes,
y desarrollar las capacidades físicas y mentales de fortaleciendo su preparación en las
nuestra población y colaborar en la preparación de ciencias básicas de la medicina que les
investigadores en el campo de las ciencias permita seguir el ritmo de los avances en
médicas. el conocimiento y sus aplicaciones en la
clínica.
Para ello, será necesario fortalecer el compromiso • Vitalidad. Para poder enfrentar el futuro
social de sus estudiantes y su vocación en el contexto del cambio científico y
humanística para tener a la vida humana y a la tecnológico y de las modificaciones que
dignidad del hombre como valores supremos, por experimenten las condiciones
lo que será necesario que los alumnos adquieran socioeconómicas de nuestra población.
los conocimientos científicos más avanzados para Para ello, será necesario rescatar la
responder cabalmente a las necesidades de salud enseñanza tutorial orientada a la solución
de la sociedad mexicana. de problemas de manera original e
innovadora y capaz de inducir en el
La educación y la formación médica en la Facultad estudiante una conciencia clara de sus
deberán ser factores de cambio e innovación en necesidades de actualización permanente
las instituciones de salud y contribuir a incrementar y educación continua.
las aportaciones de la medicina mexicana al • Investigación original. Por cuanto que es
conocimiento universal. un elemento indispensable para alcanzar
un sistema de salud de alta calidad y
eficiencia, y porque es la única vía para
El apego a la prestación de servicios de la más
atender cabalmente los complejos
alta calidad, la curiosidad científica y el
fenómenos que inciden en el proceso de la
compromiso irrestricto con los principios
salud y la enfermedad en medicina,
fundamentales de la ética médica deberán ser la
educación e investigación son
característica de sus egresados. Para ello será
inseparables.
necesario organizarse en un ambiente de libertad
intelectual, en el que se conjuguen el talento de • Humanismo. Porque el fin último del
profesores y alumnos, fomentando la creatividad y médico es el hombre mismo. Para ello
la productividad individual y colectiva”. habrá de desarrollar una sensibilidad
singular ante el dolor y la angustia de los
enfermos, ante su ignorancia y sus
En suma, la Facultad de Medicina deberá problemas, para que pueda ayudar a
caracterizarse por su calidad académica, su superarlos. Para poder servir a la sociedad
vitalidad, su compromiso decidido con la y los individuos con plena conciencia de
investigación original y los principios humanísticos sus valores y potencialidades habrá que
de la profesión para poder consolidar el liderazgo inducir en nuestros estudiantes una actitud
que legítimamente le corresponde. humanitaria.

8
• Liderazgo. Entendiendo éste como la aspectos afectivos, emocionales y
capacidad para mantener una actitud de conductuales de los pacientes bajo su
vanguardia y compartir conocimientos y cuidado.
experiencia; para orientar la educación • Conoce con detalle los problemas de
médica nacional y fortalecer tanto la salud de mayor importancia en nuestro
investigación en salud como nuestro país y es capaz de ofrecer tratamiento
sistema de educación superior; para adecuado a los pacientes que los
transformar la medicina mexicana y presentan.
responder cada vez mejor a una sociedad • Promueve el trabajo en equipo con otros
que se esfuerza en superarse y demanda, médicos y profesionales de la salud y
con razón, una mayor calidad a todo el asume la responsabilidad y el liderazgo
sistema de salud. que le corresponden, según su nivel de
competencia y papel profesional.
Congruente con la Misión de la Facultad de • Dispone de conocimientos sólidos acerca
Medicina, la función del médico se caracteriza de de las ciencias de la salud, lo que le
la siguiente manera: permite utilizar el método científico como
herramienta de su práctica clínica habitual
El médico es un profesional comprometido a y lo capacita para optar por estudios de
preservar, mejorar y restablecer la salud del posgrado, tanto en investigación como en
ser humano; sus acciones se fundamentan en alguna especialidad médica.
el conocimiento científico de los fenómenos • Tiene una actitud permanente de
biológicos, psicológicos y sociales. Su búsqueda de nuevos conocimientos, por lo
ejercicio profesional se orienta que cultiva el aprendizaje independiente y
primordialmente a la práctica clínica, la cual autodirigido, lo que le permite actualizarse
debe ejercer con conocimiento, diligencia, en los avances de la medicina y mejorar la
humanismo, prudencia y juicio critico, calidad de la atención que otorga.
guiándose por un código ético que considera a • Se mantiene actualizado en relación a los
la vida humana como valor supremo. avances científicos y tecnológicos más
recientes; utiliza la información y la
EL PERFIL PROFESIONAL DEL EGRESADO DE tecnología computacional para la
LA CARRERA DE MÉDICO CIRUJANO adquisición de nuevos conocimientos y
como una herramienta de trabajo dentro
de su práctica profesional.
El egresado de la Facultad de Medicina de la
Universidad Nacional Autónoma de México que
cumple satisfactoriamente los objetivos y adquiere
los conocimientos, habilidades, destrezas y
actitudes que integran el Plan Único de Estudios:

• Es un profesional capacitado para ofrecer


servicios de medicina general de alta
calidad y, en su caso, para referir con
prontitud y acierto aquellos pacientes que
requieren cuidados médicos
especializados.
• En la atención de los pacientes, además
de efectuar las acciones curativas, aplica
las medidas necesarias para el fomento a
la salud y la prevención de las
enfermedades, apoyándose en el análisis
de los determinantes sociales y
ambientales, especialmente el estilo de
vida.
• Se conduce según los principios éticos y
humanistas que exigen el cuidado de la
integridad física y mental de los pacientes.
• Como parte integral de su práctica
profesional examina y atiende los

9
II. INTRODUCCIÓN:
1. Mapa curricular:
ANATOMÍA

BIOLOGÍA CELULAR Y TISULAR

BIOLOGÍA DEL DESARROLLO


PRIMER AÑO

BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

PSICOLOGÍA MEDICA I

SALUD PÚBLICA I

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIÓN*** ELECCIÓN***

CIRUGÍA I

FARMACOLOGÍA
SEGUNDO AÑO

FISIOLOGÍA

INMUNOLOGÍA

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

SALUD PÚBLICA II

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIÓN*** ELECCIÓN***

PROPEDÉUTICA Y
FISIOPATOLOGÍA*
PATOLOGÍA

MEDICINA GENERAL I*
TERCER AÑO

PSICOLOGÍA MÉDICA II**

SALUD PÚBLICA III*** GENÉTICA CLÍNICA*

SEMINARIO CLÍNICO*

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIÓN*** ELECCIÓN***

HISTORIA Y FILOSOFÍA DE LA
CUART
O AÑO

SALUD PÚBLICA IV** MEDICINA

10
MEDICINA GENERAL II*

CIRUGÍA II*

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIÓN*** ELECCIÓN***

INTERNADO MÉDICO*
QUINTO AÑO

GINECOLOGÍA Y
OBSTETRICIA 

COMUNIDAD 

URGENCIAS 
PEDIATRÍA 

INTERNA 

CIRUGÍA 
MEDICINA
SEXTO AÑO

S E R V I C I O S O C I A L

* Estas asignaturas son la base del entrenamiento en el área clínica, en éllas el alumno
adquirirá los conocimientos acerca de la patología de los diversos aparatos y sistemas,
así como las habilidades y destrezas necesarias para el manejo de los problemas de
salud más frecuentes.
** Estas asignaturas corresponden al área sociomédica.
*** Su propósito es permitir que el alumno profundice o complemente de acuerdo a sus
preferencias algunos contenidos del plan de estudios; tenga la posibilidad de capacitarse
en ciertas áreas no consideradas en dicho plan, así como también dar flexibilidad al
currículo.
 Áreas de rotación bimestral.

11
2. Importancia de la asignatura en la carrera. Molecular se encuentran descritos en este Manual
de objetivos del curso y prácticas de laboratorio,
La segunda mitad del siglo XX fue el marco por lo que te sugerimos que los revises
temporal de una expansión acelerada de nuestro cuidadosamente; en caso de que algún concepto
entendimiento del mundo y del Universo en no se estudie en la clase, es tu responsabilidad
general y, como consecuencia, la orientación de buscar la información correspondiente y
una mayor cantidad de recursos humanos y aprenderla. Te deseamos que el aprendizaje de
materiales hacia la investigación en todas las esta disciplina te resulte grato y que lo lleves a
áreas de la ciencia. El campo de la medicina ha feliz término.
tenido grandes avances, particularmente en las
áreas del conocimiento de la Bioquímica y de la
Biología Molecular. La información generada por III DATOS GENERALES DE LA ASIGNATURA
estas disciplinas ha sido fundamental para
comprender mejor el fenómeno de la vida y para 1. Coordinación: Departamento de
abordar el estudio de las enfermedades. Bioquímica
2. Tipo de Asignatura: Teórica y práctica
Los conocimientos aportados por la Bioquímica y 3. Ubicación Primer año
la Biología Molecular no sólo permiten entender 4. Duración Anual
mejor la manera en la que están estructuradas las 5. N° de horas Teoría: 160 h
células y los tejidos, el funcionamiento del Práctica: 120 h
organismo y cuáles son las fundamentos de la 6. N° de créditos 22
patogénesis existente, sino que proporcionan las 7. Clave 1115
bases para el uso racional de las estrategias 8. Requisitos académicos Cubrir los
terapéuticas, principalmente en el campo del requisitos de ingreso a la licenciatura
descubrimiento de fármacos efectivos con un
mínimo de efectos indeseables.
IV OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
Si bien es cierto que los avances son
extraordinarios, aún quedan muchas interrogantes 1. Que el estudiante entienda los fenómenos
por contestar. Día con día se avanza en la biológicos desde el punto de vista molecular y
búsqueda de tales respuestas. En consecuencia, que sea capaz de integrar este conocimiento
la Bioquímica y la Biología Molecular forman parte en la estructura fisiológica de la célula, del
de esa gran plataforma de los programas actuales tejido y del organismo.
de formación académica de los médicos cirujanos.
2. Que el estudiante conozca los mecanismos
El Departamento de Bioquímica ofrece a los moleculares del funcionamiento del organismo
estudiantes de la carrera de médico cirujano el humano de una manera dinámica e integral y,
programa de contenidos de este curso, el cual está al mismo tiempo, comprenda cómo esos
dirigido e integrado con un enfoque médico, mecanismos se encuentran alterados en la
adaptado a las necesidades de una modernidad enfermedad.
inquisitiva, demandante de conocimientos cada
vez más aproximados a un contexto que permita 3. Que el estudiante demuestre, mediante
esa aspiración superior de contar con una actividades ex profeso, que ha podido integrar
medicina de alta calidad. el conocimiento a nivel molecular como una
herramienta fundamental para la comprensión
Por otro lado, ahora que inicias tus estudios de los procesos fisiológicos y de la
profesionales es importante que sepas que el fisiopatología y con ello entienda los principios
aprendizaje es una en los que se apoya la tecnología empleada
experiencia activa de descubrimiento, por lo que en el diagnóstico de enfermedades.
no sólo deberás esperar que tus maestros te
guíen a lo largo de tus estudios. 4. Que el estudiante aplique el método científico
como una herramienta en la identificación, el
Entre las habilidades que deberás adquirir durante análisis y la solución de problemas médicos.
tu formación profesional están la búsqueda de
información y la autoenseñanza.

Los conocimientos mínimos necesarios para


aprobar el curso de Bioquímica y Biología

12
V. METODOLOGÍA EDUCATIVA II. Aspectos fisicoquímicos del
Con base en lo descrito en el Plan Único de funcionamiento celular
Estudios respecto a este tema en los puntos A. 1, A. Aspectos básicos de fisicoquímica aplicados
2, 4, 6, 7, 8 y 9 y B. 1 y 2, el profesor utilizará, en a la bioquímica
la medida de lo posible, algunos procedimientos y B. Agua
técnicas que impliquen una metodología centrada C. Equilibrio hidroelectrolítico y ácido-base
en la solución de problemas, la vinculación teórico- D. Aminoácidos y proteínas
práctica de los conocimientos (el desarrollo y D.1. Aminoácidos
discusión de prácticas de laboratorio de interés D.2. Proteínas
médico), la aplicación de técnicas de enseñanza E. Enzimas y coenzimas
que favorezcan la participación activa de los E.1. Características de un sistema
estudiantes (como seminarios, discusión de casos, enzimático
las semanas de integración básica-clínica), así E.2. Cinética enzimática
como la búsqueda y análisis crítico de la E.3. Aspectos médicos de la enzimología
información, sea de libros como de fuentes
automatizadas, para lograr los objetivos de
aprendizaje. UNIDAD TEMÁTICA II: Metabolismo

III. Metabolismo y bioenergética


VI. ESTRUCTURA DEL CURSO A. Fundamentos del metabolismo celular
B. Carbohidratos
1. ACTIVIDADES PROPUESTAS: B.1. Estructura
Inicio del curso 25 de agosto de 2008 y termino el B.2. Digestión y absorción
20 de mayo de 2009. C. Metabolismo energético
C.1. Glucólisis
El curso se divide en TRES UNIDADES C.2. Papel de la mitocondria en las funciones
TEMÁTICAS: oxidativas
a) Estructura molecular (correspondiente al 25% C.3. Descarboxilación del piruvato
de la calificación). C.4. Ciclo de los ácidos tricarboxílicos (ciclo
b) Metabolismo (correspondiente al 50% de la de Krebs)
calificación). C.5. Cadena de transporte de electrones
c) Biología molecular (correspondiente al 25% de (cadena respiratoria)
la calificación). C.6. Fosforilación oxidativa
C.7. Radicales libres
El contenido educativo del curso consiste en: D. Otras vías metabólicas de los carbohidratos
D.1. Gluconeogénesis
a) Teoría. D.2. Glucogenólisis y glucogénesis
b) Trabajo de laboratorio y programas de D.3. Vía del fosfogluconato (ciclo de las
aprendizaje de la bioquímica asistida por pentosas)
computadora. D.4. Regulación de la glucemia
c) Revisión de casos de correlación bioquímica- E. Lípidos
práctica médica. E.1. Estructura
d) Solución de problemas. E.2. Digestión, absorción y transporte
e) Semanas de Integración básica-clínica F. Metabolismo de lípidos
F.1. Oxidación de los ácidos grasos (ß-
2. UNIDADES TEMÁTICAS Y CONTENIDO oxidación)
TEMÁTICO: F.2. Síntesis y utilización de los cuerpos
cetónicos
UNIDAD TEMÁTICA I: Estructura molecular F.3. Síntesis de ácidos grasos
F.4.Síntesis y degradación de triacilgliceroles
I. Lógica molecular de la vida F.5. Síntesis y degradación de fosfolípidos
A. Características de la materia viva F.6. Metabolismo del colesterol
B. Niveles de la organización celular F.7. Estructura y metabolismo de las
B.1 Bioelementos lipoproteínas
B.2 Moléculas precursoras y F.8. Regulación y alteraciones del
macromoléculas metabolismo de lípidos
B.3 Estructuras, orgánulos, células, tejidos y
organismos

13
G. Metabolismo de los compuestos B. Flujo de la información genética
nitrogenados B.1. Flujo de la información genética
G.1. Aminoácidos y proteínas B.2. Síntesis del DNA (duplicación)
G.2. Nucleótidos B.3. Transcripción
H. Regulación e integración metabólica B.4. Traducción
C. Mutaciones y reparación del DNA
D. Niveles de regulación de la expresión
UNIDAD TEMÁTICA III: Biología genética
Molecular E. Virus, oncogenes y transformación
F. Técnicas de manipulación del DNA
IV Biología Molecular
A. Organización del genoma

14
3. CALENDARIO DE ACTIVIDADES:

CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA PRIMERA UNIDAD TEMÁTICA


(BLOQUE 1)

Semana Fecha Tema


Lógica molecular de la vida: Características de la materia viva y
1 25 al 29 de agosto jerarquía de la organización celular.
A. Aspectos básicos de Fisicoquímica aplicados a la
Bioquímica.

2 1° al 6 de septiembre B. Agua
Práctica: Soluciones

3 8 al 13 de septiembre B. Agua
Amortiguadores
C. Equilibrio hidroelectrolítico y ácido-base
Práctica: Soluciones
Revisión del caso clínico: CÓLERA

4 15 al 20 de septiembre** C. Equilibrio hidroelectrolítico y ácido-base


Revisión del caso clínico: OCLUSIÓN INTESTINAL

5 22 al 27 de septiembre D. Aminoácidos
Práctica: Titulación de un aminoácido

6 29 de septiembre al 4 de D. Aminoácidos y Proteínas


octubre Práctica: Titulación de un aminoácido
Práctica: Determinación de proteínas plasmáticas

7 6 al 11 de octubre E. Enzimas y coenzimas


Práctica: Determinación de proteínas plasmáticas
Práctica Cinética Enzimática

8 13 al 18 de octubre/ E. Enzimas y coenzimas


Práctica: Determinación de proteínas plasmáticas
Práctica: Cinética enzimática
9 24 octubre PRIMER EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 HRS.

* día de asueto
/ Exámenes departamentales

15
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA SEGUNDA UNIDAD TEMÁTICA
(BLOQUE 2)

Semana Fecha Tema

1 25 de octubre A. Fundamentos del metabolismo


A. Fundamentos del metabolismo
2 27 de octubre al 1° de noviembre/* B. Estructura y Digestión de carbohidratos
C. Glucólisis

C.Glucólisis.
3 3 al 8 de noviembre/ C. Descarboxilación del piruvato
Ciclo de los ácidos tricarboxílicos
Práctica: Efecto de la insulina sobre la Glucemia
de la rata
C.Ciclo de los ácidos tricarboxílicos
4 10 al 15 de noviembre C Cadena de transporte de electrones
Práctica: Efecto de la insulina sobre la Glucemia
de la rata.
Práctica: Bombeo de Protones
C Cadena de transporte de electrones
5 17 al 22 de noviembre*/ C. Fosforilación oxidativa
Práctica: Bombeo de Protones
C. Fosforilación oxidativa
6 24 al 29 de noviembre / C.Radicales libres
1ª. Semana de Integración Básica-Clínica
Revisión del caso clínico: HIPOGLUCEMIA E
7 1 al 4 de diciembre/ INTOXICACIÓN ALCOHÓLICA

5 de diciembre SEGUNDO EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-


7 11:00 HRS.

* Día de asueto
/ Exámenes departamentales

16
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA SEGUNDA UNIDAD TEMÁTICA
(BLOQUE 3)
Semana Fecha Tema
8 al 11 de diciembre// D. Vía del fosfogluconato
1 D. Gluconeogénesis
2 15 de diciembre 2008
al 3 de enero de 2009 Vacaciones de Navidad
D. Glucogénesis y glucogenólisis
3 5 al 10 de enero D. Regulación de la glucemia
Práctica : Estudio General del metabolismo de
carbohidratos
B. Estructura y Digestión de lípidos
3 12 al 17de enero C.Prácticas comunitarias en los grupos asignados
4 F. Oxidación de los ácidos grasos
19 al 24 de enero/ F. Síntesis y utilización de cuerpos cetónicos
F. Síntesis de ácidos grasos
5 26 al 31 de enero/ F. Síntesis y degradación de triacilgliceroles
Práctica: El efecto del etanol sobre la
Lipoperoxidación
Práctica: El efecto del etanol sobre la
6 2 al 7 de febrero* Lipoperoxidación
Revisión del caso clínico CETOSIS POR INANICIÓN Y OBESIDAD
F. Metabolismo del colesterol
7 9 al 14 de febrero Metabolismo de Lipoproteínas
Práctica: Determinación de lípidos y lipoproteínas
F. Regulación y alteraciones del metabolismo de lípidos
8 16 al 21 de febrero Revisión del caso clínico: HIPERCOLESTEROLEMIA Y
ATEROSCLEROSIS
Práctica: Determinación de lípidos y lipoproteínas
G. Metabolismo de los compuestos nitrogenados
1. Aminoácidos y proteínas
G. Metabolismo de los compuestos nitrogenados
9 23 al 28 de febrero// 1. Aminoácidos y proteínas
2. Ciclo de la urea
2ª. Semana de integración básica-clínica
Práctica: El efecto del tetracloruro de carbono sobre las
Transaminasas
10 G. Nucleótidos
2 al 7 de marzo/ 1. Purinas
Práctica: El efecto del tetracloruro de carbono sobre las
Transaminasas
11 9 al 14 de marzo// G. Nucleótidos
2. Pirimidinas
Revisión del caso clínico: GOTA
Práctica: Determinación de productos finales del metabolismo
12 16 al 21 de marzo* H. Regulación e integración metabólica
Práctica: Determinación de productos finales del
Metabolismo nitrogenado
23 al 25 de marzo H. Regulación e integración metabólica
13 TERCER EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 HRS.
26 de marzo

• Día de asueto
• / Exámenes departamentales

17
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA TERCERA UNIDAD TEMÁTICA
(BLOQUE 4)

Semana Fecha Tema

1 27 al 28 de marzo A. Flujo de la información genética


B. Estructura de los ácidos nucleicos y sus funciones

2 30 de marzo al 4 de abril C. y G Organización del DNA


G. Organización del genoma
3
6 al 11 de abril Semana Santa
D. Mecanismos de síntesis del DNA
4 13 al 17 de abril E. Mecanismos de transcripción
Prácticas comunitarias en los grupos asignados
Modificación postranscripcional
5 20 al 24 de abril F. Mecanismos de traducción

F. Modificación postraduccional
6 27 de abril al 2 de mayo* H. Mutaciones y reparación del DNA

7 4 al 9 de mayo* I. Niveles de regulación de la expresión genética


Práctica: Huella Génica
J. Virus, oncogenes y transformación
8 11 al 16 de mayo*///
K. Técnicas de manipulación del DNA
Práctica: Huella Génica
18 al 22 de mayo*// K. Técnicas de manipulación del DNA
9
20 de mayo CUARTO EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 hrs.

* Día de asueto
/ Exámenes departamentales

Los contenidos específicos correspondientes a este programa, tanto teóricos, como las prácticas de
laboratorio y los casos clínicos a que hace referencia esta calendarización de actividades se encuentran en el
manual de objetivos y prácticas de laboratorio de la Asignatura de Bioquímica y Biología Molecular.

18
VII. LINEAMIENTOS DE EVALUACIÓN presentación de trabajos, participación en
clase, ejercicios de integración y de
A. Lineamientos Generales para la Evaluación de laboratorio, prácticas obligatorias, talleres y
los Alumnos en las Asignaturas de la Carrera de actitud asumida por el alumno en el curso.
Médico Cirujano
5. La evaluación departamental corresponderá
Los presentes lineamientos tienen su a la calificación obtenida por el alumno en los
fundamento en el Reglamento General de exámenes teóricos y prácticos parciales. Los
Exámenes de la UNAM y en el Plan Único de exámenes serán elaborados colegiadamente
Estudios de la carrera, considerando además y aplicados por los profesores del curso, bajo
las características específicas de las diferentes la coordinación de los departamentos o
asignaturas. secretaría correspondientes.

1. Cada departamento o secretaría responsable 6. Los exámenes se integrarán a partir de


de una asignatura establecerá en el bancos de reactivos elaborados por cada
programa académico correspondiente las departamento o secretaría, con la
unidades temáticas en que se dividirá y el participación de los profesores. Tendrán las
número de evaluaciones parciales con que características que permitan evaluar de
se calificará a los alumnos. forma homogénea, el grado de aprendizaje y
dominio de los conocimientos, habilidades y
2. Los programas académicos de las competencias definidos en el programa de la
asignaturas incluirán, entre otras, la asignatura. Para ello, los bancos contarán
definición de: con la definición del grado de dificultad de los
reactivos, su capacidad discriminatoria y los
a) La composición y ponderación de la contenidos evaluados.
forma en que se evaluará a los alumnos
en la calificación del profesor. 7. El Consejo Técnico definirá el calendario de
exámenes departamentales con base en la
b) Si se entrega o no a los alumnos el propuesta que formule la Secretaría de
examen y su clave de respuestas. Servicios Escolares, previa consulta con los
departamentos y representantes de alumnos.
c) El número de reactivos y el tiempo para
resolver los diferentes exámenes. 8. Con los resultados de las evaluaciones del
profesor y del examen departamental se
3. En todas las asignaturas se contará con dos definirá si el estudiante exenta o no la
calificaciones: la del profesor y la totalidad del examen ordinario, o si deberá
departamental. presentar alguna, algunas o todas las
unidades temáticas del curso, bajo los
a) Para cada asignatura se definirá la siguientes criterios:
ponderación de cada una de ellas, la que
podrá variar entre el 40 y 60% y cuya a) El alumno quedará exento de presentar
suma deberá representar el 100%. la totalidad del examen ordinario, si el
promedio de las calificaciones
b) Para cada unidad temática se contará aprobatorias obtenidas en las unidades
con una calificación que permitirá temáticas es de 8.5 o mayor, y tiene un
determinar si el alumno está o no exento mínimo de 80% de asistencias.
de presentar el examen ordinario en su
totalidad, o si deberá presentar alguna o b) El alumno podrá exentar la presentación,
algunas de las unidades temáticas del en el examen ordinario, de una o varias
curso. unidades temáticas en las que haya
obtenido un promedio mínimo de 8.5.
4. La evaluación del profesor incluirá una
calificación por cada unidad temática del c) En relación con el inciso que antecede, la
curso. El profesor informará al departamento calificación obtenida por el alumno en la
o secretaría correspondiente y a sus unidad temática exenta, sin redondeo, se
alumnos, la forma en que los evaluará, la que hará equivalente al número de aciertos
podrá ser compuesta, entre otras, por los que corresponda en el examen ordinario
resultados de los exámenes que aplique, la y esta cifra se sumará a los aciertos

19
obtenidos en las unidades temáticas dos veces en la asignatura no puedan
presentadas en dicho examen, siempre y inscribirse nuevamente a ella, o d) hayan
cuando éstas últimas sean aprobatorias. llegado al límite de tiempo en que pueden
estar inscritos en la carrera.
d) La calificación así obtenida, será la que
se asiente en el acta correspondiente. El examen extraordinario abarcará la
totalidad del programa y podrá incluir la
9. Los exámenes ordinarios serán elaborados evaluación de aspectos teóricos y prácticos
colegiadamente y aplicados por los según corresponda. En caso de ser así, para
profesores de la asignatura, bajo la acreditar la asignatura se requiere obtener
coordinación de los departamentos o una calificación aprobatoria en cada uno de
secretaría correspondientes, a los alumnos estos aspectos.
que no hubieran alcanzado la exención total
del examen. La calificación obtenida en el examen no será
promediada con ninguna calificación
Podrán presentar examen ordinario, los precedente.
alumnos que habiendo cursado la materia no
hayan quedado exentos de conformidad con 11. La calificación obtenida con decimales se
lo arriba señalado. Se considerará cursada expresará con base en lo siguiente:
la materia cuando se cuente con al menos el
80% de asistencia al curso, se hayan a) En calificaciones finales aprobatorias con
presentado los exámenes parciales y fracción de 0.5 a 0.9, éstas se
realizado los ejercicios, trabajos y prácticas redondearán al número entero inmediato
obligatorias que el programa académico de la superior, las fracciones de 0.1 a 0.4 se
asignatura determine. redondearán al entero inmediato inferior;
entendiendo por calificación final
Los exámenes ordinarios podrán incluir la aprobatoria, a la alcanzada en el caso de
evaluación de aspectos teóricos y prácticos la exención total o a la obtenida en los
según corresponda. En caso de ser así, para exámenes ordinarios o extraordinario.
acreditar la asignatura se requiere obtener
una calificación aprobatoria en ambos b) La calificación mínima aprobatoria será 6
aspectos. (seis). Las calificaciones menores a este
entero serán expresadas en los
De acuerdo a la legislación universitaria documentos correspondientes como 5
habrá dos periodos de exámenes ordinarios, (cinco), que significa No Acreditada.
los cuales deberán tener condiciones
semejantes, pudiendo presentarse el alumno c) Las calificaciones parciales se
en cualquiera de ellos, o en ambos. Si el expresarán con un decimal, y en relación
alumno acredita la materia en alguno, la con el inciso arriba señalado, las
calificación obtenida será definitiva. calificaciones no aprobatorias no se
expresarán como 5 (cinco), sino con la
10. Los exámenes extraordinarios serán calificación que corresponda.
elaborados colegiadamente y aplicados de
forma similar a los ordinarios. En el caso de 12. En todos los tipos de exámenes parciales, el
un alumno que hubiera alcanzado la profesor realizará la realimentación con sus
exención parcial de una o varias unidades alumnos, dándoles a conocer las
temáticas, no se seguirá el procedimiento calificaciones en un plazo no mayor de 10
señalado con anterioridad, es decir, el días una vez realizada la evaluación
alumno que presente examen extraordinario correspondiente. Las rectificaciones que
será evaluado en la totalidad de la sean necesarias en caso de error, se
asignatura. realizarán en los siguientes 15 días a partir
de la fecha en que se informen los
Podrán presentar examen extraordinario los resultados.
alumnos que: a) habiendo estado inscritos en
la asignatura no la hayan acreditado, b) En caso de revisión de examen, se estará a
siendo alumnos de la Facultad no hayan lo dispuesto por el artículo 8° del Reglamento
estado inscritos en la asignatura o no la General de Exámenes que señala que a
hayan cursado, c) habiendo estado inscritos petición de los interesados, los directores de

20
las facultades y escuelas de la Universidad evaluación del aprendizaje en todas las
acordarán la revisión de las pruebas dentro asignaturas, en el examen profesional y en
de los 60 días siguientes a la fecha en que se los resultados obtenidos por los alumnos en
den a conocer las calificaciones finales para el Examen Nacional de Aspirantes a
que, en su caso, se modifiquen las Residencias Médicas (ENARM).
calificaciones, siempre que se trate de
pruebas escritas, gráficas o susceptible de 17. Los asuntos no previstos serán resueltos por
revisión. Para tal efecto, el director el Director siguiendo principios de equidad y
designará una comisión formada justicia. De sus decisiones y de la necesidad
preferentemente por dos profesores de la de ajustar los presentes Lineamientos,
asignatura de que se trate, la que resolverá deberá informar al Consejo Técnico para que
en un plazo no mayor de 15 días. se determine lo conducente.

13. El proceso de calificación se ajustará a lo


siguiente: B. Lineamientos específicos de la asignatura
de Bioquímica y Biología Molecular
a) La Secretaría de Servicios Escolares
realizará la lectura óptica y análisis El programa de la asignatura consta de dos partes
estadístico de los resultados de los impartidas simultáneamente: Teoría y Práctica.
exámenes, los cuales entregará al
departamento o secretaría Cada una de ellas representa un porcentaje tanto
correspondiente dentro de los cinco días de las calificaciones parciales como de la
posteriores a la presentación de los calificación final del alumno, integrándose de la
exámenes. siguiente manera:

b) La calificación que se asentará en las Calificación Teórica 85%


actas como resultado de la exención, de Calificación Práctica 15%
los exámenes ordinarios o del examen
extraordinario, según sea el caso, será Así, la evaluación del aprovechamiento escolar
de acuerdo a la escala 10, 9, 8, 7, 6 tanto de la parte teórica como de la práctica, se
(Acreditado), 5 (No Acreditado) o NP (No efectuará mediante evaluaciones parciales y, en
Presentado). su caso, mediante examen ordinario o
extraordinario.
c) En un plazo no mayor de cinco días
después de presentado el 1. Evaluaciones Parciales
correspondiente examen ordinario, los
profesores deberán remitir las actas Para evaluar el aprovechamiento escolar de los
revisadas y firmadas a la Secretaría de alumnos, se programarán cuatro evaluaciones
Servicios Escolares. parciales, una para la primera Unidad Temática
(25% de la calificación final), dos para la segunda
14. Los titulares de los departamentos o Unidad Temática (50% de la calificación final) y
secretaría correspondientes, revisarán y una para la tercera (25% de la calificación final).
analizarán con los profesores los resultados
de los exámenes, con el propósito de Cada una de las evaluaciones parciales será
reorientar los programas y los procedimientos expresada en una calificación, la cual se integrará
de enseñanza-aprendizaje de las por la calificación teórica y la calificación práctica
asignaturas. de la siguiente manera:

15. La participación de los profesores en la Calificación Teórica: 85% de la


elaboración de reactivos que conformarán el calificación parcial
banco de la asignatura, será considerada
para su evaluación académica y la de los a) Examen Departamental 50%
diferentes programas de estímulos al b) Calificación del Profesor 50%
desempeño.
Calificación Práctica: 15% de la
16. Anualmente, la Dirección de la Facultad calificación parcial
deberá presentar al Consejo Técnico un
informe de los resultados alcanzados en la

21
a) Examen Departamental de Laboratorio desempeño en los ejercicios, prácticas, trabajos
50% obligatorios y evaluaciones aplicadas en el periodo
b) Calificación del Profesor 50% correspondiente.
En todos los casos, la evaluación será expresada
1. 1 Exámenes Departamentales: en la escala de 0 a 10 de conformidad con lo
señalado anteriormente en los lineamientos
Los exámenes departamentales contendrán 70 generales de evaluación, y deberá ser asentada
reactivos de opción múltiple, de los cuales 60 por el profesor en el lector óptico el día del
estarán relacionados con la Unidad Temática examen departamental correspondiente.
teórica correspondiente y los restantes serán
preguntas relacionadas con aspectos de las 1.3 Calificación Práctica:
prácticas de laboratorio realizadas en el periodo a
evaluar. En las unidades temáticas en las que se Las actividades del laboratorio serán evaluadas
revisen los casos de integración Básica clínica, se periódicamente y se verificará la adquisición de
incluirán 5 preguntas correspondientes al caso habilidades y destrezas por parte del alumno,
revisado, en cada uno de los exámenes mediante su participación y desempeño en cada
departamentales correspondientes. El tiempo una de las diferentes prácticas que se realizarán
correspondiente para resolver dichos exámenes en cada Unidad Temática.
será de dos horas. Una vez realizada la
retroalimentación de los exámenes con el profesor, Esta evaluación permitirá identificar:
éste los devolverá a la coordinación de
enseñanza. a) La capacidad del alumno para integrar
conocimientos y para aplicarlos a un problema
Los temas a explorar en cada examen específico.
departamental serán de la siguiente manera: b) Las habilidades y destrezas del alumno para
desarrollar y ejecutar las maniobras señaladas en
Primer Examen Departamental (Unidad Temática el programa académico del laboratorio.
I): c) La capacidad del alumno para generar
a) Aspectos Teóricos: Capítulos I y II; Casos estrategias que le permitan identificar y proponer
de correlación básico clínicos 1 y 2 soluciones a problemas específicos mediante
b) Aspectos Prácticos: Prácticas de la 1-5: procesos inducto-deductivos.

Segundo Examen Departamental (Unidad La evaluación sobre las habilidades y destrezas


Temática II): adquiridas por los alumnos en cada una de las
a) Aspectos Teóricos: Capitulo III A-D; Caso de prácticas se realizará de acuerdo a los siguientes
correlación básico clínico 3; 1ª. Semana de criterios:
Integración Básica-clínica
b) Aspectos Prácticos: Prácticas de la 6-9 Protocolo
Desarrollo experimental
Tercer Examen Departamental (Unidad Temática Reporte
II):
a) Aspectos Teóricos: Capitulo III E-H; Casos De esta manera se integrará un promedio de
de correlación básico clínicos 4-6; 2ª. Semana de calificaciones de las prácticas realizadas en cada
Integración Básica-clínica Unidad Temática que tendrá el valor porcentual
b) Aspectos Prácticos: Prácticas de la 9-12 que ya fue definido. El resultado será expresado
en la escala de 5 a 10 y deberá ser considerado
Cuarto Examen Departamental (Unidad Temática por el profesor en su evaluación del estudiante,
III) entregada el día del examen Departamental
a) Aspectos Teóricos: Capítulo IV; 3ª. Semana correspondiente.
de Integración Básica-clínica
b) Aspectos Prácticos: Práctica 13
2. Exámenes Ordinarios:
1.2 Calificación del Profesor:
El examen ordinario en su primera o, en su caso,
El profesor estimará la competencia de los segunda vuelta, abarcará la totalidad del programa
estudiantes a través de la apreciación de los teórico-práctico de la asignatura y estará dividido
conocimientos y aptitudes adquiridos durante el en dos secciones.
curso, mediante su participación en clases y su

22
Contendrá 80 reactivos de opción múltiple Las actas serán firmadas por uno o dos profesores
relacionados con todas las Unidades Temáticas que hayan impartido diferente Unidad Temática al
que integran el programa teórico de la asignatura mismo grupo y deberán hacerlo en la oficina de la
(68 reactivos) y el resto (12) relacionados con los Coordinación de Enseñanza en la fecha y hora
aspectos de laboratorio. La duración de cada que se indique en la misma Coordinación.
examen será de dos horas y se realizará la
retroalimentación correspondiente con el profesor. 5. Misceláneos
Los exámenes se devolverán, después de
realizada dicha retroalimentación, a la 5.1 Publicación de calificaciones:
coordinación de enseñanza.
Todas las calificaciones a que hace referencia este
La evaluación de cada examen ordinario será Programa se harán del conocimiento de los
expresada en una calificación que resultará de las alumnos a través de sus profesores, o
calificaciones correspondientes a las secciones consultando una lista publicada por el
teórica y práctica, integrándose de la siguiente Departamento en lugares visibles.
manera:
6. Lineamientos del Laboratorio
Examen teórico 68 preguntas
(85%) 6.1 Generales
Examen de laboratorio 12 preguntas
(15%) a) No habrá cambios de grupo o sección de
laboratorio que no sean realizados en el periodo
estipulado para ello, mediante el trámite
3. Examen Extraordinario administrativo correspondiente ante Servicios
Escolares.
El examen abarcará la totalidad del programa, de b) Habrá una tolerancia de 10 minutos en la hora
acuerdo a los objetivos educativos de la asignatura de entrada para cada horario de laboratorio.
y estará dividido en 2 secciones: Teórica y práctica c) Los alumnos deberán utilizar bata blanca
durante todas y cada una de las sesiones de
El examen contendrá 80 reactivos de opción laboratorio
múltiple: 68 reactivos correspondientes a aspectos d) El estudiante sólo podrá realizar las prácticas
relacionados con las dos Unidades Temáticas que en el horario y grupo que le corresponda. No se
integran el programa teórico de la asignatura y 12 podrán realizar prácticas en otros horarios o
reactivos que evaluarán los contenidos grupos.
correspondientes al total de las prácticas e) Los alumnos que se encuentran repitiendo el
planteadas en el Programa Académico de la curso de Bioquímica y Biología Molecular deberán
Asignatura. El examen durará 2 horas y la volver a realizar las actividades correspondientes
coordinación organizará la retroalimentación al laboratorio, ya que el curso es teórico-práctico.
correspondiente. Los exámenes se entregarán a la f) Para tener derecho a exentar o a presentar
coordinación. examen final, el alumno deberá cubrir al menos el
80% de asistencias de laboratorio y haberlo
La evaluación del examen extraordinario será acreditado.
expresada en una calificación que resultará de las g) En todas y cada una de las sesiones de
calificaciones correspondientes a las secciones laboratorio, los alumnos deberán de respetar todas
teórica y práctica, integrándose de la siguiente las indicaciones y restricciones que les sean
manera: mencionadas por su profesor, por el personal del
Departamento adscrito a los laboratorios, o a
Examen teórico 85% través de avisos. La persona que transgreda este
Examen práctico 15% lineamiento se hará acreedor a la sanción
correspondiente, de conformidad con la
Legislación Universitaria.
4. Calificación en actas
6.2 Evaluación del Laboratorio
La calificación en actas se asentará según lo
descrito en los Lineamientos generales para la El curso de laboratorio consta de tres Unidades
evaluación de los alumnos en las asignaturas de la Temáticas, la primera de las cuales consta de una
carrera de médico cirujano en el numeral 13. sección, la segunda de dos secciones y la tercera,
de una sección. En cada una de ellas el alumno

23
obtendrá una calificación, la cual estará integrada (tales como asistencia puntual, traer bata, no salir
de la siguiente manera: del laboratorio durante la práctica, no fumar, no
comer, no interferir en el trabajo de otros equipos,
6.2.1 Calificación del profesor. Representa el etcétera).
promedio de las prácticas realizadas durante la b) Organización de las actividades
sección a evaluar y equivale al 50% de la experimentales. Saber qué se va a hacer y cómo,
calificación de laboratorio correspondiente a dicha a fin de disponer adecuadamente del equipo de
Sección. trabajo.
c) Observación. Descripción de las maniobras
6.2.2. Examen Departamental. Todo examen experimentales realizadas y los registros
departamental contará con 10 preguntas obtenidos; anotación cuidadosa de maniobras
concernientes a las prácticas de laboratorio y realizadas.
representarán el 50% de la calificación de d) Razonamiento metodológico. El estudiante
laboratorio de dicha Sección propondrá un cambio específico en la variable
dependiente y no hará un experimento solamente
Como se indicó anteriormente, la calificación del para ver qué pasa (tendrá una hipótesis en la que
Laboratorio corresponde al 15% de la calificación identificará las variables involucradas y el
final de la Sección a evaluar y, por lo tanto, de la argumento que las relaciona).
calificación final del curso

6.3 Criterios de calificación del laboratorio 6.3.3 Reporte (40%):

El Profesor evaluará los siguientes puntos: Éste comprenderá las actividades que el
estudiante realizó durante la sesión de laboratorio
6.3.1 Protocolo y cómo las realizó. Los primeros cuatro puntos se
6.3.2 Desarrollo Experimental reportarán siguiendo las características ya
6.3.3 Reporte descritas para el Protocolo (donde se señaló lo
que se realizaría y en este caso se debe señalar lo
6.3.1 Protocolo (35% de la calificación de la que se logró), esto es:
práctica)
a) Resultados. Presentación y descripción de
Deberá ser revisado en la sesión de discusión registros y datos obtenidos (en este punto queda
correspondiente. Para su evaluación se fuera de lugar mezclar comentarios e impresiones
considerarán los siguientes apartados: sobre los mismos).
b) Análisis de resultados. Descripción del método
a) Título. utilizado en el análisis (de qué manera fueron
b) Antecedentes. Constará de la solución del analizados) y los resultados del análisis
cuestionario correspondiente y de las referencias (promedios, porcentajes, tablas, gráficas, entre
encontradas en la bibliografía respecto al otros).
problema a revisar en la práctica. c) Interpretación de resultados. Confrontar los
c) Planteamiento del problema. Éste definirá el datos obtenidos con aquellos ya publicados e
estudio a realizar. indicar la concordancia o discordancia de los
d) Hipótesis. Ésta dará la solución tentativa del mismos a manera de discusión. De ser necesario,
problema planteado y será susceptible de proponer posibles alternativas. Señalar el apoyo
someterse a prueba durante el desarrollo bibliográfico, cuya cita aparecerá en la sección de
experimental (la hipótesis no se demuestra, sino referencias.
que se acepta o se descarta una vez sometida a d) Conclusión. El estudiante evaluará la hipótesis
prueba). En la mayoría de las prácticas estos en función de los resultados obtenidos y
puntos aparecen en el Manual de Prácticas de argumentará sobre la validez de la misma.
Laboratorio. e) Referencias. Contendrá las citas bibliográficas
e) Referencias. Serán citadas específicamente utilizadas en la sección de antecedentes y
con relación a los antecedentes y tendrán un discusión (dentro de interpretación). Existen casos
formato estandarizado para trabajos científicos. particulares en que es obligado citar el método
utilizado. Estas citas se escribirán siguiendo lo
6.3.2 Desarrollo Experimental (25%) descrito para el Protocolo.
a) Comportamiento personal. Éste se refiere a la
conducción general de las actividades del El promedio de las calificaciones de las prácticas
estudiante dentro del laboratorio de prácticas corresponderá al 50% de la calificación de este

24
rubro en la sección correspondiente, sin olvidar
que la calificación de las prácticas representa el IX BIBLIOGRAFÍA
15% de la calificación global de la sección a
evaluar.
BÁSICAS

VIII OBLIGACIONES DE LOS PROFESORES Y 1. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
ALUMNOS aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Reverté; 2004.
Profesores 2. Laguna J, Piña E. Bioquímica de Laguna.
5a.ed. México: Editorial El Manual Moderno;
Con base en el artículo 56 y 61 del Estatuto de 2002.
Personal Académico de la UNAM, el profesor de
Bioquímica y Biología Molecular: 3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioquímica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
1. Impartirá sus clases teóricas y/o prácticas con Omega; 2005.
puntualidad, según el horario que le haya asignado 4. McKee T, McKee RJ. Bioquímica. 3a. ed.
el Departamento, en el calendario escolar España: McGraw-Hill Interamericana Editores;
correspondiente. 2003.
2. Impartirá su enseñanza y calificará los
conocimientos de sus estudiantes sin hacer 5. Murray KR, Granner DK, Mayes PA, Rodwell
ninguna distinción entre ellos. Para realizar dicha VW. Bioquímica de Harper. 16a. ed. México:
evaluación considerará diversos aspectos como IPN/Editorial El Manual Moderno; 2004.
asistencia, desempeño en teoría y laboratorio, 6. Stryer L. Bioquímica. 5a. ed. Barcelona:
como aparece en los lineamientos de evaluación Editorial Reverté; 2003.
de la sección previa de este programa académico.
3. Cumplirá con el programa de la asignatura de
Bioquímica y Biología Molecular aprobado por el
COMPLEMENTARIAS
Consejo Técnico de la Facultad y se los dará a
conocer a sus estudiantes el primer día de clases, 1. Alberts B, Bray D, Lewis J. Biología molecular
así como la bibliografía correspondiente al curso. de la célula. 3a. ed. Barcelona: Ediciones
4. Aplicará los exámenes departamentales en las Omega; 1992.
fechas y lugares indicados por la Coordinación de
Enseñanza de la asignatura. Hará la retro- 2. Bloomfield MM.Química de los organismos
alimentación de sus estudiantes después de los vivos. México: Editorial Limusa; 1997.
exámenes departamentales y/o finales. 3. Holum JR. Fundamentos de química general,
5. Se abstendrá de impartir clases particulares orgánica y bioquímica para ciencias de la
remuneradas o no a sus propios alumnos. salud. México: Editorial Limusa Wiley; 2001.
Alumnos

Los alumnos de la asignatura de Bioquímica y


Biología Molecular:
1. deberán cumplir con el 80% de asistencias al
curso teórico y al laboratorio y aprobar este último
para tener derecho a la calificación final.
2. deberán presentar los exámenes, tareas y
trabajos que el profesor considere indispensables
para tener derecho a calificación final (Juicio del
Profesor).
3. deberán adquirir y utilizar el Manual de objetivos
y de laboratorio en el aula, tanto de teoría como de
laboratorio.
4. No podrán realizar la práctica del laboratorio si
no traen el manual correspondiente y una bata
blanca.
5. Se abstendrán de introducir alimentos a las
aulas y/o laboratorios de enseñanza.

25
CONTENIDO TEMÁTICO

Primera Unidad Temática


ESTRUCTURA MOLECULAR

26
I
LÓGICA MOLECULAR DE LA VIDA

Al finalizar esta unidad, el alumno conocerá la naturaleza química de los seres vivos y
su organización. La unidad se divide en:

A. Características generales de la materia viva.


B. Niveles de la organización celular.

A. Características generales de la
materia viva

Al finalizar esta subunidad, el alumno conocerá las


características de la materia viva.

A.1 Discutirá la organización de los seres vivos


(procariotos, eucariotos, autótrofos y
heterótrofos) con base en la complejidad de
las estructuras que los constituyen y la
función específica que tienen.
A.2 Discutirá con base en la figura I.1 la
capacidad de los seres vivos para obtener,
transformar y utilizar la energía, así como su Fig. I.1. Ciclo del CO2 y del O2 en los seres vivos.
capacidad de autorregulación y de Modificada de: Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
autoduplicación. bioquímica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 2005.

Los sistemas vivientes son organizaciones en intercambian materia y energía con su entorno, del
extremo complejas que operan bajo principios cual están separados por una membrana. Las
fisicoquímicos. Esta organización de la vida hace funciones básicas de transformación y utilización de
posible un elevado número de procesos la energía realizadas por estos sistemas, así como su
fundamentales que se llevan a cabo en forma reproducción se llevan a cabo con un alto grado de
organizada y regulada en todos los sistemas precisión por proteínas catalíticas específicas
vivientes. Se ha propuesto que la vida está limitada llamadas enzimas. Estas enzimas están presentes en
por los principios de la física y la química, pero lo las células y actúan como catalizadores que hacen
cierto es que logra trascender hasta los más posible que se lleven a cabo reacciones sin que la
elevados principios biológicos. célula sufra daño alguno.
Todos los seres vivos son sistemas organizados y La materia evoluciona aumentando su
funcionando en forma coordinada, constituidos complejidad debido al incremento en la variedad de
fundamentalmente por moléculas de carbohidratos, unidades que la constituyen y a la especialización
lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Estos sistemas que éstas alcanzan. Cuanto más complejo es un

27
sistema más especializadas son sus partes y, por Hay dos principales clases de células: las
ello, más dependen unas de otras. procarióticas y las eucarióticas. Las células
Las características universales de los procarióticas tienen un solo cromosoma que ocupa
sistemas se encuentran a nivel bioquímico. Todas las un espacio dentro de la célula denominado nucleoide
células obtienen energía, ya sea de la luz del sol o de y se halla en contacto directo con el citoplasma. Las
las moléculas de alimento ricas en energía y la células eucarióticas poseen varios cromosomas
almacenan en una molécula con un alto contenido contenidos en un núcleo verdadero con una
energético: el ATP. Las células han desarrollado envoltura nuclear. Adicionalmente presentan una
fundamentalmente tres vías para generar ATP: serie de orgánulos que realizan funciones
fermentación, respiración y fotosíntesis. especializadas como por ejemplo, las mitocondrias
Todas las células tienen la capacidad de que son potentes generadoras de ATP.
autoduplicarse: las moléculas en las que se Se ha propuesto en la teoría de la
almacena esta propiedad son el DNA y el RNA. La endosimbiosis que, desde el punto de vista evolutivo,
universalidad de estas moléculas en todos los las células procarióticas son antecesoras de las
organismos vivos revela que todas las formas de vida eucarióticas.
sobre la Tierra tienen un origen común. Con base en el mecanismo que utilizan para
La importancia del DNA en la reproducción y obtener la energía necesaria para realizar sus
el crecimiento de las células reside en la información funciones vitales podemos agrupar a todas las
contenida en los genes. Las moléculas de DNA son células y organismos en otras dos clases principales:
polímeros de unidades, llamadas nucleótidos, los autótrofos, que utilizan el proceso de fotosíntesis
constituidos por un azúcar, un fosfato y una base para transformar moléculas inorgánicas en glucosa, a
nitrogenada de cuatro tipos diferentes. La secuencia partir de la cual se construyen moléculas más
precisa de bases en el DNA constituye la información complejas, y los heterótrofos, que obtienen la energía
genética. La función clave de esta información es la de moléculas complejas que han sido sintetizadas
de especificar la composición de las proteínas. Más por organismos autótrofos. La energía que contienen
que ninguna otra molécula, las proteínas hacen que estas moléculas complejas es liberada
un organismo sea lo que es. principalmente por su oxidación hasta CO2 y agua en
El copiado exacto del DNA, aunque esencial un proceso llamado respiración.
para el desarrollo individual, no es suficiente para
H He
permitir los cambios evolutivos; tiene que existir una
fuente de variación que proviene, fundamentalmente, Li Be B C N O F Ne
de la aparición de mutaciones o de la recombinación
del material genético. Las mutaciones surgen por un Na Mg Al Si P S Cl Ar

error en el proceso de copiado. K Ca Sc Ti V Cr Mn Fe Co Ni Cu Zn Ga Ge As Se Br Kr


Los organismos más complejos a nuestro Rb Sr Y Zr Nb Mo Tc Ru Rh Pd Ag Cd In Sn Sb Te I Xe
alrededor son multicelulares. La célula es la unidad
estructural y funcional de los seres vivos, así como el Cs Ba Hf Ta W Re Os Ir Pt Au Hg Tl Pb Bi Po At Rn

átomo es la unidad fundamental de las estructuras Fr Ra


químicas.
Resumiendo, la diversidad de los organismos
depende de un programa genético codificado por los Figura I.2. Elementos que forman parte de la materia viva. Los
ácidos nucleicos, ejecutado por medio de complejos más abundantes o macroelementos (negritas), los presentes en
reguladores que controlan las actividades pequeñas cantidades en todos los organismos o
bioquímicas de las células, lo que da como resultado microelementos(cursivas), y los que son necesarios en algunos
diferentes niveles estructurales en la organización organismos en cantidades mínimas o elementos traza
molecular y celular de dicho organismo. (subrayados).

28
Se llama metabolismo al total de reacciones que que hacen que estos elementos
ocurren en la célula. Hay reacciones catabólicas por sean apropiados como
las cuales las sustancias complejas se degradan constituyentes de la materia viva.
a sustancias más simples y reacciones anabólicas B.1.3 Describirá los tipos de enlace (tabla
que realizan el proceso inverso. I.1, pág. 4) y funciones químicas que
En resumen, las células tienen las siguientes aparecen en las moléculas biológicas
características: (alcohol, carboxilo, carbonilo, éster,
1) Un programa genético específico que permite la amida, amino, éter y tiol).
reproducción de nuevas células del mismo tipo. 2)
Una membrana celular que establece un límite que B.2 Moléculas precursoras y macromoléculas.
regula todos los intercambios de materia y energía.
3) Una maquinaria biológica que puede utilizar la B.2.1 Conocerá los aminoácidos,
energía adquirida por la célula a partir de la energía nucleótidos, monosacáridos y ácidos
luminosa o de los alimentos. grasos como precursores de
4) Una maquinaria para la síntesis de proteínas y proteínas, ácidos nucleicos,
todas las demás moléculas que integran a las células polisacáridos y lípidos, así como las
de un organismo. diversas funciones que llevan a cabo
en el organismo.
B. Niveles de la organización celular
B.3 Estructuras, orgánulos, células, tejidos y
Al finalizar esta subunidad, el alumno analizará y organismos.
discutirá los diferentes niveles de la organización B.3.1 Describirá la manera cómo se
celular. ensamblan las macromoléculas para
B.1 Bioelementos. obtener un nivel mayor de
B.1.1 Identificará en una tabla periódica organización.
(figura I.2) los elementos que forman B.3.2 Describirá la estructura de las
parte de la materia viva. membranas biológicas.
B.1.2 Conocerá las características B.3.3 Definirá a la célula como la unidad
fisicoquímicas (configuración mínima de organización de la
electrónica, electronegatividad e materia viva.
hibridación) del carbono, nitrógeno,
oxígeno, hidrógeno, azufre y fósforo,

29
Tabla I.1 CARACTERÍSTICAS DE LOS ENLACES QUÍMICOS

Tipo de enlace Descripción general Energía de enlace


IÓNICO Es la fuerza de atracción entre iones con signos 10-20 kcal/mol
contrarios que se forman por la transferencia completa 42-84kJ/mol
de electrones desde el átomo con mayor tendencia a
perderlos, al que tiene mayor afinidad por ellos.
COVALENTE Resulta de compartir electrones entre dos o más Para la unión:
átomos que tienen una afinidad electrónica semejante C–C
•Simple Se forma mediante la donación de un electrón por parte 83 kcal/mol
de cada átomo que participa en el enlace. 348 kJ/mol
•Coordinado Ambos elctrones los da uno solo de los átomos que ___
participan en la formación del enlace.
•Polar Se establece cuando los electrones del enlace O–H
covalente se encuentran más cerca del elemento de 111kcal/mol
mayor electronegatividad. En el enlace se forma un 464kJ/mol
polo relativamente positivo y otro relativamente
negativo.
•Múltiple En algunos compuestos de los átomos comparten más C–C
de un par electrónico (enlaces dobles o triples). 146kcal
611kJ/mol
Enlaces Fuerzas de atracción débiles entre diferentes ___
intermoleculares moléculas y iones
PUENTE DE Interacción dipolo-dipolo. Se establece cuando un 2.5kcal/mol
HIDRÓGENO átomo de hidrógeno sirve como puente entre dos 8-21kJ/mol
átomos electronegativos, unido a uno con un enlace
covalente, y al otro, con fuerzas de naturaleza
electrostática.
FUERZAS DE Son fuerzas electrostáticas transitorias. La atracción se 1kcal/mol
VAN DER WAALS establece entre los extremos de dipolos momentáneos 4kJ/mol
con cargas opuestas.
INTERACCIONES Enlaces polares. Las moléculas se reunen 1-2kcal/mol
HIDROFÓBICAS conjuntamente asociándose entre sí en el seno del 4-8kJ/mol
agua debido a que las interacciones agua-agua son
muy fuertes y rodean a las moléculas apolares
INTERACCIÓN Es la atracción de un ión positivo por el extremo 0.01 kcal/mol
IÓN DIPOLO negativo de las moléculas de un disolvente polar 0.04kJ/mol
(solvatación). Cuando el disolvente es el agua, se dice
que las partículas de soluto se hidratan.

30
II
ASPECTOS FISICOQUÍMICOS
DEL FUNCIONAMIENTO CELULAR

Al finalizar esta unidad, el alumno deberá conocer y aplicar los conceptos


fundamentales de fisicoquímica a la comprensión de la estructura y comportamiento de
las moléculas biológicas en la célula y en su interacción con el ambiente; además,
conocerá algunos aspectos médicos de ellos. La unidad se divide en:

A. Aspectos básicos de fisicoquímica aplicados a la bioquímica.


B. Agua.
C. Equilibrio hidroelectrolítico y ácido-base.
D. Aminoácidos y proteínas.
E. Enzimas y coenzimas.

A. Aspectos básicos de fisicoquímica A.4 Identificará los procesos exergónicos y


aplicados a la bioquímica endergónicos y los relacionará con procesos
reversibles e irreversibles.
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocerá los A.5 Analizará la estrategia de las reacciones
conceptos básicos de fisicoquímica necesarios para acopladas. Se sugiere usar como ejemplo
la comprensión de la bioquímica. una reacción catalizada por una cinasa.
A.6 Definirá los conceptos de energía de
A.1 Definirá el concepto de sistema y conocerá activación y de estado energizado de una
sus diferentes tipos con base en su reacción.
capacidad de intercambiar materia y energía
con su ambiente (sistemas abiertos y En termodinámica un sistema se define como la parte
cerrados). del Universo en estudio. Por lo tanto, un sistema
puede ser un tubo de ensayo, una máquina, una
A.2 Conocerá las leyes de la termodinámica y planta o el hombre.
definirá el concepto de entropía, entalpía así El resto del Universo se conoce como
como energía interna. ambiente. El organismo humano es un sistema
abierto porque es capaz de intercambiar materia y
A.3 Definirá el concepto de energía libre de energía con el ambiente que lo rodea; toma los
Gibbs y de energía libre estándar de una nutrimientos, oxígeno y agua del ambiente; elimina
reacción y su empleo como criterio de productos de desecho, y genera trabajo y calor.
espontaneidad de un proceso.

31
La primera ley de la termodinámica, o ley de y los cambios quedarían indicados como:
la conservación de la energía, dice que la energía no G = H – TS (4)
se crea ni se destruye, sólo se transforma.
De esta manera, un cambio en la energía
U = U final – U inicial = q – w (1) libre sería la suma algebraica del cambio de la
Esta expresión matemática muestra que el entalpía y el cambio de la entropía multiplicada por la
cambio de energía, pérdida o ganancia que sufre un temperatura (°K).
sistema (U) corresponde a la diferencia entre el Un proceso con G negativo (espontáneo y
contenido de energía al principio (U inicial) y al término exergónico) puede darse por una disminución en la
(U final) del estudio. entalpía (liberación de calor) o por un aumento en la
entropía (aumento de desorden). Por el contrario, un
La segunda relación matemática: (U = q – proceso endergónico, no espontáneo, tiene un G
w) significa que parte de ese cambio de energía se positivo, caracterizado por un aumento en la entalpía
utiliza para hacer trabajo (w) sobre el ambiente y el (absorción de calor) o por una disminución en la
resto se libera en forma de calor (q). Los procesos en entropía. El G representa la energía que se emplea
los cuales el sistema libera calor se llaman para ejercer un trabajo.
exotérmicos (q con signo negativo por convención), y En muchos sistemas, entre ellos los
a los que absorben calor se les llama endotérmicos biológicos, un valor negativo grande predice que la
(q con signo positivo). reacción se puede llevar a cabo de manera
La medida de este intercambio de calor, espontánea, pero no dice nada acerca de la
liberado o absorbido con el ambiente, se llama velocidad del proceso, ni del camino que éste sigue.
entalpía (H): Por ejemplo, en algunas reacciones químicas, el G
puede ser negativo, y esto predice que la reacción
H = qp (2) será espontánea, pero como el camino ocurre a
través de un estado energizado (de mayor contenido
donde qp se lleva a cabo a presión constante. de energía) de los reactivos, el proceso no se lleva a
La segunda ley de la termodinámica dice que cabo a menos que se introduzca energía al sistema
el Universo tiende hacia el máximo desorden. Esta para que se alcance ese estado energizado (energía
ley provee un criterio para determinar si un proceso de activación); entonces, el proceso se realizaría de
es espontáneo. Un proceso espontáneo ocurre en manera espontánea. La introducción de enzimas
una dirección que aumentaría el desorden del para realizar una reacción, tiene el efecto de
sistema y del ambiente. La medida del desorden del disminuir la energía de activación de dicha reacción
sistema se llama entropía (S) y el cambio puede ser (debido a la formación del complejo enzima-sustrato).
en el sentido de aumentar el desorden (S con signo Una estrategia que se sigue en los sistemas
positivo) o de disminuir el desorden (S con signo biológicos para lograr que las reacciones no
negativo). espontáneas, con G positivo, se lleven a cabo,
La tercera ley de la termodinámica o ley cero consiste en acoplarlas a otras reacciones
dice que a una temperatura de 0°K (-273 °C) la relacionadas que tengan un G muy negativo. De
entropía de un sistema es igual a cero. esta manera, en las vías metabólicas las reacciones
J. Willard Gibbs (1878) formuló el concepto exergónicas “empujan” o “jalan” a las reacciones
de energía libre (G) que engloba los dos indicadores endergónicas y desplazan el equilibrio químico. Por
de espontaneidad de un proceso a temperatura y ejemplo, la fosforilación de la glucosa por ATP
presión constantes: catalizada por la hexocinasa:

G = H – TS (3)

32
Ecuación:
B.3 Analizará el concepto de pH.
; G B.3.1 Definirá lo que es una reacción
(kcal/mol) química y sus componentes.
Describirá la ley de acción de masas
Glucosa + Pi = Glucosa 6 fosfato + H2O +3.3 y definirá la constante de equilibrio y
ATP + H2O = ADP + Pi + H+ –7.3 su significado.
+
Glucosa + ATP = Glucosa 6 fosfato + ADP + H –4.0 B.3.2 Conocerá la reacción de ionización
del agua, su constante de equilibrio y
B. Agua el producto iónico del agua.
B.3.3 Conocerá el concepto de pH y
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocerá las establecerá su escala de medición.
propiedades fisicoquímicas del agua y los conceptos Aplicará dicho concepto para calcular
de reacción química, pH, ácido, base y amortiguador. los valores de pH a partir de la
concentración de iones hidronio y de
B.1 Conocerá las siguientes propiedades la concentración de H+ a partir de los
fisicoquímicas del agua: su composición, sus valores de pH.
enlaces químicos, densidad electrónica,
características de dipolo, puentes de Uno de los compuestos más abundantes en nuestro
hidrógeno, estructura en sus estados físicos, planeta es el agua. Se cree que fue en los océanos
calor latente de vaporización, calor primitivos donde se originaron los primeros indicios
específico, tensión superficial, conductividad de vida. El agua constituye el medio en el cual se
térmica, constante dieléctrica y su papel realizan la mayoría de los procesos celulares (de
como solvente. hecho podría decirse que la conformación que toman
B.2 Soluciones acuosas. las moléculas dentro de las células depende del
B.2.1 Definirá qué es una solución y los agua). Es por ello que el agua es una molécula muy
diferentes tipos de soluciones que importante para sostener la estructura de las células
existen. y los organismos.
B.2.2 Explicará los cálculos y los Las características peculiares del agua
procedimientos para preparar derivan de su estructura química particular, en la cual
soluciones porcentuales molares, los dos hidrógenos y el oxígeno se encuentran
osmolares y normales, así como las formando un tetraedro irregular en el que el oxígeno
diferentes diluciones de estas. ocupa el centro y los hidrógenos, junto con los dos
Conocerá la composición de las orbitales del oxígeno no compartidos, están dirigidos
siguientes soluciones utilizadas en hacia los vértices. La diferencia de electronegatividad
medicina: solución isótonica, de entre el oxígeno y los hidrógenos hace que los
Ringer, de Darrow, de Hartman. enlaces entre ellos sean covalentes polares, dando
B.2.3 Revisará las propiedades coligativas cargas parciales positivas y negativas a la molécula
de las soluciones y su importancia en la que la constituyen como un dipolo. Esta
medicina. característica permite que exista una fuerza de
B.2.4 Definirá los conceptos de atracción entre los extremos cargados opuestamente
osmolaridad, osmolalidad, hiper e de las moléculas vecinas.
hipoosmolaridad, así como el de isotonicidad. La atracción entre las moléculas de agua
Realización de la práctica 1 "Soluciones" (ver pág. permite que se establezcan enlaces débiles llamados
133) puentes de hidrógeno que configuran redes
transitorias cuya existencia continuada confiere al

33
agua sus propiedades fisico-químicas características: implicadas en ellas, así como de una constante de
ser líquida a temperatura ambiente, alto punto de velocidad de la reacción (k), que es una medida
fusión, alto punto de ebullición, elevada tensión indirecta de la capacidad intrínseca de las moléculas
superficial, alta constante dieléctrica, alta capacidad para reaccionar entre sí. En la reacción:
calorífica y baja tensión de vapor.
Todas esas propiedades permiten que el A+B C+D
agua desempeñe muy variadas funciones en los la velocidad (v) es igual a k [A][B].
seres vivos; por ejemplo, servir como medio universal
de solución, de suspensión y de reacción para todas Como la mayoría de las reacciones son
las moléculas, o intercambiar cantidades importantes reversibles, existen dos constantes de velocidad, una
de calor sin mucha variación de su temperatura, lo correspondiente a la reacción directa y una
cual le permite mantener constante la temperatura correspondiente a la reacción inversa. Cuando la
del organismo y controlarla mediante los fenómenos velocidad de la reacción directa es igual a la
de vasoconstricción y de sudoración. El transporte de velocidad de la reacción inversa se establece una
sustancias entre los diversos órganos y tejidos del condición de equilibrio en la que hay una relación
cuerpo humano se hace por el plasma y los líquidos particular del producto de las concentraciones de los
extracelulares, ambos de naturaleza acuosa. Las productos entre el producto de las concentraciones
interacciones del agua con las diversas moléculas de los reactivos. Esta relación es lo que se conoce
permiten el mantenimiento de las estructuras como constante de equilibrio (Keq) y es igual a ki/kd
celulares. La presencia de partículas en solución va a o [C] [D] / [A] [B]. La constante de equilibrio es
modificar las propiedades características del agua y característica para cada reacción y permite conocer
da origen a lo que se conoce como propiedades si la reacción es más favorable hacia los productos (a
coligativas de las soluciones (propiedades que la derecha), en cuyo caso el valor será siempre
dependen del número de partículas en la solución y mayor a la unidad, o más favorable a la aparición de
no de su naturaleza). Entre éstas, la más notable es los reactantes (a la izquierda) cuando el valor de la
la aparición de la presión osmótica. constante será menor a la unidad. Si el valor es igual
Una molécula de agua tiene la capacidad de a uno no hay una tendencia clara en ninguna de las
ceder un protón a la molécula vecina y esto ocasiona direcciones.
que la molécula que cedió su protón quede con una En el caso del agua, la Keq tiene un valor de
carga neta negativa y la molécula de agua que lo 1.8 X 10–16 mol/l, que es mucho menor a la unidad, lo
acepta quede con una carga positiva. Esto indica que cual indica que la molécula tiende a estar asociada;
el agua se ioniza, ya que actúa como un ácido al la concentración del agua sin disociar es tan elevada
donar protones (H+) y como una base al aceptarlos, que puede considerarse constante. Cuando el valor
según la teoría de Brönsted y Lowry. Así, el agua de esta concentración se multiplica por la Keq se
puede encontrarse en dos especies iónicas: el obtiene el valor del producto de la concentración de
hidronio H3O+, que funcionaría como ácido, y el ambos iones H+ y OH–, lo que se conoce como Kw o
hidroxilo OH–, que es la especie que queda al ceder producto iónico del agua, donde Kw = [H+] [OH–] = 1
la molécula de agua su protón, y que funciona como X 10–14mol2/l2. Aquí la concentración de ambos iones
una base, ya que puede aceptar protones. Para es de 1 X 10–7. A partir de esta constante (Kw) se
facilitar la expresión de la ionización del agua se puede deducir el carácter de una solución diluida
simplifica así: respecto a su grado de acidez o basicidad; se ha
H2O H+ + OH– elegido al ion hidronio (H3O+), simplificado como H+,
A las sustancias que tienen esta capacidad como valor numérico para expresarla. Como las
se las llama anfóteras o anfolitos. concentraciones que se manejan son tan pequeñas,
La velocidad de las reacciones químicas aun expresadas matemáticamente como
depende de la concentración de las moléculas submúltiplos de 10 (potencias negativas de 10), su

34
manejo puede resultar “complicado” por lo que se C.2 Definirá los conceptos de ácido y base, su
utiliza el -log de base 10 para expresarlo. Esto es lo fuerza, y analizará los cambios del pH de una
que se conoce como “p” y referido a la concentración solución al agregar un ácido o una base
+
de H se denomina pH. El pH, entonces, corresponde explicando el porqué de este fenómeno.
al -log de la concentración de hidrogeniones, o sea:
+ +
pH = –log [H ] o bien pH = log 1/[H ] C.3 Analizará el concepto de sistema
amortiguador.
Nótese que la “p” es minúscula, ya que se C.3.1 Definirá el concepto de
trata de una sigla que indica potencial. amortiguador, de pK y explicará la
Si se considera que el valor de la importancia de los sistemas
–7
concentración de protones es de 1 x 10 , se tiene biológicos de amortiguación.
que: C.3.2 Aplicará la ecuación de Henderson-
pH = log 1/ (1 x 10–7) = log 1 – log 1 x 10–7 = 0 – (–7) Hasselbalch al cálculo del pH y de la
=7 concentración de sal o de ácido de
Es a partir del agua que se define la escala diferentes soluciones.
de pH, por lo cual se habla de soluciones ácidas C.3.3 Identificará los sistemas
cuando tienen valores de concentración de amortiguadores más importantes en
hidrogeniones mayores de 1 X 10–7 o pH menores de los medios intra y extracelular.
7 y de soluciones alcalinas con concentraciones de C.4 Explicará cómo se regula el pH de los
hidrogeniones menores de 1 X 10–7 y pH mayores a líquidos orgánicos y la participación de los
7. sistemas amortiguadores, el intercambio
Cuando la concentración de hidrogeniones iónico, así como los mecanismos
en solución acuosa es de 1.0 M, el valor del pH es 0, respiratorios y renales.
ya que el log10 1 es 0. En el otro extremo, cuando la C.4.1 Revisará las principales alteraciones
concentración de H+ es (1 X 10–14) el pH es de 14. El del equilibrio ácido-base en el
punto de neutralidad es de pH = 7 o en concentración organismo y los mecanismos para su
de H+ de 1 X 10–7. El intervalo de pH para indicar la control.
acidez de una solución va del 0 al 7, mientras que el
correspondiente a la basicidad o alcalinidad de una Realización de la práctica 2 "Regulación del equilibrio
solución va del 7 al 14. ácido-base después del ejercicio muscular intenso y
de la ingestión de bicarbonato de sodio" (ver pág.
C. Equilibrio hidroelectrolítico 137).
y ácido-base
Discusión de los casos clínicos 1 "Cólera" y 2
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocerá los "Oclusión intestinal. Acidosis metabólica.
conceptos de electrólito, ácido, base y amortiguador; Deshidratación grave" (ver págs. 195-196).
así como la composición de los compartimientos
líquidos del organismo, el balance del agua y de los Es importante recordar que un ión es una especie
electrólitos. química (átomo o conjunto de átomos) con carga
eléctrica positiva (catión) o negativa (anión) por
C.1 Definirá los conceptos de anión, catión, ganancia o pérdida de electrones; los iones disueltos
electrólito, anfolito y conocerá la en agua pueden conducir la electricidad. El paso de
composición electrolítica de los la electricidad a través de una solución con iones se
compartimentos líquidos del organismo llama electrólisis. Los solutos que pueden liberar
(plasma, líquidos intracelular e intersticial, iones en el agua por disociación o ionización y que
jugo gástrico, jugo pancreático y bilis).

35
forman una solución conductora de electricidad se fluidos gastrointestinales, peritoneal, sinovial, líquido
llaman electrólitos. cefalorraquídeo, entre otros.
El agua es el mayor constituyente de los
seres vivos; su cantidad debe mantenerse dentro de Electrólitos
un margen estrecho ya que tanto su carencia como
su exceso producen problemas clínicos que se La composición electrolítica del líquido intracelular
conocen como desequilibrios hídricos. (LIC) y del líquido extracelular (LEC) difiere en forma
El agua corporal la encontramos en sustancial. Para fines prácticos el LIC tiene al K+
diferentes compartimentos y su cantidad en éstos, como el principal catión y como aniones al fosfato y a
depende de las concentraciones de ciertos las proteínas, mientras que en el LEC, el Na+ es el
electrólitos como Na+, K+, Cl–, HCO3-, Mg2+ y Ca2+, catión más importante y el cloruro como anión.
fosfatos y proteinatos. Las concentraciones de estos La concentración total de cationes presentes
electrólitos se mantiene dentro de ciertos límites que en el plasma es aproximadamente de 150 mmol/l,
al alterarse, producen desequilibrios que pueden siendo la concentración de sodio de 140 mmol/l. Los
llegar hasta la muerte. aniones presentes en el plasma más abundantes son
En la práctica médica está indicada la el cloruro, con una concentración aproximada de 100
cuantificación de electrólitos en cualquier paciente mmol/l y el bicarbonato, con una concentración de 25
con síntomas neuromusculares. El tratamiento de las mmol/l. Dado que en cualquier sistema biológico la
alteraciones hidroelectrolíticas se basa en la suma de los cationes debe ser igual a la suma de los
evaluación del agua corporal total y su distribución, aniones, el resto de los aniones que constituyen la
así como en las concentraciones de electrólitos y en diferencia o brecha aniónica del plasma son el
la osmolaridad del suero. fosfato, el sulfato, las proteínas y los ácidos
orgánicos como son el lactato, el citrato, el piruvato,
Agua corporal el acetoacetato y el 3--hidroxibutirato.
En la práctica, esta brecha aniónica se
El agua en el cuerpo humano ocupa cerca de 70% calcula de acuerdo a la siguiente ecuación:
del peso corporal dependiendo de la edad, el sexo y
la grasa corporal. La cantidad de agua puede variar Brecha aniónica = {[Na+] + [K+]} – {[Cl-] + [HCO3-]}
desde alrededor de un 40% en personas mayores a
más de un 75% en niños recién nacidos. Su Calculada de esta forma, la brecha aniónica
porcentaje también es mayor en personas delgadas es de aproximadamente 12 mmol/l. Puede aumentar
que en obesas, así como un hombre tendrá mayor muchas veces en ciertos desórdenes como cuando
cantidad de agua que una mujer. La cantidad de los ácidos inorgánicos y los aniones orgánicos se
agua presente en los diferentes tejidos varía de acumulan, por ejemplo, en la cetoacidosis diabética y
acuerdo con las funciones y características de cada en la insuficiencia renal.
uno, siendo más abundante en células El potasio es el principal catión en el LIC,
metabólicamente muy activas (~ 90%) y de menos cuya concentración es de 110 mmol/l, es
del 10% en el tejido adiposo o aún menor, en aproximadamente 30 veces más alta que la que se
estructuras relativamente inactivas como el encuentra en el LEC. La concentración de sodio y
esqueleto. cloruro en el LIC es de 10 mmol/l y 4 mmol/l,
El agua se encuentra distribuida en el líquido respectivamente.
intracelular (30-40% del peso corporal total) y el La movilización y el metabolismo de los
líquido extracelular que, a su vez, está conformado principales cationes extra e intracelulares depende
por el líquido intersticial y la linfa (15%), el plasma de la actividad celular así como de transportadores
(4.5%) y los fluidos transcelulares que incluyen los específicos, entre los cuales se encuentra la bomba

36
+ +
de Na /K . Los cambios en la concentración de iones D. Aminoácidos y proteínas
conlleva a cambios en la osmolaridad del medio. Al finalizar esta subunidad, el alumno conocerá las
características más importantes de los aminoácidos y
Osmolaridad de las proteínas, así como sus funciones generales.
Las diferentes moléculas disueltas en el agua D.1 Aminoácidos.
corporal contribuyen a la presión osmótica, la cual es D.1.1 Identificará en la fórmula de un
proporcional a la concentración molar de la solución. aminoácido los grupos funcionales
Un cambio en la concentración iónica en cualquiera carboxilo y amino.
de los compartimentos celulares crea un gradiente de D.1.2 Relacionará las cadenas laterales de
presión y como consecuencia, existe un cambio en la los aminoácidos con sus
cantidad de agua que fluye del compartimiento que propiedades y los clasificará en
presenta una menor osmolaridad hacia el de mayor. grupos.
Para determinar la concentración osmolar de D.1.3 Reconocerá a los aminoácidos como
una solución que contiene una mezcla de electrólitos ácidos débiles e identificará los
y no electrólitos hay que tener en cuenta las valores de sus pKs y su punto
concentraciones individuales de todos sus isoeléctrico.Usar como modelos
componentes. Una fórmula sencilla para cuantificar la glicina, fenilalanina, ácido aspártico,
osmolaridad del suero y que ofrece una utilidad lisina e histidina.
clínica es: D.1.4 Identificará la carga eléctrica de los
+
Osmolaridad =2(Na mmol/l) + glucosa mmol/l + BUN amino-ácidos en soluciones de
mmol/l diferentes valores de pH y su
= 280 a 320 mOsm movilidad en un campo eléctrico.
D.1.5 Conocerá las fórmulas de los
Osmolaridad = 2(Na+ meq/l) + glucosa mg/dl + BUN mg/dl aminoácidos presentes en las
——--——-- ——-----— proteínas.
18 2.8 D.1.6 Conocerá las funciones generales
de los aminoácidos proteicos y no
donde el factor 2 se debe a que se consideran los proteicos en los seres vivos.
aniones asociados al Na+ (Cl– y HCO3–); 1 mOsm de
glucosa equivale a 180 mg/l (18 mg/dl) y 1 mOsm de Realización de la práctica 3 "Titulación de un
nitrógeno ureico (NUS o BUN de sus siglas en inglés) aminoácido con una base. Determinación del pK1 y
a 28 mg/l (2.8 mg/dl) que corresponde a la masa pK2" (ver pág. 140).
molecular de 2 átomos de nitrógeno en la urea.
Los electrólitos Na+, Cl– y HCO3–, contribuyen D.2 Proteínas.
con más del 92% a la osmolaridad del suero; los D.2.1 Identificará los productos de
otros electrólitos, junto con las proteínas séricas, hidrólisis de las proteínas.
glucosa y urea son responsables del restante 8%. D.2.2 Clasificará a las proteínas con base
El mantenimiento del agua extracelular en su composición, función y
depende básicamente de la concentración del Na+. localización.
El organismo mantiene esta concentración por medio D.2.3 Conocerá las características más
de la hormona antidiurética. Cambios de hasta 2 meq importantes de la unión peptídica.
de sodio en sangre estimulan los receptores Describirá qué es un péptido y
osmolares y causan retención renal de agua cuando mencionará algunos de los
aumenta y su eliminación cuando la osmolaridad polipéptidos importantes en
disminuye. medicina.

37
D.2.4 Describirá el estado nativo de las ciertos casos es llamado grupo prostético. Algunos
proteínas y sus diferentes niveles de ejemplos de proteínas conjugadas son las
organización: estructuras primaria, glucoproteínas (contienen azúcares como grupo
secundaria, terciaria y cuaternaria y prostético), las lipoproteínas (contienen
mencionará las fuerzas que las triacilglicéridos, fosfolípidos y colesterol), las
estabilizan. Describirá el proceso nucleoproteínas (asociadas a ácidos nucleicos) y las
general de la desnaturalización. metaloproteínas (que pueden unir iones metálicos
D.2.5 Relacionará la función de las como en el grupo hemo).
proteínas con su estructura: Los aminoácidos son compuestos alifáticos,
Globulares (albúmina y aromáticos o heterocíclicos que contienen por lo
hemoglobina). menos un grupo amino y un grupo carboxilo. En los
Fibrosas (colágena, miosina y aminoácidos biológicamente activos, el grupo amino
actina). se encuentra en el átomo de carbono alfa con
De reconocimiento (receptores de respecto al grupo carboxilo. Este carbono alfa es un
insulina o complejo mayor de carbono asimétrico (con excepción de la glicina)
histocompatibilidad). porque presenta cuatro grupos funcionales
De membrana (porina, ATPasa de diferentes:el grupo amino, el grupo carboxilo, un
sodio/potasio). hidrógeno y una cadena lateral. Los aminoácidos
D.2.6 Describirá los diferentes métodos de proteicos pueden clasificarse en función de las
purificación de las proteínas con cadenas laterales que presentan. Así, tenemos
base en sus propiedades: aminoácidos no polares, aminoácidos polares sin
ultracentrifugación, precipitación por carga y aminoácidos polares con carga, la que puede
sales, electroforesis y cromatografía ser negativa o positiva a pH neutro. Todos los
por peso molecular, por intercambio aminoácidos (con excepción de la glicina) son
iónico y por afinidad. ópticamente activos y pertenecen a la serie L en los
D.2.7 Conocerá el propósito de estudiar las organismos superiores. Los aminoácidos tienen por
proteínas plasmáticas en medicina. lo menos dos grupos ionizables: el grupo alfa amino y
Realización de la práctica 4 "Determinación de las un carboxilo. Cada aminoácido en solución tiene un
proteínas plasmáticas" (ver págs. 142). pH característico en el que no se mueve en un
campo eléctrico, es decir, tiene un pH en el que se
Las proteínas están formadas por una o varias presenta en forma de ion dipolo o zwitterion, donde
cadenas polipeptídicas, cada una de las cuales está tanto el grupo alfa amino como el grupo carboxilo se
constituida por 20 diferentes aminoácidos unidos por encuentran ionizados y, por lo tanto, tiene el mismo
enlaces tipo amida (enlaces peptídicos) en una número de cargas positivas y negativas (punto
secuencia específica para cada proteína. La masa isoeléctrico). Junto a los grupos ionizables
molecular de una proteína varía desde cerca de 6 principales, algunos aminoácidos contienen otros
000 (>50 aminoácidos) hasta 1 000 000 Da o más. grupos que pueden ionizarse: grupos amino,
(Da o Dalton es la unidad de masa atómica y es igual carboxilo, sulfhidrilo, hidroxilo o imidazol. A pH
a 1.6605655 X 10–27 kg). fisiológico, estos grupos pueden estar ionizados y
Las proteínas pueden dividirse, según su confieren al aminoácido que los contiene cargas
composición, en dos grupos principales: proteínas positivas o negativas, según sea la naturaleza del
simples y proteínas conjugadas. Las proteínas grupo ionizado. Las proteínas, como los
simples están constituidas sólo por aminoácidos, aminoácidos, se encuentran cargadas en solución; la
mientras que las proteínas conjugadas presentan, magnitud de la carga depende del tipo de proteína y
además de los aminoácidos, otro componente, que del pH. Cada proteína posee un punto isoeléctrico
puede ser de diferente naturaleza química y en característico; a pH por arriba del punto isoeléctrico

38
presenta carga negativa, mientras que a pH por espontáneamente y depende del tamaño, forma y
abajo del punto isoeléctrico tiene carga positiva. polaridad de los aminoácidos que forman la
proteína, los que interactúan entre sí y con el
Organización estructural de las proteínas medio en el que se encuentran. Esta estructura
La función de las proteínas sólo puede entenderse puede estar estabilizada por enlaces de hidrógeno,
en términos de la estructura de la proteína, es decir, enlaces iónicos, interacciones hidrofóbicas, los
de las relaciones tridimensionales entre los átomos enlaces covalentes disulfuro, etcétera. Por ejemplo,
que componen las proteínas. Se han descrito cuatro las cadenas peptídicas de las proteínas globulares
niveles de organización: se organizan en una forma muy compacta en la
1. La estructura primaria es la secuencia de que los aminoácidos hidrofílicos se encuentran en
aminoácidos en la cadena polipeptídica unidos la superficie externa mientras que los residuos
mediante enlaces peptídicos. hidrofóbicos permanecen enterrados en el interior
2. La estructura secundaria es el arreglo espacial de la molécula.
local de los átomos del esqueleto de un polipéptido 4. La estructura cuaternaria es el arreglo espacial de
sin considerar la conformación de sus cadenas las diversas subunidades polipeptídicas que
laterales. La estructura secundaria es mantenida componen algunas proteínas.
por puentes de hidrógeno entre el oxígeno y el
nitrógeno involucrados en los enlaces peptídicos Desnaturalización
de aminoácidos. El enlace peptídico tiene una
estructura plana, rígida, que es consecuencia de Se dice que una proteína se desnaturaliza cuando
interacciones de resonancia (a) que le dan 40% de pierde sus diversos niveles de organización
carácter de doble enlace entre los átomos de C y estructural. Algunos agentes que desnaturalizan las
N (b), esta última estructura es la que le permite proteínas son: el calor, los pH extremos, los rayos X,
establecer puentes de hidrógeno. la luz UV, o la agitación vigorosa. La
a) b) desnaturalización es causada por un colapso de la
estructura original con la ruptura de los enlaces de
O O hidrógeno, de los enlaces iónicos y de las
interacciones hidrofóbicas, sin cambios en la
C C N C C N+
estructura primaria. La desnaturalización va
H H acompañada de la disminución de la solubilidad,
Pauling y Corey determinaron que los grupos cambios en la rotación óptica, pérdida de la función
peptídicos asumen una configuración trans, es biológica y una mayor susceptibilidad al ataque de
decir, los carbonos alfa sucesivos están en lados las enzimas digestivas. En algunos casos, al eliminar
opuestos del enlace peptídico que los une. los agentes que causan la desnaturalización, la
Pueden existir varios tipos de estructura proteína recupera su conformación original; a este
secundaria; entre ellos destacan dos: la alfa hélice, fenómeno se le conoce como renaturalización.
en la que los aminoácidos de la cadena Una mezcla de proteínas puede separarse a
polipeptídica se presentan formando una especie partir de las diferentes movilidades en un campo
de cilindro orientado a la derecha y la lámina beta eléctrico (electroforesis), por cromatografía de
plegada, en la que los aminoácidos se acomodan distintos tipos o por su diferente solubilidad.
de manera paralela o antiparalela, uno respecto al
otro y se conectan entre sí por puentes de Clasificación de las proteínas
hidrógeno.
3. La estructura terciaria se refiere al arreglo Las proteínas pueden ser clasificadas en función de
tridimensional de un polipéptido y está determinada aspectos tan diversos como su composición, su
por las estructuras primaria y secundaria. Se forma

39
disposición espacial, su función biológica y su •Transporte: las proteínas se pueden unir a otras
localización. moléculas a fin de transportarlas en el organismo
Atendiendo a su composición la proteínas pueden (albúmina, transferrina).
ser: •Trabajo mecánico: por ejemplo la contracción de
• Simples: aquellas compuestas únicamente de los músculos, el movimiento de los flagelos y la
aminoácidos. separación de cromosomas en la mitosis (miosina y
• Conjugadas: cuando además de aminoácidos actina).
poseen un componente no proteico, el que puede ser
de origen orgánico o inorgánico y que se denomina Entre las funciones que son comunes a todas las
grupo prostético. Algunos ejemplos son: proteínas encontramos:
nucleoproteínas, formadas por la asociación de la
cadena polipeptídica con ácidos nucleicos; las •Capacidad amortiguadora: debido a que las
glucoproteínas, cuyo grupo prostético son proteínas son compuestos anfóteros y poseen
carbohidratos; las fosfoproteínas, asociadas con muchos grupos ionizables (con valores diferentes de
fósforo o como las metaloproteínas, cuando un ión pK), funcionan como amortiguadores para reducir al
metálico está enlazado directamente a la proteína, mínimo cambios súbitos en el pH.
entre otras. •Energética: liberan 4 kcal/g de proteína oxidada
hasta CO2 y H2O. Los aminoácidos pueden ser
Con base en su disposición espacial, las proteínas desaminados para formar cetoácidos, los cuales
pueden clasificarse en globulares y fibrosas. Las pueden movilizarse para producir energía calórica o
proteínas globulares son de forma esférica y solubles transformarse en carbohidratos y lípidos.
en agua. La mayor parte de las enzimas, hormonas y •Participan en el mantenimiento del equilibrio
anticuerpos tienen estructura globular. osmótico entre los diferentes compartimentos del
Las proteínas formadas por cadenas polipeptídicas organismo. Las proteínas, por ser grandes moléculas
dispuestas paralelamente a un eje, reciben el nombre coloidales, no son difusibles, esto es, no pueden
de proteínas fibrosas, como la colágena y la fibrina. atravesar las membranas y ejercen una presión
Estas proteínas son de forma alargada, baja osmótica coloidal, la cual sirve para mantener un
solubilidad en agua y resistentes a la tracción. volumen normal de sangre y un contenido normal de
Clasificación de las proteínas de acuerdo a su agua en el líquido intersticial y los tejidos.
función. Las proteínas desempeñan una amplia •Fuente de nutrición para los tejidos (sobre todo, la
variedad de funciones muy importantes en el albúmina): por constituir una fuente de los
organismo. La lista siguiente, aunque no es aminoácidos indispensables para el organismo, las
exhaustiva, da una idea de la diversidad de las proteínas son una forma de almacenamiento de
funciones biológicas en las cuales se sabe que aminoácidos.
intervienen las proteínas:
•Catalítica: las enzimas catalizan casi todas las Por último, en función de su localización, las
reacciones que se efectúan en los organismos vivos. proteínas pueden clasificarse en:
•Estructural: las proteínas proporcionan a las •Hísticas o tisulares: son las proteínas de los
células forma y soporte mecánico (como la colágena tejidos.
y las proteínas contráctiles).
•Reguladora: algunas proteínas son hormonas o •Plasmáticas o hemáticas: son las proteínas de la
sirven como receptores de las hormonas (insulina y sangre.
glucagón).
•Protectora: por ejemplo las inmunoglobulinas que Las proteínas de la sangre (la hemoglobina en los
defienden al organismo contra las infecciones virales eritrocitos y las proteínas plasmáticas), por su gran
y bacterianas.

40
accesibilidad, son muy utilizadas en el laboratorio E.2.4 Conocerá las estrategias de control
clínico. de la actividad de las enzimas: disponibilidad
de sustrato, modificación covalente,
alosterismo, retroalimentación y
E. Enzimas y coenzimas concentración de la enzima.
E.2.5 Describirá la acción de los
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocerá qué inhibidores competitivos y no
es una enzima y cómo actúa; podrá calcular sus competitivos y de los moduladores
principales parámetros cinéticos y el efecto de alostéricos sobre la actividad de las
algunas moléculas que modifican su acción y enzimas.
describirá ciertas aplicaciones médicas de las E.2.6 Conocerá el efecto del pH y de la
enzimas. temperatura sobre la actividad
E.1 Características de un sistema enzimático. enzimática.
E.1.1 Conocerá qué son las enzimas y su
clasificación de acuerdo con su E.3 Aspectos médicos de la enzimología.
función.
E.1.2 Identificará los componentes de un E.3.1 Conocerá que el uso de la
sistema enzimático y mencionará las determinación de la actividad de
coenzimas y cofactores que algunas enzimas en el diagnóstico
participan. contribuye al seguimiento de ciertas
E.1.3 Analizará el papel de vitaminas enfermedades (transaminasas,
hidrosolubles como precursores de lactato deshidrogenasa, creatina
las coenzimas e identificará al cinasa, fosfatasas y amilasa).
magnesio, al manganeso y al fierro E.3.2 Describirá la etiología de algunos
como ejemplos de cofactores padecimientos congénitos del
metálicos. metabolismo y la actividad
E.1.4 Definirá los conceptos de zimógeno enzimática empleada para su
e isoenzima. diagnóstico (fenilcetonuria,
E.1.5 Conocerá el modo de acción de las albinismo, anemia hemolítica,
enzimas y en qué consiste su glucogenosis).
especificidad. E.3.3 Describirá el uso de ciertas enzimas
E.2 Cinética enzimática. como reactivos de laboratorio en la
E.2.1 Analizará una reacción enzimática cuantificación de algunos metabolitos
para identificar al sustrato, al (determinación de glucosa, de
complejo enzima-sustrato y al colesterol y de ácido úrico).
producto. Realización de la práctica 5 "Cinética enzimática.
E.2.2 Definirá lo que es la velocidad de Efecto de la concentración de sustrato sobre la
una reacción enzimática y conocerá velocidad de una reacción enzimática" (ver pág.148).
cómo se calcula su constante de
equilibrio; mencionará el significado Las enzimas son proteínas especializadas de
de dicha constante. actividad catalítica. Algunas de ellas están formadas
E.2.3 Analizará las ecuaciones de únicamente de aminoácidos mientras que otras
Michaelis Menten y de Lineweaver- presentan algún otro componente de naturaleza no
Burk; describirá sus usos e aminoácida. La parte proteica se denomina
identificará el significado de los apoenzima, mientras que la parte no proteica se
valores de Vmáx y de Km. denomina coenzima; cuando se encuentran aisladas,

41
ambas son no funcionales, pero juntas forman una en su forma activa, otras se sintetizan en forma de
proteína funcional denominada holoenzima. proenzimas inactivas o zimógenos y deben ser
Las coenzimas funcionan a menudo en la activadas por procesos especiales para llegar a ser
transferencia de electrones o de grupos funcionales. funcionales. Algunas otras enzimas presentan sitios
Generalmente son derivados de vitaminas, las cuales diferentes del sitio activo donde se asocian moléculas
no pueden ser sintetizadas en las células de los que modulan su actividad. Estas enzimas se conocen
organismos superiores, por lo que deben ser como enzimas alostéricas y el sitio donde interactúan
adquiridas en la dieta. con el modulador se llama sitio alostérico.
Las enzimas presentan algunas características que La velocidad de las reacciones enzimáticas
las diferencian de los catalizadores químicos, como: depende de:
1. Mayor velocidad de reacción, ya que las a) La concentración y la actividad de la enzima.
reacciones catalizadas enzimáticamente alcanzan La velocidad de las reacciones enzimáticas se
velocidades de reacción de 106 a 1 012 veces ve modificada por la cantidad de enzima y por
mayores que las reacciones no catalizadas y de su capacidad de interactuar con su sustrato.
varios órdenes de magnitud mayor que las Una enzima puede atacar, dado que interactúa
catalizadas químicamente. con su sustrato, por un reconocimiento
2 .Condiciones de reacción más suaves, ya que espacial, tridimensional o estereoespecífico. Si
trabajan a temperaturas relativamente bajas, a la especificidad es absoluta, la enzima puede
presión atmosférica y en condiciones de pH neutro. actuar sobre un único compuesto, mientras
3. Mayor especificidad de reacción, ya que presentan que, si es relativa, puede usar como sustrato
una gran selectividad por la identidad de los grupos varios compuestos relacionados. La
químicos de sus sustratos y productos, de tal estereoespecificidad indica que una enzima
manera que rara vez se obtienen productos acepta sólo un cierto estereoisómero (L ó D).
colaterales o secundarios. Un sustrato puede ser transformado por una o
4. Capacidad de regulación, es decir, que sus varias reacciones teóricamente posibles
actividades varían de acuerdo con la concentración catalizadas por diferentes enzimas. Esto es
de otras moléculas diferentes de sus sustratos. Los importante en algunos procesos de control
mecanismos de regulación incluyen la inhibición, metabólico.
control alostérico, modificación covalente de la Las unidades con que se mide la velocidad de
enzima y variación en la cantidad de enzima una enzima se determinan como unidades
sintetizada. internacionales (UI). Una UI es la cantidad de
Las enzimas aceleran las reacciones biológicas al enzima en miligramos que convierte un
disminuir la energía de activación de una reacción micromol de sustrato por minuto, en katales
dada sin alterar su equilibrio. Su mecanismo de (kat), que es la cantidad de enzima que
acción consiste en la formación de un complejo entre convierte un mol de sustrato por segundo. La
la enzima y el sustrato (ES), el cual realiza la actividad específica de una enzima se expresa
reacción química adecuada y permite la recuperación en unidades por mg de proteína.
de la enzima original en el momento en que el b) La concentración del sustrato. A bajas
complejo enzima-producto se rompe para liberar al concentraciones de sustrato la reacción
producto. enzimática sigue una cinética de primer orden,
El sustrato se une a la enzima en el sitio activo, el es decir, la velocidad de la reacción es
cual consiste en un arreglo espacial de algunos proporcional a la concentración del sustrato. A
aminoácidos de la proteína donde se encuentran altas concentraciones de sustrato, la reacción
generalmente el grupo prostético o la coenzima y que es de orden cero, es decir, la enzima está
tienen la capacidad de interactuar con el sustrato. saturada por su sustrato y, por lo tanto, se
Hay algunas enzimas que se sintetizan directamente encuentra en su velocidad máxima. Cada

42
enzima tiene su característica constante de mientras que los moduladores negativos hacen más
Michaelis o Km, que define la concentración de pronunciado el efecto sigmoidal (fig. II.2).
sustrato a la que la reacción enzimática Otra manera de estudiar el comportamiento
alcanza la mitad de la velocidad máxima. cinético de las enzimas, es graficar la inversa de la
c) El pH y la composición de la solución en que se velocidad inicial contra la inversa de la concentración
lleve a cabo la reacción. Toda reacción de sustrato, lo que genera una línea recta, descrita
catalizada enzimáticamente tiene su pH óptimo. matemáticamente por la ecuación de Lineweaver-
d) La temperatura. Toda reacción catalizada Burk. En la figura II.3 se observa este
enzimáticamente tiene una temperatura óptima. comportamiento lineal de la enzima con y sin
e) La presencia de activadores e inhibidores. La inhibidores.
actividad enzimática puede ser modificada
positiva o negativamente por algunos
compuestos. Los activadores aumentan la
reacción enzimática propiciando la formación de
un sitio activo funcional y a menudo son iones
metálicos como Mg2+, Zn2+, etcétera. La
activación de las enzimas alostéricas que están
compuestas por subunidades es de gran
importancia en el control de los sistemas
multienzimáticos y se realiza generalmente por
varias moléculas orgánicas.
Los inhibidores enzimáticos pueden ser de varios
tipos; los más importantes son los competitivos y los
no competitivos. Los inhibidores competitivos
interactúan con el sitio activo de la enzima y se
parecen al sustrato en su estructura, por lo que
compiten con él para unirse al sitio activo. En
general, se remueven con un exceso de sustrato.
Los inhibidores no competitivos reaccionan con
otra estructura importante de la molécula.enzimática.
La inhibición puede ser reversible o irreversible en el
caso de que el inhibidor realice un cambio
permanente de un grupo funcional de la enzima. El
efecto de un inhibidor no competitivo no puede
revertirse por un exceso de sustrato.
El comportamiento cinético de las enzimas, así
como el efecto de los diferentes tipos de moléculas
sobre la actividad enzimática, puede ser estudiado
mediante diversas técnicas cinéticas y gráficas. Así,
al graficar la velocidad de la reacción enzimática
contra la concentración de sustrato se obtiene una
hipérbola rectangular (fig. II.1), descrita
matemáticamente por la ecuación de Michaelis-
Menten. Las enzimas alostéricas presentan un
comportamiento sigmoidal y los moduladores
positivos desplazan la curva hacia la izquierda,

43
In vivo, la mayoría de las enzimas se organiza en
sistemas multienzimáticos, los cuales se unen a
estructuras celulares o están libres en diversos
compartimientos celulares y son una forma de hacer
más eficiente la acción de las enzimas involucradas
en una vía, así como su regulación.
Las enzimas pueden clasificarse en seis grandes
grupos según el tipo de reacción que llevan a cabo:

OXIDORREDUCTASAS. Transfieren electrones o


hidrógenos.

TRANSFERASAS. Transfieren grupos funcionales


entre dos moléculas.

HIDROLASAS. Realizan reacciones de ruptura de


enlaces con entrada de la molécula de agua.

LIASAS. Realizan reacciones de adición a dobles


enlaces y ruptura no hidrolítica del sustrato.

ISOMERASAS. Realizan interconversiones de


isómeros.

LIGASAS. Realizan reacciones de formación de


enlaces con gasto de ATP.

44
CONTENIDO TEMÁTICO

Segunda Unidad Temática


METABOLISMO

45
III
METABOLISMO Y. BIOENERGÉTICA
Al finalizar esta unidad, el alumno conocerá en forma integral las rutas metabólicas de las diversas
moléculas biológicas en las células y las alteraciones que aparecen asociadas a su disfunción en algunas
enfermedades. La unidad se compone de:

A. Fundamentos del metabolismo celular.


B. Carbohidratos.
C. Metabolismo energético.
D. Otras vías metabólicas de los carbohidratos.
E. Lípidos.
F. Metabolismo de los lípidos.
G. Metabolismo de los compuestos nitrogenados.
H. Regulación e integración metabólica.

A. Fundamentos del metabolismo celular en nutrimientos y las vías metabólicas a las


que entran para satisfacer las demandas de
Al finalizar esta unidad, el alumno conocerá los energía y mantenimiento de los tejidos
principios generales del metabolismo intermediario (homeostasis) con base en el esquema
de una célula normal. general del metabolismo

A.1 Conocerá las funciones generales del A.6 Conocerá los diferentes niveles de regulación
metabolismo. del metabolismo: síntesis de enzimas
(inducción-represión), compartimentalización,
A.2 Definirá los conceptos de vía metabólica, actividad enzimática (activación, inhibición y
complejo multienzimático y encrucijada enzimas alostéricas).
metabólica.
El metabolismo puede definirse como el conjunto de
A.3 En un esquema general del metabolismo
todas las reacciones químicas que ocurren en el
identificará, con base en sus características,
organismo. Los organismos se caracterizan por
las vías anabólicas, catabólicas y anfibólicas.
poseer miles de reacciones catalizadas por enzimas,
constituyendo las vías metabólicas. El objetivo del
A.4 Describirá el papel central del piruvato, la
+
metabolismo es mantener las funciones vitales del
acetil CoA, el par NAD(P) /NAD(P)H y el
organismo tales como el trabajo mecánico, el
ciclo del ATP en el metabolismo
transporte activo de moléculas contra gradientes de
intermediario. Definirá los conceptos de
concentración y la biosíntesis de moléculas
fosforilación oxidativa y fosforilación a nivel
complejas, entre otras.
de sustrato.
Las rutas o vías metabólicas son secuencias
de reacciones en donde un precursor o sustrato se
A.5 Conocerá la transformación de los diferentes
convierte en un producto final a través de una serie
componentes de la dieta
de intermediarios metabólicos. El término

46
metabolismo intermediario se aplica a las actividades
combinadas de todas las vías
metabólicas que interconvierten sustratos, Catabolismo Anabolismo
metabolitos y productos. Por ejemplo, la secuencia
consecutiva de A —> B —> C —> D —> E tiene el Biodegradativa. Biosintética.
mismo efecto neto que
A —> E. Oxidativa. Reductora.
Toda esta actividad celular muy coordinada y
dirigida tiene como objetivo el que los sistemas Generador de energía. Consumidor de energía.
multienzimáticos cooperen para cumplir cuatro
funciones básicas: Variedad de materiales Materiales iniciales bien
1. Obtener energía química a partir de la energía iniciales, pero productos definidos y variedad en
solar en los organismos fotótrofos o de la energía finales bien definidos los productos
contenida en los nutrientes obtenidos del ambiente (convergente) (divergente)
en los organismos quimiótrofos.
2. Convertir las moléculas nutrientes en las Dentro de la gran complejidad del
moléculas características de la propia célula, metabolismo es posible distinguir algunos puntos de
incluidos los precursores macromoleculares. convergencia:
3. Transformar los precursores monoméricos en 1. La mayoría de las vías metabólicas son
polímeros (proteínas, ácidos nucleicos, lípidos, irreversibles y exergónicas.
polisacáridos y otros componentes celulares). 2. Cada vía tiene una etapa obligada. Generalmente,
4. Sintetizar y degradar las biomoléculas requeridas al principio de cada vía existe una reacción
en las funciones celulares especializadas. exergónica irreversible que permite que el
intermediario que produce continúe a lo largo de la
El metabolismo se divide en catabolismo y vía.
anabolismo 3. Todas las vías metabólicas están reguladas. La
regulación tiene el objeto de ejercer un control
El catabolismo, del griego katá, "abajo" es la fase enzimático sobre el flujo de metabolitos a través de
degradativa del metabolismo en la que nutrientes una vía metabólica. En toda vía existe una reacción
orgánicos como carbohidratos, lípidos y proteínas se enzimática que funciona tan lentamente que impide
convierten en productos más pequeños y sencillos que sus sustratos y productos se equilibren. Dado
(H2O, CO2, NH3). Las rutas catabólicas generan que la mayoría de las otras enzimas funcionan
transportadores electrónicos reducidos (NADH, próximas al equilibrio, esta reacción enzimática es
FADH2 y NADPH) y liberan energía, parte de la cual la que determina la velocidad de la vía, y por lo
se conserva en la molécula del ATP. tanto, su regulación. Esta es la forma más eficaz
de ejercer el control porque evita la síntesis
En el anabolismo, del griego aná, "arriba", innecesaria de metabolitos de la vía.
también llamado biosíntesis, los precursores
pequeños y sencillos se transforman en moléculas Una manera de controlar la actividad de la
más grandes y complejas propias de cada célula enzima limitante es regulando su actividad catalítica,
(polisacáridos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos). mediante interacciones alostéricas (como en la
Las reacciones anabólicas requieren un aporte inhibición por producto) o por modificaciones
energético, que proviene generalmente de la covalentes. Otra manera sería controlando la
hidrólisis del ATP y del poder reductor del NAD(P)H. velocidad de la síntesis de enzimas particulares.
En el siguiente cuadro aparece el resumen
de las características de estos dos tipos de procesos.

47
El hecho de que las vías de síntesis y condroitin sulfato,
degradación de moléculas sean diferentes, glicosaminoglucanos,
contribuye también a la regulación metabólica. peptidoglicanos). Reconocerá los
4. En las células eucarióticas, la carbohidratos como componentes de
compartimentalización permite la localización las glicoproteínas y de los
específica de las vías metabólicas y su control. glicolípidos y conocerá su función
como receptores y moléculas de
reconocimiento.
B. Carbohidratos
B.2 Digestión y absorción.
Al finalizar esta subunidad, el alumno explicará la B.2.1 Señalará las fuentes dietéticas de los
estructura química de los carbohidratos, sus fuentes, carbohidratos y el papel de la celulosa
su digestión, su absorción y la función que en la dieta de los mamíferos.
desempeñan en la célula. B.2.2 Conocerá el proceso de la digestión y
la absorción de los carbohidratos de la
B.1 Estructura. dieta.
B.1.1 Definirá qué son los carbohidratos y B.2.3 Conocerá los cinco principales
cuál es su importancia biológica. transportadores de glucosa (GLUT 1 a
B.1.2 Conocerá la clasificación de los GLUT 5) y su distribución en los
carbohidratos con base en el número diferentes tejidos.
de unidades sacáridas que los
componen (mono, di, tri, oligo y Realización de la práctica 6 "Efecto de la insulina
polisacáridos) y con base en su sobre la glucemia de la rata" (ver pág.152).
composición (homo y
heteropolisacáridos).
B.1.3 Conocerá la estructura química de Lecturas recomendadas
los monosacáridos con base en su 1. Díaz HD, Burgos HLC. ¿Cómo se
grupo carbonilo, en su estructura transporta la glucosa a través de la
lineal o cíclica y en el número de membrana celular? IATREA. 2002; 15 (3):
átomos de carbono. Señalará las 179-189.
siguientes características 2. Maeder T. Sweet Medicine. Scientific
fisicoquímicas: solubilidad y American. 2002; 287(1): 24-31.
propiedades ópticas. Definirá el
concepto de carbono asimétrico y los Los carbohidratos, o sacáridos, son las biomoléculas
diferentes tipos de isómeros ópticos: más abundantes en la naturaleza y son
epímero, enantiómero y anómero. indispensables en los organismos vivos. Se les llama
B.1.4 Describirá la estructura de los carbohidratos debido a que su estructura química
carbohidratos de importancia semeja formas hidratadas del carbono y se
fisiológica: ribosa, glucosa, fructosa, representan con la fórmula (CH2O)n; químicamente
manosa, galactosa, sacarosa, se definen como derivados aldehídicos y cetónicos
lactosa, maltosa, almidón, glucógeno de alcoholes polivalentes y no puede haber menos
y celulosa. de 3C para constituir un carbohidrato.
B.1.5 Describirá la estructura y
características de los principales
heteropolisacáridos (quitina,
heparina, sulfato de dermatan,

48
Transportador Distribuidor Propiedades unidades monosacáridas, como la sacarosa, la
GLUT 1 Eritrocitos, Ingreso basal maltosa, la lactosa y la celobiosa; oligosacáridos, con
barrera de glucosa. 3 a 10 unidades de monosacárido y polisacáridos,
hematoencefáli Km 1.6 mM. con más de 10 unidades de monosacárido, que
ca, tienen alto peso molecular, como el almidón, el
placenta, glucógeno y la celulosa.
retina, Los carbohidratos provienen de la dieta; se
riñón y cerebro. encuentran en los cereales (maíz, trigo y arroz),
GLUT 2 Hígado, Transportador hortalizas (bulbos, raíces, verduras), legumbres (frijol,
páncreas de glucosa, garbanzo, lenteja), tubérculos (papa, yuca), frutas,
e intestino galactosa y leche y productos lácteos, así como en algunos
delgado fructosa. productos procesados como dulces, jaleas,
Sensor de mermeladas y pastas. Los carbohidratos son los
glucosa en componentes más abundantes de la dieta del
páncreas. humano, aportan aproximadamente el 55% de las
Km de 15 mM o calorías de la dieta.
más. Los carbohidratos tienen diversas funciones
GLUT 3 Cerebro, Ingreso basal en el organismo son: a) La fuente principal de
placenta, de glucosa. energía (1 g de carbohidrato produce 4 Cal); b)
hígado, riñón KM 2 mM. Precursores en la bio-síntesis de ácidos grasos y
y corazón. Transportador algunos aminoácidos; c) Constituyentes de moléculas
de glucosa y complejas importantes como glucolípidos,
galactosa. glucoproteínas, ácidos nucleicos y nucleótidos.

GLUT 4 Tejido Dependiente Estructura de los monosacáridos


adiposo, de insulina.
corazón y Km de 5 mM. Los alcoholes y los aldehídos o cetonas pueden
músculo reaccionar entre sí para producir hemiacetales y
esquelético. hemicetales. Cuando existen estos grupos hidroxilo y
GLUT 5 Yeyuno, Transportador carbonilo en una misma molécula provocan que la
espermatozoi de molécula se ciclice. La naturaleza del ciclo depende
des, riñón, fructosa. de la posición del grupo hidroxilo que participa. Si el
cerebro. compuesto es una aldosa y tiene 5 carbonos será el
C 4 el que reaccione y el anillo formado es un furano.
De la misma manera, si el compuesto tiene 6
Se clasifican según el número de unidades carbonos, será el C 5 el que reaccione y se formará
sacáridas en monosacáridos y polisacáridos. Los un anillo de pirano. La transferencia de un protón del
monosacáridos, según el número de carbonos en su grupo hidroxilo al oxígeno del carbonilo ocasiona un
molécula, se dividen en triosas (3C), tetrosas (4C), nuevo carbón asimétrico. La posición del hidroxilo en
pentosas (5C), hexosas (6C), heptosas (7C), este carbono determina dos formas isoméricas alfa o
etcétera. Según su función carbonilo pueden ser beta que, en solución, guardan un equilibrio con la
aldosas o cetosas, por ejemplo, la glucosa es una forma lineal (forma carbonilo).
aldohexosa y la fructosa una cetohexosa. Los
polisacáridos son carbohidratos que resultan de la Glucósidos
unión de varias moléculas de monosacáridos. Este Son los compuestos resultantes de la unión
grupo se puede clasificar en disacáridos, con dos covalente de azúcares con varias moléculas. Se

49
clasifican en homoglucósidos, si se unen Existe también otra enzima llamada maltasa
exclusivamente carbohidratos (osas) mediante (alfa amilasa), que hidroliza los enlaces 1 4
enlaces glucosídicos, y en heteroglucósidos, si glucosídicos de la malto-sa; la acción de esta enzima
forman enlaces con otro tipo de moléculas como facilita la formación de la dextrina límite. Esta
proteínas o lípidos. Los homoglucósidos pueden partícula está constituida por moléculas de
clasificarse según el número de unidades en: amilopectina que tienen una gran cantidad de
disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los ramificaciones. Las dextrinas límite son degradadas
polisacáridos, también llamados poliósidos, pueden por la  1 6 glucosidasa y se obtiene una mezcla
clasificarse en homopolisacáridos, que pueden ser de de glucosa y maltosa.
reserva, como el almidón, el glucógeno, la inulina, o Los productos de la digestión de los
estructurales, como la celulosa, la lignina y la quitina, carbohidratos se absorben en el intestino a través de
y en heteropolisacáridos, que pueden dividirse en no GLUT2 y GLUT5 o por cotransporte con sodio y
nitrogenados, como las pectinas, el agar y la goma pasan a la circulación portal.
arábiga, o nitrogenados, como los
glucosaminoglucanos. C. Metabolismo energético
Muchos de los alimentos que se ingieren a
diario contienen almidón y glucógeno que son Al finalizar esta subunidad, el alumno conocerá las
polisacáridos de reserva. El almidón forma gránulos vías involucradas directamente en la generación de
en las células de las plantas y el glucógeno se la energía de la célula.
encuentra en el citoplasma de las células musculares
y hepáticas de los animales. El azúcar que constituye C.1 Glucólisis.
la unidad estructural de estas moléculas es la C.1.1 Describirá las reacciones de la vía
glucosa, la cual se encuentra formando dos tipos de glucolítica, indicando las reacciones
enlaces: los enlaces  1 4 se encuentran en la irreversibles y aquellas que generan
amilosa (formada por unidades de maltosa) y el NADH o ATP por fosforilación a nivel
enlace  1 6 conecta a la estructura llamada de sustrato.
amilopectina. La estructura del glucógeno es similar a C.1.2 Señalará los productos de la vía y su
la del almidón, pero con una mayor cantidad de destino en presencia y en ausencia
ramificaciones. El almidón está compuesto por 3 000 de oxígeno; discutirá la importancia
residuos de glucosa y tiene un peso molecular fisiológica de la formación de lactato.
cercano a 5 X 105; el glucógeno tiene un peso C.1.3 Conocerá el balance energético y la
molecular de 1 a 4 X 106. La degradación de estos regulación de la vía glucolítica; hará
polisacáridos es diferente si se realiza en el aparato énfasis en el papel de las siguientes
digestivo o en el interior de las células; es hidrolítico moléculas: ATP, ADP, AMP, fructosa
en el primer caso y fosforolítico en las células. 2,6-bisfosfato, alanina y citrato.
Durante la digestión, la amilosa es C.1.4 Señalará la importancia de la
hidrolizada por una alfa amilasa, la cual rompe los glucólisis en los eritrocitos, en las
enlaces  1 ; 4. Los productos primarios son células musculares, en las células
oligosacáridos con 6 a 7 residuos; los últimos nerviosas y en los hepatocitos.
productos son una mezcla de maltosa y glucosa. En
la cadena de amilopectina, la alfa amilasa rompe los Las células de los organismos heterótrofos obtienen
enlaces  1 4, pero no los  1 6; éstos son su energía de reacciones oxidativas en las cuales los
hidrolizados por una  1 6 glucosidasa. El electrones de un sustrato donador se transfieren a un
resultado de la acción de las dos enzimas es la aceptor. Bajo condiciones anaeróbicas, un
hidrólisis de la amilopectina hasta glucosa y maltosa. compuesto orgánico sirve como aceptor de

50
electrones; bajo condiciones aeróbicas, el oxígeno es fructosa 2,6 bisfosfato y se inhibe por ATP y citrato.
el aceptor final. La deshidrogenasa de gliceraldehído 3 fosfato
Los sustratos preferidos por la célula para también desempeña un papel importante en la
obtener la energía requerida para sus funciones regulación de la glucólisis.
vitales son los azúcares (mono, di y
homopolisacáridos). Asimismo, las células son C.2 Papel de la mitocondria en las funciones
capaces de usarlos también como intermediarios oxidativas.
para la formación de otros compuestos importantes C.2.1 Conocerá la biogénesis de la
en biología. mitocondria.
La glucólisis es la vía metabólica por la que C.2.2 Señalará la estructura de la
se degrada la glucosa; filogenéticamente, es la vía mitocondria y describirá las
más antigua y consiste en una secuencia de características de su matriz,
reacciones enzimáticas en las cuales se degrada la membrana externa, membrana
glucosa. La glucólisis puede dividirse en dos fases: interna y espacio intermembranal;
una de activación y una oxidativa. La fase de hará énfasis en su papel en la
activación consiste en la transferencia de fosfatos a transducción de energía.
la glucosa con gasto de dos ATP y en su ruptura en C.2.3 Reconocerá que en la mitocondria se
dos moléculas de gliceraldehído 3 fosfato; en la fase realizan, entre otras, las siguientes
oxidativa, el gliceraldehído 3 fosfato es transformado vías: síntesis de algunas proteínas,
en piruvato con la obtención de cuatro moléculas de descarboxilación del piruvato, ß-
ATP por fosforilación a nivel de sustrato. oxidación, ciclo de Krebs, cadena de
Las reacciones de la glucólisis ocurren en el transporte de electrones y
citoplasma y no están ligadas a estructuras celulares. fosforilación oxidativa.
El producto de la vía es el piruvato, el cual
puede seguir diversos destinos según las La respiración celular es una secuencia de
condiciones de la célula. En condiciones reacciones de óxidorreducción de la que los
anaeróbicas, el piruvato se transforma en lactato por organismos obtienen energía para formar
acción de la lactato deshidrogenasa en presencia del compuestos como el ATP. La base molecular de este
NADH + H+ obtenido en la oxidación del proceso es una oxidación, paso a paso, de los
gliceraldehído 3 fosfato. En las levaduras, el piruvato compuestos orgánicos hasta CO2 y la transferencia
se descarboxila a acetaldehído y se forma etanol por de hidrógeno (protones más electrones) al oxígeno
la reducción del acetaldehído con el NADH mediante con la formación de una molécula de agua. La
la acción de la deshidrogenasa alcohólica. Bajo energía obtenida por la respiración celular es, por
condiciones aerobias, el piruvato se descarboxila en tanto, una parte de la energía liberada en la reacción
las mitocondrias y produce NADH y acetil CoA, la del hidrógeno con el oxígeno. Todos estos procesos
cual es el sustrato principal del ciclo de Krebs. se realizan en las mitocondrias de los organismos
Sólo una pequeña parte de la energía eucariotos y en las membranas plasmáticas de los
almacenada en la molécula de la glucosa se libera en organismos procariotos.
la glucólisis (2 ATP netos por cada molécula de Las mitocondrias son orgánulos
glucosa). En estricta anaerobiosis, la glucólisis es la relativamente autónomos cuya estructura está
única fuente de energía de la célula. adaptada a su función principal, es decir, a la
La regulación de la vía glucolítica se realiza a conversión de la energía de oxidación en aquella de
nivel de la transformación de la fructosa 6 fosfato en los compuestos de reserva con un alto contenido
fructosa 1,6 bisfosfato. Esta reacción es catalizada energético. Una mitocondria está constituida por dos
por la fosfofructocinasa I, la que es una enzima membranas separadas: una membrana externa lisa y
alostérica cuya actividad se estimula por AMP, ADP y muy permeable y una membrana interna con

51
plegamientos irregulares (crestas) y selectivamente oxidada de este lipoato. Para ello, el FAD unido a la
permeable. El interior de la mitocondria está dihidrolipoil deshidrogenasa (E3) remueve los
+
constituido por la matriz. Cada compartimiento tiene electrones del lipoato y los entrega al NAD
+.
un contenido característico de enzimas y moléculas reduciéndolo a NADH + H
de acuerdo con los procesos que se realizan en ellos. La actividad del complejo de la piruvato
La cadena de transporte de electrones (cadena deshidrogenasa es regulada por tres mecanismos:
respiratoria) y la generación de enlaces de alta 1. Inhibición por producto: tanto el acetil CoA como el
+
energía asociada a esta transferencia de electrones NADH + H actúan como moduladores alostéricos
tiene lugar en la membrana interna. La mitocondria negativos.
contiene además un DNA circular específico y todos 2. Por disponibilidad de sus sustratos: deben existir
los componentes necesarios para la síntesis de concentraciones adecuadas de piruvato, CoA y
proteínas, lo que podría indicar que el origen de la NAD+.
mitocondria pudo ser una bacteria que estableció una 3. Por modificación covalente: la piruvato
simbiosis con una célula eucariótica a la que infectó. deshidrogenasa (E1) existe en dos formas: una
fosforilada (inactiva) y otra desfosforilada, que es
C.3 Descarboxilación del piruvato. activa. La fosforilación es llevada a cabo por una
C.3.1 Conocerá las reacciones de la proteína cinasa dependiente de Mg2+ y ATP,
descarboxilación oxidativa del mientras que la desfosforilación la realiza una
piruvato e indicará sus productos y el fosfoproteína fosfatasa, cuya actividad es
destino de los mismos. estimulada por altas concentraciones de Ca2+. Este
C.3.2 Analizará el carácter irreversible de último evento ocurre cuando existe una
la descarboxilación del piruvato y su concentración elevada de ADP, el cual es indicador
regulación por producto, por de carencia energética.
alosterismo y por modificación Los individuos que tienen deficiencia de
covalente. tiamina, como ocurre en el beriberi, presentan
problemas a nivel neurológico debido a que el
En los organismos aeróbicos el piruvato, producto de cerebro obtiene toda su energía por oxidación
la glucólisis, entra a la mitocondria para ser oxidado a aeróbica de la glucosa.
acetil CoA y CO2. Este proceso oxidativo irreversible
es realizado por la piruvato deshidrogenasa, un C.4 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos (ciclo de
complejo de tres enzimas y cinco diferentes Krebs).
coenzimas o grupos prostéticos: pirofosfato de C.4.1 Definirá el concepto de
tiamina (TPP), lipoato, flavin adenin dinucleótido óxidorreducción, par redox y
(FAD), CoA y nicotin adenin dinucleótido (NAD). potencial de óxidorreducción.
En la primera reacción se forma CO2 y un C.4.2 Señalará la localización subcelular
grupo -hidroxietilo derivado del piruvato, el cual se de la vía en función de sus
une covalentemente al TPP de la piruvato alimentadores y precisará el papel
deshidrogenasa (E1). En el siguiente paso el grupo del ciclo en la generación de la
-hidroxietilo es oxidado a acetato y se transfiere al energía celular.
lipoato unido covalentemente a la dihidrolipoil C.4.3 Describirá las reacciones
transacetilasa (E2). El TPP se regenera en este enzimáticas involucradas en el ciclo,
paso. sus sustratos y productos, así como
La siguiente reacción consiste en transferir el las sustancias que intervienen en la
grupo acetato del lipoato a la CoA para formar acetil regulación de la vía.
CoA. El lipoato permanece reducido. Los siguientes C.4.4 Conocerá el papel anfibólico de la
pasos tienen como finalidad regenerar la forma vía y los diferentes destinos de sus

52
intermediarios: citrato, isocitrato, Į- de las cuales tres donan sus hidrógenos al NAD+ y
cetoglutarato, succinil CoA, malato y una al FAD.
oxaloacetato.
C.4.5 Definirá el concepto de reacción a) La oxidación de la Acetil CoA derivada de la
anaplerótica y conocerá las enzimas glucosa, los ácidos grasos y los aminoácidos es
involucradas en estas reacciones la función primaria del ciclo de Krebs, el cual la
para el ciclo de Krebs. procesa en una serie de reacciones que se
C.4.6 Conocerá el balance energético de la inician y terminan con el oxaloacetato; en cada
vía y hará énfasis en el número y tipo vuelta del ciclo de Krebs se produce un GTP por
de coenzimas reducidas producidas fosforilación a nivel del sustrato y se liberan
en la oxidación de una molécula de cuatro pares de hidrógeno que alimentan la
acetil CoA. cadena respiratoria con la producción de 9 ATP
en la fosforilación oxidativa.
Además de su papel central en la oxidación de la
La mayor parte del ATP generado en los organismos acetil CoA, el ciclo de Krebs participa en los
aerobios se produce en el proceso de la fosforilación siguientes procesos metabólicos:
oxidativa en el cual, los hidrógenos extraídos de los b) Gluconeogénesis. Reúne numerosos sustratos que
metabolitos mediante las reacciones de se convierten en oxaloacetato. Este compuesto
deshidrogenación son cedidos a la cadena sale de la mitocondria en forma de malato, citrato
respiratoria, en donde se genera el potencial o aspartato y se transforma en el citosol, primero
protonmotriz que sirve de fuerza impulsora para la en fosfoenol piruvato y después en glucosa.
síntesis del ATP. La mayoría de las c) Biosíntesis de las ácidos grasos. Aporta la molécula
deshidrogenaciones de los metabolitos se llevan a de citrato que, al salir de la mitocondria, es
cabo en una secuencia cíclica de reacciones transformada con gasto de un ATP por la citrato
conocida como ciclo de Krebs, ciclo del ácido cítrico liasa en oxaloacetato y acetil CoA, que es el
o ciclo de los ácidos tricarboxílicos. El ciclo de Krebs alimentador inicial de la biosíntesis de los ácidos
se lleva a cabo por enzimas solubles (a excepción de grasos. El oxaloacetato se reduce a malato, el
la succinato deshidrogenasa que es parte integral de cual es oxidado por la enzima málica para la
la membrana interna) de la matriz mitocondrial y producción de NADPH, coenzima indispensable
durante él se oxidan los residuos de acetato activo en la biosíntesis de los ácidos grasos.
(acetil CoA) provenientes de la glucosa, los ácidos d) Interconversión de Aminoácidos. Numerosos
grasos y los aminoácidos, hasta CO2 y coenzimas aminoácidos entregan sus carbonos al ciclo de
reducidas. Aproximadamente dos tercios del ATP Krebs al transformarse, por reacciones
utilizado por los organismos aerobios se genera sucesivas, en alguno de los metabolitos clave del
como resultado de la oxidación de los restos de ciclo: -cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato y
acetato en el ciclo de Krebs. oxaloacetato; una vez ahí, mediante las
El ciclo de Krebs es una vía de confluencia reacciones del ciclo de Krebs, pueden
para el catabolismo celular (fig. III.1) que, en una transformarse en algún otro aminoácido que se
secuencia de ocho reacciones oxida al residuo derive de otro intermediario del ciclo.
acetato de la acetil CoA conforme a la ecuación e) Biosíntesis de Purinas y Pirimidinas. El ciclo de
siguiente: Krebs alimenta la síntesis de bases púricas y
pirimídicas aportando, de manera indirecta,
CH3 – COOH + 2H2O 2CO2 + 4(2H+) aspartato y glutamina.
f) Biosíntesis de Porfirinas. El ciclo de Krebs aporta
En el ciclo ocurren dos reacciones en las que uno de los sustratos iniciales necesarios para
se desprende CO2 y hay cuatro deshidrogenaciones, que se lleve a cabo esta vía: la succinil-CoA.

53
deshidrogenasa y -cetoglutarato deshidrogenasa
Regulación del ciclo de Krebs son las enzimas reguladoras del ciclo.
C.5 Cadena de transporte de electrones (cadena
Por el hecho de que entrega NADH y FADH2 a la respiratoria).
cadena respiratoria y recibe de ella las mismas C.5.1 Describirá la naturaleza de los
coenzimas oxidadas, el ciclo de Krebs funciona bajo componentes de la cadena de
el control de la cadena respiratoria y depende en transporte de electrones y señalará
última instancia de la fosforilación oxidativa. Sin su secuencia con base en los
embargo, el ciclo de Krebs responde a moduladores potenciales de oxidorreducción.
Calculará la energía generada en
cada paso del transporte de
electrones.
C.5.2 Identificará los alimentadores de la
vía, así como su sitio de entrada a
ésta y el último aceptor de los
electrones.
C.5.3 Señalará el sitio de acción de los
siguientes inhibidores de la cadena
respiratoria: amital, rotenona,
antimicina, cianuro, NaN3, CO y H2S.
C.5.4 Describirá los sistemas de transporte
de los equivalentes reductores a la
mitocondria (lanzaderas).
C.5.5 Citará algunos ejemplos de
alteraciones en los componentes
mitocondriales, como las isoenzimas
e isoformas de la citocromo c
oxidasa, entre otras.

Lecturas recomendadas
1. Schon EA. Mitochondrial genetics and disease.
TIBS. 2000; 25(11): 555-5560.
2. Raha S, Robinson BH. Mitochondria, oxygen free
radicals, disease and aging. TIBS. 2000; 25(10):
502-508.
3. Cardellach F, Casademont J. Enfermedades
mitocondriales: un diagnóstico todavía difícil.
Medicina Clínica. 2000; 114 (4): 139-140.
4. Rubio JC, Matín MA, del Hoyo P, Bustos F,
Campos Y, Arenas J. Déficits de los complejos
alostéricos generados en el propio ciclo y también en enzimáticos de la cadena respiratoria
otras vías del metabolismo; son moduladores mitocondrial. Rev Neurol. 1998; 26 (supl 1): S15-
negativos NADH, ATP, citrato, succinil CoA y S20.
oxaloacetato y moduladores positivos ADPy Ca2+. 5. Castro-Gago M, Novo MI, Eirís J. Tratamiento de
Las enzimas citrato sintasa, isocitrato las enfermedades mitocondriales durante la

54
infancia y adolescencia. Rev Neurol. 1998; 26 participan en la transferencia de hidrógenos y
(supl 1): S92-S98. electrones (la cadena respiratoria) se localiza en la
membrana interna de la mitocondria. La cadena se
C.6 Fosforilación oxidativa. puede dividir en cuatro complejos: el complejo I o
C.6.1 Describirá brevemente la hipótesis NADH deshidrogenasa (que cede sus electrones a la
quimiosmótica propuesta para coenzima Q); el complejo II o las deshidrogenasas
explicar la síntesis de ATP y los que ceden sus electrones al FADH2 (como la
datos que existen en favor de ella. succinato deshidrogenasa) y a través de él a la
Definirá los conceptos de misma coenzima Q; el complejo III o citocromo c
vectorialidad, impermea-bilidad, reductasa, y el complejo IV o citocromo c oxidasa,
fuerza protonmotriz e ionóforo, que transfiere los electrones al oxígeno, que es el
empleados en esta hipótesis. aceptor final.
C.6.2 Con base en el cálculo de energía Los componentes de la cadena respiratoria
libre de Gibbs, señalará el número están arreglados de acuerdo con potenciales de
de ATP que se genera al reoxidarse oxidorreducción crecientes (de valores negativos a
las coenzimas NADH y FADH2 en la positivos). La energía liberada en el curso de la
cadena respiratoria. Definirá el transferencia de hidrógeno y electrones a través de la
concepto de control respiratorio cadena respiratoria se utiliza para la formación de
indicando el papel del ADP, del ATP por la llamada fosforilación oxidativa. La energía
transportador de adenin nucleótidos requerida para la formación de un ATP a partir de un
y del acarreador de fosfatos y su ADP es equivalente a una diferencia de potencial
efecto sobre la síntesis de ATP. redox de 0.15 V. En promedio, la oxidación de una
C.6.3 Señalará el sitio de acción de los molécula de NADH da origen a 2.5 moléculas de
inhibidores de la ATP sintasa ATP, mientras que se forman 1.5 moléculas de ATP
(oligomicina y venturicidina), de los cuando se oxida FADH2 vía succinato (no involucra
desacoplantes sintéticos y naturales NADH). El rendimiento de energía de la fosforilación
(dinitrofenol y termogenina) de los oxidativa es alrededor de 40% del valor teórico de la
procesos de transporte de electrones energía liberada en la reacción del hidrógeno con el
y la fosforilación oxidativa y el oxígeno.
inhibidor del translocador de adenin El transporte de los electrones entre los
nucleótidos (atractilósido) y hará diferentes componentes de la cadena respiratoria
énfasis en su efecto sobre la síntesis puede ser inhibido por diversos compuestos, entre
de ATP. ellos: los barbituratos, la rotenona, la antimicina, el
CO, las azidas, el H2S y el cianuro, los que actúan en
Realización de la práctica 7 "Estudio del bombeo de distintos sitios de la cadena respiratoria.
protones por levaduras; efecto de los inhibidores de Las reacciones de la cadena respiratoria y la
la cadena de transporte de electrones y de los fosforilación oxidativa están acopladas; si se
desacoplantes" (ver pág.153). desacoplan, la energía se pierde como calor y no hay
síntesis de ATP. Pueden desacoplarse in vitro por 2,4
Lectura recomendada dinitrofenol o compuestos similares e, in vivo, por la
1. Hinkle PC. ¿Cómo fabrican ATP las células? termogenina presente en tejido adiposo pardo, el que
Investigación y Ciencia 1978; 20: 58-75. es abundante en recién nacidos.
La membrana interna de la mitocondria debe
Mientras que el CO2 se forma por la oxidación del estar intacta para generar ATP. Las moléculas de
sustrato durante el ciclo del ácido cítrico en la matriz ATP formadas en el interior de la mitocondria son
mitocondrial, la secuencia de las reacciones que translocadas al exterior en intercambio con moléculas

55
de ADP presentes fuera de la mitocondria por medio C.7.5 Describirá los mecanismos protectores
de un acarreador altamente específico presente en la del organismo contra las especies
membrana mitocondrial: la translocasa de los adenin- reactivas de O2: superóxido dismutasa,
nucleótidos. catalasa, glutatión peroxidasa,
Hay otro mecanismo de síntesis de ATP no vitaminas E y C y ȕ-carotenos.
asociado al transporte de electrones en el que los
donadores de la energía y del fosfato final del ATP Realización de la práctica 8 "El efecto del etanol
son compuestos con enlaces fosfato de alta energía. sobre la lipoperoxidación" (ver pág.156).
Este tipo de fosforilación se conoce como
fosforilación a nivel de sustrato. Lecturas recomendadas
Los sustratos metabolizados dentro de la 1. Piña GE, Huberman A, Chávez R, Lascurain
mitocondria son transportados al exterior por R, Zenteno E, Frenk S. Los radicales libres.
mecanismos específicos (transporte de ácidos Beneficios y problemas. Gac Méd Méx 1996;
dicarboxílicos, de aminoácidos, de iones, etcétera). 132 (2): 183-203.
Este transporte, como el del ATP, se convierte en 2. Fernández AA, Abudara V, Morales FR. El
uno de los factores de control en la función óxido nítrico como neurotransmisor y
mitocondrial. neuromodulador. Actas de Fisiología. 1999;
Dado que la membrana interna de la 5: 39-77.
mitocondria es impermeable para el NAD+ y el NADH 3. Raha S, Robinson BH. Mitochondria, oxygen
y a que una forma eficiente, energéticamente free radicals, disease and aging. TIBS. 2000;
hablando, de reoxidar al NADH que se obtiene en la 25 (10): 502-508.
glucólisis es un proceso mitocondrial, existen
lanzaderas que son sistemas de transporte de los Un gran número de enfermedades, como el
hidrógenos citoplasmáticos (equivalentes reductores) Parkinson, aterosclerosis, enfisema pulmonar y
a través de la membrana mitocondrial. Las dos cáncer, entre otras, tienen su origen en una
lanzaderas más importantes son la del glicerol fosfato producción excesiva o anormal de derivados del
y la del malato. oxígeno, químicamente muy activos: los radicales
libres.
C.7 Radicales libres. Un radical libre es cualquier especie química,
C.7.1 Definirá el concepto de radicales molécula o átomo, portadora de uno o más
libres y cuáles son derivados del electrones desapareados. Se llama electrón
oxígeno. desapareado al electrón que se encuentra solo en un
C.7.2 Describirá cómo y dónde se generan orbital. La presencia de un electrón desapareado
los radicales superóxido, hidroxilo y hace que los radicales libres sean muy reactivos,
otras moléculas reactivas: peróxido pues buscan con avidez completar su par electrónico.
de hidrógeno y singulete de oxígeno. No obstante, existen radicales libres relativamente
C.7.3 Describirá el efecto de estos estables, como las moléculas con estructuras
radicales y moléculas reactivas sobre resonantes (con múltiples enlaces dobles), que
otras moléculas, células y permiten la deslocalización del electrón desapareado.
organismos y su contribución en las La colocación de un punto, generalmente al final de
siguientes condiciones: fagocitosis, la fórmula química, indica el carácter de radical libre
inflamación, lipoperoxidación y de una molécula (•).
perfusión postisquemia. Los radicales libres son capaces de alterar
C.7.4 Describirá las condiciones en las que reversible o irreversiblemente compuestos
se genera el radical NO y su relevancia bioquímicos de todo tipo y pueden modificar en forma
fisiológica. importante su estructura y, como consecuencia,

56
alterar la capacidad funcional de las sustancias oxigenada, que no es realmente un radical libre, pero
atacadas. El principal blanco de los radicales libres este compuesto por captación de un electrón y de un
son las insaturaciones de los lípidos de membrana en protón, puede dar lugar a la formación de especies
los cuales provocan una peroxidación. La presencia oxigenadas muy activas, especialmente al radical
de lípidos peroxidados en las membranas biológicas hidroxilo.
disminuye su fluidez, lo que se traduce en Radical hidroxilo. El •OH es un oxidante
alteraciones de la permeabilidad a sustancias o, extremadamente reactivo que interactúa con casi
incluso, su integridad, lo que provoca la lisis celular. todas las moléculas a velocidades sólo limitadas por
Los radicales libres también son capaces de inactivar su difusión. El radical hidroxilo es formado por la
o destruir enzimas y otras proteínas y atacar a los ruptura de una molécula de agua bajo el efecto de
ácidos nucleicos. El daño al DNA puede causar una radiación gamma o en el ciclo de Haber-Weiss:
mutaciones y dar origen a cánceres. La acción sobre
• +
los carbohidratos puede alterar su función como 1. 2 O2 – + 2 H O2 + H2O2
2+
receptores (de hormonas o neurotransmisores). Es 2. H2O2 + Fe Fe3+ + •OH + OH–
decir, los radicales libres influyen sobre actividades 3. Fe3+ + O2•– 2+
Fe + O2
celulares tanto a nivel de la membrana como en las el ciclo global se expresa:
vías metabólicas y en la expresión genética. 2+
Fe /Fe
3+

Una de las características más importantes O2•– + H2O2 O2 + •OH + OH–


de las reacciones de los radicales libres es que se
forman por reacciones en cadena; esto significa que 1. La dismutación del radical anión superóxido
un radical libre puede dar lugar a la formación de produce peróxido de hidrógeno.
otro, de manera que este mecanismo permite que la 2. El peróxido de hidrógeno se descompone en el
actividad se propague y que el daño se generalice. radical hidroxilo con intervención del Fe2+ (reacción
de Fenton).
Los radicales derivados del oxígeno 3. La regeneración del Fe2+ por medio del radical
anión superóxido.
Las especies reactivas del oxígeno son el anión Singulete de oxígeno. El singulete de
superóxido, el peróxido de hidrógeno, el hidroxilo y el oxígeno, representado gráficamente como 1O2*, se
singulete de oxígeno. caracteriza por tener un par electrónico antiparalelo
Anión superóxido. La transformación del en su última órbita; no es realmente un radical, sin
oxígeno en radical libre puede efectuarse cuando el embargo, es incluido aquí por ser un derivado muy
oxígeno acepta un electrón que transforma este oxidante del oxígeno. Se forma principalmente en
elemento en un radical con carga negativa, el anión reacciones en las que los pigmentos biológicos,
superóxido: O2 •–. como el retinal, las flavinas o las porfirinas, son
Probablemente la fuente más importante de expuestos a la luz en presencia de oxígeno.
producción de radicales superóxido sea el estallido
respiratorio (aumento súbito del consumo de Antioxidantes
oxígeno) de los macrófagos y de los leucocitos Para controlar los efectos devastadores de los
polimorfonucleares en respuesta a una señal radicales libres existen mecanismos protectores.
inmunitaria provocada por alguna infección. Estos sistemas tienen la función de neutralizar el
Peróxido de hidrógeno. El anión superóxido efecto de los radicales libres o evitar su aparición. El
sufre espontáneamente, o bajo la acción de la nivel primario de defensa lo constituyen tres enzimas
enzima superóxido dismutasa (SOD), una reacción especializadas.
de dismutación: dos radicales libres reaccionan entre 1. Superóxido dismutasa. Existe en las mitocondrias
sí, uno de ellos perdiendo electrones y el otro (SOD de Mn2+) y en el citosol (SOD de Cu2+ y de
ganándolos. Esta dismutación produce agua Zn2+). Cataliza la dismutación del radical anión

57
superóxido para dar oxígeno molecular y peróxido carbohidratos, identificar su papel como combustible
de hidrógeno: celular y como generador de intermediarios de otras
vías metabólicas y podrá explicar en forma integral la
• +
2 O2 – + 2 H O2 + H2O2 regulación de la glucemia.

2. Glutatión peroxidasa. Existe principalmente en el D.1 Gluconeogénesis.


citosol y contiene selenio. Cataliza la siguiente D.1.1 Señalará en qué consiste la
reacción: gluconeogénesis, los sustratos
gluconeogénicos, los
2GSH + H2O2 GSSG + 2H2O compartimentos celulares de la vía y
los tejidos con mayor actividad
(donde: GSH-glutatión reducido y GSSG-glutatión gluconeogénica.
oxidado). D.1.2 Comparará y analizará las
3. Catalasa. Existe principalmente en los reacciones de esta vía con las de la
peroxisomas y su función es destruir el agua glucólisis desde el punto de vista
oxigenada por dismutación: energético y describirá los
mecanismos empleados para evitar
H2O2 + H2O2 2H2O + O2 las barreras energéticas.
D.1.3 Indicará el destino metabólico del
Otro tipo de protección contra los radicales producto de la gluconeogénesis
libres es la que prestan unas sustancias capaces de hepática.
neutralizar a los radicales o limitar su reactividad, D.1.4 Describirá el ciclo de Cori y el ciclo
llamadas atrapadoras. Entre ellas cabe mencionar: de la alanina y el significado
Vitamina E (tocoferol) y beta caroteno. fisiológico de ambos.
Reaccionan con los radicales peróxido y suspenden D.1.5 Elaborará el balance energético y
la cadena de reacciones radicalares. Son liposolubles explicará la regulación de la
y por eso pueden proteger las membranas. gluconeogénesis y hará énfasis en
Vitamina C. Reacciona directamente con los el papel de la
superóxidos, con el singulete de oxígeno y con el fructosa 2,6 bisfosfato.
radical hidroxilo; regenera la vitamina E al reaccionar
con el radical tocoferilo y lo convierte en radical
ascorbilo, también muy estable. Es el proceso por el cual se sintetiza la glucosa a
Algunos minerales como el selenio, el cinc, el partir de diversos sustratos como son:
cobre y el manganeso, constituyentes de las enzimas a) Lactato o piruvato.
antes mencionadas; proteínas y péptidos como el b) Aminoácidos glucogénicos (Ala, Arg, Cys, Asp,
glutatión, la albúmina, la ceruloplasmina, la ferritina, Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser, Tre, Val).
la transferrina, etcétera y, por último, sustancias c) Cualquier otro intermediario que pueda ser
quelantes que evitan que el hierro, cobre y otros metabolizado vía piruvato (o que entre al ciclo de
metales de transición catalicen reacciones de Krebs).
oxidación. La gluconeogénesis no puede verse como la
vía en sentido contrario de la glucólisis ya que
D. Otras vías metabólicas de los algunas de las reacciones de esta última son muy
carbohidratos exergónicas, lo que las hace irreversibles. Tal es el
caso de las reacciones catalizadas por la
Al finalizar esta subunidad, el alumno podrá analizar piruvatocinasa (transforma al fosfoenolpiruvato en
en forma integral el metabolismo de los piruvato), la fosfofructocinasa (paso de fructosa 6

58
fosfato a fructosa 1,6 bisfosfato) y la hexocinasa
(glucosa a glucosa 6 fosfato). Estas reacciones se D.2 Glucogenólisis y glucogénesis.
evitan por medio de las siguientes alternativas:
1. La formación del fosfoenolpiruvato a partir de D.2.1 Conocerá la distribución tisular del
oxaloacetato. El oxaloacetato se forma en la glucógeno.
mitocondria por carboxilación del piruvato con una D.2.2 Describirá las reacciones de la
enzima dependiente de biotina y ATP llamada glucogenólisis y de la glucogénesis e
carboxilasa del piruvato. También se puede indicará los sustratos y los
obtener el oxaloacetato en el citoplasma por productos, así como la localización
carboxilación del piruvato y reducción con NADPH subcelular de las vías.
para formar el malato, el cual se deshidrogena para D.2.3 Discutirá el balance energético y la
producir el oxaloacetato. regulación de ambas vías por
Estas reacciones son llevadas a cabo por la enzima alosterismo (glucosa, glucosa 6
málica. La fosforilación del oxaloacetato con GTP o fosfato, AMP y Ca2+). Revisará el
ITP y su descarboxilación simultánea por la papel de las las hormonas epinefrina,
fosfoenolpiruvato carboxicinasa producen el glucagón e insulina en la regulación
fosfoenolpiruvato. de estas vías.
2. La degradación hidrolítica de la fructosa 1,6 D.2.4 Indicará las diferencias del
bisfosfato a fructosa 6 fosfato catalizada por la metabolismo del glucógeno en el
fructosa 1,6 bisfosfatasa. músculo y en el hígado.
3. La degradación de la glucosa 6 fosfato a glucosa D.2.5 Mencionará los defectos enzimáticos
por la glucosa 6 fosfatasa. de las siguientes glucogenosis: von
La síntesis de una molécula de glucosa a Gierke, McArdle y Andersen.
partir de dos moléculas del piruvato requiere seis
moléculas de ATP. El glucógeno es un polisacárido de reserva localizado
La posibilidad de que la gluconeogénesis en forma de gránulos en el citoplasma de las células;
proceda completamente (es decir, que su producto es osmóticamente inactivo y facilita la rápida y
final sea glucosa) depende de la presencia de todas reversible transformación de la glucosa en una
las enzimas clave en un tejido determinado. Se lleva molécula de reserva, según la situación energética
a cabo con facilidad en el hígado y en los riñones; no de la célula. La degradación del glucógeno se
ocurre en el cerebro ni en el músculo esquelético ya conoce como glucogenólisis y su síntesis como
que la glucosa 6 fosfatasa se encuentra ausente en glucogénesis (glucogenogénesis).
estos tejidos. Es por esto que el producto de la La glucogenólisis se inicia por una ruptura
degradación del glucógeno muscular (glucosa 6 fosforolítica del glucógeno por la fosforilasa. En
fosfato) no puede servir como una fuente para presencia de fosfato, se separa una glucosa del
mantener el nivel de la glucosa sanguínea. En el glucógeno como glucosa 1 fosfato y ésta, por acción
músculo, el glucógeno se degrada hasta lactato que de una fosfoglucomutasa, se transforma en glucosa 6
sale a la circulación sanguínea y se transfiere al fosfato, la que puede entrar entonces a la vía
hígado donde se transforma en glucógeno hepático o glucolítica. La energía invertida para la inclusión de
en glucosa libre por la vía de la gluconeogénesis. una molécula de glucosa en el glucógeno y su
Esta contribución indirecta del lactato del músculo a regreso a glucosa 6 fosfato es de dos moléculas de
la glucosa sanguínea se conoce como el ciclo de ATP.
Cori. El músculo también contribuye a mantener la La síntesis de glucógeno se inicia con la
glucemia, al transformar el piruvato en alanina, la que fosforilación de la glucosa para formar glucosa 6
sale a la circulación y en el hígado se convierte otra fosfato que se transforma posteriormente en glucosa
vez en piruvato para entrar a la gluconeogénesis. 1 fosfato por acción de la fosfoglucomutasa. Esta

59
molécula reacciona con UTP por acción de la UDP- NADPH; en la fase no oxidativa, la ribosa 5-fosfato y
glucosa pirofosforilasa y origina UDP-glucosa, que es la eritrosa 4 fosfato son formadas por una
el sustrato de la glucógeno sintetasa. Las numerosas interconversión de ésteres fosfóricos de azúcares de
ramificaciones presentes en el glucógeno son 3C, 4C, 5C, 6C y 7C.
introducidas por la acción de una enzima ramificante. En el sentido biosintético, las reacciones del
La degradación y la síntesis de glucógeno ciclo de las pentosas sirven para la fijación de bióxido
están finamente reguladas por el AMP cíclico a de carbono durante la fotosíntesis.
través de la actividad de la proteína cinasa. En una Algunos de los intermediarios de esta vía
secuencia de reacciones, este compuesto se están relacionados con la glucólisis como la glucosa
involucra en la conversión de la fosforilasa b 6 fosfato, la fructosa 6 fosfato y el gliceraldehído 3
(inactiva, no fosforilada) en fosforilasa a (activa, fosfato. Las enzimas del ciclo de las pentosas, al
fosforilada).Inversamente, la glucógeno sintetasa que igual que las de la glucólisis, son solubles en el
está en su forma activa (no fosforilada o forma I) citoplasma.
cambia a su estado inactivo (fosforilado o forma D). El ciclo de las pentosas no es una vía
La concentración intracelular de AMP cíclico (AMPc) principal para el metabolismo de la glucosa y sus
es regulada por las hormonas epinefrina y glucagon, relaciones con la glucólisis pueden variar de acuerdo
las que aumentan la concentración de AMPc, y por la con el tipo de tejido y sus funciones biológicas.
insulina, que la disminuye. Las reacciones de este ciclo no pueden ser
utilizadas en la obtención de energía, ya que la
D.3 Vía del fosfogluconato (ciclo de las oxidación del NADPH no forma ATP directamente.
pentosas). El ciclo de las pentosas es importante en
D.3.1 Indicará la distribución tisular de todas las células ya que es la principal forma de
esta vía. obtener el NADPH necesario en los procesos de
D.3.2 Señalará las reacciones de la fase síntesis (reductoras); asimismo, es la fuente de la
oxidativa y de la no oxidativa e ribosa 5-fosfato, la cual es precursora de la
indicará sus productos y su destino biosíntesis de nucleótidos y ácidos nucleicos.
metabólico.
D.3.3 Mencionará las relaciones de la vía D.4 Regulación de la glucemia.
del fosfogluconato con otras vías D.4.1 Explicará el significado de los términos:
metabólicas como la glucólisis, la glucemia, hipo e hiperglucemia.
síntesis de nucleótidos, la síntesis de D.4.2 Discutirá la importancia biológica de
ácidos grasos, la síntesis de mantener una glucemia normal.
colesterol y los sistemas oxidantes D.4.3 Discutirá el papel de las siguientes
de las células fagocíticas. hormonas: epinefrina, glucagon,
D.3.4 Discutirá la regulación de la actividad cortisol e insulina en la regulación de la
de la vía y hará énfasis en su glucemia normal indicando las vías
importancia para las síntesis metabólicas, los tejidos involucrados y
reductoras. las fuentes endógenas y exógenas de
D.3.5 Mencionará la consecuencia de la los carbohidratos.
deficiencia de la glucosa 6 fosfato D.4.4 Reconocerá la glucosilación no
deshidrogenasa en eritrocitos. enzimática de las proteínas
(hemoglobina glucosilada y
El ciclo de las pentosas es una vía colateral a la fructosaminas) como consecuencia de
glucólisis. Presenta dos fases: una oxidativa y una no una hiperglucemia prolongada.
oxidativa. En la fase oxidativa, una molécula de
glucosa es gradualmente degradada y se forma el

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Realización de la práctica 9 "Estudio general del que pueden aumentar hasta 10 veces y en el caso de
metabolismo de los carbohidratos" (ver pág.157). los cuerpos cetónicos hasta 100 veces.
La principal regulación de la glucemia se
Discusión del caso clínico no. 3 “Hipoglucemia realiza por hormonas. Las principales son: glucagon,
secundaria a intoxicación alcohólica” (ver pág. 198). insulina, epinefrina, gluco-corticoides y las hormonas
tiroideas.
Lecturas recomendadas Cuando la concentración de glucosa
1. Beisswenger PJ, Szwergold BS, Yeo KT. disminuye, como en el ayuno, el páncreas secreta
Glycated proteins in diabetes. Clin Lab Med. glucagón El resultado neto es que en el hígado se
2001; 21 (1): 53-78. detienen las vías de utilización de la glucosa
2. Cohen MP. Intervention strategies to prevent (glucogénesis y glucólisis) y se activan las vías
pathogenetic effects of glycated albumin. productoras de glucosa (glucogenólisis y
Arch Biochem Biophys. 2003; 419 (1): 25-30. gluconeogénesis). Por otra parte, la disminución en el
3. Desmond A. Glicosilación no enzimática de consumo de glucosa por los tejidos insulino-
proteínas: su rol en las complicaciones dependientes (músculo y tejido adiposo), causada
crónicas de la diabetes y el envejecimiento. por la disminución en los niveles de esta hormona,
Acta Bioquím Clín Latinoamer. 1995; 29 (2): contribuye a preservar la glucosa para que pueda ser
173-190. utilizada por el cerebro, ya que la glicemia inferior a
los 60 mg/dl, provoca que este órgano no reciba las
La concentración sanguínea de la glucosa o glucemia cantidades de glucosa suficientes para obtener la
debe mantenerse dentro de límites muy estrechos energía necesaria para realizar adecuadamente sus
debido a que algunas células como las nerviosas y funciones, por lo que, si esta situación se prolonga,
los eritrocitos utilizan a la glucosa como única fuente pueden sobrevenir el coma y la muerte. Otras
de energía, lo que las hace especialmente sensibles hormonas que intervienen para aumentar la glucemia
a la disminución de la glucemia. Por otro lado, el en el caso de ayunos prolongados son los
aumento de las concentraciones de glucosa en glucocorticoides, quienes provocan la hidrólisis de
sangre se asocia a problemas de hiperosmolaridad y proteínas musculares a fin de proveer de sustratos
a la aparición de proteínas glucosiladas que se gluconeogénicos al hígado, mientras que las
asocian a algunas patologías, como la diabetes y sus hormonas tiroideas estimulan la glucogenólisis
consecuencias. hepática.
La concentración normal de glucosa en Por otro lado, cuando la glucemia aumenta,
sangre en ayunas es de 80-100 mg/dl, y sus límites como después de una dieta rica en carbohidratos, los
extremos son 65 y 120 mg/dl. Los niveles superiores islotes de Langerhans detectan este aumento y
a los valores normales se conocen como secretan insulina. Esta hormona produce un
hiperglucemia, mientras que los inferiores se incremento en el transporte de glucosa al interior del
designan como hipoglucemia. músculo y del tejido adiposo, por los receptores
La glucosa sanguínea puede provenir de dos GLUT 4 y, activa la glucógeno sintasa, tanto
fuentes: una exógena (la dieta) y una endógena muscular como hepática. De esta manera, la
(glucogenólisis y gluconeogénesis hepática). En el glucemia disminuye y los depósitos de glucógeno
primer caso, después de una comida que contenga hepático y muscular aumentan.
carbohidratos, la glucemia se incrementa para volver El aumento de los valores de glucosa en
en unas dos horas a los niveles basales. Si por el sangre presenta algunos efectos fisiológicos que
contrario, el individuo está en ayunas la glucosa pueden explicarse por las propiedades osmóticas y
desciende pero nunca por debajo de 60 mg/dl. Esto químicas de la glucosa. Entre dichos efectos se
hace un contraste notable con las grandes encuentran la deshidratación de los tejidos y el
variaciones en la concentración de los ácidos grasos envejecimiento de proteínas. En el primer caso, la

61
salida del agua al torrente circulatorio causa que los E.1.3 Clasificará a los lípidos con base en
tejidos pierdan, además del agua, algunos iones su composición, en su grado de
importantes, como el potasio. En el segundo caso, complejidad y en su grado de
las concentraciones altas de glucosa sanguínea polaridad.
(superiores a 120 mg/dl) aceleran el envejecimiento E.1.4 Identificará a los lípidos como los
proteínico por glucosilación no enzimática o glicación. componentes principales de las
La glucosa reacciona con los grupos amino membranas celulares y relacionará el
expuestos de las proteínas y cambia las propiedades contenido y las características
catalíticas y estructurales de las mismas. La químicas de los lípidos con la
hemoglobina, la colágena, las proteínas del cristalino impermeabilidad y fluidez de la
y muchas más sufren glicación en proporción a la membrana.
concentración de glucosa en la circulación. Este E.1.5 Mencionará las diferencias en cuanto
efecto permite comprender el origen de algunas de a la asimetría y la composición de las
las complicaciones que aparecen en el caso de los membranas celulares (citoplasmática
diabéticos, como la aparición de cataratas por la y mitocondrial).
glicación irreversible de las proteínas del cristalino, o
los elevados niveles de hemoglobina glicada E.2 Digestión, absorción y transporte.
(hemoglobina A1c), que en los diabéticos llegan a ser
de dos a tres veces mayores que en los individuos E.2.1 Señalará la fuente dietética de los
normales. El nivel de hemoglobina A1c revela la lípidos.
concentración de glucosa en sangre durante un E.2.2 Conocerá el mecanismo por el cual
período de varias semanas, por lo que su el organismo realiza la digestión y
determinación puede ser muy útil para comprobar si absorción de los lípidos.
los pacientes diabéticos han sido tratados E.2.3 Conocerá el transporte de los lípidos
adecuadamente. de la dieta en el organismo
(quilomicrones).

E. Lípidos
Los lípidos son sustancias biológicas solubles en
Al finalizar esta subunidad, el alumno explicará las solventes orgánicos, pero escasamente solubles en
características principales de los lípidos, sus el agua. Pertenecen a este grupo moléculas tan
estructuras, el papel que desempeñan en los seres diversas como las grasas, los aceites, algunas
vivos, así como su digestión y absorción. vitaminas y hormonas, así como todos los
componentes no proteicos de las membranas.
E.1 Estructura. Los lípidos pueden clasificarse en dos
E.1.1 Definirá qué son los lípidos, cuál es grandes grupos: los saponificables y los no
su importancia biológica. saponificables. Los primeros tienen la característica
E.1.2 Conocerá las propiedades de que, en soluciones alcalinas, se hidrolizan
fisicoquímicas de los lípidos: produciendo ésteres de ácidos grasos, mientras que
solubilidad, naturaleza química, los segundos no son objeto de hidrólisis alcalina. A
apolaridad. los lípidos saponificables pertenecen los
E.1.2 Reconocerá las fórmulas de los acilgliceroles, los fosfoacilgliceroles, los esfin-
lípidos que emplea la célula: ácidos golípidos y las ceras, mientras que en el grupo de los
grasos, triacigliceroles, lípidos insaponificables encontramos los terpenos,
fosfoglicéridos y glicolípidos, los esteroides y las prostaglandinas, así como los
terpenos y esteroides. compuestos relacionados con éstos. Asimismo,

62
existen lípidos con un grupo extremo polar y otro Los esfingolípidos son lípidos complejos
grupo opuesto no polar. Este grupo se conoce como derivados de un alcohol insaturado llamado
lípidos anfipáticos y son los responsables de esfingosina, el que se une con un ácido graso de
estabilizar las emulsiones o forman parte de la bicapa cadena larga por medio de un enlace amida para
lipídica de las membranas. formar una ceramida. Las esfingomielinas contienen
Los ácidos grasos biológicamente una ceramida esterificada con fosforilcolina o
importantes son ácidos monocarboxílicos con fosforiletanolamina. Cuando la ceramida se combina
cadenas alifáticas de diverso tamaño, con un número con un azúcar forma los glucoesfingolípidos, que
par de átomos de carbono, que pueden ser saturados pueden subdividirse en cerebrósidos (si sólo
o insaturados. En el caso de los insaturados, los de contienen una unidad de azúcar), sulfátidos
origen natural son isómeros geométricos cis; pueden (contienen un sulfato esterificado en la unidad de
ser monoinsaturados o poliinsaturados y son líquidos azúcar) y gangliósidos (contienen oligosacáridos con
a temperatura ambiente. Los ácidos grasos uno o más ácidos N-acetilneuramínicos).
poliinsaturados no son sintetizados en el organismo Los esteroides son derivados del
por lo que se consideran esenciales. En soluciones ciclopentanoperhidrofenantreno. El núcleo esteroide
fisiológicas se encuentran en forma ionizada es una estructura rígida, casi plana, no polar. Los
formando sales o "jabones". Los ácidos grasos de esteroides más importantes son el colesterol y sus
cadena larga son insolubles en agua, pero los derivados (los ácidos biliares, las hormonas
jabones forman micelas. Los ácidos grasos forman esteroidales –estrógenos, progestágenos,
ésteres con alcoholes y tioésteres con la coenzima A. glucocorticoides, mineralcorticoides y andrógenos– y
Las prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos son la vitamina D que, aunque no es propiamente un
derivados de ácidos grasos poliinsaturados de 20 esteroide, deriva del colesterol).
carbonos, especialmente del ácido araquidónico. Los terpenos son polímeros de dos o más
Los acilgliceroles son compuestos en los que unidades de isopreno, que pueden ser lineales o
uno o más de los grupos hidroxilo del glicerol están cíclicos, con dobles enlaces trans en su mayoría. Las
esterificados. Pueden dividirse en monoacilgliceroles, vitaminas A y K, así como el escualeno, pertenecen a
diacilgliceroles y triacilgliceroles. En los este grupo.
triacilgliceroles los tres grupos hidroxilo están En la dieta, la grasa constituye cerca de 60 g,
esterificados con ácidos grasos, que pueden o no ser de los cuales 90% son triacilgliceroles. Es de todos
iguales. Las propiedades de los triacilgliceroles están conocida la dificultad para digerir la grasa, que en
determinadas por la naturaleza de sus ácidos grasos mucho está determinada por su casi nula solubilidad
componentes y se dividen en aceites (líquidos) o en agua. Esto ocasiona que se aglomere la grasa y
grasas (sólidos) de acuerdo con la longitud de sus que forme vacuolas, lo que impide que sea atacada
cadenas o con su grado de saturación. Los fácilmente por las enzimas digestivas. Para facilitar
triacilgliceroles son hidrofóbicos y no forman micelas. su hidrólisis, durante el proceso digestivo que se
Los fosfoacilgliceroles o fosfoglicéridos son inicia en la boca la lipasa lingual hidroliza algunos
derivados del ácido fosfatídico, es decir, del L- triacilglicéridos y produce ácidos grasos libres y
glicerolfosfato esterificado con dos ácidos grasos. El monoacilglicéridos que, junto con otros ácidos grasos
ácido fosfatídico se esterifica, a su vez, a través de libres, posibilitan que las vacuolas de grasa se hagan
su grupo fosfato, con un alcohol y forma las diversas más pequeñas y formen gotitas. Tanto los
familias de fosfoglicéridos, las cuales poseen un monoacilglicéridos como los fosfolípidos funcionan
carácter anfipático. como factores tensoactivos. La acción de esta lipasa
Los plasmalógenos son glicerofosfolípidos en lingual es muy breve ya que, al llegar al estómago, es
los que la posición 1 del glicerol fosfato está inhibida por el pH ácido y es hasta llegar al duodeno
combinado con un alcohol de cadena larga mediante donde se continúa el proceso de digestión. Puede
una unión tipo éter. considerarse que la dificultad de la digestión de los

63
lípidos se supera si se aumenta el área entre la fase fosfolípidos y ésteres de colesterol. La absorción de
acuosa y la lipídica y se logra un aumento en la los lípidos y la actividad del retículo endoplásmico
solubilización de los productos de hidrólisis con liso de la célula intestinal dan como resultado la
detergentes (sales biliares). El aumento del área y la formación de vesículas que se enriquecen con
solubilización suceden cuando en el duodeno, por proteínas (apoproteínas), lo que genera los
efecto de la colecistocinina, que es una hormona quilomicrones, partículas ricas en triacilglicéridos.
secretada por la llegada de los lípidos al duodeno, se
estimula la contracción de la vesícula biliar con la F. Metabolismo de los lípidos
consecutiva salida de sales biliares y otros lípidos,
que forman agregados que reciben el nombre de Al finalizar esta subunidad, el alumno podrá definir en
micelas mixtas; éstas son diferentes a las gotitas forma integral el metabolismo de los lípidos en
emulsionadas. La acción de las sales biliares es relación con su función como combustibles. Analizará
romper la tensión superficial de la gotita de grasa la regulación del metabolismo de los lípidos en
favoreciendo la interacción con el agua y su algunos estados fisiológicos.
fragmentación; así se origina la micela. Este proceso
también recibe el nombre de emulsificación. Al F.1 Oxidación de los ácidos grasos (ß-oxidación).
mismo tiempo, la lipasa pancreática, que es F.1.1 Describirá la reacción de activación
secretada como proenzima, hidroliza, al igual que la de los ácidos grasos en el citoplasma
lingual, la unión alfa éster de los triacilglicéridos y y el mecanismo de transporte al
deja libres dos ácidos grasos y un monoacilglicérido interior de la mitocondria.
que también serán emulsificados por las sales F.1.2 Describirá las reacciones de la ß-
biliares. oxidación e identificará sus sustratos
Además de la lipasa, el jugo pancreático y productos.
contiene otras esterasas que actúan sobre los F.1.3 Conocerá las reacciones adicionales
ésteres de colesterol, monoacilglicéridos y los necesarias para la oxidación de los
ésteres de vitamina A. Los fosfolípidos son ácidos grasos insaturados y de
hidrolizados por fosfolipasas específicas, pero la más cadena impar.
abundante en el jugo pancreático es la fosfolipasa A2 F.1.4 Calculará el número de moléculas de
que hidroliza la unión éster beta del ácido graso. La ATP generadas en la oxidación
presencia de sales biliares es necesaria para la completa del ácido palmítico y
absorción de otros lípidos, como el colesterol y las señalará los tejidos que dependen
vitaminas A y K. energéticamente de esta vía.
Se ha calculado que una persona sana
absorbe cerca de 70 a 90% de los lípidos, tanto
exógenos como endógenos; otro de los productos Los ácidos grasos almacenados en los tejidos son
derivados de la hidrólisis de los acilglicéridos, el utilizados por la célula para la producción de energía
glicerol, se absorbe por difusión facilitada. Las sales en magnitudes que varían de tejido a tejido, así como
biliares son absorbidas en forma muy eficaz por el del nivel metabólico del organismo. Son los
intestino y son llevadas por la vena porta músculos, principalmente el cardiaco y el esquelético,
nuevamente al hígado, de ahí a la bilis y una vez más los que más dependen de los ácidos grasos como
al intestino; a esta circulación de las sales biliares se fuente de energía.
le llama circulación enterohepática. La mayoría de los ácidos grasos que se
En la célula intestinal los lípidos son oxidan en los tejidos provienen de los triacilglicéridos
resintetizados formando triacilglicéridos por efecto de del tejido adiposo, desde donde son liberados por la
una enzima que activa a los ácidos grasos y los une acción de la enzima lipasa sensible a hormonas y
a los monoacilglicéridos; también se forman transportados en la circulación como complejos

64
albúmina-ácidos grasos. Al llegar al hígado y a las F.2.1 Describirá la estructura de los
células de otros tejidos, el ácido graso es activado en cuerpos cetónicos: acetoacetato, ß-
el citosol mediante la acción de la acil coenzima A hidroxibutirato y acetona.
sintetasa (tiocinasa) con gasto de ATP, en esta F.2.2 Conocerá las vías de síntesis y de
reacción se produce un acil coenzima A (acil CoA) y utilización de los cuerpos cetónicos e
AMP. El proceso de oxidación del ácido graso se indicará sus sustratos y sus
realiza dentro de la mitocondria; sin embargo, su productos.
membrana es impermeable a los ácidos grasos y F.2.3 Señalará los tejidos involucrados en
derivados del acil CoA, por lo que se requiere de un la síntesis y utilización de los
transportador: la molécula de carnitina es la cuerpos cetónicos.
encargada de llevar al ácido graso al interior de la F.2.4 Analizará la importancia fisiológica
mitocondria. Una vez dentro de la mitocondria, el acil de los cuerpos cetónicos en el
CoA sufre una serie de cambios que permiten ayuno, la diabetes y dietas
obtener un fragmento de dos carbonos, la acetil CoA. deficientes en carbohidratos.
Los cambios preparan al acilo para quedar
nuevamente activado y éstos son realizados por: a) Cuando bajan los niveles de glucosa se estimula la
Una deshidrogenasa que requiere de FAD y gluconeogénesis a partir del oxaloacetato y se
transforma al grupo acilo en uno enoilo (molécula con incrementa la vía de oxidación de los ácidos grasos,
un doble enlace entre el carbono alfa y beta); b) Una lo que provoca el aumento concomitante de los
hidratasa que elimina la doble ligadura y deja un niveles de acetil CoA. En el hígado, el exceso de
hidroxilo en el carbono beta. Esta molécula se llama acetil CoA se transforma en un grupo de moléculas
-hidroxiacil-CoA; c) Otra deshidrogenasa específica, conocidas genéricamente como cuerpos cetónicos.
cuya coenzima es el NAD+, transforma el grupo La vía de síntesis de los cuerpos cetónicos
hidroxilo de la posición beta en un grupo ceto; d) Una (cetogénesis) se inicia con la condensación de dos
tiolasa que requiere de una coenzima A (HSCoA) moléculas de acetil coenzima A; al producto de la
para unirla al carbono que tiene la nueva función reacción, acetoacetil CoA, se le une una tercera
cetona y romper entre el carbono beta y alfa para molécula de acetil CoA para formar el ß-hidroxi-ß-
producir una molécula de acetil-CoA. Estas cuatro metil glutaril CoA. Esta molécula, al romperse por
enzimas siguen trabajando con el acil CoA que en una liasa (HMGCoA liasa), produce una acetil CoA y
cada vuelta pierde dos carbonos como acetil CoA. Al un ácido acetoacético o acetoacetato. Este producto
mismo tiempo, el FADH2 y el NADH obtenido en cada se reduce con NAD+ y forma el ß-hidroxi-butirato; el
ciclo de la oxidación generan 4 ATP en la cadena acetoacetato, por una descarboxilación no
respiratoria y las acetil CoA entran al ciclo de Krebs enzimática, produce la acetona.
para ser totalmente oxidadas con la ganancia de 10 El acetoacetato es utilizado por otros
ATP netos por cada acetil CoA que entra al ciclo. Así órganos, como el músculo cardiaco y el cerebro,
tenemos que, por ejemplo, un palmitato (16C) genera donde, por acción de una transferasa en presencia
108 ATP al oxidarse hasta CO2 y H2O. Si de succinil coenzima A, se transforma en acetoacetil-
consideramos el gasto de la fase de activación del CoA, molécula que se rompe por una tiólisis, en
ácido graso, obtenemos una ganancia neta de 106 presencia de otra CoA para formar dos acetil CoA; la
ATP. enzima responsable de esta reacción es una tiolasa.
Las dos acetil CoA resultantes son oxidadas para la
F.2 Síntesis y utilización de los cuerpos obtención de energía en los órganos mencionados.
cetónicos. Al incremento de acetoacetato en la sangre
se le llama cetonemia. Puede deberse a una
deficiencia en el metabolismo de los carbohidratos
con el consiguiente aumento en el catabolismo de las

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grasas y la desviación de la acetil CoA a la síntesis La biosíntesis de los ácidos grasos se inicia
de cuerpos cetónicos. Algunos ejemplos de con la salida de la acetil-CoA desde la mitocondria en
situaciones en las que ocurre lo anterior son: la forma de citrato y su transformación en malonil CoA
diabetes, el ayuno prolongado y la dieta deficiente en mediante la fijación del CO2 por una sintetasa
carbohidratos. dependiente de biotina, que utiliza ATP. Tanto la
acetil CoA como la malonil-CoA se unen a un
F.3 Síntesis de ácidos grasos. complejo multienzimático llamado sintetasa de los
F.3.1 Indicará las fuentes de los ácidos grasos. Este complejo está formado por un
alimentadores de la ß-reducción: conjunto de proteínas enzimáticas dispuestas
acetil CoA y NADPH. Mencionará el alrededor de la proteína transportadora de acilos
papel del citrato y de las lanzaderas (PTA). En pasos sucesivos ocurre la condensación
(malato-aspartato y citrato) como de la acetil y la malonil CoA con desprendimiento de
transportadores del acetil-CoA CO2 y el resto del acetoacetilo de cuatro carbonos es
mitocondrial. llevado por el brazo central de la PTA a los sitios
F.3.2 Describirá la síntesis de novo de un activos de las enzimas del complejo para
ácido graso e indicará las enzimas transformarlo, sucesivamente, en hidroxiacilo, enoilo
involucradas, sustratos, coenzimas y y acilo saturado, mediante el gasto de dos NADPH.
productos. El ciclo se repite al incorporar dos carbonos del
F.3.3 Describirá las reacciones necesarias malonil-CoA en cada vuelta, hasta que se completa
para el alargamiento e insaturación el ácido palmítico, un ácido graso saturado de 16 C.
de los ácidos grasos, así como la El citrato desempeña un papel muy
localización subcelular de los importante en la síntesis de los ácidos grasos ya que
sistemas involucrados en este al salir al citoplasma se convierte en acetil CoA y
proceso. oxaloacetato. Este proceso alimenta con carbonos a
F.3.4 Señalará la fuente de los carbonos la síntesis de los ácidos grasos y aporta NADPH por
del ácido palmítico y calculará el la acción de la enzima málica sobre el sistema
gasto energético de la síntesis de oxaloacetato-malato-piruvato. Por otra parte, el
dicho ácido. citrato es un modulador positivo de la malonil CoA
F.3.5 Conocerá la función de los ácidos sintetasa (también llamada acetil CoA carboxilasa),
grasos poliinsaturados como que es la principal enzima reguladora de la síntesis
precursores de prostaglandinas, de los ácidos grasos.
tromboxanos, leucotrienos y
lipoximas e indicará la función de F.4 Síntesis y degradación de triacilgliceroles.
estos eicosanoides en el organismo
humano. F.4.1 Conocerá la estructura química y la
distribución tisular de los
Cuando el requerimiento de energía en la célula ha triacilglicéridos en función de su
sido satisfecho y existen suficientes sustratos carácter de combustible con
oxidables, procede su almacenamiento bajo la forma importancia fisiológica.
de triacilglicéridos que constituyen la reserva de F.4.2 Describirá la vía de degradación de
energía a largo plazo más importante de las células y los tri-acilglicéridos (lipólisis) e
del organismo. El primer paso de este proceso es la identificará sus enzimas, sustratos,
biosíntesis de los ácidos grasos, la cual se realiza en productos y función en el organismo.
el citoplasma celular a partir de la acetil CoA, el ATP F.4.3 Señalará las fuentes de sustratos
y el NADPH proveniente del ciclo de las pentosas y para la síntesis de triacilglicéridos:
de otros sistemas generadores de poder reductor. acil CoA y glicerol fosfato.

66
F.4.4 Describirá la síntesis de los esfingolípidos, indicando los
triacilglicéridos (lipogénesis) e sustratos, intermediarios, enzimas y
identificará sus intermediarios y productos de las vías.
enzimas. F.5.2 Describirá la degradación de los
F.4.5 Explicará tanto la regulación fosfoglicéridos y de los
hormonal como la metabólica de la esfingolípidos.
lipólisis y de la lipogénesis e indicará La síntesis de los fosfoglicéridos es similar en los
el papel de la concentración de pasos iniciales a la síntesis de los TAG: el glicerol 3-
sustratos y productos de las vías, así fosfato se esterifica con dos acil CoA para formar
como el estado energético celular. ácido fosfatídico. Este compuesto es el precursor de
todos los fosfoglicéridos. Existen dos estrategias para
Una vez formados los ácidos grasos procede la la obtención de los fosfolípidos que contienen
lipogénesis o síntesis de los triacilglicéridos: dos glicerol, según la naturaleza de la cabeza polar.
ácidos grasos activados como acil CoA reaccionan En la formación de fosfatidilinositoles y de
con una molécula del glicerol fosfato para formar el cardiolipina, el ácido fosfatídico reacciona con CTP
ácido fosfatídico. Esta última molécula es precursora para formar CDP-diacilglicerol, el cuál reacciona con
de los triacilglicéridos y de los fosfolípidos. Para la cabeza polar (inositol o fosfatidilglicerol) para
sintetizar los primeros se hidroliza el fosfato, con formar el fosfoglicérido correspondiente.
producción del diacilglicerol, el cual recibe enseguida El fosfatidilinositol puede ser fosforilado para
otra molécula de acil CoA, con la cual se completa el formar la familia de los fosfatidilinositol 4,5 bisfosfato.
triacilglicérido. La mayoría de las enzimas Estos compuestos son hidrolizados por la fosfolipasa
participantes en este proceso son aciltransferasas y C en respuesta al estímulo de algunas hormonas y
tiocinasas. producen dos segundos mensajeros muy potentes:
En el organismo humano la acción de la IP3 y el diacilglicerol, los cuales causan movilización
insulina estimula todo el proceso de la lipogénesis al de Ca2+ del retículo endoplásmico y proveen de ácido
favorecer la entrada de la glucosa a los adipocitos, el araquidónico para la síntesis de prostaglandinas,
ciclo de las pentosas, la descarboxilación del tromboxanos y leucotrienos.
piruvato, la biosíntesis de los ácidos grasos y la En la síntesis de fosfadiletanolamina y de
acumulación de los triacilglicéridos. fosfatidilcolina, el ácido fosfatídico pierde su fosfato y
La hidrólisis de los triacilglicéridos en el tejido el diacilglicerol resultante reacciona con CDP-colina o
adiposo, llamada también lipólisis, es estimulada a CDP-etanolamina.
nivel de la triacilglicérido lipasa en una acción La fosfatidiletanolamina también puede
mediada a través de AMP cíclico, por numerosas obtenerse por descarboxilación de fosfatidilserina y la
hormonas entre las cuales se cuentan: la epinefrina, fosfatidilcolina por metilación de fosfatidiletanolamina,
el glucagón, los glucocorticoides, la tiroxina y el utilizando S-adenosil metionina como donador de
ACTH; mientras que es inhibida por la insulina y por metilos. La fosfatidilserina se obtiene por recambio
el incremento de la concentración de ácidos grasos de la cabeza polar de la fosfatidiletanolamina por una
libres. La hidrólisis se completa por la acción de la serina.
diacilglicérido lipasa y la monoacilglicérido lipasa que Las fosfatidilcolinas proporcionan ácidos
en conjunto liberan un glicerol y tres ácidos grasos de grasos para la síntesis de los ésteres de colesterol de
cada triacilglicérido. las HDL por la reacción de LCAT, mientras que la
dipalmitoilfosfa-tidilcolina es el principal componente
F.5 Síntesis y degradación de fosfolípidos. del surfactante pulmonar.
Degradación de fosfoglicéridos
F.5.1 Describirá la síntesis de novo de los Los fosfoglicéridos son hidrolizados por diversos
fosfoglicéridos y de los tipos de fosfolipasas que se clasifican según su sitio

67
de acción: la fosfolipasa A1 libera los ácidos grasos inducida por hormonas (glucagon,
de la posición de 1; la fosfolipasa A2 los libera de la insulina y ACTH).
posición 2. La fosfolipasa C libera la cabeza polar F.6.4 Describirá las modificaciones que
fosforilada que se encuentra en la posición 3 del sufre el colesterol para la síntesis de
glicerol, mientras que, la fosfolipasa D libera la sales biliares, hormonas esteroidales
cabeza polar. y vitamina D.

Síntesis de esfingolípidos El colesterol es una molécula muy importante por su


Los esfingolípidos contienen una molécula de interés clínico y el gran número de compuestos que a
esfingosina en lugar del glicerol. Sus precursores son partir de él se sintetizan, como las hormonas
serina y palmitoil CoA. Los ácidos grasos activados esteroidales, las sales biliares y la vitamina D.
(acil CoA) reaccionan con el grupo amino de la La síntesis del colesterol (colesterogénesis)
esfingosina para formar las ceramidas, quienes son es una vía citoplásmica que se inicia a partir de la
las precursoras de esfingomielinas, cerebrósidos y unión de tres moléculas de acetil CoA, las que
gangliósidos. forman el ß-hidroxi-ß-metilglutaril-CoA, precursor del
Las esfingomielinas se obtienen de la reacción de la mevalonato. La enzima que produce este último
ceramida con CDP-colina. compuesto en la colesterogénesis es la ß-hidroxi-ß-
Los cerebrósidos se obtienen por la unión metil glutaril-CoA reductasa, dependiente de NADPH.
directa de galactosa o glucosa a la ceramida. El Después de tres fosforilaciones para activar la
donador del azúcar es UDP-galactosa o UDP- molécula, el mevalonato se descarboxila para formar
glucosa. el isopentenil pirofosfato, unidad isoprenoide de
Los gangliósidos se forman por la adición todos los terpenos. El isopentenil pirofosfato se une
secuencial y ordenada de residuos de azúcar a la con uno de sus isómeros para formar el geranil
ceramida. Los donadores de estos azúcares son pirofosfato, de 10 átomos de carbono que, por
UDP-azúcares o el CMP-NeuAc (ácido N- combinación con otra molécula de isopentenil
acetilneuramínico o ácido siálico). pirofosfato, forma el farnesil pirofosfato, de 15
Los esfingolípidos son degradados por carbonos. Dos moléculas de farnesil pirofosfato se
enzimas lisosomales (hexosaminidasas, - unen por un enlace especial (cabeza-cabeza) para
galactosidasa, la sialidasa o la esfingomielinasa) formar el escualeno, de 30 carbonos.
hasta dar ceramidas y los azúcares El escualeno se cicliza y, por cambios
correspondientes. Existen una serie de defectos sucesivos de oxidación, descarboxilación y
genéticos en los que faltan estas enzimas lo que reacomodo de electrones y grupos químicos, forma el
conduce a una acumulación de gangliósidos que lanosterol, el zimosterol y finalmente el colesterol. La
causan graves consecuencias a la salud. vía de la colesterogénesis se regula principalmente
por colesterol endógeno o el que se obtiene a partir
F.6 Metabolismo del colesterol. de la dieta a nivel de la enzima ß-hidroxi-ß-
metilglutaril-CoA reductasa.
F.6.1 Mencionará la importancia fisiológica El colesterol puede seguir diversos caminos:
del colesterol. a) Migra a la membrana, donde regula la fluidez de la
F.6.2 Describirá la vía de síntesis del misma; b) Se transforma químicamente para producir
colesterol e identificará sus ácidos biliares por oxidación de su cadena lateral; c)
sustratos, intermediarios y enzimas. Pierde una cadena de seis átomos de carbono para
F.6.3 Conocerá la regulación de la producir la pregnenolona, el precursor de todas las
colesterogénesis a nivel enzimático, hormonas esteroidales, sean progestágenos (como la
a nivel de la síntesis de las enzimas, progesterona), mineralcorticoides (como la
así como por modificación covalente aldosterona), glucocorticoides (como el cortisol),

68
andrógenos (testosterona) y estrógenos (estrona y LDL) y las lipoproteínas de alta densidad (LAD o
estradiol); d) El colesterol también es precursor de la HDL). La densidad de las lipoproteínas refleja la
vitamina D, que se obtiene por la ruptura del anillo B. relación existente entre la cantidad de lípidos y de
El colesterol se excreta principalmente como proteínas.
sales biliares, aunque una parte puede eliminarse en Los quilomicrones transportan los lípidos de
las heces como coprostanol, producto de la la dieta desde el enterocito al tejido adiposo, la
degradación bacteriana del colesterol en el intestino glándula mamaria, el músculo y el hígado. Los lípidos
grueso. endógenos, principalmente los triacilglicéridos y el
colesterol se transportan desde el hígado a los
F.7 Estructura y metabolismo de las tejidos mediante las lipoproteínas VLDL. Las
lipoproteínas. apoproteínas características de las VLDL son la apo
F.7.1 Describirá los mecanismos de B-100, apo-C y apo-E, de las cuales las dos últimas
transporte de los ácidos grasos son compartidas con los quilomicrones, los que
provenientes de la lipólisis y el de los tienen además la apo-B48 y la apo-A. Tanto los
otros lípidos (TAG, ésteres de quilomicrones como las VLDL son llevados hasta los
colesterol y fosfolípidos) en el capilares de los tejidos en donde su apo-CII activa a
organismo. la lipoproteína lipasa, quien hidroliza la mayor parte
F.7.2 Conocerá la composición y la función de los triacilgliceroles de estas lipoproteínas hasta
de las lipoproteínas (quilomicrones, glicerol y ácidos grasos, los que son tomados por los
LDL, VLDL, HDL y Lp[a]). tejidos para ser oxidados o almacenados en el tejido
F.7.3 Describirá el metabolismo de las adiposo.
diferentes lipoproteínas. Los restos de VLDL, que han perdido la
mayor parte de sus triacilgliceroles y algunas
Los lípidos son compuestos prácticamente insolubles apoproteínas y fosfolípidos, se convierten en LDL.
en agua que se transportan en el torrente circulatorio Las LDL contienen apo B-100 y transportan
mediante las lipoproteínas. colesterol a los tejidos.
Las lipoproteínas son partículas globulares Las lipoproteínas más pequeñas son las
de alto peso molecular con un núcleo formado por HDL; éstas son ricas en fosfolípidos y proteínas y
lípidos hidrofóbicos –TAG y ésteres de colesterol–, dentro de sus funciones se cuenta el intercambio de
los cuales aportan la mayor parte de la masa de la apoproteínas A, C y E con las demás lipoproteínas y
partícula, y por una sola capa superficial de el transporte del colesterol extrahepático al hígado
moléculas de fosfolípidos, colesterol y proteínas o (transporte inverso del colesterol).
polipéptidos que rodean al núcleo y estabilizan la El colesterol es transportado en la sangre por
partícula para que permanezca en solución dentro tres diferentes lipoproteínas: las LDL (60 a 75%), las
del plasma. HDL (15 a 35%) y las VLDL (10%). Las LDL y las
La fracción proteica de las lipoproteínas se HDL tienen una función combinada en la
conoce como apolipoproteína o apoproteína, de las conservación del equilibrio del colesterol; las LDL
que se han aislado y caracterizado seis clases llevan el colesterol hacia las células y regulan la
principales: A, B, C, D, E y (a). Algunas de éstas son síntesis de novo del colesterol en ellas; las HDL lo
integrales y no pueden ser removidas, en tanto que eliminan de las células, es decir, captan el colesterol
otras pueden ser transferidas a otras lipoproteínas. liberado en el plasma procedente del recambio de
Las lipoproteínas principales que circulan en membranas y de células que mueren y lo llevan al
el plasma humano se clasifican con base en su hígado para su metabolismo o excreción.
densidad en quilomicrones, lipoproteínas de muy Además de las clases ya mencionadas de
baja densidad (LMBD o –según la sigla inglesa– lipoproteínas existe la lipoproteína (a) [Lp(a)], la cual
VLDL), las lipoproteínas de baja densidad (LBD o tiene una composición lipídica muy similar a la LDL,

69
contiene apoB-100 y una glucoproteína llamada 4. Martínez AE, González MO. La leptina, una
apo(a). La apo(a) es polimórfica (de longitud y hormona novedosa. Investigadores Médicos.
secuencia) y tiene una gran homología con el 2003; IV (5):1097-1103.
plasminógeno. Esta homología es importante porque 5. Sabath EFS. Leptina. Rev Inv Clín. 2002; 54
la Lp(a) se asocia con el bloqueo de la activación del (2): 161-165.
plasminógeno y la consiguiente lisis de los coágulos 6. Villaseñor A. El papel de la leptina en el
de fibrina, así como con la estimulación de la desarrollo de la obesidad. Rev Endocrin
proliferación de células musculares lisas, procesos Nutr. 2002; 10 (3):135-139.
que pueden estar en el origen de lesiones
ateroscleróticas. Además, la apo(a) dificulta el Los lípidos son compuestos que se han relacionado
catabolismo mediado por el receptor de LDL al que con varias patologías.
se fija e interfiere, de esta manera, con el La regulación del metabolismo lipídico se
metabolismo y transporte del colesterol. La ejerce en respuesta a las diferentes necesidades
concentración de Lp(a) en sujetos normales es de ~5 energéticas y los estados de la dieta de un
mg/dl; las cifras >30 mg/dl constituyen otro valor de organismo (ayuno-alimentación). La síntesis y la
predicción de un alto riesgo de aterosclerosis y degradación de los TAG y del colesterol son
trombosis. procesos que afectan a todo el organismo, con sus
órganos y tejidos formando una red interdependiente
F.8 Regulación y alteraciones del metabolismo conectada por la corriente sanguínea. La sangre
de lípidos. transporta los TAG en forma de quilomicrones y
F.8.1 Describirá el estado del metabolismo VLDL, los ácidos grasos en forma de complejos con
lipídico y sus alteraciones en el albúmina y el colesterol asociado a VLDL, LDL y
estrés, obesidad, dislipoprotei- HDL. Las células pancreáticas perciben los estados
nemias, hígado graso e de la dieta del organismo y responden liberando
hipercolesterolemias, quienes son hormonas (insulina o glucagon) que regulan la
factores de riesgo de aterosclerosis. velocidad de las rutas opuestas del metabolismo de
F.8.2 Identificará el papel de la leptina en lípidos y controlan si se han de degradar o sintetizar
la regulación del peso corporal y del los ácidos grasos, los TAG, los fosfolípidos o el
apetito. colesterol.
La regulación metabólica se puede ejercer a
Realización de la práctica 10 "Determinación de corto plazo (disponibilidad de sustratos, interacciones
lípidos y lipoproteínas plasmáticas" (ver pág.162). alostéricas y modificaciones covalentes) o a largo
Discusión de los casos clínicos 4 “Cetosis por plazo (control de la síntesis y degradación de las
inanición. Obesidad” y 5 “Hipercolesterolemia y enzimas). Otro nivel de regulación se relaciona con el
aterosclerosis” ver pág. (199 y 200). transporte de los lípidos de un tejido a otro.
Los lípidos más abundantes del organismo
Lecturas recomendadas son los TAG almacenados en el tejido adiposo, los
1. Libby P. Atherosclerosis the new view. cuales se hidrolizan por la acción de una lipasa
Scientific American. 2002; 286( 5): 28-37. sensible a hormonas como el glucagon, la epinefrina
2. NIH (National Institutes of Health) consensus y los glucocorticoides, obteniendo glicerol y ácidos
conference. Triglyceride, HDL, and coronary grasos que salen a la circulación. Estos últimos se
heart disease. JAMA. 1993; 269 (4): 505-510. asocian a albúmina y se transportan al hígado,
3. Alba ZayasL, Pereira RG, Aguilar BA. corazón y músculo para ser oxidados hasta CO2 y
Lipoproteína (a): estructura, metabolismo, H2O, con la producción consecuente de ATP. Las
genética y mecanismos patogénicos. Rev condiciones fisiológicas y metabólicas que
Cub Invest Biomed. 2003; 22(1): 32-40. determinan la movilización de grasas del tejido

70
adiposo pueden ser alteradas por situaciones de agentes hipolipemiantes como las resinas
estrés (dolor, fiebre, infecciones, miedo, hemorragia, secuestradoras de ácidos biliares, la niacina y los
hipoglucemia) en las que se estimula la inhibidores de la 3-hidroxi-3 metilglutaril- CoA (HMG-
adenohipófisis, que secreta ACTH, induciendo la CoA) reductasa.
secreción de glucocorticoides. La ACTH y los En condiciones de estrés metabólico, la
glucocorticoides aceleran la hidrólisis de los TAG. capacidad para secretar VLDL no es suficiente para
La concentración de los TAG almacenados la síntesis aumentada de TAG. Esto ocasiona que el
en los adipocitos depende de la velocidad de su depósito de AG y TAG en el tejido hepático se vuelva
recambio (síntesis e hidrólisis). Cuando el excesivo estableciéndose una condición tóxica
almacenamiento de energía en forma de TAG en el llamada hígado graso. Sin embargo, el hígado graso
tejido adiposo es excesivo, se establece una ocurre especialmente en condiciones tóxicas graves,
condición llamada obesidad, la cual correlaciona con cuando la síntesis de las apolipoproteínas,
un promedio de vida menor y con un aumento en requeridas para la formación de VLDL, es inferior a la
problemas de salud, principalmente de tipo disponibilidad de ácidos grasos, ocasionando su
cardiovascular. Muchos factores conducen a ella, acumulación. Esta situación se observa
pero la causa básica es una ingesta calórica por frecuentemente en las personas que ingieren
encima de los requerimientos energéticos estándar. constantemente grandes cantidades de etanol y una
El apetito se regula por la presencia de dieta hipoproteica. La oxidación del etanol
compuestos antianoréxicos. La síntesis de estos proporciona la energía necesaria para mantener las
compuestos se ve afectada por la presencia de una funciones celulares, pero también favorece la síntesis
proteína pequeña que se libera por las células de ácidos grasos debido a un aumento en la
adiposas: la leptina. La ausencia de esta proteína o disponibilidad de NADH y al aumento en la actividad
de su receptor en las células del hipotálamo de la fosfatidato fosfohidrolasa.
implicadas en la regulación del apetito se asocia con Finalmente la obesidad, sobre todo el patrón
la aparición de obesidad en ratones. Su papel está masculino de depósito centrípeto o visceral de la
actualmente en estudio en humanos. grasa, favorece una dislipidemia aterogénica que se
Existen otras alteraciones de los lípidos caracteriza por el aumento de los TAG plasmáticos,
asociadas al metabolismo de las lipoproteínas. Estas la disminución de HDL y la intolerancia a la glucosa.
alteraciones se conocen en general como La aterosclerosis involucra la formación de placas
dislipoproteinemias, en las que hay modificaciones ricas en lípidos en la íntima de las arterias. Las
de los niveles de colesterol y/o TAG en sangre. placas empiezan como rayas grasas conteniendo
En las hipercolesterolemias familiares, los células espumosas, las cuales son inicialmente
receptores celulares para lipoproteínas de baja macrófagos llenos de lípidos, particularmente ésteres
densidad (LDL) son deficientes. Por lo tanto las LDL de colesterol. Estas lesiones primarias desarrollan
no pueden ser captadas por las células y degradadas placas fibrosas que pueden ocluir la arteria y causar
por las enzimas lisosomales. El consecuente un infarto cerebral o al miocardio. La formación de
incremento de LDL en sangre se asocia con estas placas está frecuentemente asociada como se
xantomas (depósitos de lípidos, frecuentemente mencionó anteriormente, con anormalidades en el
encontrados bajo la piel) y enfermedades de arterias metabolismo de lipoproteínas plasmáticas. En
coronarias. En las hipertriacilgliceridemias se contraste con estas lipoproteínas, las lipoproteínas
encuentran bajos niveles de lipoproteína lipasa (LPL) de alta densidad (HDL) tienen un efecto protector.
o apo CII (el activador de LPL) y TAG aumentados. Como parte de la estrategia general para limitar la
Estas deficiencias se asocian con xantomas aterosclerosis hay que controlar la hipertensión, si
característicos e intolerancia a comidas ricas en fuera necesario con farmacoterapia. La mayoría de
grasas. El tratamiento involucra dietas bajas en los enfermos con diabetes mellitus fallece a
ácidos grasos saturados y colesterol y el uso de consecuencia de aterosclerosis o sus

71
complicaciones. El control riguroso de la glucemia en En general podemos decir que la concentración de la
estos enfermos disminuye las complicaciones leptina aumenta después de la ingesta de alimento y
microvasculares de la diabetes, por lo que se disminuye durante el ayuno y la diabetes. La insulina
recomienda prestar atención al control de la y los glucocorticoides aumentan la síntesis de esta
glucemia. hormona, mientras que las catecolaminas, los
La leptina es una hormona de naturaleza andrógenos y los ácidos grasos de cadena larga la
proteica constituida por 167 aminoácidos que circula inhiben.
en el plasma sanguíneo y regula el peso corporal y
los depósitos de grasa, a través de sus efectos en el G. Metabolismo de los compuestos
metabolismo y el apetito. En general, induce una nitrogenados
disminución en el apetito y un incremento en el gasto
energético. Al finalizar esta subunidad, el alumno describirá los
La leptina es producida y liberada por el procesos más importantes del metabolismo de los
tejido adiposo blanco fundamentalmente como una compuestos nitrogenados.
señal de saciedad, aunque se ha visto también que
se produce en tejido adiposo marrón, en la placenta y G.1 Aminoácidos y proteínas.
en algunos tejidos fetales, como el corazón, hueso y G.1.1 Conocerá de manera general cómo
cartílago. se realiza en el organismo la
La síntesis y la secreción de leptina están digestión de las proteínas y la
directamente relacionadas con la cantidad de grasa absorción de los aminoácidos.
corporal y el tamaño del adipocito. Aunque factores G.1.2 Identificará las fuentes nutricionales
como la edad, el sexo, el índice de masa corporal, la de los aminoácidos.
actividad física, el fumar, la hipertensión, el colesterol G.1.3 Describirá las reacciones de
en HDL, la concentración plasmática en ayuno de transaminación y desaminación e
triacilgliceroles, de glucosa y de insulina también identificará la localización subcelular,
afectan la secreción de leptina. Así por ejemplo, la sustratos, enzimas y productos de la
concentración de la hormona es hasta cuatro veces actividad de estas enzimas.
mayor en mujeres que en hombres. El fumar puede G.1.4 Identificará el papel de la glutamina y
traer cambios en el peso corporal, al modificar la del ácido glutámico en el
sensibilidad de los receptores del hipotálamo a la metabolismo de los compuestos
leptina y en consecuencia modular la síntesis de nitrogenados. Describirá el papel de
hormona, reduciendo el peso corporal. la glutamino sintetasa, de la
El hipotálamo es el sitio de mayor acción de glutamato deshidrogenasa, de las
leptina. La acción más importante de la leptina en transaminasas y de la glutaminasa
este órgano es la disminución en la producción del en el metabolismo de los
neuropéptido Y (NPY). Las implicaciones de estos compuestos nitrogenados.
cambios son las siguientes: G.1.5 Señalará las causas de la toxicidad
Incremento en el NPY Incremento en la leptina del ión amonio y los mecanismos del
(disminución de leptina) (diminución en el NPY) organismo para combatirla.
Se presenta hiperfagia Hipofagia G.1.6 Describirá el proceso de síntesis de
la urea e indicará la localización
Aumento en la secreción de Incremento en el gasto subcelular, sustratos, enzimas y
insulina mayor respuesta a la energético productos de la vía. Describirá la
insulina en tejido adiposo regulación de la síntesis de urea, así
como los defectos en el metabolismo
Aumento de peso Pérdida de peso que producen alteraciones en este

72
proceso; señalará sus excretado tiene que ser repuesto para mantener un
consecuencias fisiológicas. balance nitrogenado que, en los adultos normales,
G.1.7 Identificará a los aminoácidos se encuentra en equilibrio; en los jóvenes, las
precursores de Į-cetoglutarato, embarazadas y los convalecientes es positivo y en
piruvato, acetoacetato, fumarato y los ancianos, los enfermos y los desnutridos el
oxaloacetato. balance nitrogenado es negativo.
G.1.8 Identificará a los aminoácidos Los aminoácidos ingresan al organismo
precursores de las siguientes humano formando parte de las proteínas de la
aminas: acetilcolina, catecolaminas, dieta que, por lo general, aportan alrededor de 10%
serotonina, carnitina, poliaminas y de las kilocalorías diarias; sin embargo, el valor
creatinina. principal de los aminoácidos recibidos reside en el
G.1.9 Conocerá las bases metabólicas de las aporte de las estructuras moleculares que el
siguientes alteraciones congénitas organismo humano no puede sintetizar por sí
del metabolismo: acidemia mismo y que son los aminoácidos indispensables o
propiónica, acidemia metilmalónica, esenciales cuya presencia determina en gran parte
hipervalinemia, fenilcetonuria y la calidad de la dieta; ellos son: ARGinina, LISina,
alcaptonuria. METionina, HIStidina, TREonina, VALina,
FENilalanina, LEUcina, IsoLEucina y TRIptofano
Realización de la práctica 11 "El efecto del (ALM-HTV-FLIT).
tetracloruro de carbono sobre las transaminasas” (ver
pág. 170). 2. Compuestos nitrogenados. Los aminoácidos
participan en la síntesis de numerosos compuestos
Los aminoácidos son el sustrato más importante del nitrogenados que no son proteínas, por ejemplo,
metabolismo nitrogenado en los organismos los oligopéptidos glutatión y carnosina; las bases
superiores pues de ellos derivan proteínas, purinas, nitrogenadas de los ácidos nucleicos y los
pirimidinas, porfirinas, péptidos y hormonas, entre fosfolípidos; las hormonas derivadas de
otros compuestos y, además, sus esqueletos aminoácidos como la epinefrina, tiroxina y
carbonados se oxidan para liberar energía. serotonina; las hormonas peptídicas como el
Todos los aminoácidos de los sistemas vivos glucagón, la ACTH y la oxitocina; los
se encuentran como parte de un “pool” o poza neurotransmisores como la dopamina y el
(reserva) metabólica cuya magnitud se mantiene aminobutirato gamma; los neuropéptidos como las
constante mediante un equilibrio entre la entrada y la endorfinas y los factores liberadores; las porfirinas
salida de aminoácidos. Desde la poza, los como el grupo hemo; los pigmentos como la
aminoácidos son llamados hacia sus diferentes melanina; las aminas como la histamina y varios
destinos metabólicos: compuestos más.
1. Participar en el proceso de la nutrición por medio 3. Gluconeogénesis. Una porción considerable de la
de la síntesis de nuevas proteínas. síntesis diaria de glucosa que se realiza en el
2. La síntesis de compuestos nitrogenados no hígado se hace a partir de los aminoácidos que
proteicos. reciben, por esto, el nombre de aminoácidos
3. Su entrada a la gluconeogénesis para sintetizar glucogénicos. Con la excepción de la leucina y la
glucosa. lisina, todos los aminoácidos tienen la capacidad
4. Su degradación oxidativa para la producción de de aportar todo o parte de su esqueleto carbonado
energía. para que se incorpore a la síntesis de la glucosa y
esto se logra, en un primer paso, mediante la
1. Nutrición. Los aminoácidos son oxidados pérdida del grupo amino por transaminación, lo
constantemente en los animales y el nitrógeno

73
cual deja libre la cadena carbonada bajo la forma Acetoacetil-CoA: Tri, Lis
de un cetoácido. Acetil-CoA: Tre, Leu, Ile
Los cetoácidos mitocondriales resultantes:
alfa-cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato, El ciclo de la urea
oxaloacetato y piruvato confluyen hacia la El mecanismo de la transdesaminación permite el
formación del oxaloacetato citoplásmico que acopio de los grupos amino de los diferentes
ingresa al eje central del metabolismo y se aminoácidos en la molécula del glutamato, la cual, al
transforman en fosfoenol piruvato que alimenta la ser desaminada oxidativamente por la
gluconeogénesis. Dos moléculas de este último deshidrogenasa del glutamato, libera el ion amonio.
siguen el reverso de la vía glucolítica hasta su Dado que este compuesto es muy tóxico para el
transformación en glucosa. sistema nervioso central, se elimina mediante la
4. Oxidación. Para la oxidación de su esqueleto síntesis de urea. Esta síntesis se lleva a cabo en el
carbonado los aminoácidos pierden primero al hígado mediante un proceso metabólico denominado
grupo amino, lo cual se lleva comúnmente a cabo el ciclo de la urea, la primera parte del cual se realiza
mediante la transaminación acoplada a la en la mitocondria y el resto en el citoplasma de la
desaminación oxidativa (transdesaminación), célula hepática.
proceso reversible en el cual un aminoácido El ciclo de la urea (fig. III.2) que permite
transamina primero con el alfa-cetoglutarato y le mantener una muy baja concentración de amonio
transfiere su grupo amino para formar glutamato y libre, se inicia con la síntesis del carbamil fosfato a
éste es desaminado enseguida por la glutamato partir del amonio y el CO2 con un gasto de 2 enlaces
deshidrogenasa con producción de NADH y de alta energía. El carbamil fosfato entrega el grupo
liberación de amonio. El metabolismo del esqueleto carbamino a la molécula de ornitina, la cual actúa
de carbono se aparta entonces de la ruta seguida como portadora de grupos en las cuatro reacciones
por el grupo amino ya que, para el primer caso, los del ciclo:
carbonos pueden ser llevados hacia la oxidación 1. Transferencia del carbamino a la ornitina para
en el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria, o formar citrulina: ornitina transcarbamilasa.
bien, incorporarse a la gluconeogénesis en el 2. Condensación de la citrulina con el aspartato. Se
hígado para la síntesis de glucosa; en tanto que el forma el arginino-succinato con gasto de 2ATP:
ion amonio será transportado hasta el hígado en arginino-succinato sintetasa.
donde será tomado por la vía metabólica del ciclo 3. Ruptura del arginino-succinato. Se desprende
de la urea. fumarato y se produce arginina: arginino-succinato
La oxidación del esqueleto carbonado de liasa.
los aminoácidos procede mediante su agrupación 4. Hidrólisis de la arginina para regenerar a la ornitina
en “familias” o grupos de aminoácidos que, al y liberar urea: arginasa.
transformarse en el metabolismo, confluyen hacia
alguno de los intermediarios de la glucólisis, la En resumen, para formar una molécula de urea se
descarboxilación del piruvato o del ciclo de Krebs. requiere de un ion amonio, un CO2 y un aspartato. Se
Los glucogénicos son de la familia del: produce una molécula de fumarato y una de urea,
Piruvato:Tre, Gli, Ser, Ala, Met, Cis y Tri con gasto de cuatro enlaces de alta energía
Alfa-cetoglutarato: Pro, His, Arg, Gln y Glu provenientes del ATP.
Succinil-CoA: Ile, Val, Met
Fumarato: Tir, Fen, Asp G.2 Nucleótidos.
Oxaloacetato: Asn, Asp
G.2.1 Conocerá las características
Y los cetogénicos son de la familia del: generales de las bases nitrogenadas,
Acetoacetato:Leu, Tir, Fen

74
los nucleósidos y nucleótidos: Discusión del caso clínico 6 "Gota" (ver pág. 202).
estructura química y funciones.
Los nucleótidos están formados por ribosa o
desoxirribosa, una base nitrogenada que puede ser
una purina o una pirimidina, y una, dos o tres
moléculas de ácido fosfórico. Dependiendo del
número de grupos de fosfato presentes, los
nucleótidos pueden ser mono, di, o trifosforilados.

Ácido fosfórico—Ribosa—Base nitrogenada

Los nucleósidos se diferencian de los


nucleótidos en que no tienen ácido fosfórico.

Ribosa — Base nitrogenada

Las bases nitrogenadas pueden ser purinas o


pirimidinas. Las purinas están formadas por dos
anillos heterocíclicos (formados por diferentes tipos
de átomos), uno con seis miembros y otro con cinco
miembros, y son la adenina y la guanina. Las
pirimidinas están formadas por un anillo heterocíclico
de seis miembros y las más importantes son: uracilo,
timina y citosina.
Los nucleótidos y nucleósidos púricos tienen
funciones muy variadas en los seres vivos; entre las
G.2.2 Con base en un esquema general de más importantes están la de servir como sustratos
la síntesis de las bases púricas y acarreadores de energía, segundos mensajeros,
pirimídicas describirá sus neurotransmisores, coenzimas, etcétera.
mecanismos de regulación. Los nucleótidos pirimídicos intervienen como
G.2.3 Identificará los sustratos y productos acarreadores en la biosíntesis de polisacáridos y de
de las vías de ahorro en la síntesis fosfolípidos. Los nucleótidos púricos y pirimídicos
de purinas. forman parte de los ácidos nucleicos y
G.2.4 Identificará las causas y desoxirribonucleicos.
consecuencias fisiológicas de la La síntesis de purinas se lleva a cabo en el
sobreproducción de ácido úrico. citoplasma celular y comprende las siguientes tres
G.2.5 Describirá el efecto del alopurinol fases:
sobre la xantina oxidasa y el que 1. Activación, en la que la ribosa 5 fosfato adquiere
ejercen algunas drogas dos moléculas de fosfato que se asocian al
anticancerígenas, como la carbono 1 de la molécula; esta reacción es llevada
mercaptopurina, el 5-fluorouracilo, el a cabo por la fosforribosil pirofosfato sintetasa, la
metotrexato y la tioguanosina sobre cual es una de las enzimas reguladoras de la
la síntesis de purinas y pirimidinas. síntesis de purinas y de pirimidinas.
Realización de la práctica 12 "Estudio de los 2. Formación de los anillos heterocíclicos, en donde
productos finales del metabolismo nitrogenado" (ver varias enzimas intervienen añadiendo los
pág. 171).

75
diferentes átomos que componen al anillo purínico concentraciones de purinas son altas, ya sea por
hasta formar inosina monofosfato. aporte elevado o por exceso en el catabolismo de las
La primera reacción, catalizada por la enzima mismas.
fosforribosilglicinamida sintetasa, es reguladora de la Los análogos de los nucleótidos se han
síntesis de purinas y su velocidad depende de las utilizado como inhibidores de algunas enzimas; por
concentraciones de sus sustratos. ejemplo, la azaserina y la acivicina, análogos de la
3. A partir de la inosina monofosfato se sintetizan la glutamina, se usan como inhibidores de la enzima
guanosina monofosfato y la adenosina monofosfato glutamina amino transferasa que interviene en la
por medio de dos vías metabólicas que se regulan síntesis de purinas. El metotrexato y el 5-fluorouracilo
mutuamente. Las altas concentraciones de GTP se usan como inhibidores de la síntesis de dTMP. La
estimulan la síntesis de AMP y las altas aplicación de estos inhibidores en pacientes con
concentraciones de ATP estimulan la síntesis de procesos neoplásicos da como resultado la
GMP. disminución de la síntesis del DNA y del crecimiento
La síntesis de pirimidinas también se lleva a celular.
cabo en el citoplasma y se inicia con la síntesis de El alopurinol se usa en el tratamiento del
carbamilfosfato a partir de glutamina, CO2 y ATP en síndrome de gota porque es un análogo de la
una reacción catalizada por la enzima carbamilfosfato hipoxantina y actúa como inhibidor de la enzima
sintetasa citoplasmática que es una reacción xantina oxidasa y de la producción de ácido úrico.
parecida a la que ocurre en la mitocondria para la
biosíntesis de la urea; posteriormente, se adiciona H. Regulación e integración metabólica
ácido aspártico para producir ácido orótico al cual se
une una molécula de fosforribosilpirofosfato y se Al finalizar esta subunidad, el alumno será capaz de
descarboxila para dar la uridina monofosfato. A partir analizar los mecanismos de regulación del
de ésta se sintetizan la citidina monofosfato y la metabolismo y de su integración en algunas
timidina monofosfato. condiciones fisiológicas.
Las purinas se catabolizan por dos caminos
metabólicos: H.1 Conocerá cómo se lleva a cabo la regulación
1. En la vía del ahorro de las purinas, la adenina, la del metabolismo.
hipoxantina o la guanina son reaprovechadas y, H.2 Analizará los cambios adaptativos que
por medio de la enzima fosforribosiltransferasa ocurren en las siguientes condiciones
correspondiente, se vuelve a formar el AMP, IMP o normales y patológicas: ejercicio intenso,
GMP. embarazo-lactancia, vejez, ayuno, obesidad,
2. En una secuencia de reacciones cuyo producto desnutrición, diabetes mellitus y gota.
final es el ácido úrico, que es la forma en la que se H.3 Conocerá los mecanismos de acción
excretan las bases púricas. hormonal e identificará los receptores
El catabolismo de las pirimidinas se lleva a membranales y las cascadas de
cabo por una serie de reacciones cuyos productos amplificación: la adenilato ciclasa (AMP
finales son la malonil-CoA y la metilmalonil CoA; cíclico), la fosfolipasa C (fosfoinosítidos,
estos dos productos se catabolizan hasta CO2 y calcio) y la GMPc fosfodiesterasa (GMP
agua. El exceso en el catabolismo de purinas genera cíclico).
una sobreproducción de ácido úrico que tiende a
acumularse en las articulaciones distales, lo que Lecturas recomendadas
produce el síndrome de gota. Esto se debe a que el 1. Scott JD, Pawson T. Cell communication the
ácido úrico es insoluble en ambientes con un pH inside story. Scientific American. 2000; 282
menor a 6.0, lo que hace que no se pueda eliminar (6): 54-61.
por la orina. Este síndrome se produce cuando las

76
2. Kholodenko BN, Westerhoff HU. The señal se logran muchas veces a través de la
macroworld versus microworld of compartimentalización, es decir, a través de
biochemical regulation and control. TIBS. membranas que separan la célula del medio
1995; 20: 52-54. extracelular y por los pequeños compartimentos en
el interior de la célula, éstas siendo separadas
Las células y los organismos son sistemas espacialmente (por membranas) o funcionalmente
relativamente aislados en un estado casi (por acarreadores).
estacionario. Las funciones de los organismos vivos 2. Cambiando la concentración de los efectores
como un todo o como sus partes están reguladas con (activadores o inhibidores) en las enzimas
el objetivo de asegurar un máximo de supervivencia. alostéricas. Al interactuar con el sitio alostérico de
Ya que los sistemas vivos reaccionan en el espacio y la enzima, estos efectores pueden aumentar o
el tiempo, se emplea tanto una regulación en el disminuir la actividad enzimática con base en los
espacio y en el tiempo. cambios cooperativos de la conformación de las
La regulación espacial se expresa a través subunidades que componen a la enzima. La
del grado de organización de las estructuras; el cantidad de la enzima alostérica no cambia durante
mantenimiento de la estabilidad estructural de las el proceso.
proteínas, en la asociación de las enzimas que 3. Por inducción o por represión cuando, en
cooperan en los complejos multienzimáticos, su contraste con los dos mecanismos anteriores, la
localización en compartimentos definidos cantidad de enzima y, por tanto, su actividad total
(mitocondria, retículo endoplásmico) y por la en el sistema cambian. La cantidad de enzima por
especialización de células y tejidos mediante célula depende de la presencia de una proteína
procesos de diferenciación. represora que es codificada por un gen regulador y
El tiempo está involucrado en la regulación que, en su forma activa, se une a una región del
principalmente en términos de modificación de las DNA (operador) e impide la unión de la RNA
velocidades de reacción (metabólica, de transporte y polimerasa al promotor. De esta manera, inhibe la
otras). En la práctica, se utilizan ambas dimensiones síntesis de algunas enzimas (represión). Algunos
simultáneamente. compuestos de bajo peso molecular (inductores)
En bioquímica una de las principales señales pueden interactuar con el represor y cambiarlo a
para regular los procesos metabólicos es la una forma inactiva que no puede inhibir la síntesis
concentración de moléculas. Los mecanismos de una enzima dada ; esto es la inducción de su
regulatorios son efectivos a diferentes niveles de síntesis; Fundamentalmente, no se abren nuevas
organización pero sus bases son siempre vías metabólicas, simplemente se liberan o se
moleculares. Las funciones de un organismo pueden bloquean las ya existentes, principalmente por el
regularse a través de reacciones que se realizan en principio de retroalimentación, en el que la
las células (regulación metabólica) y a nivel de todo regulación se ejerce sobre la actividad de la
el organismo (control hormonal y nervioso). En una enzima en una forma prácticamente instantánea y
célula, los procesos metabólicos están controlados reversible.
principalmente por regulación de la actividad de las Los sistemas multienzimáticos son aquellos
enzimas individuales. en los cuales las enzimas individuales están
Las enzimas pueden regularse de varias organizadas de tal manera que el producto de una
maneras: reacción sirva como sustrato de la siguiente enzima.
1. Cambiando la concentración de los sustratos Aquí, la regulación por retroalimentación juega un
(como una señal metabólica) lo que resulta en papel importante, ya que el producto de una
cambios en la actividad enzimática, permaneciendo secuencia de reacciones controla la actividad de una
constante la cantidad de enzima involucrada. Los de las enzimas precedentes, generalmente la primera
cambios en la concentración de un compuesto de la secuencia. El control por retroalimentación

77
generalmente es negativo, es decir, un aumento en la gran número de reacciones intracelulares (por
concentración del producto inhibe a la enzima ejemplo, la activación de la proteína cinasa A). La
regulatoria. En los sistemas multienzimáticos, una de fosforilación de proteínas produce cambios en la
las reacciones parece ser la reacción limitante de la actividad de algunas enzimas claves en el
velocidad, es decir, procede a su velocidad máxima metabolismo de los carbohidratos y de los lípidos.
posible. Otra manera de regular los procesos es a Otras hormonas, al interactuar con su receptor
través de isoenzimas. extracelular activan a la fosfolipasa C, produciendo
La regulación al nivel de un organismo los «segundos mensajeros» Inositol trifosfato y
requiere la existencia de células y de estructuras diacilglicerol, los cuales regulan la concentración de
diferenciadas especiales con una función de control calcio citoplásmico, quien es una nueva señal de
(células nerviosas, glándulas endócrinas). Se sabe regulación metabólica. Una tercera molécula que
que estas células producen ciertos compuestos que actúa como segundo mensajero intracelular es el
pueden ser considerados como portadores de GMP cíclico.
información, señales que se transportan de una parte Existe otro mecanismo por el que actúan las
del organismo a otra. hormonas cuyo receptor se encuentra en la
La regulación del metabolismo celular puede membrana. En este caso, la interacción de la
llevarse a cabo por las hormonas, moléculas de hormona con el receptor, provoca que éste se
diversa naturaleza química que pueden alcanzar a autofosforile y una vez ocurrido este evento, el
algunas células del organismo ; quienes presentan receptor fosforila a otras proteínas blanco. El proceso
receptores para ellas (tejidos blanco); y afectar su secuencial fosforilación de proteínas, se convierte en
función, Para aumentar la eficiencia de la regulación, la manera en la que la señal se transmite a las
las hormonas se transportan a menudo de la célula moléculas implicadas en la regulación de algunas
que las origina hasta el tejido blanco en asociación vías. La hormona insulina actúa mediante este
con una proteína específica. Se ha asumido que el mecanismo.
proceso básico de la regulación hormonal es la unión Otras hormonas –como las esteroidales y las
de la hormona a su receptor, el que puede tiroideas– cruzan la membrana celular y reaccionan
encontrarse en la superficie celular o en el con una proteína receptora en el citoplasma. El
citoplasma. complejo viaja entonces hasta el núcleo donde, a
En el primer caso la hormona no penetra en nivel del DNA, aumenta la producción del RNAm y
la célula sino que, en algunos casos, reacciona con del RNAr específicos. Éstos controlan entonces la
una proteína asociada a la adenilato ciclasa, que a síntesis de las enzimas que intervienen en la
su vez cataliza la formación de AMP cíclico a partir regulación de los procesos metabólicos.
de ATP. Por eso el AMP cíclico se conoce a menudo
como el "segundo mensajero" porque afecta a un

78
CONTENIDO TEMÁTICO

Tercera Unidad Temática


BIOLOGÍA MOLECULAR

79
IV
Biología molecular

Al finalizar esta unidad, el alumno será capaz de identificar las diferentes moléculas
informacionales de la célula y su organización; los mecanismos por los que fluye la
información genética; los mecanismos por los que se regula la expresión genética en los
diferentes estadios del ciclo celular, y el empleo de algunas técnicas de manipulación del
DNA útiles en medicina. La unidad se divide en:

A. Organización del genoma.


B. Flujo de la información genética.
C. Mutaciones y reparación del DNA.
D. Niveles de regulación de la expresión genética.
E. Virus, oncogenes y transformación.
F. Técnicas de manipulación del DNA.

A. Organización del genoma A.1.3 Describirá las estructuras


primaria, secundaria y terciaria
Al finalizar esta unidad el alumno conocerá la de los ácidos nucleicos y hará
estructura de los ácidos nucleicos y sus énfasis en lo dinámico de estas
diferentes niveles de organización. moléculas.

La información genética es el conjunto de


A.1 Estructura de los ácidos nucleicos.
datos que determinan la estructura y
A.1.1 Identificará los diversos
propiedades funcionales en las células. La
componentes de los ácidos
información genética es almacenada en el
nucleicos y señalará las
núcleo de los eucariotos en estructuras
diferencias que existen entre el
llamadas cromosomas. En el caso de los
DNA y los diversos tipos de RNA.
procariotos, el cromosoma se encuentra
Conocerá el significado de los
disperso en el citosol. El núcleo es un
patrones de metilación del DNA
orgánulo separado del citoplasma por la
como mecanismo de
membrana nuclear, que de hecho, es una
identificación de su origen.
doble membrana que presenta poros con un
A.1.2 Reconocerá las diferentes diámetro de 30 a 100 nm, a través de los
conformaciones del DNA (A, B y cuales las macromoléculas pueden
Z). intercambiarse entre el citoplasma y el
núcleo. La membrana nuclear, además,
participa directamente en la duplicación del

80
DNA y permite la comunicación directa del desoxirribosa del nucleótido vecino. Las
núcleo con el medio que lo rodea. La mayoría moléculas de DNA contienen dos tipos de
del material nuclear está formado por bases nitrogenadas, dos bases pirimídicas
nucleoproteínas cuyo principal componente (timina T y citosina C) y dos bases púricas
es el ácido desoxirribonucleico (DNA); en un (adenina A y guanina G). Estas bases se
1 1
núcleo en interfase las nucleoproteínas unen entre el C de la desoxirribosa y el N
9
forman filamentos de grosor variable (30 nm de las pirimidinas o el N de las purinas por
en promedio). El grosor de estos filamentos enlaces N-glucosídicos. La secuencia de
depende de la presencia o la ausencia de bases es altamente específica para cada
proteínas que interactúan con la doble hélice molécula del DNA.
del DNA, mientras que su longitud depende Las moléculas del DNA en solución
del peso molecular de las cadenas del DNA. presentan la estructura de una doble hélice
Así, un cromosoma contiene oléculas del que gira a la derecha alrededor de un eje
DNA de varios centímetros de longitud y común. Las dos cadenas son
10
tiene aproximadamente 10 de peso complementarias, corren de manera
molecular. antiparalela entre ellas. Se conectan entre sí
Además del ácido a través de puentes de hidrógeno que se
desoxirribonucleico, existe otro tipo de ácido forman entre bases yuxtapuestas A-T (dos
nucleico: el RNA. Se conocen tres tipos puentes de hidrógeno) y C-G (tres puentes
diferentes del RNA: los RNA mensajeros de hidrógeno); las bases se mantienen
(RNAm), que llevan la información para una perpendicularmente al eje longitudinal de la
cadena polipeptídica; los RNA ribosomales molécula del DNA. Además, se estabilizan
(RNAr), que forman parte de la estructura de por interacciones hidrofóbicas entre bases
los ribosomas y que son de diferente tamaño vecinas de la misma hebra.
(16S, 5S y 23S, en el caso de procariotos; Las bases son hidrofóbicas y están
18S, 5S, 5.8S y 28S, en el caso de colocadas en forma muy empaquetada y
eucariotos; los RNA 16S y 18S se prácticamente no entran en contacto con el
encuentran en la subunidad pequeña de los agua. El agua interacciona con la parte
ribosomas, mientras que los otros se hidrofílica de la molécula formada por
encuentran en la subunidad grande de los residuos de azúcar y grupos fosfato cargados
mismos) y los RNA de transferencia (RNAt), negativamente. Dependiendo del contenido
que sirven de adaptadores en el proceso de de agua del medio, las moléculas de DNA
síntesis de proteínas porque traducen el pueden existir en tres formas: A, B y Z. Las
mensaje codificado en nucleótidos a un diferentes formas difieren en el número de
lenguaje de aminoácidos. En los organismos nucleótidos por vuelta y en sus
eucariotos, los ácidos ribonucleicos (RNA) se características estructurales. Se supone que
sintetizan en el núcleo. la forma B es la predominante de las
Las moléculas del DNA son moléculas del DNA in vivo.
polinucleótidos, o sea, cadenas compuestas Aparte del DNA lineal, existen
de mononucleótidos en las que la parte moléculas de DNA en forma de círculos
externa de la estructura está constituida por cerrados que pueden arreglarse en
los esqueletos de desoxirribosa fosfato estructuras similares a eslabones de una
unidos entre sí por enlaces fosfodiéster, de cadena (en mitocondrias, bacterias y virus).
tal manera que el grupo 5'-fosfato de la
desoxirribosa de un nucleótido está A.2 Organización del DNA.
esterificado con el grupo 3'-OH de la

81
A.2.1 Identificará los distintos niveles de los cromosomas mitóticos en donde se
de organización del DNA; alcanza la máxima condensación posible,
reconocerá al nucleosoma, la como se ve en el microscopio electrónico.
fibra de 30 nm (solenoide), el su- Las proteínas nucleares pueden
perenrollamiento de 300 nm dividirse, en general, en proteínas del tipo de
las histonas y proteínas no histonas. Las
(dominios estructurales en bucle)
histonas son proteínas de peso molecular
y el cromosoma en metafase.
entre 10 000 y 25 000 con un alto contenido
A.2.2 Reconocerá a las histonas y a
de aminoácidos básicos como arginina y
otras proteínas no histonas como
lisina, los cuales pueden representar de 23 a
responsables del 30% de todos los aminoácidos que
empaquetamiento del DNA. componen a la proteína.
Reconocerá la importancia de los Las histonas pueden clasificarse en
siguientes dominios proteicos: cinco diferentes grupos según su tamaño y
hélice-vuelta-hélice, cremalleras su composición de aminoácidos. La función
de leucina, dedos de cinc, en su de las histonas consiste en organizar los
interacción con el DNA y entre largos filamentos de DNA en formas más
proteínas que interactúan con el compactas que permitan su
DNA. empaquetamiento en el núcleo. Esto se lleva
A.2.3 Relacionará los cambios en el a cabo a través de las interacciones
electrostáticas de las histonas con las cargas
empaquetamiento del
negativas de los grupos fosfato del DNA.
cromosoma con la función del
Además de las histonas existen proteínas no
DNA. Definirá el significado de
histonas que interactúan con el DNA.
los siguientes conceptos:
Las no histonas son una gran
cromatina, centrómero, telómero, variedad de proteínas que difieren en
eucromatina y heterocromatina. abundancia, tamaño y composición de
aminoácidos. Algunas de ellas presentan
Lecturas recomendadas
dominios que son muy comunes como los
1. Collins FS, Jegalian KG.
dedos de cinc y los zippers o cremalleras de
Deciphering the code of the life.
Scientific American. 1999; leucina. Estas proteínas son responsables de
281(6): 86-91. la selectividad e inhibición transitoria en la
2. Kornberg RD, Lorch Y. Twenty- transcripción del RNA a través de su unión a
five years of the nucleosome, ciertos segmentos de DNA implicados en su
fundamental particle of the regulación o a través de la modificación de la
eukaryote chomosome. Cell.
organización del DNA. Además, regulan la
1999; 98: 285-294.
transcripción de los genes de las mismas
histonas.
Dado que el tamaño del núcleo impediría la
existencia de los cromosomas en forma
A.3 Organización del genoma.
extendida, el DNA se compacta formando
estructuras superenrolladas que se asocian A.3.1 Discutirá el concepto de gen y
a proteínas básicas (histonas) para formar señalará el número aproximado
superestructuras cada vez más complejas de genes contenidos en el
como son: los nucleosomas, el solenoide o genoma humano.
fibra de 30 nm, las fibras de 300, 700 y 1 A.3.2 Señalará las características más
400 nm y, finalmente, las macroestructuras importantes de los genes únicos

82
y redundantes, de mantenimiento celular. Este DNA es de origen materno y
y tejido específicos, estructurales constituye la llamada "herencia de Eva".
y reguladores, dominantes, La mayoría de los genes para
recesivos y ligados al sexo preRNA (RNAhn) son genes únicos, pero
(conocerá las Leyes de Mendel). pueden ser transcritos miles de veces. Los
RNAm resultantes de la maduración de estos
A.3.3 Señalará las regiones
preRNA pueden traducirse cientos de veces,
hiperconservadas y las regiones
lo que provoca la aparición de una gran
hipervariables del DNA (intrones
cantidad de proteína codificada en dichos
y exones).
genes.
A.3.4 Conocerá las diferentes clases
de DNA: genes que codifican B. Flujo de la información genética
proteínas, genes que codifican
para RNA de transferencia y Al finalizar esta subunidad el alumno
ribosomales, seudogenes, DNA conocerá los procesos inv olucrados
en el f lujo de la inf ormación genética.
repetitivo y DNA espaciador.
A.3.5 Señalará las características del
DNA mito-condrial y la B.1. Flujo de la información genética.
información contenida en él.
B.1.1 Conocerá las funciones de los
ácidos nucleicos y los flujos de la
Realización de la práctica 13 “Huella génica”
información genética (dogma
(ver pág. 183).
central de la Biología Molecular).

Cuando se analiza el contenido del DNA que B.2 Síntesis del DNA (duplicación).
se expresa como preRNAm, RNAr, RNAt y
otros tipos de RNA, se observa que éste B.2.1 Describirá el ciclo celular con sus
constituye sólo 10% del DNA total (este DNA fases y conocerá las diferentes
se conoce como DNA informativo); el moléculas que se generan en
restante 90% contiene seudogenes, DNA cada una de éstas.
espaciador y DNA repetitivo. Todo esto B.2.2 Examinará qué es la duplicación
constituye el genoma. De todo el DNA, el del DNA y en qué fase del ciclo
repetitivo constituye 30 a 40% y está celular ocurre.
compuesto de secuencias de longitud B.2.3 Identificará los sucesos más
variable que pueden estar repetidas diez, mil
importantes catalizados por el
o más veces. Las secuencias repetidas
“replicosoma”.
pueden agruparse, como el caso del DNA
satélite asociado al centrómero del
Lecturas recomendadas
cromosoma, o presentarse disperso, como la
1. Hübscher U. Eukaryotic DNA
secuencia ALU, de la cual existen ± 500 000 polymerases a growing family.
copias dispersas en todos los cromosomas y TIBS. 2000; 25 (3): 143-147.
que está posiblemente relacionada con los 2- Collins FS, Jegalian KG.
orígenes de la duplicación. Deciphering the code of the life.
Scientific American. 1999; 281
Del DNA celular, 0.1% es mitocondrial. En él
(6): 86-91.
hay 13 genes que codifican para proteínas
de gran importancia para la bioenergética

83
Las moléculas del DNA son es la que se sintetizó de novo, la cual indica
sintetizadas a partir de desoxirribonucleótidos que la duplicación del DNA es
en presencia de un molde de DNA y de semiconservativa. Este mecanismo permite
varios tipos de enzimas, entre las que se la transmisión de la información genética de
encuentran dos DNA polimerasas, con una generación a la siguiente.
diferente función en el proceso: una RNA A consecuencia de la direccionalidad
polimerasa (primasa), una topoisomerasa de de la actividad de la DNA polimerasa III se
tipo II denominada DNA girasa y una serie de descubrió que hay una diferencia en la
proteínas que catalizan la separación de las velocidad de síntesis entre las dos cadenas
dos hebras del DNA, entre las que destacan del DNA, encontrándose que hay una cadena
las helicasas. líder y una retardada. Esto permitió
Las DNA polimerasas son enzimas determinar que la duplicación de la cadena
que pueden unir desoxirribonucleótidos sólo retardada se realiza en forma discontinua,
en la dirección 5´ 3´, aunque también apareciendo una serie de secciones
tienen actividad de exonucleasas en la pequeñas de DNA (entre 100 y 1 000 pares
dirección 5 ´ 3´y en la dirección de bases), conocidas como fragmentos de
3´ 5´. Esta capacidad de polimerización Okazaki, y que son posteriormente unidas
sólo en la dirección 5´ 3´ se conoce por la DNA ligasa para formar la hebra
como direccionalidad de la duplicación y es la completa.
responsable de algunas peculiaridades del Durante su vida, las células realizan
proceso. diversas funciones, a veces se dedican
Dado que las DNA polimerasas no principalmente a crecer, otras a dividir su
pueden iniciar la síntesis del DNA a menos material genético, o a repartirlo en lo que
que posean un extremo 3´OH terminal al que serán, dos nuevas células hijas. Estas
puedan añadir el desoxirribonucleótido diferentes etapas constituyen lo que se
entrante, se hace necesaria la actividad de conoce como el ciclo celular, integrado por 4
una RNA polimerasa (primasa) que genere fases bien definidas: M (mitosis), G1 (unión
dicho extremo 3´ OH terminal. Tomando 1), S (síntesis) y G2 (unión 2).
como molde una de las hebras, la primasa Morfológicamente sólo se han definido dos
cataliza la formación de un pequeño etapas de división e interfase, en esta última
segmento (5-20 ribonucleótidos) de RNA que están incluidas G1, S y G2.
sirve como “cebador" para la síntesis de la Durante la etapa G1, la célula crece,
nueva cadena de DNA por la DNA lo que implica un gran gasto energético y
polimerasa III. Las cadenas formadas de síntesis de sus componentes. El paso a la
novo son antiparalelas a la cadena que les etapa S, requiere de señales precisas para
sirve de molde. Después de la sustitución del que se inicie la síntesis del DNA, de tal forma
"cebador" del RNA a cargo de la DNA que, al terminar esta etapa, la célula tiene ya
polimerasa I, los segmentos de la cadena un contenido equivalente al doble de DNA.
formada de DNA son unidos por la DNA Para poder distribuir este DNA entre dos
ligasa. El papel de la DNA polimerasa I, células hijas y dividirse (fase M), la célula
además de la función de sustitución de los pasa por una etapa de preparación para la
"cebadores" del RNA, se encarga de la mitosis llamada G2. Numerosos genes se
reparación de las hebras del DNA. prenden y apagan durante cada etapa del
Diversos experimentos han ciclo celular en forma específica y altamente
demostrado que una de las cadenas del DNA precisa.
resultante provienen del progenitor y la otra

84
Cuando una célula se diferencia, para la identificación y unión al promotor, es
como es el caso de las neuronas, al llegar a decir, el sitio donde debe iniciarse la
la etapa G1, la célula toma un camino transcripción. Esta enzima utiliza un molde
alternativo a S, dejando de dividirse para de DNA para sintetizar una cadena de RNA,
estacionarse en una etapa llamada G0. la cual crece en la dirección 5´ 3' hasta
Durante esta etapa, un gran número de llegar a una señal de terminación en el DNA,
genes tejido-específico se prenden dando a lo que provoca la entrada de la proteína rho
la célula la identidad de acuerdo a la estirpe la cual separa la RNA polimerasa de la
a la cual pertenece. cadena molde del DNA.
En el caso de los organismos
B.3 Transcripción. eucariotos, sus RNA polimerasas son
diferentes, aunque el proceso es
B.3.1 Identificará en qué consiste, en
básicamente el mismo. Una de las
qué compartimiento subcelular y
diferencias en la transcripción entre
en qué fase del ciclo celular se
procariotos y eucariotos es que los RNAm de
lleva a cabo la transcripción.
los procariotos suelen ser policistrónicos, es
B.3.2 Identificará las enzimas,
decir, llevan la información para más de una
sustratos y los sucesos más
cadena polipeptídica, mientras que los de
importantes del proceso de
eucariotos son monocistrónicos.
transcripción.
Los productos de la transcripción en
B.3.3 Describirá en qué consisten los
eucariotos sufren, a su vez, una serie de
procesos de modificación
modificaciones postranscripcionales. Los
postranscripcional que sufren el
RNA mensajeros adquieren en su extremo 5´
RNAm, el RNAt y el RNAr y hará
terminal un "casquete", es decir, un
énfasis en el papel de las
nucleótido poco común con un enlace
ribozimas.
especial (7 metilguanosina unida por un
B.3.4 Revisará el efecto de la
enlace 5´ 5´) que lo protege de la
rifamicina, de la actinomicina D y
acción de las nucleasas. Asimismo,
de la Į-amanitina sobre la
adquieren una cola de poli A en el extremo 3´
transcripción.
terminal y pierden algunas secuencias que
no llevan información para ninguna cadena
Lectura recomendada
1- Proudfoot N. Connecting polipeptídica (intrones). El producto de este
transcription to messenger RNA proceso de edición es el que será leído en
processing. TIBS 2000; 25 (6): los ribosomas durante la traducción o síntesis
290-293. de proteínas.
Los RNA ribosomales se sintetizan
Todas las moléculas del RNA son principalmente en el nucleolo, se asocian a
sintetizadas en el núcleo mediante las proteínas ribosomales y las
transcripción de la información genética nucleoproteínas formadas son transportadas
codificada en la secuencia de las bases del al citoplasma donde llevan a cabo su función.
DNA mediante la acción de una RNA Los RNA de transferencia también
polimerasa dependiente de DNA. son editados, es decir, se modifican hasta
La RNA polimerasa dependiente del adquirir la estructura funcional. Pierden
DNA es una enzima que está compuesta de secuencias o algunas de sus bases sufren
6 subunidades: 2, ß, ß´,  y una proteína
modificaciones (por ejemplo, se reducen para
acídica designada como  que se requiere producir dihidrouridina, se metilan para

85
producir ribotimina, etcétera) lo que les proceso participan los tres diferentes tipos de
confiere resistencia a las nucleasas. RNA (el mensajero, el ribosomal y el de
transferencia); cada uno contribuye, de
B.4 Traducción. manera específica, a la obtención de una
proteína funcional.
B.4.1 Proceso de la traducción. El lenguaje codificado en nucleótidos
B.4.1.1 Describirá en qué consiste en los ácidos nucleicos es traducido a un
y en qué compartimiento lenguaje de aminoácidos mediante una serie
subcelular se realiza la de RNAs de transferencia (RNAt) cargados
traducción, tanto de cada uno con un aminoácido determinado, el
proteínas intracelulares, que es especificado por el asa del anticodón,
como de proteínas de según un código de lectura: el código
secreción. genético. Este código presenta cuatro
B.4.1.2 Conocerá el alfabeto del características:
código genético y el 1. Está basado en tripletas, es decir, una
secuencia de 3 nucleótidos determina un
concepto de codón y
aminoácido.
anticodón.
2. El código no se sobrepone y no tiene
B.4.1.3 Identificará las moléculas
espacios, es decir, que la información se
que intervienen en el
almacena en tripletas de bases seguidas.
proceso de traducción. 3. El código es universal. Es el mismo para
B.4.1.4 Conocerá las fases del todos los organismos.
proceso y la función que 4. El código es degenerado. Esto significa
desempeña el ribosoma que más de una tripleta puede codificar
en el mismo. para un aminoácido. Sin embargo, los
B.4.1.5 Conocerá el efecto de los primeros dos nucleótidos de una tripleta
siguientes inhibidores son generalmente los mismos para un
sobre la síntesis de aminoácido determinado.
proteínas: tetraciclinas, El proceso de la síntesis de
estreptomicina, proteínas puede dividirse en diferentes
etapas:
cloranfenicol, eritromicina,
a) La activación de los aminoácidos, es
puromicina,
decir, la formación de los aminoacil RNAt
dehidroemetina,
por sintetasas específicas.
cicloheximida y la toxina
b) La iniciación es la primera fase del
diftérica. proceso; en ella se requiere la presencia
de tres proteínas conocidas como
La síntesis de proteínas es un proceso factores de iniciación necesarios para
complejo en el que intervienen de manera disociar los ribosomas en sus
coordinada más de cien macromoléculas subunidades y para acarrear el aminoacil
para unir los residuos de los 20 aminoácidos RNAt inicial (generalmente metionil RNAt
en una secuencia codificada en el RNA o su análogo formilado). Además, se
mensajero. Asimismo, la síntesis de necesita la asociación del RNA
proteínas requiere de grandes cantidades de mensajero con la señal de inicio de la
energía y se regula rigurosamente. En este traducción (generalmente la tripleta
AUG) a la subunidad pequeña del

86
ribosoma y del aminoacil RNAt inicial al endoplásmico, del aparato de Golgi o de los
sitio peptidilo (P) del ribosoma. Todo este lisosomas, se forman en ribosomas
complejo de proteínas, de RNAs y de la firmemente unidos al retículo endoplásmico.
subunidad pequeña del ribosoma Conforme el polipéptido se va sintetizando,
constituye el complejo de iniciación, al entra en cisternas endoplásmicas y es
que se une la subunidad grande para
transportado al aparato de Golgi donde se
formar el ribosoma activo.
concentra y se modifica, por ejemplo, con
c) El alargamiento de la cadena
adición de azúcares. Más tarde estas
polipeptídica se realiza a partir de este
proteínas son englobadas en vesículas que
momento por la llegada del siguiente
aminoacil RNAt al sitio aminoacilo (A) del viajan a la superficie celular y se fusionan
ribosoma con la ayuda de un factor de con la membrana para verter su contenido al
alargamiento asociado a GTP, que lo espacio extracelular. Las proteínas cuyo
coloca en el sitio adecuado con gasto de destino son los organelos intracelulares se
un enlace de alta energía. Enseguida se sintetizan en retículo endoplásmico y se
forma el enlace peptídico por la acción transportan a su destino mediante una señal
de la peptidil transferasa que se interna que es reconocida en dicho organelo.
encuentra asociada a la subunidad
grande del ribosoma y el movimiento del
ribosoma sobre la molécula de RNAm B.4.2 Modificación postraduccional y
para colocar al nuevo peptidil RNAt en el degradación de proteínas.
sitio P y dejar libre el sitio A del ribosoma B.4.2.1 Mencionará en qué
y continuar el alargamiento de la cadena. consisten las
El movimiento del ribosoma se realiza
modificaciones
por la acción de otro factor de
postraduccionales:
alargamiento (factor G) con hidrólisis de
plegamiento,
una nueva molécula de GTP.
modificaciones cova-
d) La terminación se realiza cuando los
factores de terminación (factores R) lentes reversibles
encuentran una tripleta sin sentido (UAA, (fosforilación, acetilación y
UGA, UAG), lo que provoca la activación ADP ribosilación) e
de la peptidil transferasa que hidroliza el irreversibles
enlace peptidil RNAt y libera a la cadena (glucosilación,
polipeptídica. El RNAt y el RNAm se hidroxilación, proteólisis
liberan al igual que el ribosoma, que controlada, unión a grupos
ahora puede volver a disociarse para prostéticos) y cuál es su
iniciar un nuevo ciclo de traducción. El posible función.
polipéptido liberado adquiere sus B.4.2.2 Comprenderá el concepto
estructuras secundaria y terciaria
de vida media de una
correspondientes.
proteína.
Esta descripción de la síntesis de
B.4.2.3 Describirá cuáles son los
proteínas corresponde a proteínas que
procesos lisosomal y no
permanecerán intracelularmente. En el caso
lisosomal, mediante los
de los organismos eucarióticos, las proteínas
que se degradan las
que serán excretadas, o que forman parte de
proteínas.
la membrana plasmática, del retículo

87
sintetizadas de tal forma que requieren que
Lectura recomendada se les realice un corte de tipo proteolítico
1. Goldberg AL. The cellular
chamber of pomm. Scientific para que adquieran su forma activa, como es
American. 2001; 284 (1): 56-61. el caso de los zimógenos y las prohormonas.
El corte de la preproteína hacia su forma
Las modificaciones postraduccionales de las biológicamente activa se realiza por una
proteínas pueden incluir desde el proteasa específica y se encuentra regulado
plegamiento de los polipéptidos con la ayuda por los diferentes eventos celulares.
de proteínas como las chaperonas y ¿Qué determina la estabilidad de las
chaperoninas, cambios en el extremo amino- proteínas?
terminal y en aminoácidos específicos, Todas las células contienen gran cantidad
procesamiento proteolítico, formación de de proteasas con diferente especificidad.
puentes disulfuro y otras como la unión de Estas las podemos dividir en tres grupos
carbohidratos, metales, grupos prostéticos, generales:
etcétera. 1. Algunas proteasas cortan a la
Una de las modificaciones más proteína en sitios específicos dando origen
comunes en el extremo amino terminal que a proteínas maduras que son de menor
se da en las células eucarióticas es el de tamaño que su proteína precursora. Estas
remover los residuos de metionina, con las proteasas participan en diferentes
que se inicia la síntesis de la misma; en las procesos que incluyen el corte de la
células bacterianas se remueve la formilación secuencia señal de una proteína de
exportación y el procesamiento de
presente en la metionina y, en algunos
proteínas citosólicas para dar origen a sus
casos, ésta también es recortada. Además
formas maduras.
de este tipo de modificaciones que ocurren
2. La internalizacion de proteínas de
en la secuencia del extremo amino terminal
membrana (algunos receptores) en
de una proteína, los aminoácidos presentes respuesta a la unión del ligando genera
en la proteína también se pueden modificar; como primer evento la unión de clatrina
por ejemplo, los aminoácidos serina, treonina alrededor de la membrana; ésta se
y tirosina pueden unir grupos fosfatos a sus invagina al citoplasma y forma vesículas
cadenas laterales, es decir, son susceptibles rodeadas de clatrina. El destino de estas
de ser fosforilados en sus cadenas laterales. vesículas son los endosomas temprano,
Este tipo de transformaciones se usa por la tardío y finalmente el lisosoma que es el
célula para comunicar cambios en el medio responsable de la degradación de
ambiente que tienen como respuesta macromoléculas por medio de enzimas
modificaciones en la regulación de vías hidrolíticas.
3. Finalmente, la vida media de las proteínas
metabólicas. Algunos aminoácidos, como la
varía entre algunos segundos, días y
lisina, puede metilarse, otros como la
excepcionalmente toda la vida (cristalino).
cisteína, añadir grupos isoprenílicos u otros
Para ser degradadas, las proteínas son
lípidos a su cadena lateral, lo cual facilita la
marcadas para ser reconocidas por el
unión de la proteína con la membrana. Los proteosoma, el cual es un complejo de alto
residuos de cisteína pueden formar de peso molecular que se encarga de la
manera específica puentes disulfuro. degradación de proteínas citosólicas. Los
Finalmente, muchas de las proteínas son sustratos de este sistema son

88
principalmente proteínas que están C.2 Efecto de mutaciones en promotores,
alteradas en su plegamiento, por lo que el operadores, genes reguladores,
proteosoma actúa como un sistema de intrones, exones y genes estructurales
control de calidad. También está y dará ejemplos: talasemias, anemia
involucrado en la degradación de proteínas de células falciformes, etcétera.
como un mecanismo de regulación, por
ejemplo en el caso de las ciclinas para que C.3 Identificará los mecanismos que
se complete el ciclo celular. El primer paso existen para la reparación del DNA:
en este sistema es el marcar a la proteína uvr, fotoliasa, excinucleasa, sistema
alterada (proteína blanco) para que sea SOS, entre otros.
degradada. La marca es una pequeña
proteína llamada ubiquitina, la cual se
une covalentemente a la proteína blanco. Durante la duplicación puede ocurrir
Son tres los componentes del sistema de espontáneamente un número pequeño de
ubiquitinación: errores en el orden o tipo de las bases
a) E1 enzima activadora de la ubiquitina, nitrogenadas. La probabilidad de uno de
dependiente de ATP estos errores puede incrementarse bajo la
b) E2 enzima que conjuga a la ubiquitina
influencia de diferentes agentes mutágenos
con la proteína blanco
(químicos o físicos). Estos cambios en la
c) E3 ligasa de ubiquitina, selecciona a la
secuencia de bases nitrogenadas en el DNA
proteína blanco
d) El complejo multiproteico del proteosoma se conocen con el nombre de mutaciones.
(20S) degrada rápidamente a las Existen varios tipos de mutaciones:
proteínas unidas a la ubiquitina. Este las que cambian una base por otra
complejo está formado por 14 (sustitución) y pueden ser de una base púrica
subunidades apiladas una sobre otra y por otra base púrica o de una pirimidina por
que son las responsables de la actividad otra pirimidina; lo que se conoce como
proteolítica. transición. Si el cambio es de una purina por
Para que la proteína sea degradada una pirimidina, o viceversa, la mutación se
necesita tener varias ubiquitinas unidas. conoce como transversión. Existe otro tipo de
mutaciones en las que hay un cambio de
C. Mutaciones y reparación del dna marco de lectura para la traducción. Hay dos
tipos de mutaciones de este tipo: la inserción,
Al finalizar esta subunidad el alumno en la que la entrada de uno o dos nucleótidos
conocerá los diferentes cambios que puede modifica el marco en que se leerá el mensaje
sufrir el DNA y sus consecuencias. Conocerá por los ribosomas, y la supresión (deleción),
también los mecanismos de reparación del en la que la pérdida de uno o dos nucleótidos
DNA. provoca el mismo efecto.
En el caso de las mutaciones
C.1 Conocerá los diferentes tipos de puntuales, en las que sólo hay cambio de
mutaciones y la acción de algunos una base, la información genética es
agentes mutágenos: luz UV, cambiada casi imperceptiblemente y las
radiaciones, naranja de acridina, mutantes pueden sobrevivir. Cuando cambia
bromuro de etidio, 5 bromouracilo. un mayor número de bases, ocurren
alteraciones importantes en la secuencia de

89
un gen, lo que puede ser incompatible con la D.3.3 Control de modificaciones del
existencia de esa mutante. transcrito primario.
Con el fin de sobrevivir, la célula tiene D.3.4 Control de la traducción por la
mecanismos para reparar el DNA dañado. En presencia del casquete, de
secuencias especiales, vida
ese sentido la actividad exonucleasa
media del RNAm.
3’ ; 5’ de las DNA polimerasas, la de los
D.3.5 Regulación del proceso de
productos de algunos genes, como los uvr
síntesis proteica.
ABC, los de la fotoliasa y la de la uracilo-DNA
glucosidasa desempeñan un papel D.4 Revisará un modelo de regulación en
importante. procariotos y otro en eucariotos
(operón de lactosa y regulación de la
D. Niveles de regulación de la expresión de los genes de las
expresión genética inmunoglobulinas).
Al finalizar esta subunidad el alumno D.5 Conocerá la relación que existe entre
conocerá los diferentes niveles de regulación el ciclo celular, el tipo de célula y los
genética (en procariotos y en eucariotos), así procesos antes descritos, y el proceso
como los diversos mecanismos implicados en de diferenciación celular.
ella.
Lecturas recomendadas
1. Etchergary P. Rhytmic histone
D.1 Describirá los niveles de posible control acetylation underlies
de la expresión de la información transcription in the mammalian
circadian clock. Nature. 2003;
genética (transcripcionales, 421: 177-182.
traduccionales, modificaciones 2. Pombo A. Cellular genomics:
postranscripcionales y which genes are transcribed,
when and where? TIBS. 2003;
postraduccionales). 28 (1): 6-9.
D.2 Conocerá cómo la información que el 3. Konberg RD. Eucaryotic
transcriptional control. TIBS.
organismo recibe del medio exterior se Millenium Issue 1999; M46-M48.
transforma en señales que se traducen 4. Papin JA. Metabolic pathways in
en diferentes acciones. the post genome era. TIBS.
2003; 28(5): 250-258.
D.3 Conocerá los posibles mecanismos 5. Le Hir H, Nott A, Moore M. How
que operan en los diferentes niveles de introns influence and enhance
eukaryotic gene expression.
regulación:
TIBS. 2003; 28(4): 215-220.
D.3.1 Cambios en la molécula del
DNA: pérdida amplificación y Las bacterias son capaces de controlar la
rearreglo de genes. expresión de las enzimas necesarias para
D.3.2 Control de la transcripción en utilizar nutrientes del medio, o bien, aquellas
eucariotos (a nivel del rearreglo enzimas requeridas para la síntesis de
de la cromatina, de la iniciación y biomoléculas que intervienen en su
a nivel de los mecanismos de funcionamiento y proliferación. Estos
acción de los receptores cambios de expresión ocurren con gran
intracelulares). rapidez y precisión y fueron el primer ejemplo
claro de la manera en que se regula la

90
expresión génica. Cuando una enzima se cAMP (CRP, también denominada CAP) y
expresa en respuesta a una necesidad forma un complejo que se une a la región
bacteriana se habla de un proceso de reguladora de los operones y favorece su
inducción génica, mientras que, cuando su transcripción. Por tanto, cuando la glucosa
expresión se apaga, se habla de represión reduce los niveles de cAMP, la proteína CRP
génica. pierde su afinidad por la región reguladora
Los cambios en la expresión de un del operón y se interrumpe la expresión.
gen están controlados por la interacción de Una forma alternativa de regular la
su región reguladora con diversas proteínas expresión génica es acoplar la transcripción a
nucleares que favorecen o interfieren con la la traducción lo cual favorece la terminación
unión de la RNA polimerasa al sitio de temprana de la transcripción. Este proceso
iniciación de la transcripción. El ejemplo más se conoce como atenuación y el operón de
sencillo de esta regulación es la manera triptofano constituye un buen ejemplo.
como se controla la expresión de un conjunto Cuando hay triptofano en el medio se
de genes, llamado operón de lactosa, cuya favorece la terminación de la transcripción y
expresión depende de la presencia de el operón nunca logra expresarse; sin
lactosa en el medio; normalmente, la embargo, cuando el triptofano se agota, la
expresión de este operón se encuentra transcripción continúa y se expresan las
reprimida. El gen regulador codifica para una enzimas necesarias para su síntesis. La
proteína que se une con gran afinidad a la expresión de otros operones necesarios para
región del DNA que controla la expresión del la síntesis de aminoácidos, como histidina,
operón y que previene que la RNA fenilalanina, leucina, treonina e isoleucina, es
polimerasa pueda iniciar la transcripción. Por controlada por atenuación.
su función, a esta proteína se le denomina el Mientras que en las bacterias
represor del operón de lactosa. La presencia cualquier individuo puede expresar todos sus
de lactosa, en ausencia de otros nutrientes, genes, en las células animales esto no
favorece que una pequeña porción de dicha siempre es cierto. Por ejemplo, todas las
lactosa sea transformada enzimáticamente a células del cuerpo humano poseen la misma
un metabolito que puede unirse al represor información genética codificada
5
con gran afinidad; el resultado de esta unión aproximadamente en 10 genes distintos; sin
es una inactivación alostérica del represor. A embargo, no hay ningún tipo celular que
este metabolito de la lactosa se le denomina exprese todos estos genes simultáneamente.
inductor del operón ya que, al disminuir la De hecho, cualquier célula expresa sólo un
cantidad de represor funcional, favorece de número reducido de estos genes, la gran
manera indirecta la iniciación de la mayoría de los cuales codifica para proteínas
transcripción de los otros genes del operón. necesarias para las funciones generales de
Un nivel más de control queda de manifiesto cualquier tipo celular. La expresión de estos
cuando las bacterias reprimen la expresión genes es lo que hace similares a los distintos
del operón de lactosa cuando en el medio tipos celulares; un ejemplo claro de este tipo
aparecen otros nutrientes como la glucosa. A de genes lo constituye los que codifican para
este efecto represor de la glucosa se le las enzimas glucolíticas, proteínas que se
conoce como represión catabólica y ocurre expresan de manera constitutiva como
gracias a que la presencia de glucosa reduce resultado de que las regiones reguladoras de
los niveles intracelulares de AMP cíclico estos genes responden a factores de
(cAMP). Normalmente, el cAMP se une a una transcripción presentes en todas las células.
proteína denominada proteína receptora de Los transcritos primarios son editados

91
inmediatamente para dar origen al RNA inactivación es que la expresión del gen se
mensajero maduro que es traducido por reduce a la mitad, ya que sólo una de las dos
ribosomas libres para sintetizar un péptido copias es activa, como es el caso de los
que, al adquirir su conformación nativa, genes localizados en el cromosoma X. En
posee actividad enzimática. Así como la contraposición, existen genes que pueden
expresión de los genes constitutivos confiere estar presentes en un mayor número de
similitudes a los distintos tipos celulares, la copias como resultado de una amplificación;
expresión de genes tejido específico es la tal es el caso de los genes que codifican para
que le da a cada tipo celular sus los RNA ribosomales, de los cuales las
características. Los hepatocitos, por ejemplo, células requieren muchas copias. En genes
expresan albúmina, pero no miosina, como lo que codifican para los anticuerpos en células
hacen las células musculares, ni tampoco B y los receptores de las células T ocurre un
expresan las enzimas que permiten la rearreglo de las secuencias primarias del
síntesis de neurotransmisores como lo hacen DNA, lo que es responsable de la gran
las neuronas. La expresión de estos genes diversidad de antígenos naturales y
tejido-específico está controlada por sus artificiales que pueden ser reconocidos por el
regiones reguladoras las cuales requieren de sistema inmune. Este proceso es controlado
factores de transcripción especiales que por los distintos factores que regulan la
aparecen en dos etapas. En la primera, la maduración de las células B y las células T.
expresión de estos factores ocurre en Además de la capacidad de
respuesta a estímulos hormonales o de transcribir o no ciertos genes con mayor o
factores de crecimiento durante la menor eficiencia, existen otros niveles en los
diferenciación celular. En la segunda, la que se puede regular la función del producto
presencia de estos factores de transcripción final por medio de la modulación tanto en
se hace independiente del estímulo hormonal cantidad como en calidad. El primer nivel de
y de factores de crecimiento o diferenciación regulación se refiere al control de la vida
y se convierte en proteínas que se expresan media de los RNA mensajeros determinada
de manera permanente en la célula por la existencia de secuencias en los
diferenciada. Muchas de las hormonas que extremos no codificantes que regulan su
activan este proceso requieren de receptores velocidad de degradación. Durante el
de membrana y sistemas de transducción proceso de maduración de los mensajeros,
que llevan la señal al núcleo a través del en el cual se eliminan intrones, también
citoplasma. Otros, como las hormonas pueden eliminarse uno o varios exones y dar
esteroides, se unen a receptores nucleares lugar a una mayor diversidad de proteínas; a
que sirven como factores de transcripción. este proceso se le denomina edición
En algunas ocasiones la regulación alternativa. Una vez que el mensajero ha
implica un cambio de la secuencia del DNA, madurado, existen varios mecanismos que
como se ejemplifica a continuación. En el pueden aumentar o disminuir la eficiencia
humano, como en todos los organismos con la que los ribosomas traducen la
diploides, la mayoría de los genes está información a un péptido. En muchas
presente en dos copias, una de origen ocasiones la proteína tiene un destino final
paterno y una de origen materno. Algunas diferente al citoplasma, el cual puede ser
veces, el origen paterno o materno del gen mitocondrial, lisosomal, de membrana celular
determina que este gen pueda ser transcrito o una proteína de secreción; esta información
o no, fenómeno al que se le denomina se encuentra codificada en el extremo amino
“impronta genética”. El resultado de esta terminal del péptido naciente y puede

92
constituir un punto más de control. El último E.2 Conocerá la clasificación de los virus
punto de regulación consiste en aumentar o con base en su ácido nucleico y dará
disminuir la velocidad de degradación de las ejemplos de cada uno.
proteínas por el sistema de la ubiquitina; este
E.3 Definirá los conceptos de oncogén y
mecanismo nuevamente contribuye a
protooncogén.
controlar la cantidad del producto génico. A
pesar de la diversidad de los niveles de E.4 Revisará algunos mecanismos por los
regulación de la expresión génica, los cuales un protooncogén se transforma
mecanismos más comunes son los que en oncogén, como:
modulan la eficiencia de la transcripción y los E.4.1 Inserción de un promotor o de un
que modulan la actividad biológica por intensificador (amplificador).
modificaciones postraduccionales, entre los E.4.2 Mutación puntual.
que destacan la fosforilación y la E.4.3 Traslocaciones cromosómicas.
desfosforilación. E.4.4 Amplificación.
Hemos mencionado los rasgos más
sobresalientes de la manera en que las E.5 Estudiará el producto de algunos
células regulan la expresión génica, pero aún oncogenes como son: src, sis, erb B,
es poco lo que se sabe con respecto a cómo ras y myc y establecerá la relación
se integran e interaccionan. Por ejemplo, aún entre la función de dichos productos y
resulta difícil explicar cómo distintos factores la transformación celular.
de crecimiento, con diferentes receptores de
membrana y sistemas de transducción,
Los virus son partículas subcelulares
estimulan a los mismos factores de
constituidas por ácidos nucleicos en forma de
transcripción, pero conducen a respuestas
DNA o de RNA de cadena doble o sencilla,
celulares diversas. El gran número de niveles
proteínas y, en ocasiones, membranas
a los cuales se puede regular la expresión
lipídicas. Su genoma compacto está
génica y las múltiples combinaciones y
constituido por un reducido número de genes
secuencias en las que pueden presentarse
que codifican para proteínas estructurales de
sugiere una gran complejidad. El resultado
la cápside, enzimas de duplicación, así como
final de esta complejidad determina al tipo de
enzimas y secuencias de DNA que permiten
genes que participan y la secuencia en la que
la inserción del genoma viral al genoma de la
se expresan para dar origen a los diferentes
célula huésped, entre otros.
tipos celulares.
Los virus son incapaces de
multiplicarse de manera autónoma, pero
F. Virus, oncogenes y
pueden hacerlo cuando se encuentran en el
transformación
interior de una célula. En la mayoría de los
casos la infección viral conduce a la
Al finalizar esta subunidad el alumno
multiplicación viral a expensas de la célula
conocerá la estructura general de los virus,
infectada. El daño ocasionado al destruir las
su clasificación y su posible implicación en la
células es responsable de una gran variedad
transformación celular. Conocerá la relación
de enfermedades de menor gravedad, como
entre la función de los productos de los
la influenza, o enfermedades más serias,
oncogenes y la transformación celular.
como la viruela, e incluso enfermedades
E.1 Describirá la estructura general de los mortales, como el síndrome de
virus. inmunodeficiencia adquirida. En algunos

93
casos la infección viral se asocia a una anticuerpos, el organismo produce factores
mayor frecuencia en el desarrollo de tumores proteicos solubles llamados interferones que
y cáncer, como es el caso del virus del aceleran la muerte de la célula infectada e
papiloma y el cáncer cervicouterino. Es interrumpen la expresión de proteínas virales.
interesante notar que un tipo de virus sólo El que los virus se aíslen del sistema inmune,
puede infectar a un restringido tipo de células su ciclo de vida y su gran diversidad
y a ninguna otra, por ejemplo, el virus del genética, son responsables de que no haya
herpes infecta las células de los nervios medidas eficaces para su eliminación y son
periféricos. A este fenómeno de especificidad la causa de su gran impacto, tanto en la
de infección se le denomina tropismo y se salud pública, como en la economía
debe a que el virus y su célula blanco agropecuaria y agrícola.
interactúan por la unión de una proteína de la En su mayoría, los virus son capaces
envoltura viral con un antígeno presente en la de activar la maquinaria de síntesis del DNA
membrana celular. de la célula infectada, evento ligado al ciclo
Las enfermedades por virus son celular y al control mismo de la proliferación;
difíciles de tratar debido a que, fuera del al interferir con este aspecto de la vida
momento en que las partículas virales viajan celular los virus aseguran su multiplicación.
hasta sus células blanco y penetran en su No es sorprendente entonces que en
interior, no pueden ser neutralizadas por ocasiones los virus hayan incorporado a su
anticuerpos. reducido genoma versiones de genes
El problema del reconocimiento de celulares que controlan la proliferación
antígenos virales por anticuerpos se dificulta celular. Un ejemplo de este tipo de genes es
si uno considera que en poco tiempo emerge ras, que codifica para una proteína G
un gran número de partículas virales de una monomérica que transduce la señal
célula infectada y que el tiempo en que se proliferativa de diversos factores de
logran títulos protectores de anticuerpos es crecimiento. La versión celular de ras (c-ras)
relativamente largo. A estas dificultades se posee homólogos virales (v-ras), la mayoría
suma una característica genética de los virus de los cuales presenta alteraciones que dan
que les permite tolerar cambios de lugar a una proteína permanentemente activa
secuencias o incluso eliminar o adquirir y que no está sujeta a la regulación celular.
nuevos genes a lo largo de su multiplicación, Así, mientras que c-ras sólo entra en función
lo que les confiere una gran diversidad cuando los receptores o factores de
genética. Estos cambios en secuencias son crecimiento son activados, v-ras
particularmente nocivos cuando ocurren en constantemente obliga a la célula a proliferar.
regiones del DNA que codifican para los Cuando los virus, en lugar de lisar a una
antígenos que son reconocidos por célula, integran su genoma al material
anticuerpos. genético de ésta, los genes virales pueden
Las proteínas virales que se expresarse de manera constitutiva; si esto
seleccionan son aquellas que continúan ocurre con genes como v-ras, se favorece
teniendo la función requerida por el virus, una proliferación celular descontrolada y se
pero que no pueden ser reconocidas por los dice que la célula ha sido transformada. Hay
anticuerpos. La velocidad con la que estos proteínas virales que pueden interferir con la
cambios se propagan a toda la población proliferación celular, como el antígeno grande
viral es sorprendentemente rápida y T del adenovirus o las proteínas E7 del virus
previenen el uso eficaz de vacunas contra del papiloma.
varias enfermedades virales. Además de los

94
No sólo la integración viral puede dar G. Técnicas de manipulación
origen a la expresión de genes que del DNA
promueven la proliferación celular, también la
aparición de mutaciones espontáneas puede Al finalizar esta subunidad el alumno
dar origen a versiones de c-ras que al igual conocerá las diferentes técnicas de
que v-ras estimulan continuamente la manipulación del DNA y sus posibles
proliferación. A estas versiones mutadas se aplicaciones.
les denomina oncogenes, ya que están
asociadas al desarrollo de neoplasias, F.1 Señalará la importancia de la
tumores y diversos tipos de cáncer. A los tecnología del DNA recombinante en el
genes celulares que al ser mutados pueden campo de la medicina.
dar origen a oncogenes se les denomina
F.2 Definirá qué son las enzimas de
protooncogenes; a éstos pertenece una larga
restricción y conocerá cuál es su
lista de receptores y proteínas de
utilidad y función en el estudio y la
transducción de diferentes factores de
manipulación del DNA.
crecimiento y proteínas que controlan el ciclo
celular. Mientras que los protooncogenes son F.3 Definirá qué es un vector de clonación
todos parte de las señales que activan la y un vector de expresión; tomará como
proliferación, también existen genes cuyos ejemplo los plásmidos.
productos sirven para frenarla. A estos frenos F.4 Conocerá en qué consiste el
de la proliferación se les denomina genes procedimiento básico de la
supresores de tumores o antioncogenes. Si metodología de clonación y cuál es su
un gen supresor de tumores se muta y pierde utilidad, al tomar en cuenta:
su función, el resultado puede compararse
con la pérdida de un freno de la proliferación F.4.1 Cómo se fragmenta el DNA.
celular. Cuando esto ocurre también puede F.4.2 Cómo se unen los fragmentos de
presentarse un crecimiento descontrolado, DNA a los vectores.
ahora como resultado de la falta de un F.4.3 Cómo se introduce el DNA
mecanismo de freno. recombinante en las células
Las células transformadas poseen hospederas (transfección).
mutaciones, tanto en protooncogenes como F.4.4 Cómo se seleccionan las células
en genes supresores de tumores, lo que da que contienen DNA
como resultado una señal permanente de recombinante.
proliferación, por un lado, y la falta de F.4.5 Cuál es la utilidad del DNA
mecanismos de freno, por el otro. Esta recombinante.
combinación hace que estas células F.5 Conocerá los mecanismos de
presenten una duplicación descontrolada y recombinación in vitro (ingeniería
mucho más veloz que las células normales, genética).
lo que, en parte, es responsable del
F.6 Conocerá el significado de los téminos:
crecimiento desmesurado de las masas
transgen, sobreexpresión, knock out, huella
tumorales.
digital del DNA y polimorfismo.

Las técnicas modernas de biología molecular


han permitido un gran control sobre la
caracterización y manipulación del material

95
genético tanto de DNA como de los distintos genes y RNA mensajeros. Los fragmentos de
tipos de RNA. Debido a su especificidad y DNA obtenidos de la clonación en plásmidos,
gran capacidad de detección, estas técnicas o por transcripción reversa y amplificación,
han tenido un gran impacto en la medicina. pueden unirse a nucleótidos marcados con el
Inicialmente, la biología molecular se ha isótopo radiactivo del fósforo 32P, o
aplicado al diagnóstico de entidades "derivatizados" con moléculas fluorescentes;
patológicas y para determinar la presencia de la marca permite seguir a estas moléculas
agentes infecciosos como microorganismos y que sirven como sondas para localizar a sus
virus. En la actualidad se estudia con gran secuencias complementarias. La gran
interés la posibilidad de una terapéutica especificidad y elevada capacidad de
génica que pueda corregir alteraciones detección de la hibridación de la sonda con
fisiopatológicas derivadas de la pérdida de la su secuencia complementaria permite el
función parcial o total de un gen; esto abre análisis de DNA para detectar la presencia y
una nueva era en las aplicaciones de la número de copias de un gen (técnica
biología molecular en la medicina. denominada Southern); también se aplica en
La biología molecular recibió un gran la identificación y la cuantificación de RNA
impulso con el descubrimiento de entidades mensajeros (técnica a la que se le denomina
circulares de DNA llamadas plásmidos que, Northern).
además de poseer genes que confieren Los segmentos de DNA cuyo estudio
resistencia a los antimicrobianos, pueden ha resultado de mayor interés son aquellos
contener y expresar muchos otros genes. que contienen toda la información de un gen
Dos herramientas cruciales de la biología o de las regiones reguladoras. Sin embargo,
molecular son la posibilidad de cortar el DNA introducir un gen o un promotor a unas
con enzimas de restricción, endonucleasas cuantas moléculas de plásmido sería
que sólo cortan secuencias específicas, y el problemático para estudios bioquímicos,
uso de ligasas, que generan un enlace genéticos y estructurales por la reducida
covalente entre los extremos obtenidos por la cantidad de material. Esta limitación había
acción de las enzimas de restricción. Estos sido resuelta previamente, ya que los
dos principios básicos permiten remover o plásmidos pueden ser introducidos a
insertar cualquier porción de DNA contenida bacterias a través del proceso de
entre dos sitios de restricción y se dice que transformación. Normalmente los plásmidos
se ha clonado esta secuencia de DNA. La contienen secuencias que les permiten
clonación hace posible introducir en un multiplicarse una vez que están dentro de
plásmido, no sólo secuencias de DNA de una bacteria; a estas secuencias se les
otros plásmidos, sino también de cualquier denomina origen de duplicación. Gracias a
origen: viral, bacteriano, animal o vegetal. La que los plásmidos contienen genes que
reciente aplicación de transcriptasas reversas confieren resistencia a los antimicrobianos,
de origen viral, enzimas que sintetizan DNA las bacterias que han sido transformadas con
complementario mediante RNA como molde, un plásmido pueden distinguirse de las que
y de polimerasas termostables que permiten no lo han sido al hacerlas crecer en medio de
“amplificar” un segmento de DNA, ha cultivo que contiene al antimicrobiano en
simplificado aún más el uso de técnicas de cuestión; los antimicrobianos más utilizados
biología molecular. son la ampicilina y la kanamicina. Este simple
El tener secuencias de DNA o DNA proceso de selección logra dos resultados
complementario al RNA mensajero ha prácticos: por una parte, elimina a las
resultado de gran utilidad para el estudio de bacterias no transformadas y, por otra,

96
asegura la multiplicación masiva del plásmido aplicación particularmente útil de la biología
que se duplica junto con el genoma molecular se ha derivado del uso de vectores
bacteriano. El resultado es un cultivo de de expresión en bacterias y células animales.
bacterias con un alto contenido de plásmidos La expresión de proteínas exógenas por
y, por tanto, del segmento de DNA que se bacterias y levaduras ha permitido obtener
desea estudiar. La multiplicación del cantidades suficientes para estudios
segmento de DNA por estudiar asegura bioquímicos, estructurales e, incluso, ha sido
suficiente material para cualquier otro la principal fuente para la cristalización. La
propósito. transfección y la expresión de proteínas
A los plásmidos que sirven para exógenas en células de mamíferos y en
insertar DNA ajeno al plásmido y permiten su células vegetales ha permitido identificar
multiplicación se les denomina vectores de versiones de genes que contienen
clonación, pero existen también plásmidos alteraciones en sus secuencias que dan
más complejos en los que el sitio en el que como resultado proteínas con una función
se puede insertar el DNA exógeno se alterada. Con esta aproximación se han
encuentra frente a una región reguladora que identificado mutaciones responsables de
permite la síntesis de RNA mensajero. A enfermedades como el cáncer y la diabetes.
estos plásmidos se les llama vectores de Una aplicación sorprendente ha sido la de
expresión, ya que permiten que el DNA sea identificar la función de genes recién
transcrito a RNA; estos plásmidos pueden descubiertos que al ser insertados en
presentar regiones reguladoras reconocidas vectores de expresión no sólo han permitido
por bacterias o por células de animales. obtener proteínas puras en cantidades
Hemos dicho que la transformación consiste suficientes para su caracterización
en introducir el DNA a una bacteria y bioquímica, sino también han dado la
expresarlo; cuando esto ocurre en una célula oportunidad de conocer su función, al
eucariótica: levadura, célula animal o vegetal, expresarlas en un ambiente celular normal.
el proceso se denomina transfección. Una

97
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

I
CONCEPTOS TEÓRICOS INICIALES

98
EL MÉTODO CIENTÍFICO Observación

La cultura no puede comprenderse sin hacer El método científico se inicia con la


referencia al método científico. La ciencia no observación. Lo que no puede observarse,
es un sector de la civilización que pueda directa o indirectamente por medio de
separarse del resto de ella, sino un esfuerzo instrumentos o de modificaciones de la
creativo con su propio sistema de valores conducta, no puede ser investigado por la
que, poco a poco, ha llegado a formar parte ciencia.
de los valores generales en la sociedad La observación debe ser repetida en
moderna. forma independiente por observadores
La ciencia está basada en el método diversos. Las observaciones únicas, que no
científico; su capacidad y limitaciones están se repiten ni actual ni potencialmente, no
definidas por él y dondequiera que el método pueden ser objeto de estudio científico.
científico sea aplicable, puede haber ciencia.
El origen de la ciencia se pierde en Problema
el más remoto pasado. Mucho antes de que
existieran los registros históricos de la Después de que una observación se hace y
humanidad, la magia primitiva dio origen se repite, el segundo tiempo del método
también a la religión y, mucho antes, al arte. científico es plantear un problema; en otras
Ciencia, religión y arte difieren en métodos, palabras, se hacen preguntas sobre la
pero coinciden en metas: comprender e observación: ¿Cómo es que los hechos
interpretar al universo y la interacción de sus ocurren de esta manera? ¿Qué es lo que
partes para promover el progreso material y determina su desarrollo, evolución y término?
espiritual de la humanidad. Es en este punto donde el científico difiere
del hombre común; ambos hacen
El objetivo de la ciencia es hacer observaciones pero sólo el primero muestra
teorías. Las teorías científicas explican los curiosidad científica sobre ellas.
hechos y predicen con alto grado de Plantear un problema es hacer
probabilidad la ocurrencia de hechos preguntas, pero, hacer “buenas preguntas” al
similares. igual que hacer “buenas observaciones” es
La secuencia del método científico un arte muy preciado. Para que tengan valor
es: observar, plantear problemas, hacer científico los problemas deben ser
hipótesis, experimentar y formular teorías. significativos y tener respuestas
Cada uno de los procesos del método comprobables por técnicas apropiadas.
científico, tomado aisladamente, forma parte Las preguntas que se inician por
de la actuación cotidiana de todos los seres ¿cómo? o ¿qué? se resuelven mejor,
humanos, pero, en su conjunto, utilizados científicamente, que las que comienzan con
sistemáticamente, constituyen la más ¿por qué?, pero los investigadores pueden
poderosa herramienta que ha diseñado la formular los problemas para que adopten la
humanidad para conocer y controlar a la forma adecuada.
naturaleza.

99
Hipótesis Teoría
Una vez planteado un problema adecuado, el
científico procede al tercer tiempo del Las pruebas experimentales son la base del
método: formular una explicación o hipótesis. quinto peldaño, final del método científico: la
Por supuesto que un problema puede tener formulación de una teoría. Cuando una
varias explicaciones posibles, pero sólo una hipótesis se ha sostenido por pruebas
de ellas es la verdadera. Las respuestas convincentes, obtenidas por muchos
casuales a un problema son generalmente laboratorios e investigadores independientes,
erróneas; pero el científico con su intuición, se propone una teoría que consiste en una
su experiencia y, a veces por incidentes afirmación con límites mucho más amplios
afortunados, acierta en la hipótesis. Esto se que los experimentos en que se basa y que
sabe al emplear el cuarto tiempo del método expresa la creencia o probabilidad de que
científico. sea valedera en cualquier combinación de
sujeto, tiempo y lugar en donde se reúnan
Experimentación condiciones similares.
Desde este punto de vista una buena
El objetivo de la experimentación es teoría permite hacer “predicciones.” Las
comprobar la validez de la hipótesis. Si los predicciones científicas tienen siempre un
experimentos demuestran que la hipótesis es soporte experimental muy sólido y aun
errónea, se hace una nueva y se la sujeta a cuando no afirman que un hecho ocurrirá con
comprobación. El procedimiento puede certidumbre, sí plantean que tiene una gran
prolongarse por mucho tiempo al formular probabilidad de ocurrir.
nuevas hipótesis y tratar de comprobarlas Unas pocas teorías han probado su
experimentalmente. validez tan universalmente, y expresan tan
La situación ideal en la alto grado de probabilidad, que se las conoce
experimentación consiste en reducir el con el nombre de leyes naturales. Por
problema a dos alternativas posibles que ejemplo, ninguna excepción se conoce al
puedan contestarse con claridad, afirmativa o hecho de que una manzana desprendida de
negativamente; pero en muchas ocasiones su árbol caerá al suelo si no es sostenida de
los resultados del experimento sólo conducen alguna manera. La ley de gravitación se basa
a soluciones parciales. en esta observación.
La experimentación es la parte más Las leyes naturales orientan la
ardua del método científico. Cada investigación científica. Si en el análisis de un
experimento es un caso en sí mismo; el hecho se elimina lo imposible, aquello que es
conocimiento anterior y la experiencia contrario a las leyes naturales, lo que resta,
ayudan técnicamente para decidir la forma en aunque sea muy raro y poco probable, debe
que una hipótesis puede ser comprobada ser la verdad. La verdad son los hechos que
experimentalmente. La elección correcta del nos rodean. Aunque acontecen sin cesar a
experimento y su interpretación es lo que nuestro alrededor, muy pocas personas y
separa al genio del aficionado a la muy pocas veces se hace un análisis
investigación. científico de ellas.

100
Si se emplean las leyes naturales comunidad y en especial en medicina. El SI
para marcar lo imposible, con el resto posible es esencialmente una versión ampliada del
se hacen nuevas hipótesis, se comprueban sistema métrico decimal.
por experimentos, se formulan nuevas El SI comprende tres tipos de
teorías y se acumula el conocimiento unidades: las unidades de base, las unidades
científico que ha permitido al hombre situarse derivadas, las unidades suplementarias y una
en un Universo observable que tiene un radio serie de prefijos que permiten tomar múltiplos
(r) de millares de millones de años luz y que y submúltiplos decimales de las unidades
incluye un microcosmos tan pequeño que se utilizadas.
expresa en órdenes de magnitud menores de
–20
10 m y adquirir un dominio incuestionable Unidades de base
sobre su ambiente.
El SI consta de siete unidades básicas que
SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES son dimensionalmente independientes. Las
(SI) unidades básicas están anotadas en el
cuadro I.1, junto con los símbolos que hay
Los resultados de todos los experimentos en que utilizar para indicar estas cantidades.
que se basan las teorías científicas y las
leyes naturales derivan de las mediciones de Unidades SI derivadas
objetos o de sus propiedades.
Medir es comparar magnitudes; toda Al multiplicar una unidad de base por sí
medición comprende un número y una misma o al asociar dos o más unidades de
unidad. La unidad identifica la clase de base por una simple multiplicación o división,
dimensión y el número expresa las veces que se puede formar un amplio grupo de
la unidad está contenida en el objeto o la unidades llamadas SI derivadas (cuadro I.2).
propiedad medida. La medición es un arte Ejemplo: la unidad derivada de volumen es el
muy refinado; en la actualidad emplea metro elevado al cubo, o metro cúbico.
instrumentos muy complejos y alcanza una
precisión extraordinaria. La combinación de unidades de base
Un sistema de medidas preciso para formar las unidades derivadas es una
requiere unidades bien definidas. La Oficina de las grandes ventajas del SI. En el SI no es
Internacional de Pesas y Medidas revisa preciso memorizar factores de conversión; el
periódicamente el sistema para incorporar los
factor a que se recurre para formar las
adelantos tecnológicos y mejorar la exactitud
unidades derivadas es 1 (unidad), cualidad
y precisión de las medidas.
que hace al SI coherente.
Se han hecho muchos esfuerzos
para desarrollar un sistema de unidades
universalmente aceptable. El producto de
estos esfuerzos es el Sistema Internacional
de Unidades (cuya abreviatura es SI en todos
los idiomas). A partir del creciente
intercambio de información científica este
sistema ha sido aceptado por toda la

101
Cuadro I.1. Unidades básicas del SI. signo de puntuación alguno (ejemplo:
Magnitud Nombre Símbolo nanómetro y no nano-metro).
Longitud metro m El símbolo del prefijo se antepone
Masa kilogramo kg también directamente al símbolo de la
Tiempo segundo s unidad, sin espacios intermedios ni signos de
Cantidad de mol mol
sustancia puntuación (ejemplo: mm, milímetros; nmol,
–9
Temperatura kelvin K nanomol que equivale 10 moles).
termodinámica Cuadro I.3. Unidades SI derivadas con
Intensidad luminosa candela cd nombres especiales
Definición
Intensidad de ampere A Magnitud Nombre Símbolo
corriente eléctrica Fuerza Newton Nm. kgm/s
2

Presión Pascal Pa N/m2


Cuadro I.2. Algunas unidades derivadas
simples Trabajo; energía; cantidad Joule J Nm
de calor
Magnitud Nombre Símbolo Carga eléctrica; cantidad Coulomb C
A.s
2
Superficie metro m
cuadrado de electricidad
3 Potencia; flujo energético Watt W J/s
Volumen metro m
cúbico Tensión eléctrica; Volt V W/A
3
Concentración mol/metro mol/m potencial eléctrico
de sustancia cúbico
Velocidad metro por m/s Temperatura Celsius Grado °C
K–273,16
segundo Celsius

Cuadro I.4. Prefijos SI.


A cierto número de unidades SI derivadas se
les ha dado nombres especiales, en su Factor Prefijo Símbolo
18
mayor parte tomados de los hombres de 10 exa E
15
ciencia que han hecho contribuciones 10 Peta P
12
notables al conocimiento del tema de estudio 10 Tera T
9
correspondiente (cuadro I.3). 10 Giga G
6
10 Mega M
3
Prefijos SI 10 Kilo k
–3
10 Mili m
Cuando las unidades SI derivadas resultan 10
–6
Micro µ
demasiado grandes o demasiado pequeñas 10
–9
Nano n
para determinados fines (sería 10
–12
Pico p
desproporcionado, por ejemplo, utilizar el –15
10 Femo F
metro cúbico para expresar el volumen de –18
10 ato q
sangre del cuerpo humano), el SI contiene
una serie de prefijos que permiten formar
Unidades no pertenecientes al SI
múltiplos y submúltiplos decimales de las
unidades SI (cuadro I.4).
Ciertas unidades ajenas al SI son de uso tan
Los prefijos SI se anteponen
frecuente que en cierto modo forman parte
directamente al nombre de la unidad, sin

102
de nuestra vida cotidiana y se acordó
utilizarlas juntamente con el SI (cuadro I.5). La multiplicación de las unidades se
Algunas de estas unidades, en indica con un punto a nivel o elevado
especial el litro y las unidades de tiempo, son (newton.metro=N.m) o un espacio (N m). La
de gran importancia en las profesiones de la división se puede indicar mediante una barra
salud. Conviene señalar que el litro es un oblicua o por exponentes negativos:
nombre especial que se da al submúltiplo, –1
1/s = s
decímetro cúbico, de la unidad SI de
volumen. mol por metro cúbico puede expresarse por:
3 –3
mol/m o mol.m
Cuadro I.5. Algunas unidades no El SI tiene muchas ventajas y
pertenecientes al SI. algunas desventajas, pero se reconoce la
Magnitud Unidad Símbolo Valor en realidad del esfuerzo para implantarlo como
SI una forma de expresar los datos científicos,
Tiempo minuto min 60 s comprensible para todos. Se recomienda
hora H 3 600 s desechar las unidades que no pertenecen al
SI a la mayor brevedad posible, pero la
Día D 86 400 s
realidad del uso de otras unidades en textos
Volumen Litro loL 10-3 m3
y comunicaciones científicas no se puede
Energía caloría cal 4.185J
negar. En este Manual las unidades SI se
anotarán entre paréntesis cuando se juzgue
conveniente.

Reglas de escritura de símbolos y cifras


Algunas recomendaciones para utilizar
el SI en bioquímica
Los símbolos de las unidades no toman la
terminación del plural (ejemplo: dos mililitros
PARA EXPRESAR CONCENTRACIONES
se escribe 2 ml, y no 2 mls).
La concentración de sustancias cuya masa
Los símbolos de las unidades jamás
molecular se conoce se expresa en forma de
van seguidos de un punto, salvo si están al
cantidad de sustancia, es decir, en moles (o
final de una frase (ejemplo: 5 ml y no 5 ml.).
en submúltiplos como el milimol o el
Cuando se escriben cifras, la coma
nanomol) por litro. Ejemplo:
sólo se puede utilizar para indicar los
decimales; las cifras deben agruparse en Ácido úrico en el suero o plasma:
tríos, dispuestos a la derecha y a la izquierda Varones: 0.18 a 0.53 mmol/l.
de la coma, y separados entre sí por un Mujeres: 0.15 a 0.45 mmol/l.
pequeño espacio. Ejemplo: Colesterol en el suero o plasma: 3.9 a 7.2
mmol/l.
forma correcta: 1 000 000 Glucosa en el suero o plasma: 3.6 a 6.1
0,003 278 mmol/l.
0.003 278 Vitamina A en el suero: 0.53 a 2.1 µmol/l.
forma incorrecta: 1,000,000
La concentración en forma de
0.003,278
cantidad de sustancia no debe ser

103
denominada “concentración molar” o La actividad también puede ser
molaridad, ni utilizar el símbolo M en vez de expresada en términos de unidades (símbolo:
mol/l (como tampoco mM, nM, etcétera, en U). Por definición, una unidad es igual a la
vez de mmol/l, nmol/l, etcétera). concentración de enzima necesaria para la
La concentración de sustancias cuya formación de un micromol de producto por
masa molecular se desconoce o es dudosa minuto (µmol/min). La actividad específica de
se expresa en kg/l, g/l, mg/l, etcétera. una enzima se define como la concentración
Ejemplo: de producto que se forma por 1 miligramo de
enzima por minuto.
Proteína sérica total: 60 a 80 g/l.
Albúmina sérica: 33 a 55 g/l.
MATEMÁTICAS PARA EL LABORATORIO
Globulina sérica: 20 a 36 g/l.
Fibrinógeno en el plasma: 2 a 6 g/l.
Notación científica o exponencial
Hormona antidiurética en plasma: 2 a 12
Cuando se expresan cantidades muy
pg/ml
grandes o muy pequeñas, como es el caso
Concentración de sustancias en tejidos. frecuente en bioquímica, la dificultad de
Se expresa en unidades de masa (si no se escribir y manipular muchos ceros se evita
conoce la masa molecular) o en moles (si se con el uso de la notación exponencial o
conoce la masa molecular) por kilogramo de científica.
tejido seco o húmedo. Ejemplo: En la notación exponencial todo
número puede expresarse como una
g/kg, mg/kg o mol/kg, mmol/kg, etcétera.
potencia entera de 10, o como un producto
No se recomienda expresarla en unidades de dos números, uno de los cuales es una
de volumen, es decir en mg/ml, g/l, etcétera. potencia entera de 10. Ejemplo: el número de
Concentración de iones hidrógeno. Avogadro seiscientos dos sextillones se
escribe:
La concentración de hidrogeniones en los
602 000 000 000 000 000 000 000
líquidos biológicos se expresa en nmol/l, así
y en la notación exponencial como una
como en unidades de pH. El valor del pH se
cantidad decimal multiplicada por 10 elevada
define como el logaritmo negativo de la 23
a la potencia apropiada = 6.02 x 10 . Como
actividad de los iones hidrógeno (pH = -log
+ ejercicio, examine las cantidades siguientes:
H ), esta actividad puede determinarse
potenciométricamente con la ayuda de un 2
200 = 2 x 10 x 10 = 2 x 10
pH-metro. 2
205 = 2.05 x 10
5
Actividad enzimática. La unidad SI de 205 000 = 2.05 x 10
–1
actividad catalítica es mol por segundo: mol/s 0.205 = 2.05 x 10
–4
(también llamado katal, símbolo: kat) y 0.000 205 = 2.05 x 10
–7
corresponde a la cantidad de sustrato 0.000 000 1= 1/10 000 000 = 1 x 10
transformado por segundo como resultado de El exponente de la base 10 para
la catálisis. La velocidad medida es números mayores de la unidad es el número
proporcional a la cantidad de enzima de lugares desde la coma o punto decimal
presente. separada de la primera cifra significativa:

104
2 2 3 3
205 = 2.05 x 10 = 2 lugares (5.1 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = (0.51 x 10 ) + (3.4 x
3 3
10 ) = 3.91 x 10
Para fracciones decimales menores
de la unidad se separa la primera cifra El método del factor unitario en los
distinta de cero después de la coma decimal cálculos
y se cuentan los lugares hacia la izquierda El procedimiento que se utilizará para
hasta la coma decimal, incluso la cifra resolver problemas que incluyan conversión
separada y el número es el exponente de unidades se denomina método del factor
negativo: unitario. Esta técnica se basa en las
propiedades del número 1, es decir:
0.000 205 = 0.000 “2”05 • Cualquier número al ser multiplicado por
uno, sigue siendo el mismo número (1 x 5 =
del 2 a la coma decimal son 4 lugares; por lo 5).
4
tanto, es 2.05 x 10– . • El número 1 puede ser escrito como el
cociente de cualquier número dividido por si
Las operaciones de multiplicar y
mismo (3/3 ó 6/6).
dividir, elevar a potencias o extraer raíces se
• Se puede tomar cualquier ecuación y
facilitan manipulando los exponentes según
dividirla por uno de los miembros para
reglas muy sencillas. La porción decimal no
obtener una razón igual al número 1.
exponencial se opera en forma ordinaria, lo
Por ejemplo, dada la ecuación:
que reduce el manejo a tres cifras
1 minuto = 60 segundos, obtener la razón
significativas como máximo; los exponentes
igual al número 1.
se suman algebraicamente para multiplicar,
se restan para dividir, se multiplican por una
1 minuto = 60 segundos
potencia deseada para tener el exponente de
1 minuto 1 minuto
la misma y para encontrar raíces se divide el
exponente entre el índice de la raíz.
1= 60 segundos ó 1= 1 minuto
Ejemplos:
1 minuto 60 segundos
6 3 9 10
6 x 10 por 3 x 10 = 18 x 10 = 1.8 x 10 Estas razones o factores que son
6+3 9
ya que 6 x 3 = 18 y 10 = 10 equivalentes al número 1 se conocen como
6 3 3
6 x 10 entre 3 x 10 = 2 x 10 factores unitarios, factores de conversión o
6–3 3
ya que 6/3 = 2 y 10 = 10 coeficientes de conversión.
El recíproco de cualquier factor
unitario es también un factor unitario.
Para la adición y la sustracción usando En ambos casos el numerador y el
notación científica, primero se escribe cada denominador describen la misma cantidad,
cantidad con el mismo exponente n. Luego por lo que se puede efectuar conversiones
se realiza la operación deseada entre los entre diferentes unidades que miden la
valores N1 y N2, donde N1 y N2 son los misma cantidad.
números obtenidos con el mismo exponente;
estos últimos permanecen iguales. Ejemplo:

105
El método del factor unitario consiste en: Los logaritmos son indispensables
1. Tomar una relación entre unidades y para manejar los datos bioquímicos; constan
expresarla en forma de una ecuación, de dos partes que se separan por una coma
2. Luego expresar la relación en forma de o punto decimal; a la izquierda, la
una fracción (llamada factor de característica corresponde al orden de
conversión) y, por último; magnitud y puede ser positiva o negativa
3. Multiplicar la cantidad dada por ese factor. según sea la cantidad mayor o menor de la
En esta multiplicación, las unidades unidad. El exponente de la base 10 para
idénticas se multiplican o cancelan como números mayores de la unidad es siempre
si fueran números. positivo. Cuando es negativo se indica con el
Ejemplo: ¿Cuántos µl hay en 0.00005 L (5 x signo menos arriba del número que la
-5
10 L)? representa:

-6 6
1) 1 µl = 10 L ó 1 L = 10 µl 0.001 = 10 -3 característica 3
-3
1 000 = 10 característica 3
6
2) 10 —O
1L A la derecha, la mantisa es la
fracción decimal de exponente que
-5 [-5+ 6] 1
3) 5 x 10 L x= 5 x 10 = 5 x 10 µl = corresponde a los dígitos que ocupan el
50µl. orden de magnitud; se obtiene de tablas o de
calculadoras electrónicas y siempre tiene
En este método las unidades se valor positivo:
acarrean en todo el proceso del cálculo, por 0.3010
log 2 = 0,3010 esto es 10 =2
lo tanto si la ecuación se establece en forma
correcta, todas las unidades se cancelan Cuando la característica y la mantisa
excepto la deseada. son de diferente signo (+ o –) se opera con el
Logaritmos cologaritmo que se obtiene por la suma
algebraica de la mantisa positiva con la
El logaritmo de un número es el exponente o característica negativa es un número todo
potencia de una base determinada que se negativo, ver el siguiente ejemplo:
requiere para obtener el número. Si el
n
número “a” elevado a la potencia “n” (a ) es Log 0.002 = 3.3010 = -2.6990
igual al número “N”, entonces “n” es el
logaritmo de base “a” del número “N.” Es 3.000
decir: +0.3010
n -2.6990 cologaritmo
si a = N entonces n = loga de N

La base “a” puede ser cualquier La característica indica la posición del punto
número; en la práctica médica se usa como decimal en la cifra representada por la
base el número 10 y los logaritmos mantisa y se determina por inspección del
resultantes se conocen como logaritmos número.
“comunes” o de Briggs. Su símbolo es: log o Para un número mayor que 1, la
log.10 característica es uno menos que el número

106
de cifras antes del punto decimal; así: la ejemplo el antilogaritmo de 1.6747 es 47.29:
característica de 100 es 2 porque el número la característica es 1 (hay dos dígitos a la
cien tiene 3 dígitos a la izquierda del punto izquierda del punto decimal) y la mantisa es
decimal. Para un número menor que 1, la 0.6747, que se buscaría en la tabla de
característica es numéricamente uno más logaritmos donde se hallaría que
que el número de ceros que siguen al punto corresponde a 4 729.
decimal; así: la característica de 0.000 000 1 Los estudiantes deben familiarizarse
es 7 con signo negativo. con el uso de logaritmos en las operaciones
Para encontrar el logaritmo de un comunes.
número, por ejemplo: 0.000 809, se busca en El logaritmo del producto de dos
la tabla las dos primeras cifras distintas de números es igual a la suma de sus
cero de izquierda a derecha (80) en la logaritmos:
primera columna vertical de las tablas se log a x b = log a + log b
sigue la horizontal correspondiente hasta la El logaritmo del cociente de dos
columna 9, que es el otro número, en donde números es igual al logaritmo del dividendo
se lee 9 079, que es la mantisa requerida. La menos el logaritmo del divisor:
mantisa para 809, 8.09, 0.0809, etcétera; es log a/b = log a – log b
la misma (9 079), pero difiere la El logaritmo de la potencia “n” de un
característica. Así: número es igual a "n" veces el logaritmo del
número:
Log 0.000 809 = 4.9079 = -3.0921 3
log a = 3 x log a

Si el número del cual se requiere el


logaritmo tiene cuatro cifras, la cuarta se Gráficas
busca en la misma columna horizontal en la "Una figura equivale a mil datos en una tabla
parte de la tabla que dice “partes numérica" y así como se construye un
proporcionales” y debe agregarse a la modelo para visualizar un conjunto complejo
mantisa como diez milésimos. de hechos, se utiliza una gráfica para
presentar los datos experimentales en tal
Por ejemplo, para el número 8 091:
forma que fácilmente se asimilen y aprecien
Mantisa para 809 = 9 079 sus relaciones cuantitativas.
parte proporcional para 1 = 1 Se llama gráfica a la representación
esquemática de las variaciones que sufren
0.9079 las distintas magnitudes que intervienen en
+ 0.0001 los fenómenos físicos, químicos, biológicos,
0.9080; log 8091 = 3.9080 sociales o de cualquier otra índole. Tiene por
objeto mostrar rápida e intuitivamente la
El antilogaritmo es el número que relación que guardan las magnitudes
corresponde a un logaritmo dado. Para comparadas.
encontrarlo se busca la mantisa en la tabla Entre las diferentes clases de
de antilogaritmos, se determina el número a gráficas que existen las más importantes son:
que corresponde y se fija la posición del Gráfica poligonal. Consiste en
punto decimal según la característica. Por expresar las variaciones de un fenómeno

107
continuo por medio de puntos y de fenómeno discontinuo se emplean las barras,
representar la marcha de dicho fenómeno por que pueden ser horizontales o verticales.
medio de una línea que une esos puntos. Barras verticales. Las magnitudes se
Para elaborar una gráfica poligonal representan por medio de rectángulos, barras
se trazan en un papel, de preferencia de base igual que descansan en el eje de las
milimétrico, dos rectas perpendiculares entre abscisas y cuya altura es proporcional a la
sí que se corten en cero. En cada una de intensidad del fenómeno y se mide en el eje
ellas se representará una de las magnitudes de las ordenadas.
que se van a relacionar. El punto cero (0) se Barras horizontales. Las barras
llama origen y la rectas son los ejes; 0X es el descansan sus bases en el eje de las
eje X y 0Y es el eje Y. Para referirse al eje X ordenadas y el fenómeno se mide en el eje
generalmente se dice: eje horizontal o eje de de las abscisas.
las abscisas (variable independiente) y para Gráfica de sectores circulares. Para
el eje Y: eje vertical o eje de las ordenadas hacer una gráfica de este tipo hay que tener
(variable dependiente). en cuenta que el círculo debe tener el total de
Los ejes dividen su propio plano en las magnitudes que se van a representar.
cuatro regiones llamadas cuadrantes que se Los sectores circulares son
numeran I, II, III y IV. En el laboratorio proporcionales a las magnitudes que
utilizamos habitualmente sólo el primer representan; magnitud que se mide en
cuadrante (figura I.1). grados de circunferencia. Para determinar el
Las distancias a la derecha de 0, a lo número de grados que deben tener dichas
largo del eje X, se consideran como positivas partes se plantearán una serie de reglas de
y las de la izquierda como negativas. tres para cada una de ellas en las cuales se
Similarmente, hacia arriba de 0, a lo largo del consideran:
eje Y, se miden las distancias positivas y como 100% a la suma total de las
hacia abajo de 0 las negativas. magnitudes que se quieren graficar, para
Después se trazan los puntos cuyas obtener en cada caso el porcentaje
distancias a uno de los ejes sean correspon diente; una vez obtenido
proporcionales a la magnitud que se va a
representar y, finalmente, al unir estos puntos
por medio de segmentos de recta, se tiene la
gráfica poligonal.
Nota: por lo general, es mejor que la
curva llene una parte considerable de la
página. Muy bien puede usarse la misma
unidad de medida sobre los dos ejes, pero a
menudo los valores tienen un campo de
variabilidad muy amplio, lo cual hace
necesario usar diferente escala para cada
uno de los ejes.
Diagrama en barras. Cuando se
quieren expresar simples comparaciones de
medidas entre sí o para representar un éste, se pasará a grados, considerando

108
360o como 100% y procediendo entonces a f = 0.01096 x n2mr = 717 g
hacer la gráfica. 980

ALGUNOS MÉTODOS UTILIZADOS EN


o sea, interpretando la fórmula, la fuerza de
BIOQUÍMICA
contención para sostener la unidad masa (el
gramo) e impedir que se vaya del centro de
Centrifugación
rotación es la fuerza que la gravedad ejercía
Un método muy útil en el laboratorio para sobre 716 g o, dicho de otra manera, el
separar sustancias de diferente densidad gramo a esa velocidad pesa en el fondo del
suspendidas en un líquido es la tubo de la centrífuga 716 gramos comparado
centrifugación; en ella, la acción de la fuerza con el tubo en reposo o 716 veces la fuerza
centrífuga (fuerza necesaria para desplazar de la gravedad (g).
hacia afuera un determinado peso en La centrifugación y
dirección radial) da como resultado que las ultracentrifugación son operaciones que se
partículas más pesadas se sedimenten más basan en el principio anterior y que permiten
rápido que las partículas ligeras. separar los componentes de una mezcla.
Las centrífugas ordinarias operan a
La fuerza centrífuga depende de la rotaciones menores de 10 000 revoluciones
cantidad de materia (m) que se desplaza por minuto (rpm). Las condiciones que limitan
hacia afuera cuando está rotando a una esta velocidad son la resistencia de la parte
velocidad por minuto de (n) veces a una de la centrífuga que sostiene el rotor (brazo),
distancia radial (r) y se expresa por la la fricción con el aire y el calentamiento.
fórmula: Las ultracentrífugas operan en
2
f (en dinas) = 0.01096 n m r cámaras refrigeradas, evacuadas de aire, y el
rotor no gira sostenido por un “brazo” sino
En el sistema métrico decimal, la unidad de f impulsado por chorros de aceite o aire
es la dina, la de m es el gramo y la de r es el comprimido que se aplica a una porción
centímetro. Ejemplo: si se coloca un gramo externa del rotor sostenido por una pared
de agua en un tubo de centrífuga y se rota a muy gruesa de una cámara cilíndrica de
2 000 rpm (revoluciones por minuto) a una rotación. Se alcanzan velocidades de 20 000
distancia radial de 16 cm, la fuerza es: a 70 000 rpm.
2
f = 0.01096 x 2000 x 1 x 16 = 701 440 dinas La sedimentación en la
ultracentrífuga se expresa en unidades
Si transformamos las dinas a peso,
Svedberg (símbolo: S) y se aplica a la
entonces el gramo de agua tiene peso
comparación práctica de tamaños
porque es atraído al centro de la Tierra de
moleculares que no sólo dependen de la
acuerdo con la ley de la gravitación y es
masa de las moléculas implicadas sino
atraído en estado normal, con 980 dinas de
también de su forma. Es importante
fuerza. Si usamos, por lo tanto, peso en vez
considerar que los valores de Svedberg no
de dinas como la unidad de nuestro problema
son aditivos, es decir, dos partículas 5S no
tendremos:
crean una partícula 10S. Sin embargo, hay

109
una correspondencia tosca que para las esto conduce a que se agite el contenido
proteínas esféricas es de: de los tubos y se eche a perder el trabajo.
2 S = 10 kdal 4. No alzar las tapas de la centrífuga cuando
4 S = 50 kdal está en movimiento.
8 S = 160 kdal 5. Ante cualquier dificultad o duda consulte
16 S = 400 kdal
al profesor.
–13
La unidad Svedberg es igual a 10
segundos; no pertenece al SI y puede Potenciometría
suplirse por 0,1 picosegundo (ps) o 100 Muchas de las reacciones que se realizan en
femtosegundo (fs). En las moléculas menos las células son reacciones de oxidación y de
densas que el medio de suspensión, como reducción, es decir, en las que se transfieren
las lipoproteínas, el desplazamiento es hacia electrones.
la superficie y se expresa en Svedberg de La electroquímica estudia las
flotación (Sf) y permite la clasificación en: reacciones químicas en las que hay
LDL, HDL y VHDL (low density, high density transferencia de uno o más electrones.
y very high density) con Sf de 0 a 10, 10 a La oxidación es la pérdida o liberación de
400 y las muy densas que no flotan y tienen electrones y la molécula que los cede se
una densidad mayor de 1. denomina agente reductor.
El peligro del mal uso de la centrífuga deriva La reducción es la ganancia de electrones y
de la enorme fuerza que alcanza en el radio la molécula que los acepta se denomina
de rotación y el “peso” de las sustancias agente oxidante.
colocadas en el campo gravitacional del Cuando se oxida un agente reductor,
aparato. se transforma en su forma oxidada y como la
Se debe tener cuidado con los reacción es reversible las formas oxidada y
siguientes puntos: reducida del compuesto constituyen un par
1. Los tubos en las centrífugas deberán conjugado llamado par redox o par de
colocarse por pares para que no haya oxidorreducción.
diferencia de peso en un lado de la El proceso de oxidación siempre va
centrífuga. Enfrente de un tubo de un acompañado del proceso de reducción ya
peso determinado debe estar otro, en la que los electrones que cede una molécula
misma posición, con el mismo peso. El reductora son aceptados por una molécula
descuido de esta regla implica un desnivel oxidante, lo cual constituye las reacciones de
que, a las velocidades y fuerzas oxidorreducción o reacciones redox.
señaladas, puede romper los tubos y La determinación cuantitativa de la
dañar el aparato. Para balancear por concentración de las moléculas oxidantes y
pares los tubos lo mejor es usar una reductoras en una solución es el objeto de
balanza de dos brazos y ajustar el peso estudio de la potenciometría. En esta técnica
hasta que sea idéntico. se determina el potencial eléctrico generado
2. Para no forzar el motor arránquese por la transferencia de electrones en una
gradualmente la centrífuga hasta alcanzar reacción redox en la cual estén involucradas
la velocidad requerida. las moléculas a estudiar. Este potencial se
3. Nunca se frene una centrífuga; déjese mide en una celda electroquímica. La celda
parar por su propia inercia; el no hacer más común es la de Daniell (Fig. I.2), en la

110
que en dos compartimientos separados que presión del gas de una atmósfera. Sin
contienen ZnSO4 y CuSO4 se colocan cinc y embargo, en la práctica es inconveniente
cobre metálico, respectivamente; las dos porque se trata de un electrodo gaseoso.
soluciones se conectan por un puente salino
(un tubo que contiene agar embebido en una
solución de un electrolito como el KCl).
Cuando los dos electrolitos se conectan por
un alambre metálico, ocurre un flujo de
electrones del electrodo de cinc al electrodo
de cobre, el cual puede ser medido por
medio de un voltímetro. Cuando el cinc cede
los electrones se convierte en ion soluble,
mientras que el cobre disuelto, al aceptar los
electrones, se convierte en cobre metálico
que se deposita en el electrodo. El puente
salino cierra el circuito eléctrico entre las dos
Fig. 1.2 Celda de Daniell
soluciones.
El hecho de que fluya una corriente
Es por ello, que se usan otros
eléctrica del polo positivo (ánodo, que en
electrodos de referencia, como el de calomel,
este caso es el electrodo de cinc) al polo
en el cual el sistema de medición es mercurio
negativo (cátodo, que en este caso es el
y cloruro mercuroso. En el caso de este
electrodo de cobre), significa que hay una
electrodo, como sucede con todos los pares
diferencia de potencial entre los electrodos
redox, debe calibrarse con respecto al
denominada fuerza electromotriz (fem) de la
electrodo de hidrógeno.
celda. Dado que el potencial de un electrodo
Los pares redox de interés para el
está relacionado con la magnitud de cargas
bioquímico incluyen a menudo al ion
positivas existentes, la diferencia de potencial
hidrógeno como reactivo o como producto,
compara las cargas relativas existentes en
por lo que tales sistemas están en función del
dos puntos. Se denomina potencial de
pH del medio.
electrodo (E) a la diferencia de potencial
Hay diferentes tipos de electrodos:
respecto a un electrodo de referencia
los metálicos (como los de la celda de
arbitrario y depende de la concentración de
Daniell), los metálicos-sal insoluble (como el
las moléculas en la solución y de la
de plata/cloruro de plata), los gaseosos
temperatura.
(como el de hidrógeno, que se adsorbe sobre
En general, el potencial de los
platino), los electrodos selectivos de iones
electrodos se mide con referencia al
(que pueden ser para aniones o para
electrodo de hidrógeno al que se le ha
cationes) y los de vidrio (que son electrodos
asignado
selectivos de iones, especiales para
En general, el potencial de los electrodos se +
determinar H ). Estos últimos son los más
mide con referencia al electrodo de
utilizados ya que una de las aplicaciones
hidrógeno al que se le ha asignado
prácticas más importantes de la
arbitrariamente un potencial de cero a 25o C
potenciometría es la determinación del pH.
a una concentración de 1 mmol/L y una

111
Dentro del electrodo de vidrio hay un El esquema del circuito de un
alambre de plata con un extremo sumergido potenciómetro típico se encuentra en la figura
en una solución de HCl 0.1M. El bulbo de la I.3. La sensibilidad del medidor se puede
parte inferior es de un vidrio especial, ajustar para cambios de acuerdo a la
+
permeable a los iones H . La superficie temperatura (botón de control de
interior de esta membrana de vidrio está en temperatura). Con el botón de calibración a
contacto con la solución de HCl y la exterior cero se introduce un voltaje lateral en el
con la solución cuyo pH se quiere determinar. circuito que permite que la lectura
En las dos superficies la membrana de vidrio corresponda al pH de la solución reguladora
absorbe agua y forma una capa de gel a tipo. Los medidores de pH se construyen de
través de la cual difunden los iones tal manera que el cero de la escala del
hidrógeno y desplazan a otros iones de la potenciómetro corresponda a un pH de 7. El
estructura del vidrio (como sodio) y esto medidor se calibra antes de usarlo, primero
provoca el establecimiento de un potencial.
En una solución amortiguadora que contenga
Cl– se sumerge un electrodo de Ag/AgCl.
Cuando el electrodo se coloca en una
solución cuyo pH es diferente al de la
solución amortiguadora, aparece una
diferencia de potencial entre los dos
extremos, lo cual es una medida de la
diferencia de los dos valores de pH.
La determinación más precisa del pH
se realiza en un pH-metro que consiste,
fundamentalmente, en un potenciómetro
diseñado para emplearse con un sistema de
electrodo de vidrio. Como una unidad de pH
corresponde a 59 milivoltios a 25º C, el con una solución reguladora de pH 7,
mismo medidor se puede usar con dos ajustando el cero para que dé la lectura
escalas para hacer lecturas en mv o en pH. exacta; se lava el electrodo con agua
El electrodo de vidrio consiste en una destilada o desionizada y se calibra con una
membrana de vidrio situada al final de un segunda solución reguladora de pH 4 ó 10;
tubo de vidrio o plástico de paredes más se ajusta nuevamente el medidor, ahora con
gruesas. En el tubo se encuentra ácido el control de temperatura, para que dé la
clorhídrico diluido saturado de cloruro de
lectura exacta; luego se determina el pH de
plata y un hilo de plata que conecta a la la solución problema.
terminal del voltímetro con un electrodo de
referencia. El pH se determina midiendo la Electroforesis
diferencia de potencial a través de la
Una partícula coloidal o un ion provistos de
membrana de vidrio que separa la solución a carga eléctrica emigran hacia el ánodo o el
la cual se quiere determinar el pH, de la
cátodo bajo la influencia de un campo
solución de referencia cuya concentración de eléctrico externo. Si las partículas de una
hidrogeniones se conoce.
mezcla tienen diferentes velocidades de

112
desplazamiento, puede aprovecharse esta se realiza en un canal vertical y la densidad
propiedad para separarlas. El empleo de de la solución por debajo del frente debe ser
fuerzas eléctricas para lograr esta separación mayor que la de arriba, ya que en caso
se llama electroforesis y depende contrario el sistema de frentes se destruiría.
fundamentalmente de la carga y no de la En el método, la solución a separar se coloca
masa molar de las partículas cargadas. Esta encima del medio amortiguador conductor.
técnica se ha empleado en la La técnica es difícil y costosa, aunque puede
separación de proteínas, péptidos, presentar la ventaja de que se evitan las
nucleótidos, ácidos orgánicos y porfirinas, interacciones de los solutos con cualquier
entre otros compuestos. Es importante superficie y se eliminan así los efectos
considerar que en el caso de una proteína su adsorbentes y desnaturalizantes. Además,
carga depende del pH del medio, por lo que puede operarse en medios acuosos, a baja
es posible emplear la técnica para determinar temperatura y bajo condiciones favorables de
el punto isoeléctrico de la misma. pH y fuerza iónica.
Si se aplica un campo eléctrico a Electroforesis zonal. Uno de los
través de una solución, la fuerza que actúa problemas que presenta la técnica anterior es
sobre las moléculas cargadas de soluto la necesidad de estabilizar las zonas de
depende de la carga eléctrica (e); del número soluto contra la convección gravitacional y la
de cargas en la molécula (z), y de la fuerza difusión. Esto originó el empleo de otra
del campo eléctrico (E). Inmediatamente técnica de electroforesis: la electroforesis
después de poner a funcionar el campo, las zonal. En ella, el empleo de gradientes de
partículas cargadas se aceleran hasta que densidad, sólidos porosos o fibrosos y geles
alcanzan un equilibrio, o sea, cuando la permite resolver el problema de la difusión y
carga electrostática queda equilibrada por la de la convección gravitacional.
fuerza de fricción que ejerce el medio En este tipo de electroforesis la
disolvente; entonces, se mueven a una mezcla de solutos a separar se aplica como
velocidad constante. La velocidad por unidad una mancha o una banda delgada en un
de campo eléctrico se denomina movilidad punto del canal electroforético. Los solutos
electroforética. Dado que la fricción depende migran con distintas velocidades (de acuerdo
del tamaño de la partícula y de la viscosidad a su movilidad) y se separan en zonas
discretas. La distancia de migración es
del medio en que se mueve, la facilidad con
directamente proporcional al voltaje aplicado
la que se mueve una partícula cargada
y al tiempo. Los solutos migran a través del
depende directamente de su carga e
solvente que baña un soporte sólido. Este
inversamente de su tamaño y de la
soporte puede ser de diversa naturaleza y
viscosidad del medio.
cada uno presenta algunas ventajas y
Existen dos tipos de electroforesis: la
desventajas en su uso. Los soportes más
frontal y la zonal.
comunes son papel, acetato de celulosa,
Electroforesis frontal o en medio
almidón, agar, agarosa y poliacrilamida.
líquido. Es el método clásico de Tiselius en el
Dado que en el caso de los geles es posible
que la separación de los componentes de
un manejo del tamaño del tamizado para
una mezcla se realiza en varios frentes o
lograr una máxima eficiencia en la
límites que se traslapan a lo largo del
procedimiento. El movimiento de los frentes

113
separación, este método es el más usado en agarosa y uno ramificado y muy ácido
bioquímica. llamado agar o pectina. El agar y la agarosa
En la técnica hay que cuidar algunos son solubles en soluciones acuosas a 100oC
aspectos que pueden afectar la separación y solidifican a temperatura ambiente; forman
como: la selección adecuada del soporte, del geles de buena firmeza cuando se usan a
amortiguador, vigilar la temperatura de la una concentración de 0.5 a 2%. Su estructura
cámara, la intensidad del campo eléctrico, el se mantiene por numerosos puentes de
tiempo, etcétera. hidrógeno entre cadenas adyacentes de
Electroforesis en papel y en acetato polisacáridos. El gel de agarosa ofrece
de celulosa. La electroforesis en papel fue el ciertas ventajas sobre otros soportes; posee
primer método de separación en zonas en un una porosidad elevada y uniforme, lo que
campo eléctrico. Es una técnica sencilla y favorece la migración regular de las
rápida, que requiere pequeñas cantidades de sustancias cargadas, lo cual se traduce en
muestra y que es especialmente útil en las una mayor resolución.
electroforesis de alto voltaje para separar Para realizar la electroforesis en
moléculas de bajo peso molecular como estos medios se prepara el gel sobre una
aminoácidos, péptidos, oligonucleótidos y superficie de vidrio. Una vez solidificado el
otros compuestos orgánicos con grupos gel, se hacen pocillos en él para aplicar en
cargados. Ha sido muy utilizada en el mapeo ellos la muestra. Se lleva a cabo, o se
bidimensional de proteínas (fingerprinting), "corre", la electroforesis y, al final, se fija la
para identificar diferencias entre proteínas preparación, se tiñe y se seca. La técnica se
similares, probar que una proteína es ha usado en combinación con la
producto de otra de mayor tamaño, etcétera. inmunodifusión en el análisis inmunológico
Dado que el papel tiene una alta de proteínas y en la cuantificación de
actividad endosmótica*, lo que causa algunos proteínas inmunoprecipitables.
problemas en la electroforesis, ha sido La electroforesis en agarosa ha
sustituido por el acetato de celulosa, que permitido el estudio de las moléculas del
tiene una estructura microporosa uniforme, DNA, cuyo tamaño impide que puedan
actividad endosmótica baja y en el que la penetrar en los geles de poliacrilamida, pero
adsorción de las proteínas ha sido eliminada. que penetran fácilmente en geles de agarosa
6
En los aparatos en que se realizan a 0.2%, si tienen un peso hasta de 150 x 10 ,
6
estas técnicas el soporte se humedece al o a 0.8% si pesan hasta 50 x 10 .
sumergirlo en el amortiguador y colocarlo de Es posible separar moléculas de
tal manera que se establezca el contacto con DNA que difieren sólo 1% de peso molecular
las soluciones en que están los electrodos. según sea la concentración de la agarosa.
Los aparatos se tapan para evitar la Para detectar las bandas, se sumerge el gel
evaporación y para mantener una atmósfera en una solución de bromuro de etidio el cual
húmeda dentro del aparato. se pega al DNA y fluoresce cuando se excita
Electroforesis en geles de agar y con luz ultravioleta. El peso molecular se
agarosa. El agar es una mezcla de determina por la distancia de migración.
polisacáridos que se obtiene de ciertas También se han usado estos geles de
especies de algas marinas. Está constituido agarosa para la obtención de mapas de
de dos componentes principales: uno lineal o restricción, los que permiten ver diferencias

114
entre dos moléculas de DNA, localizar en la determinación de los pesos moleculares
mutaciones, detectar recombinaciones de de proteínas.
fagos, aislar fragmentos de DNA deseados, Electroenfoque. Si se coloca una proteína en
distinguir entre el DNA lineal, circular o un gradiente de pH sujeto a un campo
superenrollado. eléctrico, se moverá hasta alcanzar su punto
Electroforesis en geles de isoeléctrico, donde permanecerá sin
poliacrilamida. Los geles de poliacrilamida moverse. Esta técnica es lo que se conoce
son geles totalmente sintéticos que han como electroenfoque. Para formar un
sustituido a los geles de almidón en el gradiente estable y continuo de pH se usan
estudio rutinario de proteínas por métodos anfolitos sintéticos de una gran variedad de
electroforéticos. Esto ha sido posible gracias pesos moleculares y rangos de pH. Cuando
a la gran facilidad con que puede variarse se establece el campo eléctrico, los anfolitos
según el contenido total del monómero y su migran y generan el gradiente de pH según
grado de entrecruzamiento. Dada su sus propios puntos isoeléctricos. Esta técnica
capacidad de filtrador molecular, se ha ha sido utilizada en combinación con la
empleado para separar compuestos con separación por pesos moleculares en la
base en su peso molecular para lo que se electroforesis bidimensional como método de
usa lauril sulfato de sodio (SDS) con el objeto análisis de proteínas.
de evitar las diferencias individuales en las *Nota: Cuando se aplica un potencial
cargas de las proteínas. eléctrico a un líquido contenido en un soporte
Los amortiguadores que se usan pueden ser no conductor el líquido se moverá hacia uno
continuos (en los que se utiliza el mismo u otro electrodo, en favor o en contra del
amortiguador en los tanques de los movimiento electroforético, alterando la
electrodos y los sistemas electroforéticos) y movilidad electroforética de las partículas
discontinuos, en los que hay dos tipos de cargadas. Este fenómeno se conoce como
geles: el de separación, o de poro cerrado, endosmosis. Si el soporte está cargado,
en el cual se resuelven los componentes de induce la orientación de las cargas con signo
una mezcla (aquí es importante el uso del opuesto en el líquido, lo que ocasionará al
amortiguador adecuado) y el gel aplicar la corriente eléctrica que ocurra un
concentrador, o de poro abierto, que sirve flujo del líquido dentro del canal
para concentrar la muestra. A los geles se les electroforético. Este fenómeno es lo que se
puede incorporar sustancias disociantes conoce como actividad endosmótica y puede
como la urea y el SDS sin que sean causar problemas en las separaciones
afectados. También pueden emplearse electroforéticas.
agentes reductores como el 2
mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los SOLUCIONES
puentes disulfuro de las proteínas. Una solución es una mezcla homogénea de
Las dos aplicaciones principales de por lo menos dos componentes: una fase
la electroforesis discontinua son la dispersa, que es el soluto (sustancia que se
determinación de la pureza de proteínas y el disuelve), y una dispersora que constituye el
análisis de los componentes de una mezcla. solvente o disolvente (la sustancia que
La electroforesis en gel de poliacrilamida en disuelve al soluto) y que, generalmente, se
presencia de SDS también se ha empleado encuentra en mayor proporción. Las

115
soluciones más utilizadas en bioquímica son relación es peso a peso (p/p), peso a
las que tienen agua como solvente. volumen (p/v) o volumen a volumen (v/v).
La solubilidad de un soluto en un Ejemplos:
solvente depende de la naturaleza de éstos,
Solución porcentual p/p. Solución al
de la temperatura y, en el caso de un gas, de
10% de NaCl contiene 10 g de la sal por 100
la presión. La solubilidad generalmente está
g de solución. El peso/peso porcentual
dada en gramos de soluto por 100 g de
expresa el número de gramos del soluto en
solvente.
100 gramos de la solución final.
Se llaman soluciones diluidas las que
contienen una proporción relativamente
%p/p = g de soluto x 100
pequeña de soluto; se llaman soluciones
100 g de solución
concentradas las que contienen una gran
cantidad de soluto. Sólo son posibles
Solución porcentual p/v. Solución de NaCl
soluciones concentradas cuando el soluto es
a 10% p/v: 10 g de NaCl en 100 ml de
muy soluble.
solución. Esto expresa el número de gramos
Una solución saturada contiene la
de soluto en 100 ml de la solución final. En
cantidad de soluto disuelto necesaria para la
bioquímica, si no se especifica otra situación,
existencia de un equilibrio entre las
las soluciones porcentuales deben
moléculas disueltas y las moléculas en
entenderse como p/v.
exceso que no están disueltas. Esta solución
se forma por medio de una vigorosa agitación
con exceso de soluto. Existe una solución %p/p = g de soluto x 100
sobresaturada cuando en la solución hay 100 ml de solución
presente más soluto que en una solución
saturada. Para prepararla se forma una Solución porcentual v/v. Se utiliza
solución saturada a temperatura elevada y se cuando el soluto y el solvente son líquidos. El
enfría cuidadosamente para evitar la v/v indica el número de volúmenes de soluto
cristalización. Las soluciones sobresaturadas por 100 volúmenes de solución. Solución de
son inestables y con facilidad se convierten etanol a 30% v/v: 30 ml de éste en 100 ml de
en soluciones saturadas. solución. Esto quiere decir que por cada 100
Las mencionadas soluciones son ml de solución, 30 ml corresponden al soluto
poco precisas y no indican, de manera y el resto, hasta completar 100 ml, al agua
cuantitativa, el soluto ni el solvente; los destilada o al solvente empleado.
métodos cuantitativos más comunes, que %v/v = volumen de soluto x 100
sirven para expresar la concentración (la 100 volúmenes de solución
medida numérica de la cantidad relativa de Es importante insistir que los
soluto en la solución) de las soluciones, son términos porcentuales expresan siempre una
las porcentuales, las molares y las normales. relación, es decir, podemos variar los
volúmenes siempre y cuando no perdamos
Soluciones porcentuales
dicha relación. Por ejemplo, si nos pidieran
En las soluciones porcentuales no se toma
preparar 50 ml de una solución de alcohol
en cuenta el peso fórmula del soluto. En este
etílico a 20%, seguiríamos el siguiente
tipo de soluciones se debe especificar si la
planteamiento:

116
100 ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro Soluciones molares
50 ml de sol. tienen x ml de alcohol puro Una solución molar se define como el
número de moles de soluto en un litro de
X = 20 x 50 x 10 solución:
100 M= No. de moles
litro de solución
Resultado: necesitamos 10 ml de
alcohol puro y completar un volumen de 50 donde un mol es igual al peso atómico o
ml. molecular expresado en gramos (átomo
El alcohol etílico común es de 96% gramo o molécula gramo). Un mol contiene el
23
de pureza (v/v). Por lo tanto, si no contamos número de Avogadro (6.023x10 ) de
con alcohol puro y quisiéramos preparar una partículas, átomos o moléculas.
solución de alcohol a 20%, seguiríamos el
Si un mol de una sustancia se
siguiente planteamiento:
disuelve en agua hasta un volumen de un
100 ml de sol. tienen 96 ml de alcohol puro litro, se obtiene una solución 1 molar (1M).
X ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro Por ejemplo, si quisiéramos preparar
una solución 1 molar de NaCl, tendríamos
X= 20 x 100 = ml de solución que considerar, primero, su peso molecular
96 (Na:23 + Cl:35.5 = 58.5) y este valor en
Resultado: necesitamos 20.83 ml de gramos disolverlo en agua, hasta completar
solución de alcohol a 96% y completar un un litro.
volumen de 100 ml. Ahora bien, si nos piden preparar 400
Si tan sólo queremos 50 ml de esta ml de una solución 0.5 M de NaCl: ¿cuántos
nueva solución, entonces: gramos de NaCl deben pesarse?

100 ml de sol. de alcohol a 20% tienen 1. Sabemos que un mol de NaCl es de 58.5
20.83 ml de alcohol a 96% g.
50 ml de sol. de alcohol a 20% tienen X ml 2. Haremos el siguiente planteamiento:
de alcohol a 96% Una sol. 1M tiene 58.5g de NaCl.
Una sol. 0.5M tiene X g de NaCl.
X= 50 x 20.83 = 10.41ml
100 X= 0.5 x 58.5 = 29.25 g de NaCl
100
Resultado: necesitamos 10.41 ml de
alcohol de 96% y completar con agua 3. De acuerdo con la definición de solución
destilada hasta un volumen final de 50 ml. molar, los 29.25 g de NaCl los
consideramos en un litro de solución, pero
como nos piden preparar 400 ml haremos
el siguiente planteamiento:
En 1000 ml de sol. hay: 29.25g de NaCl
En 400 ml de sol. hay: X g de NaCl

117
X= 400 x 29.25 = 11.7 g de NaCl entre el número de átomos de hidrógeno
1000 sustituibles en la molécula. El ácido sulfúrico
(H2SO4), de peso molecular 98, tiene dos
Resultado: necesitamos 11.7 g de átomos de hidrógeno sustituibles en cada
NaCl y disolverlo hasta completar un molécula; por lo tanto, su peso equivalente
volumen de 400 ml. es: 98/2 = 49.
En este ejemplo, como podemos ver, El peso equivalente de un hidróxido
hemos multiplicado la molaridad del se calcula dividiendo el peso molecular entre

problema (0.5 mol/L) por el peso molecular el número de grupos hidroxilo (OH ) de la
de NaCl (58.5 g) y por el volumen del pro- molécula. El hidróxido de aluminio Al (OH)3

blema (400 ml). Posteriormente dividiremos contiene tres grupos OH por molécula; su
entre 1 litro (1 000 ml). Para simplificar el peso molecular es de 78; por lo tanto, su
procedimiento podemos aplicar la siguiente peso equivalente es 78/3 = 26.
fórmula: El peso equivalente de una sal se
calcula dividiendo el peso molecular entre la
V x PM x M = gramos de la sustancia valencia total de los cationes (cargas
1000 positivas) que contenga la fórmula. La
valencia del sodio es 1, y el sulfato de sodio
Na2SO4 (peso mo-lecular 144) tiene dos
En donde:
iones de sodio en cada molécula; por lo
V= Volumen del problema en ml.
tanto, el peso equivalente del sulfato de sodio
PM = Peso molecular de la sustancia en g.
será 144/2 = 72.
M= Molaridad del problema.
El peso equivalente de un oxidante
(reductor) se calcula dividiendo el peso
Soluciones normales
molecular entre el número de electrones
Son las que contienen el peso equivalente de
ganados (o perdidos) que puedan aportar por
una sustancia en gramos por litro de
molécula.
solución:
Recordemos la fórmula utilizada para
N = peso equivalente calcular la cantidad de sustancia necesaria
litro de solución para preparar cualquier cantidad de una
solución determinada:
Para calcular la cantidad de una sustancia
donde el peso equivalente de una sustancia
que se necesita pesar para preparar un
es el número de unidades de esta sustancia
volumen determinado de una solución de
que puede combinarse con una unidad de
cualquier normalidad, se aplica una fórmula
hidrógeno:
semejante:

V x Eq x N = gramos de la sustancia
Peso equivalente = peso molecular
1000
n

n = número de hidrógenos sustituibles. Ejemplo: preparar una solución 0.1 N


de cloruro de calcio (CaCl2) para obtener un
Ejemplo: el peso equivalente de un
volumen de 300 ml:
ácido se calcula dividiendo el peso molecular

118
V = 300 ml medidas son tan cercanas que con gran
N = 0.1 frecuencia se utilizan indistintamente.
Eq = peso molecular del CaCl2 La presión osmótica depende del
111/2 = 55.5 número de partículas y no de su carga, ni de
sustituyendo=300 ml x 55.5 g x 0.01 N= 1.67 su masa; la misma fuerza osmótica es
1000 ejercida por una molécula grande, como una
proteína, con peso molecular de varios miles
Resultado: necesitamos 1.67 g de y muchas cargas, como por una molécula de
+ –
CaCl2 para preparar 300 ml de una solución glucosa o un ion de Na o de Cl . Así para
0.1 N. determinar el efecto osmótico de una
solución hay que sumar los efectos de todas
Soluciones osmolares las partículas incapaces de atravesar la
El fenómeno de la ósmosis se presenta membrana independientemente de su peso
molecular.
cuando una solución está separada de su
Por ejemplo: el cloruro de sodio en
solvente por una membrana semipermeable.
solución acuosa se disocia casi
La ósmosis es la difusión de solvente a +
completamente en iones sodio (Na ) y cloruro
través de la membrana desde la parte de –
menor a la de mayor concentración. La (Cl ). Por lo tanto, cada molécula da origen a
dos partículas osmóticamente activas, y una
presión osmótica es la presión que debe
solución osmolar contiene media molécula
aplicarse sobre la solución de mayor
gramo (peso molecular expresado en
concentración a fin de impedir el paso del
gramos) por litro, o sea:
solvente (ósmosis) a través de la membrana.
Las membranas biológicas tienen 1 osm/l = 58.5/2 = 29.25 g/l ó también
permeabilidades dis-tintas y se dice que son 1 mol de NaCl = 2 osm/l
semipermeables, es decir, que son
En cambio, la glucosa en solución no
permeables de forma selectiva para las
se disocia y para esta sustancia la solución
moléculas del solvente o pequeñas
osmolar contiene un mol en gramos por litro:
moléculas, pero no permiten el paso libre de
todas las moléculas disueltas. 1 mol de glucosa = 180 g/l = 1 osm/l
Las mediciones cuantitativas La mayoría de los líquidos corporales
demuestran que la presión osmótica es tiene una presión osmótica que concuerda
proporcional a la concentración molar (para con la de una solución de cloruro de sodio a
sustancias no disociables) del soluto, por lo 0.9 % y se dice que esta solución es
que una solución osmolar es aquella que isosmótica con los líquidos fisiológicos.
contiene un mol de la sustancia en gramos
en un litro de solución; el osmol es una Soluciones isotónicas
medida del número total de partículas en Las soluciones isotónicas con respecto unas
solución. La concentración expresada en a otras ejercen la misma presión osmótica;
osmol por litro se llama osmolaridad; el osmol es decir, contienen la misma concentración
por kilogramo de disolvente se denomina de partículas osmóticamente activas. Cuando
osmolalidad; en las soluciones muy diluidas, se habla de soluciones isotónicas en
como son las del cuerpo humano, las dos el laboratorio, suele tratarse de las que

119
tienen la misma presión osmótica que el unidad de solución original diluida a un
plasma sanguíneo, que es apro- volumen final de 10, esto es, 1 volumen de
ximadamente de 0.3 osmolar (300 solución original con 9 volúmenes de
miliosmoles). Las soluciones fisiológicas de solvente (volumen final = 10).
concentración menor a 300 mosm/l se llaman Para calcular la concentración de la
hipotónicas; cuando su concentración es solución diluida se multiplica la concentración
mayor de 300 mosm/l se denominan de la solución original por la dilución
hipertónicas. expresada como fracción.
Una solución es isotónica con Ejemplo: una solución de 300 mg/100
respecto a una célula viva cuando no ocurre ml se diluye en la razón 1:10. La
ganancia ni pérdida neta de agua en la concentración de la solución final es:
célula, ni se produce ningún otro cambio en 300 x 1/10 = 30 mg /100 ml.
ésta cuando entra en contacto con la
solución. Si se hace más de una dilución, a
El término isotónico, que significa: partir de una misma solución, la
igualdad de tono, se emplea en medicina concentración de la solución final se obtiene
como sinónimo de isosmótico; pero los al multiplicar la concentración original por el
términos isotónico y tonicidad sólo deben producto de las diluciones. Ejemplo: la
emplearse en relación con un líquido solución anterior se diluye a su vez en la
fisiológico. Por ejemplo, una solución de razón 1:100. La concentración de la solución
ácido bórico que es isosmótica con la sangre será: 300 x 1/10 x 1/100 = 0.3 mg/100 ml.
y el líquido lagrimal, sólo es isotónica con el La dilución y redilución sistemáticas
líquido lagrimal, ya que esta solución de una solución se llaman diluciones
ocasiona hemólisis de los eritrocitos porque seriadas. Para encontrar la concentración en
las moléculas de ácido bórico atraviesan un tubo dado de la serie, se multiplica la
libremente la membrana eritrocitaria a dilución en ese tubo por cada una de las
cualquier concentración. En consecuencia, diluciones precedentes, incluida la del tubo
isotonicidad connota compatibilidad original.
fisiológica, mientras que isoosmoticidad, no Ejemplo: hacer una dilución seriada
necesariamente. En otras palabras, la 1:2, 1:4, 1:8, etcétera, a un volumen final de
tonicidad es una fracción de la presión 1 ml.
osmótica total de la solución; por tanto, la Paso 1: a 0.5 ml de la solución a
tonicidad de una solución no se puede diluir, añadirle 0.5 ml del diluyente y
predecir únicamente por su composición ya etiquetarlo como tubo 1 (dilución 1:2,
que intervienen también las propiedades volumen 1 ml).
distintivas de la membrana limitante. Paso 2: transferir a otro tubo 0.5 ml
de la dilución anterior y agregarle 0.5 ml de
Cálculo y expresión de diluciones diluyente (dilución 1:2). La dilución final
La dilución consiste en preparar una solución obtenida se calcula al multiplicar la dilución
menos concentrada a partir de una solución del tubo 1 (o anterior) con la nueva dilución
inicial más concentrada. Las diluciones se (1/2 x 1/2), igual a 1:4. Los pasos siguientes
expresan usualmente como una razón se hacen igual que para el paso 2. En el
matemática, como 1:10. Esto significa una

120
siguiente cuadro se muestra un resumen de la vez, en forma suave para no lesionarla; no
lo anterior. debe demostrársele miedo o repugnancia
Tubo Dilución para evitar que se ponga nerviosa e
intranquila, lo que puede ocasionar que
1. 0.5 ml(1) = 0.5 ml (1) = 1:2(4)
muerda.
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
La palma de la mano se coloca sobre
2. 0.5 ml(1) = 0.5 ml (1) = 1:4 (4)
el dorso del animal; la cabeza de éste entre
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
el dedo pulgar y el dedo índice; de esta
es decir: 1/2 ; x 1/2 = 1:4 manera se logra su inmovilidad y es posible
3. 1/4 x 1/2 = 1:8 levantar el animal y moverlo de lugar.
4. 1/8 x 1/2 = 1:16 Muchas veces es necesaria la
5. 1/16; ; x 1/2 = 1:32 inyección intraperitoneal de alguna sustancia,
para lo cual se sostendrá al animal con una
(1) Volumen de la solución original a diluir. mano, como se indicó antes, mientras con la
(2) Volumen del agua necesaria para la
otra se introduce la aguja de la jeringa
dilución.
(3) Volumen final. formando un ángulo de 10º con la pared
(4) Dilución obtenida. abdominal en el cuadrante inferior izquierdo,
(5) Volumen de la solución diluida 1:2 (o ligeramente a la izquierda de la línea media;
anterior).
es importante mantener el ángulo de la aguja
porque, si éste se abre, la aguja puede llegar
MANEJO DE MATERIAL BIOLÓGICO
a la vejiga o al intestino. Para tener la
Se le llama material biológico al conjunto de
seguridad de estar en la cavidad peritoneal,
seres vivos o sus productos utilizado en el
hay que jalar el émbolo de la jeringa para que
desarrollo del trabajo en el laboratorio. La
se haga el vacío; si el vacío no se hace y, por
utilidad e importancia de este material es
el contrario, se extrae líquido, es probable
muy grande ya que muchos fenómenos de
que se haya puncionado la vejiga.
los seres vivos sólo pueden estudiarse en
Para la extracción de vísceras, como el
ellos mismos, por ejemplo, la
hígado, es necesario sacrificar al animal, lo
experimentación de nuevos fármacos o los
cual se logra fácilmente y con menor
mecanismos que se presentan en entidades
sufrimiento para la rata anestesiándola o
patológicas y la producción de las mismas en
descerebrándola, o sea, seccionando la
forma experimental. Del correcto manejo
médula espinal a nivel del cuello mediante un
dependerá en gran parte el éxito de la
golpe certero en este lugar contra el borde de
experimentación y la veracidad de los
una mesa. Después se prosigue a la
resultados obtenidos. A continuación se
darán algunas generalidades sobre el manejo extracción de la víscera y se abre la pared
del material biológico utilizado en las abdominal con unas tijeras o bisturí.
prácticas de este Manual.
Extracción de sangre para análisis
Animales El profesor a cargo del grupo deberá estar
El animal utilizado más comúnmente en el presente en el momento de la extracción; de
laboratorio de bioquímica es la rata. Para su lo contrario, por ningún motivo, el alumno
correcto manejo es importante la forma cómo podrá hacerla por su cuenta.
se sujeta, lo cual se hará con firmeza, pero a

121
Procedimiento para obtener una muestra 4. Después que se ha entrado a la vena, la
de sangre venosa: sangre llenará los tubos vacíos del
sistema vacutainer. Si se usa jeringa, se
1. Para que un alumno sea considerado
necesita una ligera succión con ésta para
como voluntario deberán tomarse en
obtener la muestra (por lo general,
cuenta algunos antecedentes como: no
aparece una gota de sangre en la base de
padecer o haber padecido hepatitis o
la aguja). Una succión excesiva puede
alguna otra enfermedad
causar colapso de la vena. Tirar del
infectocontagiosa; no tener problemas de
émbolo de la jeringa hasta que se haya
coagulación y no ser muy aprensivo. El
extraído la cantidad de sangre deseada.
donador (de preferencia con las venas
5. Soltar la ligadura antes de extraer la aguja
visibles), estará sentado con el brazo
con un movimiento rápido y uniforme
sobre la mesa.
mientras que se ejerce una presión sobre
2. Con una ligadura elástica, aplicar un
la herida con una torunda.
torniquete en el brazo por encima del sitio
6. Mantener la presión por un momento o
de la punción (esto causa congestión
hasta que se haya detenido el sangrado.
venosa y evita el retorno de la sangre). El
Cubrir la punción con una cinta adhesiva.
uso prolongado del torniquete causa
7. Retirar la aguja de la jeringa en el
estasis de la sangre y
contenedor de punzocortantes y vaciar lo
hemoconcentración. Si las venas no se
más pronto posible la muestra de sangre
hacen prominentes, pedir al donador que
en un tubo de centrífuga procurando
cierre y abra la mano varias veces.
deslizar la sangre suavemente por la
Escoger una vena fija y de buen calibre,
pared del tubo (si es que no se utilizó el
localizarla y palparla con el dedo para
sistema Vacutainer).
sentir su consistencia y trayectoria; antes
de puncionar, asegurarse de que la Alerta clínica
jeringa no contenga aire y que el émbolo Si es difícil detener el sangrado de la
se deslice suavemente. Las dimensiones punción, elevar la zona y aplicar una cubierta
de la aguja y la jeringa dependen de la que presione. Los hematomas se pueden
cantidad de sangre que se necesita así evitar:
como del tamaño e integridad de la vena • Usando una buena técnica.
que se usa. También se puede usar el • Aflojando el torniquete antes de retirar la
sistema Vacutainer que consiste en un aguja.
tubo al vacío, un mango y una aguja • Aplicando la presión suficiente sobre el
recolectora de muestras múltiples. sitio de punción después de completar el
3. Limpiar minuciosamente la zona con una procedimiento.
torunda humedecida con alcohol de 70º y La sangre obtenida puede tratarse de
dejar secar espontáneamente. Sujetar la diferentes maneras según el empleo que se
piel con el pulgar izquierdo; puncionar le vaya a dar.
primero la piel y luego penetrar la vena Para obtener suero. La sangre se
con el bisel de la aguja hacia arriba recibe en un tubo de ensayo o de centrífuga
siguiendo el trayecto de la vena. seco y se deja coagular a temperatura
ambiente o en una estufa o baño de agua a

122
37º C. Si se va a trabajar inmediatamente clasificación, manejo y disposición final de
con el suero, separar con un aplicador de estas sustancias, lo cual nos permite
madera el coágulo y centrifugar el resto del identificar los peligros y disminuir los riesgos.
tubo. Si se desea la separación espontánea
del suero, se deja a temperatura ambiente Manejo de materiales peligrosos y/o
por unas horas para que el coágulo se biológico infecciosos
retraiga. Debe evitarse que el suero se Precauciones generales: Se refieren a las
mezcle con porciones de coágulo; si esto medidas para minimizar la difusión de
sucede, es necesario centrifugar y volver a enfermedades transmisibles, especialmente
separar el suero con una pipeta Pasteur. hepatitis B o SIDA y para evitar incendios,
Para obtener plasma. Hay que evitar cortaduras o exposiciones simples, de corta
la coagulación por medio de un duración o accidentales a sustancias
anticoagulante (heparina, citrato de sodio o químicas peligrosas.
EDTA) en el tubo que recibe la sangre. 1. Manejar cualquier líquido corporal,
Mezclar suavemente por inversión. sangre, plasma, suero, orina, tejido,
Centrifugar a 2 500 rpm durante 5 minutos y cadáver o cultivo como potencialmente
extraer enseguida el plasma sobrenadante infeccioso. Todas las sustancias químicas
con una pipeta Pasteur; pasarlo a otro tubo. proporcionadas, equipos y materiales del
laboratorio deberán ser utilizados con el
La sangre, el plasma o el suero y
máximo cuidado, atendiendo a las
todos los recipientes que los contengan
indicaciones de peligrosidad y cuidados
deben considerarse como material
específicos, según el caso.
potencialmente infectante, por lo que
(torundas, agujas, tubos, etcétera) deberán 2. Se debe conocer los símbolos y los
depositarse, de acuerdo a su clasificación, códigos de color sobre las precauciones y
en envases que tengan impreso el símbolo los peligros en el laboratorio. Asegurarse
de riesgo biológico y entregarse a la de conocer la localización de
coordinación del laboratorio para su extinguidores, del botiquín y de las salidas
desinfección y desecho. de emergencia.

3. Usar bata en el laboratorio, la cual deberá


MEDIDAS DE SEGURIDAD
estar cerrada durante todo el tiempo que
Durante el desarrollo del curso de
se permanezca en el laboratorio.
bioquímica, en el laboratorio se pueden llegar
a utilizar sustancias o muestras biológicas 4. Lavar las manos y usar guantes. Los
que, en ocasiones representan riesgos guantes deben usarse para efectuar
potenciales a la salud, debido a que pueden punciones vasculares y para manipular
ser: corrosivas, reactivas, explosivas, tóxicas, sangre, líquidos corporales, cultivos de
inflamables o biológico infecciosas. microorganismos, sustancias o superficies
Aunque los laboratorios se contaminadas. Después del uso de
consideran en general lugares de trabajo cualquier material biológico, se procede al
seguros, esto es así sólo cuando conocemos lavado de manos con los guantes
y seguimos las normas de seguridad puestos. Después de quitarse los guantes
existentes en la materia acerca de la debemos lavarnos nuevamente las
manos.

123
5. Todos los materiales desechables y no evitar la contaminación de alimentos,
desechables se deben descontaminar en cigarros o manos que después se llevarán
una solución 1:10 de hipoclorito de sodio a la boca o con las que se tocarán
de 4 a 7 % de concentración, durante más alimentos (nunca ingerir alimentos en el
de 20 minutos antes de ser desechados. laboratorio). Por último, nunca pipetear
con la boca, especialmente los ácidos
6. Los elementos punzocortantes deben
fuertes, productos cáusticos, oxidantes
desecharse en recipientes especiales
fuertes y compuestos venenosos.
destinados para ello, los cuales deben
estar etiquetados con la leyenda que 9. Seguir las indicaciones del profesor y del
indique "Peligro, residuos punzocortantes personal a cargo del área de prácticas. Es
biológico-infecciosos" y marcados con el una regla de laboratorio que todos los
símbolo universal de riesgo biológico. accidentes personales, por triviales que
Nunca reencapuchar las agujas sean, se comuniquen inmediatamente al
profesor. Nunca realizar actividades
7. Limpiar las superficies potencialmente
experimentales sin la supervisión del
contaminadas con hipoclorito de sodio al
responsable del grupo.
1%, con alcohol al 70% o con agua
oxigenada. 10. Manejar adecuadamente los residuos
peligrosos derivados de las prácticas,
8. Todas las sustancias químicas son
identifique su nivel de riesgo y el
potencialmente tóxicas y peligrosas, por
mecanismo para su desecho. Queda
lo que se deberá:
prohibido desechar sustancias a la tarja o
a) Conocer las propiedades (venenosas, por cualquier otro medio, sin autorización
cáusticas o corrosivas) y el uso correcto del responsable del grupo. Las hojas de
de las mismas. seguridad correspondientes incluyen qué
b) Nunca probar, así como tampoco inhalar, hacer en caso de accidentes y la forma
directamente las sustancias. Para correcta de desechar los residuos.
determinar el olor se acerca la tapa del 11. Indicaciones generales para evitar
frasco cuidadosamente a la nariz, o bien, incendios o explosiones al utilizar
si se trata de sustancias volátiles o solventes inflama-
vapores acercar éstos con la mano a la bles. Los solventes inflamables (alcohol,
nariz. éter, cloroformo, acetona, tolueno, xilol,
c) Evitar el contacto de sustancias con la etcétera) se utilizan en todos los
piel, especialmente la cara; usar bata y laboratorios, por lo que se recomiendan
guantes para proteger la ropa y el cuerpo; las siguientes precauciones:
nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca a) No fumar en el interior del laboratorio.
de un matraz con líquidos en ebullición o
b) No utilizar la llama del mechero sin
material de reacción hacia el vecino, o a
cerciorarse de que no hay cerca líquidos
sí mismo, ya que puede proyectarse el
inflamables. No mantener el mechero
contenido; para las sustancias que no
encendido cuando esté fuera de uso.
tienen un efecto pronunciado sobre la
piel, pero cuya ingestión es peligrosa,

124
c) Si se vierten accidentalmente sobre las parado sobre un piso húmedo. Siempre
mesas, secar de inmediato con un trapo apagar y desconectar los aparatos antes
húmedo y enjuagar éste en el chorro de de cualquier manipulación.
agua, exprimiéndolo.
Pictogramas de seguridad
d) Nunca calentar un líquido orgánico sobre En las etiquetas de productos químicos de
una flama. Para calentar, usar baño de uso en el laboratorio además de la
agua o parrilla eléctrica. identificación del contenido, calidad y límite
de pureza de lo que contiene, podemos
En caso de incendio debe hacerse lo
encontrar pictogramas (símbolos
siguiente: para un incendio pequeño en un
internacionalmente aceptados y reconocidos)
vaso, un matraz, etcétera, éste se cubrirá con
que indican los riesgos principales. Los
un recipiente mayor o se ahogará el fuego
pictogramas de seguridad son:
con un trapo mojado o se combatirá con un
extinguidor.
Cuando el fuego sea de un solvente
RIESGO BIOLÓGICO
derramado sobre la mesa o el piso, se
utilizará un extinguidor de bióxido de
carbono. Si el fuego no puede vencerse de
inmediato, se evacuará el laboratorio y se
avisará al departamento contra incendios de
la institución. Todo aquello que pueda contener
12. Los accidentes más frecuentes que bacterias, virus u otros microorganismos con
ocurren en el laboratorio son las lesiones capacidad de infección o cuando contiene
debidas a cortes, laceraciones, etcétera, toxinas producidas por microorganismos que
por cristalería rota. causen efectos nocivos a los seres vivos.
Ejemplo: jeringas, sangre.
En caso de heridas pequeñas dejar
Medidas de prevención: evitar el
que sangre unos segundos; tener cuidado de
contacto con los ojos, la piel y las vías
no dejar partículas de vidrio en la herida y
respiratorias. Utilizar elementos de protección
aplicar un desinfectante.
personal.
Las heridas de mayor importancia
deben ser atendidas por un médico. Mientras
tanto, evitar el sangrado aplicando presión en E = EXPLOSIVO
un punto más arriba la herida o antes de ella
(no mantener la presión por más de 5
minutos).

13. Casi siempre, los choques eléctricos en


el laboratorio son de poca importancia;
las precauciones de seguridad se Es toda sustancia sólida o líquida o
deducen de la naturaleza del peligro. mezcla de sustancias que pueden
Nunca tocar un aparato eléctrico con las desprender gases a una temperatura, presión
manos húmedas o cuando se esté y velocidad tales que pueden detonar,

125
producir violentas deflagraciones, o explotar Sustancias que pueden causar
al exponerse al calor cuando están irritación a la piel, mucosas, o los ojos, por
parcialmente confinadas. Ejemplo: azida de contacto inmediato, prolongado o repetido,
plomo, fluoruro de carbono. pudiendo también provocar inflamación.
Medidas de prevención: Ejemplo: cloroformo, SDS, hipoclorito de
almacenarlas alejadas de otros productos, sodio, aminoantipirina.
evitar todo Medidas de prevención: evitar el
choque, fricción y mantener alejadas de contacto con los ojos, la piel y las vías
fuentes de calor, chispas o fuego. respiratorias. Utilizar elementos de protección
personal.

O = OXIDANTE F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE


Sustancias cuyo punto de ignición es menor
Sustancias capaces de aportar de 0°C y su punto de ebullición máximo de
oxígeno cuando reaccionan con otra 35°C.
sustancia, por lo que cuando entran en F = INFLAMABLE
contacto con combustibles o inflamables Sustancias líquidas cuyo punto de ignición es
avivan la reacción pudiendo desarrollar menor a 40°C. Ejemplo: etanol, tolueno, éter
reacciones violentas. Ejemplo: nitrito de dietílico.
sodio, hiposulfito de sodio. Medidas de prevención: mantener
Medidas de prevención: mantener alejado de fuentes de calor, de ignición o
alejadas de las sustancias combustibles o eventuales chispas, de materiales
inflamables, ya que pueden favorecer los combustibles y oxidantes.
incendios y dificultar su extinción.

Xn = NOCIVO N = NOCIVO PARA EL MEDIO


Sustancias de menor toxicidad pero AMBIENTE
pueden causar daños a la salud. También se Aquellas sustancias o preparados que
incluyen aquellas mezclas o preparados que cuando son liberados al medio ambiente
tienen alguna sustancia que puede ser tóxica pueden presentar un efecto inmediato o
pero que se encuentra a una baja diferido, poniendo en peligro a alguna
concentración en la mezcla. especie. Ejemplo: tiourea, o-toluidina.
Medidas de prevención: evitar que
Xi = IRRITANTE
los derrames alcancen los desagües, tratar

126
los residuos en condiciones ambientalmente riesgos específicos en frases cortas que son
adecuadas. adaptables a las distintas sustancias.
Las frases "S" brindan los consejos
de prudencia o las medidas de prevención
más importantes relacionadas con el riesgo
asignado a esa sustancia química y que
permitirán su manipulación y
almacenamiento en forma segura. En
algunos casos se mencionan combinaciones
T+ = ALTAMENTE TÓXICO, T TÓXICO
de frases R o de frases S, cuando dos o más
Sustancias que pueden causar daño en
riesgos tienen relación entre sí (cuadro I.6).
forma aguda o crónica a la salud o causar la
muerte si son inhaladas, ingeridas o se
El símbolo de la N.F.P.A. (National Fire
absorben por la piel, aún en pequeñas
Protection Association)
cantidades. Ejemplo: azida de sodio,
El símbolo de la N.F.P.A. es un sistema de
dinitrofenol, bromuro de etidio.
identificación de riesgos de un producto
Medidas de prevención: evitar todo
químico, en tres categorías principales:
contacto directo. Utilizar elementos de
"salud", "inflamabilidad" y "reactividad"
protección personal. Emplear estrictas
indicando el grado de severidad por medio de
medidas de higiene personal y del ambiente
una escala numérica desde (4) que indica el
del laboratorio.
riesgo mayor, (3) riesgo severo, (2) riesgo
moderado, (1) riesgo menor, hasta (0) que
representa ausencia de riesgo.
Este símbolo es útil para alertar
acerca del riesgo de ese producto y, a su
vez, puede ayudar a determinar los cuidados
C = CORROSIVO a tener en cuenta en el almacenamiento y en
Sustancias capaces de atacar y destruir los caso de emergencias, de derrames o
tejidos orgánicos si entran en contacto con salpicaduras.
ellos o bien atacar ciertos metales o La información se presenta por
materiales. Ejemplo: hidróxido de sodio, medio de una estructura espacial en forma
ácido clorhídrico, ácido acético. de rombo principal, dividido a su vez en otros
Medidas de prevención: evitar el cuatro.
contacto con los ojos, la piel y las vías El rombo azul a la izquierda identifica
respiratorias. Utilizar elementos de protección el riesgo para la salud. El rombo rojo en la
personal. parte superior indica el riesgo por
inflamabilidad. El rombo amarillo a la derecha
Identificación sobre los riesgos señala el riesgo por reactividad o
específicos y los consejos de prudencia inestabilidad. El rombo blanco en la parte
Frases "R" éstas advierten acerca del riesgo inferior indica riesgos especiales tales como:
más común asignado a esa sustancia W reactivo al agua, COR corrosivo, AIR
química, por medio de la enumeración de reactivo al aire, OXY oxidante. Ejemplo:

127
de microorganismos, se clasifican en: sangre,
cultivos, patológicos (tejidos, órganos, partes
y fluidos corporales, etcétera), no anatómicos
3 C (gasas, algodones, jeringas, etcétera) y
o
a n punzocortantes (lancetas, agujas, pipetas
Pasteur, etcétera).
Residuos municipales: son aquellos
que no representan peligro para la salud y
Ácido clorhídrico sus características son similares a los
residuos domésticos comunes.
Hojas de seguridad Residuos especiales CRETI: son
Cada práctica cuenta con las hojas de aquellos residuos que constituyen un peligro
seguridad para cada reactivo o sustancia que para la salud por sus características
se utilice en el laboratorio. agresivas tales como: Corrosividad,
Las hojas de seguridad proveen Reactividad, Explosividad, Toxicidad e
información sobre (cuadro I.7, pág. 100): Inflamabilidad Es importante no olvidar que,
• Los componentes de un producto, su la mezcla de residuos municipales con
reactividad, las medidas precautorias residuos biológico infecciosos hace que se
principales o las advertencias más consideren en su totalidad como biológico
importantes. infecciosos, mientras que la mezcla de
• Los elementos de protección personal que residuos biológico infecciosos con peligrosos
se recomienda emplear en la manipulación. CRETI se deben consideran como peligrosos
• Las vías de ingreso y los órganos blanco. CRETI.
• Las medidas por derrame accidental y de
primeros auxilios.
Envasado y etiquetado de RPBI para su
• La información toxicológica.
desecho.
• Las recomendaciones para su
Los residuos RPBI deben ser envasados de
almacenamiento.
acuerdo con sus características físicas y
• Las condiciones para la disposición de los
biológico infecciosas conforme la norma
residuos.
oficial mexicana 087-ECOL-95 (cuadro I.8).
Es importante destacar que todos los
Clasificación de los residuos
envases tengan impreso el símbolo universal
Los residuos que se generan en laboratorios
de riesgo biológico y leyendas que indiquen
de instituciones de enseñanza o
la peligrosidad de los residuos y el tipo de
investigación así como en hospitales y
residuos que contienen.
clínicas contienen residuos no peligrosos o
Los contenedores para
municipales, residuos biológico infecciosos y
punzocortantes deben de ser: • De color rojo.
residuos especiales.
• De paredes rígidas.
Residuos peligrosos biológico
• De polipropileno.
infecciosos (RPBI): es todo aquello que ha
• Resistentes a fracturas y pérdida del
entrado en contacto con pacientes o
contenido al caerse.
animales, sus muestras biológicas y/o cepas
• Destruibles por métodos fisicoquímicos.

128
• Esterilizables y con tapa, la que puede tener Las hojas de seguridad serán proporcionadas
o no separador de agujas. para cada práctica en el laboratorio.
Precauciones: depositar los RPBI, de De manera general, los envases
acuerdo a su clasificación, inmediatamente destinados a los residuos CRETI deben
después de su generación. ser de cristal de color ámbar, con
No compactar los residuos durante el capacidad de uno a cuatro litros, latas de
envasado y no mezclar residuos de diferente
aluminio para solventes (capacidad
máxima de 20 litros) y, en algunos casos
clasificación.
recipientes de plástico, siempre y cuando
Una vez identificados, separados y
las características fisicoquímicas de la
envasados correctamente los residuos
sustancia a envasar lo permita. Cada
peligrosos, el personal responsable del residuo debe envasarse en forma
laboratorio se encargará de su recolección, individual y colocar en el frasco
tratamiento y disposición final así como de respectivo el pictograma de seguridad
las medidas necesarias para la desinfección, correspondiente.
esterilización y limpieza del material y equipo
utilizado en el laboratorio.

Frases R Frases S Combinación de frases

R7 Puede provocar incendios S3 Conservar en sitio fresco R 20/21 Nocivo por inhalación y contacto por la piel

No comer ni beber Tóxico: peligro de efectos irreversibles graves por


R 23 Tóxico por inhalación S 20 R 39/25
durante la manipulación ingestión

No tirar los residuos por Mantenga el contenedor bien cerrado y en un lugar


R 36 Irrita los ojos S 29 S 3/7
los desagües fresco

Llevar guantes de Utilice ropa protectora adecuada, guantes y


R 45 Puede ser cancerígeno S 37 S 36/37/39
protección adecuados protección facial o gafas

Cuadro I.6 Ejemplos de frases S y R

Manejo de residuos CRETI

El manejo, consistente en la separación,


envasado y almacenamiento de cada uno de
los reactivos peligrosos CRETI utilizados en
las prácticas deberá realizarse de acuerdo a
cada reactivo en cuestión según lo indicado
en las hojas de seguridad.
El manejo de accidentes, tales como
derrames, ingestión o salpicaduras, así como
la aplicación de primeros auxilios deberán de
realizarse de acuerdo al reactivo en cuestión
según lo indicado en la hoja de seguridad.

129
Ácido clorhídrico

Identificación Primeros auxilios


Fórmula química: HCl Ojos: lavar inmediatamente con agua corriente
Apariencia y olor: solución de color ligeramente durante 15 mi nutos.
amarillo o incolora
con olor característico muy penetrante. Piel: quitar ropa y zapatos contaminados, lavar
Marcaje liquído corrosivo inmediatamente la zona dañada con abundante
Sinónimos: ácido muriático, cloruro de hidrógeno. agua.

Inhalación: mover a la persona al aire fresco; si se


Generalidades dificulta la respiración proporcionar oxigeno y
Está presente en el sistema digestivo de muchos mantenerlo caliente y en reposo, no dar a ingerir
mamiferos y una deficiencia de éste provoca nada.
problemas en la digestión; un exceso provoca
úlceras gastricas. La disolución acuosa grado Ingestión: no provocar vómito y dar a beber agua
reactivo contiene aproximadamente 38% de HCl. continuamente, por ejemplo, una cucharada cada 10
minutos o dar a beber leche de magnesia.
Propiedades física y químicas
PM: 36.46 En todos los casos de exposición, el afectado debe
Solubilidad: soluble en agua ser transportado al hospital tan pronto como sea
pH de disoluciones acuosas: 0.1 (1.0N), 4.0(0.001N). posible.
Reacciona con la mayorÍa de los metales
desprendiendo hidrógeno. Manejo y almacenamiento
Con agentes oxidantes como peróxido de hidrogeno Peligro: corrosivo y venenoManténgase en envase
genera cloro, el cual es muy peligroso. de vidrio, en lugares secos, bien ventilados, alejados
Niveles de toxicidad. de materiales oxidantes y fuentes de ignición o calor.
DL50 (oral en conejos): 900 mg/Kg, inhalación en
ratas): 3124 ppm/1 h. Tratamiento en caso de accidente
Control de fuego: en caso de accidente utilizar CO2,
CLMo (concentración letal minima publicada): polvo químico seco o arena seca. Los extinguidotes
(inhalación en humanos) 1300 ppm/30 min; de fuego se eligen dependiendo de los alrededores,
ya que el HCl no arde.
3000ppm/5 min.
Fugas y derrames: ventilar el área y protegerse con
Riesgos el equipo de seguridad necesario. Cubrir el derrame
Produce gas inflamable cuando se encuentra en con bicarbonato de sodio o una mezcla de 50:50 de
contacto con metales. Se generan v apores tóxicos e hidroxido de calcio y cal sodada, mezclar
irritantes de cloruro de hidrógeno cuando se calienta. cuidadosamente. Mantener el materil lejos de fuentes
Inhalación: elgas causa dificultad para respirar, tos, de agua y drenajes hasta no ser neutralizado como
inflamación y ulceración de nariz, tráquea y laringe. se indicó anteriormente.
Exposiciones severas causan espasmo de la laringe
y edema en los pulmones. Desechos
Contaco con los ojos y piel: es un irritante severo de Neutralizar las soluciones concentradas de ácido
ojos y piel, puede causar quemaduras serias, clorhídrico con carbonato de calcio o cal y diluir con
dermatitis, reducir la visión o, incluso, la pérdida total agua cuidadosamente. La disolución resultante
de ésta. puede verterse al drenaje, con abundante agua. En
caso de soluciones diluidas,
Ingestión: produce corrosión de las membranas
mucosas de la boca, esófago y estómago, causa
náusea, vómito, disfagia, sed intensa y diarrea

Cuadro I.7. Hoja de seguridad para el ácido Clorhídrico.

130
Cuadro I.8 Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.

TIPO DE RESIDUO ESTADO FÍSICO ENVASADO COLOR

Sangre Sólido Bolsa de plástico Rojo


Líquido Recipiente hermético

Cultivos y cepas de Sólidos Bolsa de plástico Rojo


agentes infecciosos Líquidos Recipiente hermético

Residuos no Sólidos Bolsa de plástico Rojo


anatómicos Líquidos Recipiente hermético

Patológicos Sólidos Bolsa de plástico Amarillo


Líquidos Recipiente hermético
Objetos
punzocortantes Sólidos Recipientes rígidos Rojo
usados y sin usar

131
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

II
EXPERIMENTOS

132
Práctica 1
Soluciones
Tiempo de la práctica 3 horas Material

Objetivos Por equipo:


• 3 vasos de precipitado de 10 ml
Que el alumno: • 3 pipetas de 1.0 ml
• 3 pipetas de 5.0 ml
1. Identifique la existencia de soluciones • 3 pipetas de 10.0 ml
en los sistemas biológicos. • Gradilla con 6 tubos de ensayo
2. Explique los cálculos y procedimientos • Eritrocitos humanos lavados en
para preparar soluciones porcentuales, solución
molares y normales, así como las • Salina isotónica
diferentes diluciones de éstas. • Solución de azul de metileno al 1.0%
3. Presente ejemplos de soluciones • Cloruro de sodio en cristales (NaCl)
utilizadas en medicina (solución • Balanza granataria
isotónica, Ringer, Darrow y Hartman).
Por grupo:
Responda a las siguientes preguntas: • 1 Microscopio marca Leica.

1. ¿Qué es una solución? Procedimiento


2. ¿Cuántas clases de soluciones 1. Hacer los cálculos correspondientes
existen? para comprobar que la solución a 0.9%
3. ¿Qué significan los siguientes de NaCl es isotónica con respecto al
términos: mol, solución molar y solución plasma (ver pag. 121). Considerar que:
normal? a) El cloruro de sodio se disocia en
4. ¿Qué significan: v/v, p/v, p/p y ppm? solución acuosa en los iones sodio y
5. ¿Cuál es la composición de las cloruro, por lo que la concentración
siguientes soluciones: solución isotónica iónica se duplica (1 mmol/l = 2 mosm/l).
de cloruro de sodio, suero glucosado a b) La presión osmótica normal del
5%, Ringer-lactato? plasma es de 290-310 mosm/l.
6. ¿Cuáles son los tipos de soluciones
que existen in vivo? Mencionar ejemplos. 2. Preparar 20 ml de una solución de
7. ¿Qué es una solución isotónica? NaCl a 4.5% (etiquetar como solución 1).
8. ¿Qué es una solución osmolar?
9. ¿Cómo se calcula la osmolaridad de 3. A partir de la solución anterior,
una solución? preparar 25 ml a 0.9% (solución 2) y 50
10. ¿Qué les pasa a los eritrocitos ml a 0.045% (solución 3).
cuando se ponen en contacto con
soluciones salinas de diferente 4. Colocar en tres tubos de ensayo 2 ml
osmolaridad? de las diferentes soluciones de cloruro
11. ¿Qué se entiende por dilución y de sodio preparadas en los puntos 2 y 3.
dilución seriada de las soluciones? Con la ayuda de un gotero (dejando caer
lentamente por las paredes del tubo) 2
gotas de eritrocitos lavados. Mezclar con
cuidado y dejar reposar a temperatura
ambiente unos minutos. Valorar el grado
de hemólisis que sufren los eritrocitos

133
cuando se ponen en contacto con las Problemas
diferentes soluciones.
1. Hacer los cálculos para preparar una
5. De las 3 soluciones prepradas con los solución de KCl al 3%.
eritrocitos tomar una gota de cada una y
por separado colocarlas en un porta- 2. Hacer los cálculos para prepara una
objetos, colocar un cubre-objetos y solución de CaCl2 0.25 M se requieren
observarlas al microscopio 15 ml.

Ver las intrucciones para el uso del 3. Calcular el volumen de H2SO4 se


microscopio requiere para preparar una solución 3N
40 ml volumen final.
6. Hacer la dilución y redilución (dilución
seriada) de la solución de azul de 4.- Prepare 500 ml de una solución
metileno como se muestra en el 0.125 M de NaHC03
siguiente cuadro:
5.- 250 ml de H2SO4 0.1 M
DILUCIÓN SERIADA DE AZUL DE
METILENO 6.-100 ml de glucosa 0.5 M
Tubo H2O (ml) Sol de azul Volumen de
de metileno transferencia 7.-Cuantos mililitros de HCl 0.1M se
1 2 0.5 ml* - requieren para preparar una solución
contiene 0.025 M de HCl
2 2 - 0.5 ml
3 2 - 0.5 ml 8.-Cuantos gramos de soluto se
4 2 - 0.5 ml requieren para preparar las siguientes
5 2 - 0.5 ml soluciones
6 2 - 0.5 ml 125 ml de NaCl al 10%
50 ml de Ca(NO3)2 al 3.35 %
*Nota: para mezclar al hacer las 750 ml de CaCl2 al1.5%
diluciones se debe succionar y soplar
con cuidado la pipeta en cada tubo 9.-Cual presenta la osmolaridad más alta
varias veces antes de transferir la NaCl 0.1M o Na2SO4 0.08 M
dilución al siguiente tubo.
10.- A un enfermo hay que inyectarle 15
Resultados g de KCl y 126 g de glucosa ¿Cuánta
1. Expresar en forma ordenada los agua habrá que añadirles para que
cálculos efectuados para cada uno de los resulte un suero 0.4 osmolar?
ejercicios.
11.- Expresar en meq/l una
2. Deducir el movimiento o no del concentración de Ca2+ de 11 mg/dl.
solvente cuando se ponen en contacto
eritrocitos con soluciones hipo, hiper e 12.- Una solución 14 g de glucosa en 25
isoosmóticas. ml ¿Cuál es la concentración molar de la
solución?
3. Calcular la dilución y la concentración
de azul de metileno en cada uno de los 13.- Calcular la osmolaridad a partir de la
seis tubos de la dilución seriada (ver pág. composición de algunas soluciones
93). Asegúrese que la coloración como Dextrosa a 10 % en solución salina
obtenida disminuya gradualmente a 0.45%.
conforme avanza la dilución.

134
14.- Dextrosa a 5 % en solución salina a
0.2 %.

15.- Describir la composición de las


siguientes soluciones Hartman, Ringer y
Darrow y demostrar su osmolaridad con
respecto al plasma.

Referencias

1. Villazón SA, Cárdenas CO,Villazón


DO, Sierra UA. Fluidos y electrólitos.
México: JGH Editores; 2000.

2. Peña-Díaz A, Arroyo BA, Gómez PA,


Tapia IR, Gómez EC. Bioquímica.
Undécima reimpresión de la 2a. ed.
México: Editorial Limusa; 2004.

3. Laguna J, Piña E. Bioquímica de


Laguna. 5a.ed. México: Editorial El
Manual Moderno; 2002: p. 41-56.

4. Holum JR. Fundamentos de química


general, orgánica y bioquímica para
ciencias de la salud. México: Editorial
Limusa Wiley; 2001.

5. Farias GM. Química clínica. Décima


edición México: Editorial El Manual
Moderno; 1999.

6. Bloomfield MM.Química de los


organismos vivos. México: Editorial
Limusa; 1997.

135
INSTRUCCIONES PARA EL USO DEL MICROSCOPIO MARCA LEICA

1. Nunca use un adaptador entre el 11. Ajuste los tubos oculares a la


cable y la fuente de alimentación. distancia de los ojos.

2. Use siempre el microscopio sobre una 12. Al término del uso del microscopio
superficie dura y estable. retirar la muestra de la platina.

3. Conecte el cable de alimentación del 13. Bajar la platina hasta el tope y


microscopio a una toma de corriente con regresarla a su posición original si es
conexión a tierra. Se suministra un cable necesario.
de tres terminales con toma a tierra.
14. Colocar el revolver de los objetivos
4. Encienda el microscopio girando el de manera que el objetivo de 4X sea el
interruptor de control de la iluminación que quede en dirección de la lámpara.
situado en la parte inferior izquierda del
instrumento. 15. Desconectar el equipo y enrollar el
cable.
5. Coloque el interruptor de control de la
iluminación en el nivel más bajo. El 16. Limpiar la platina y oculares con un
control de iluminación le permite ajustar paño humedecido con metanol o con un
la intensidad de luz. limpia cristal comercial.

6. Abra completamente el diafragma de 17. Colocar al microscopio la funda


apertura del condensador girando el contra el polvo para mantenerlo en
anillo hacia el extremo derecho. buenas condiciones físicas y mecánicas.

7. Usando el botón de enfoque del Partes del microscopio:


condensador, suba el condensador hasta 1) Oculares.
el extremo superior de su 2) Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X
desplazamiento. Iluminación critica y 100X.
únicamente: si el desplazamiento del 3) Platina.
condensador es excesivo, limítelo con 4) Diafragma.
el tornillo situado debajo de la platina 5) Lámpara.
hasta que la lente superior del Tornillo de la platina para desplazar la
condensador se encuentre debajo de la muestra.
superficie de la platina. Interruptor de control de la iluminación.
Tornillo macrométrico.
8. Coloque la preparación de la muestra Tornillo micrométrico.
con la muestra en la platina.
1
9. Gire el revólver hasta situar el
objetivo 4X en la posición de trabajo.
(pag X)
6
10. Suba la platina girando el mando de
enfoque macrométrico hasta que 9 3

observe la preparación y, finalmente,


4
enfoque la muestra con precisión 8
utilizando el mando de enfoque
micrométrico.
7 5

136
Práctica 2
Regulación del equilibrio ácido-base
después del ejercicio muscular intenso
y de la ingestión de bicarbonato de sodio

TIEMPO DE PRÁCTICA: 3 HORAS 6. ¿Cuáles son los sistemas


extrasanguíneos que tienden a mantener
Objetivos el pH extracelular?

1. Al finalizar la práctica, el alumno Escriba la ecuación de Henderson y


constatará las actividades reguladoras Hasselbalch aplicada al sistema HCO3–
del pulmón y el riñón para mantener el /H2CO3 y, con base en ella, conteste la
equilibrio ácido-base en condiciones que
tienden a romperlo. siguiente pregunta:
2. Mediante la determinación del pH
observará la variación de la a).¿Cómo participan el aparato
concentración de hidrogeniones en la respiratorio y el riñón en el control del pH
orina de un individuo que ha realizado sanguíneo?
ejercicio muscular intenso.
3. Relacionará los resultados obtenidos INTRODUCCIÓN
con los cambios metabólicos originados Dentro de los mecanismos de regulación
por el ejercicio muscular intenso. de que dispone el organismo para
mantener la integridad fisiológica,
Conteste las siguientes preguntas: aquellos involucrados en la homeostasis
del pH en los fluidos extracelulares
1. ¿Por qué es importante que se desempeñan un papel crucial para la
mantenga constante, dentro de ciertos supervivencia del individuo. En este
límites, el pH en el organismo? sentido cabe señalar que, como
resultado de la oxidación de los
2. ¿Cuáles son las fuentes de iones H+ alimentos, un humano adulto promedio
en el organismo? produce alrededor de 20 moles de CO2
3. ¿Cuáles son los sistemas reguladores al día, Al difundir a la sangre, gran parte
que facilitan la eliminación del H+ de dicho gas se combina con al agua en
producido en el organismo con el fin de el interior de los eritrocitos, produciendo
mantener constante el pH sanguíneo? ácido carbónico (H2CO3), reacción que
4. ¿Cuáles son las reacciones de es seguida por la disociación del H2CO3
formación del ácido carbónico (H2CO3) a para producir el anión bicarbonato HCO3-
partir de CO2 y H2O, y de su disociación y un ión hidrógeno (H+). Dado el carácter
para formar el ion bicarbonato? de ácido débil del H2CO3, la fracción
Escríbalas. disociada del mismo es pequeña; sin
5. ¿Qué sistemas amortiguadores embargo, considerando la gran cantidad
participan directamente en la regulación de CO2 que produce el organismo, la
del pH sanguíneo? acidificación de los fluidos extracelulares
sería importante en ausencia de
mecanismos reguladores. En el hombre,

137
la intervención de los pulmones y los y la regulación de la cantidad de HCO3-
riñones evita que ocurra tal acidificación reabsorbido hacia la sangre desde el
manteniendo en un nivel constante la filtrado glomerular. A diferencia del
concentración de H+ y, por consiguiente, intercambio gaseoso en los pulmones,
del pH. los mecanismos de regulación renal son
Para entender el papel que de situaciones patológicas donde se
juegan ambos órganos en la altera el intercambio de gases pulmonar
homeostasis del equilibrio ácido-base, (es decir, en la acidosis y alcalosis
debe tenerse presente que el sistema del respiratorias), en cuyo caso es necesario
ácido carbónico implica la participación aumentar o disminuir la tasa de
de un componente gaseoso o volátil (el reabsorción del HCO3- , o bien en
CO2) y dos componentes no volátiles (el estados fisiológicos que producen
HCO3- y el H+). En la sangre, el equilibrio cantidades importantes de ácidos
entre dichos componentes determina el orgánicos (por ejemplo, en la diabetes no
valor del pH sanguíneo, que puede controlada o durante el ejercicio intenso)
evaluarse mediante la bien conocida donde se incrementa la excreción de H+
ecuación de Henderson-Hasselbach. En Gran parte de este último aparece en la
el individuo normal, dicho valor fluctua en orina acomplejado con el amoniaco en
un promedio 7.4, siendo la sangre forma de ión amonio (NH4+) o asociado
venosa –enriquecida en CO2 ligeramente con el fosfato en forma de fosfato
más ácida en relación con la sangre monobásico de sodio (NaH2PO4),
arterial. Ahora bien, ya que a representando este último la llamada
temperatura ambiente el CO2 existe en acidez titulable. En general, el pH de la
estado gaseoso, la cantidad de CO2 orina será un reflejo de la producción de
disuelto en la sangre dependerá de la ácidos no volátiles por el organismo.
presión parcial (PCO2) ejercida por el El resultado final de los
mismo a nivel de los alvéolos mecanismos fisiológicos que participan
pulmonares. En el mundo, la magnitud en el mantenimiento del equilibrio ácido-
de dicha PCO2 es de aproximadamente 40 base es el de mantener el pH
mmHg , lo que se traduce en una extracelular en un rango compatible con
concentración de CO2 sanguíneo de el funcionamiento adecuado del
aproximadamente 25 mM; este último organismo manifieste en una alteración
valor incluye no solo el CO2 como tal, en la frecuencia y/o profundidad del
sino también el bicarbonato y el ácido proceso de inhalación-exhalación, dará
carbónico. Considerando el pH como resultado una alteración de la PCO2
sanguíneo normal y el pKa del sistema alveolar – aumentandola o
bicarbonato-ácido carbónico, la relación disminuyéndole -con la siguiente
[HCO3-] / [H2CO3 + CO2] es de modificación del del nivel de CO2]
aproximadamente 20. Es precisamente
la PCO2 la que es controlada por los Material
pulmones, ya que durante el proceso de • Diez probetas o vasos de precipitado.
la exhalación se elimina CO2, • Orina.
manteniendo constante la PCO2 en los • Solución de bicarbonato de sodio a 3%.
alvéolos y evitando así que que aumente • Potenciómetro.
el nivel de CO2, disuelto en la sangre.
Todo proceso o patología que se Método
Por lo que respecta a los riñones, Un alumno por equipo desayunará o
su participación en el mantenimiento de comerá normalmente (evitar ingestión de
un pH extracelular constante se da a jugos ácidos); después hará lo que se
través de dos mecanismos: la excreción indica a continuación.
de equivalentes ácidos (H+) hacia la orina

138
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes Hipótesis
de la clase práctica. Vaciar la vejiga y Elabore la hipótesis apropiada.
descartar esa orina.
Material
2. Tomar 250 ml de agua Orina
inmediatamente antes de la clase Solución de bicarbonato de sodi al 3%
práctica. Potenciómetro

3. Orinar en un vaso de precipitado de Método


100 ml. Anotar el volumen de la muestra. 1. Tomar 250 ml de agua una hora antes
4. Ingerir 250 ml de agua. de la clase práctica. Vaciar la vejiga y
descartar esa orina.
5. Realizar ejercicio muscular intenso,
como subir y bajar varias veces las 2. Tomar 250 ml de agua
escaleras de tres o cuatro pisos u otro inmediatamente antes de la clase
ejercicio sugerido por el profesor. práctica.
6. Obtener muestras de orina cada 15
minutos, como en el inciso 3, hasta 3. Orinar en una probeta de 100 ml.
completar por lo menos cinco muestras. Anotar el volumen de la muestra.

7. A cada muestra se le determinará el 4. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de


pH inmediatamente después de haber bicarbonato de sodio.
sido obtenida ya que con el tiempo el pH
tiende a aumentar debido a la pérdida de 5. Obtener muestras de orina cada 15
dióxido de carbono y a que el minutos, hasta completar por lo menos 5
crecimiento bacteriano produce muestras.
amoniaco a partir de la urea.
Análisis de resultados 6. A cada muestra se le determinará el
pH inmediatamente después de haber
Análisis de resultados sido obtenida.

Una vez obtenido el valor del pH para Análisis de resultados


cada una de las 5 muestras de orina,
trazar una gráfica de pH contra tiempo; Una vez obtenido el valor del pH para
interpretar los resultados y discutirlos en cada una de las cinco muestras de orina,
grupo. trazar una gráfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en
Objetivos (Segunda parte) grupo.

1. El alumno constatará el papel del riñón Referencias


en el mantenimiento del equilibrio ácido-
base en una situación de alcalosis 1. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto
metabólica provocada por la ingestión de con aplicaciones clínicas. 4a. ed.
bicarbonato de sodio. Barcelona: Editorial Reverte; 2004.
2. Mediante la medición del pH, observar 2. Montgomery R. Bioquímica: casos y
la variación de la concentración de texto. 6a. ed. Editorial Harcourt-Brace;
hidrogeniones en la orina de un individuo 1998: cap.4.
que ha ingerido una carga de 3. Villazón SA, Cárdenas CO,Villazón
bicarbonato de sodio.

139
Práctica 3
Titulación de un aminoácido
con una base y la aplicación
de la ecuación de Henderson y Hasselbalch.
Determinación del pK1 y del pK2

Tiempo de práctica: 3 horas 8. ¿Qué les pasa a estos grupos


funcionales cuando se someten a pH
Objetivo ácido o básico?
Que el alumno:
1. Experimente y entienda cómo se 9. ¿Se pueden usar los aminoácidos
comporta un sistema amortiguador de como amortiguadores de pH?
pH. 10. ¿Son los aminoácidos buenos
2. Aprenda el uso de la ecuación de amortiguadores a pH de 7.0?
Henderson-Hasselbalch. 11. ¿Cuál es el punto isoeléctrico de los
3. Aprenda a calcular el pK de un par aminoácidos que tienen un grupo amino
ácido-base. y un grupo carboxilo?
4. Mida el pH de diferentes sustancias y 12. ¿Cuál es la carga eléctrica de los
calcule su concentración de H+. aminoácidos que tienen dos grupos
5. Aplique estos conocimientos al estudio carboxilo a pH de 7.0?
de las propiedades de los aminoácidos. 13. ¿Cuál es la carga eléctrica de los
aminoácidos que tienen dos grupos
Para lograr lo anterior conteste las amino a pH de 7.0?
siguientes preguntas y
planteamientos: Material
1. ¿Qué es el pH de una solución? • Cuatro vasos de precipitado de 100 ml.
2. ¿Qué es un sistema amortiguador • Pipeta de 1 ml (para el NaOH).
ácido-base y para qué sirve? • Potenciómetro.
3. ¿Cuáles son los sistemas • Piceta para enjuagar el electrodo.
amortiguadores más importantes en • Glicina 0.025 mol/l pH 2.
biología? • Lisina 0.025 mol/l pH 2.
4. Escribir la ecuación de Henderson- • Ácido aspártico 0.025 mol/l pH 2.
Hasselbalch. • Histidina 0.025 mol/l pH 2.
5. ¿Qué es el pK de un par ácido base? • NaOH 1.0 mol/l.
6. ¿Por qué es importante la
concentración de H+ en los seres vivos? Método
7. Dibujar la fórmula de la glicina, de la
lisina, de la histidina y del ácido aspártico 1. Poner 20 ml de la solución de glicina
e identificar a los grupos α-amino y α- en un vaso de precipitado de 100 ml.
carboxilo de estos aminoácidos, así
como su radical, e indicar la naturaleza 2. Proceder a la medición del pH.
del mismo.

140
3. Añadir 0.1 ml de NaOH 1.0 mol/l. Método
Agitar el vaso y volver a medir el pH;
anotar los resultados. 1. Pedir a los alumnos desde la clase
anterior que traigan diferentes muestras,
4. Repetir el paso 3 hasta llegar a un pH tales como leche, café, refresco, orina,
aproximado de 12. saliva, jugo de frutas, etcétera.
2. Colocar los líquidos en un vaso de
5. Hacer lo mismo (pasos 1 a 4) para los precipitado y medir el pH en el
otros tres aminoácidos. potenciómetro.

Análisis de resultados Análisis de resultados


Calcular la concentración molar de H+ en
1. Hacer una gráfica de pH vs volumen
cada uno de las muestras estudiadas.
en ml de NaOH gastados luego de tomar
en cuenta que cada 0.1 ml de NaOH
Referencias
diluido en 20 ml aumenta la
concentración de OH en 5 mM.
1. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto
2. Localizar en la gráfica el pI y los con aplicaciones clínicas. 4a. ed.
diferentes pK de los aminoácidos. Barcelona: Editorial Reverte; 2004.

3. Mediante la ecuación de Henderson- 2. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios


Hasselbalch cuantificar la relación entre de bioquímica. 4a. ed. Barcelona:
cada par de especies ionizables de los Ediciones Omega; 2005
aminoácidos a diferentes pH.

4. Identificar a qué pH tienen poder


amortiguador.

Medición del pH y cálculo de la


concentración de H+ en diferentes
líquidos

141
Práctica 4
Estudio de las proteínas corporales

TIEMPO DE PRÁCTICA: 2 HORAS

Objetivos Aunque las proteínas tisulares son de gran


importancia en el organismo, las localizadas
1. Aplicar los conocimientos generales
en la sangre (la hemoglobina en los
sobre las proteínas al estudio de las
eritrocitos y las proteínas plasmáticas), por
proteínas corporales.
su gran accesibilidad, proporcionan con
2. Conocer las alteraciones más
facilidad información importante y, por lo
frecuentes de las proteínas plasmáticas y
tanto, son las más utilizadas en el
sus consecuencias.
laboratorio clínico.
3. Conocer los métodos generales para el
estudio de las proteínas plasmáticas.
Proteínas plasmáticas
4. Determinar la concentración sérica de
proteína total y de albúmina e interpretar La sangre está constituida por formas
los resultados obtenidos. celulares en suspensión (eritrocitos,
leucocitos y plaquetas) en un medio líquido
INTRODUCCIÓN llamado plasma. El plasma se obtiene
cuando, inmediatamente después de extraer
Las proteínas son polímeros lineales la sangre, se le agregan anticoagulantes
constituidos por los aminoácidos, que se como oxalato, citrato, EDTA o heparina y se
unen entre sí por medio de enlaces tipo centrifuga. Si se recoge sangre sin
amida denominados enlaces peptídicos. anticoagulante y se deja que ésta coagule,
Los polímeros compuestos por dos el líquido que se separa se llama suero. El
aminoácidos forman un dipéptido, por tres, suero carece de células y de factores de la
un tripéptido; cuando el número de coagulación incluyendo la proteína
aminoácidos es mayor, oligopéptidos y fibrinógeno, pues ésta ha sido transformada
polipéptidos o simplemente se denominan en fibrina insoluble en el proceso de la
péptidos. Las proteínas son moléculas coagulación. El fibrinógeno constituye sólo
constituidas por una o más cadenas de 3 a 6% del total de las proteínas en
polipéptidicas. plasma.
Las proteínas pueden ser clasificadas en El agua constituye 92 a 93% del plasma o
función de aspectos tan diversos como su suero y en ella encontramos electrólitos,
composición, su disposición espacial, su metabolitos, nutrientes, hormonas y
función biológica y su localización. proteínas en una proporción de 7 a 8%; de
Atendiendo a su localización dentro del estos solutos presentes, las proteínas son
organismo humano, las proteínas pueden las que están en máxima proporción,
clasificarse en: aproximadamente 6 a 8 g/dl de suero y este
valor es 0.2 a 0.4 g/dl mayor en plasma por
• Hísticas o tisulares, son las proteínas de
la presencia de fibrinógeno.
los tejidos.
Las proteínas plasmáticas son un grupo de
• Plasmáticas o hemáticas, son las
más de 100 moléculas distintas con
proteínas de la sangre.
características y funciones muy diversas,

142
aunque para fines prácticos el término Las enzimas se estudian evaluando su
"proteína plasmática" se usa para todas actividad catalítica o su concentración de
aquellas proteínas cuya concentración en masa mediante métodos inmunoquímicos.
el plasma sea mayor a 10 mg/dl y que También es posible el estudio fraccionado
cumplan con alguna función específica de las proteínas, para lo que se recurre a
dentro de él. Aproximadamente son 20 las otros procedimientos más precisos de gran
proteínas que cumplen con ambas ayuda clínica, como la electroforesis, la
definiciones. Todas estas proteínas, a inmunoelectroforesis y la inmunodifusión
excepción del fibrinógeno, se encuentran radial de proteínas plasmáticas.
tanto en plasma como en suero.
La mayoría de las proteínas plasmáticas
Proteína total
son sintetizadas por el hígado. Las
proteínas del plasma, al igual que otras La suma de las concentraciones de todas y
proteínas del organismo, son destruídas y cada una de las proteínas presentes en el
reemplazadas constantemente, con una plasma se conoce como proteínas totales y
vida media de aproximadamente 10 días. la cifra normal, en promedio, es de 7.1 g/dl,
Las funciones de las proteínas plasmáticas siendo las cifras límite entre 6 y 8 g/dl.
pueden agruparse en tres grandes grupos: Las proteínas totales están integradas por
de transporte como la transferrina, albúmina (más de la mitad) y las globulinas;
lipoproteínas y la albúmina; de defensa del estas últimas agrupan a todas las proteínas
organismo en el ataque a agentes extraños que no son albúmina.
o para limitar la respuesta inflamatoria, La concentración de las proteínas
como las inmunoglobulinas, la a1- plasmáticas en un momento determinado es
antitripsina, la haptoglobina y el el resultado de tres procesos: la velocidad
complemento. Por último, para mantener la de síntesis, el volumen del líquido en que se
presión oncótica de la sangre, necesaria distribuyen y la velocidad de degradación.
para prevenir pérdidas de líquido del En diversos estados patológicos, estos
espacio vascular al intersticial: la albúmina procesos pueden superponerse. En la
es el ejemplo más importante de este práctica, la determinación de la
grupo. concentración de la proteína total es un
parámetro que sólo refleja los cambios de
Métodos para el estudio de las proteínas las proteínas más abundantes, como la
plasmáticas albúmina y las inmunoglobulinas.
La determinación de proteína total es útil en
El laboratorio clínico cuantifica en una
el diagnóstico de enfermedades del hígado,
muestra de suero las concentraciones de
de los riñones y de la médula ósea.
proteína total y de albúmina. A partir de
estos datos, se calcula la fracción globulina
En clínica se puede observar hiper o
como la diferencia entre los dos resultados
hipoproteinemias, pero tanto en unas como
anteriores y la relación albúmina/globulina
en otras, frecuentemente existe disminución
se calcula a partir de estos últimos. La
de la albúmina ; casi nunca, aumento; y
concentración de otras proteínas se
generalmente aumento de globulinas, en
determina por grupos (por ejemplo, las
alguna de sus fracciones.
gamma-globulinas) o individualmente por
La determinación de las proteínas totales
métodos inmunoquímicos (por ejemplo
suele realizarse en el suero que carece de
algunas hormonas o marcadores
fibrinógeno y de cualquier anticoagulante
tumorales).

143
que pueda diluir levemente las proteínas en Las cifras normales de albúmina son de 4.5
el plasma. g/dl y las cifras límite entre 3.5 y 5 g/dl. La
relación normal A/G es mayor de uno y es
Albúmina un indicador importante en algunos estados
patológicos. Una relación A/G baja puede
La albúmina es la principal proteína
obtenerse porque existe hiperglobulinemia,
plasmática y es sintetizada y secretada por
hipoalbuminemia o ambas.
el hígado a razón de 12 g al día. Supone
alrededor de 25% de la producción proteica
Separación electroforética de las
hepática total y la mitad de toda su proteína
proteínas del suero
secretada. La albúmina es una proteína
Las técnicas de electroforesis, enfoque
globular compuesta por 585 aminoácidos
isoeléctrico y cromatografía de intercambio
en una sola cadena polipeptídica con 50%
iónico son algunas de las más importantes
de -hélice y 15% de estructura , posee
para el estudio de las proteínas basadas en
17 puentes disulfuro y tiene una vida media
su carga eléctrica.
entre 14 y 20 días.
En la electroforesis, si se colocan las
En el adulto normal se degradan
proteínas en un soporte (geles poliméricos,
diariamente 12 g de albúmina que pueden
almidón o papel) inmersas en una solución
proveer de aminoácidos para la síntesis de
amortiguadora a un pH determinado dentro
otras proteínas. Además de esta función
de un campo eléctrico, las proteínas se
nutritiva, la albúmina ayuda a conservar la
desplazan hacia un polo cargado. En
distribución normal de agua ya que produce
función de la relación entre el pH del
cerca de 80% del efecto osmótico de las
amortiguador y el pI de la molécula, ésta se
proteínas plasmáticas totales, debido a su
moverá hacia el cátodo, hacia el ánodo, o
alta concentración y bajo peso molecular.
permanecerá estacionaria (pH=pI), por
La albúmina interviene en el equilibrio
influencia del campo eléctrico externo.
ácido-básico y se encarga también del
Cuando se realiza la electroforesis en papel
transporte de varias sustancias como son
o acetato de celulosa a pH 8.6, que es un
los ácidos grasos, la bilirrubina, varias
pH significativamente superior al pI de las
hormonas e incluso algunos fármacos
principales proteínas plasmáticas cuyo peso
(sulfonamidas, penicilina G, aspirina, entre
molecular oscila entre 66 000 y 700 000, las
otras).
proteínas están cargadas negativamente y
Alteraciones en la concentración de se mueven hacia el polo eléctrico positivo.
albúmina. La más común es la disminución En función de su velocidad de
en su concentración o hipoalbuminemia. En desplazamiento, las proteínas del suero se
general, la disminución de 1 g de albúmina separan en cinco fracciones principales:
sérica equivale a una pérdida de 30 g de albúmina, globulina -1, globulina -2,
proteína tisular. Las principales causas de globulina , fibrinógeno  (para plasma
hipoalbuminemia son las enfermedades solamente) y globulina  (Fig. 5.1). La
renales, la desnutrición por baja ingestión electroforesis no separa los componentes
de proteínas y la síntesis deficiente como proteicos en sustancias químicamente
consecuencia de la insuficiencia hepática, puras: algunas de estas fracciones
sobre todo en casos de cirrosis. La representan decenas a cientos de proteínas
manifestación clínica más llamativa de la individuales y diferentes que sólo tienen en
hipoalbuminemia es el edema. común la misma velocidad de
desplazamiento electroforético. Hay que

144
tener en cuenta que la migración a distinta realiza mediante métodos como la
velocidad en el campo eléctrico, obedece a nefelometría, la turbidimetría y la
la forma y carga de la molécula y menos a inmunodifusión radial y métodos de
su tamaño o peso molecular. inmunoanálisis con reactivos marcados,
Las membranas de acetato de celulosa como el radioinmunoanálisis, el
tienen la ventaja de ser químicamente enzimoinmunoanálisis, el
homogéneas y poder transparentarse, con fluoroinmunoanálisis y el
lo que las sustancias que se separan luminoinmunoanálisis.
pueden cuantificarse por densitometría,
Tabla 5.1 Algunas proteínas cuya
una vez teñidas. Este aparato condujo
concentración se determina en el
históricamente a la separación y
suero
clasificación operacional de las proteínas
NOMBRE DE LA g/L PROPIEDADES Y MOTIVO PARA LA
del plasma humano (Fig. 5.1). El área de PROTEÍNA FUNCIÓN PRUEBA

cada pico determina la concentración de la Albúmina 35-50 Transporte de Desnutrición


proteína que posee esa movilidad múltiples Hepatopatía
particular. sustancias Neoplasias

Ig G 8-17 Inmunidad Inmunodeficiencias


humoral Mieloma

C3 0.5- Proteína del Obstrucción biliar


0.9 complemento Lupus eritematoso

Proteína C <0.005 Implicada en la Infecciones agudas


reactiva respuesta
inmune

Proteína fijadora 0.2- Une y Daño hepático


de vitamina D 0.55 transporta grave
vitamina D3

Haptoglobina 0.5- Fija la Hemólisis


3.2 hemoglobina Síndrome nefrótico

Fibronectina 0.25- Promueve la Sepsis


0.4 adhesión Leucemia
celular, une Pancreatitis aguda
fibrina
La electroforesis separa las proteínas del
Transferrina 2.3- Transporte de Hemocromatosis
suero en patrones que pueden ser
4.3 hierro malnutrición
altamente específicos para ciertas
enfermedades como sucede en el mieloma, Ceruloplasmina 0.2- Transporte de Daño hepático
0.55 cobre grave
el síndrome nefrótico, Síndrome nefrótico
la cirrosis o las quemaduras corporales
extensas (Fig. 5.1).
La tabla 5.1 describe algunas de las
proteínas cuya cuantificación es de utilidad
Proteínas específicas clínica.
Las proteínas plasmáticas de interés clínico
pueden determinarse por procedimientos
cuantitativos específicos que proporcionan
una información clinica más precisa que los
métodos anteriores. La cuantificación se

145
Alteraciones de las proteínas la aplicación de la ligadura para extraer la
plasmáticas sangre puede producir un aumento
significativo al cabo de unos minutos. En
Dada la gran diversidad de funciones
ambos casos, la modificación se debe a un
desempeñadas por las proteínas
aumento del paso de líquido desde el
plasmáticas en el organismo, son también
compartimiento vascular hacia el intersticial.
muchas las alteraciones o disfunciones que
pueden aparecer.
Las alteraciones pueden clasificarse en: Método
• Alteraciones en la cantidad de proteínas Para la determinación de proteína total se
totales. utiliza el método de Biuret modificado, el
• Alteraciones en las fracciones obtenidas cual es de gran especificidad y precisión.
tras una electroforesis, disproteinemias. Los polipéptidos que contengan, por lo
• Presencia en el plasma de alguna Ig menos, dos enlaces peptídicos reaccionan
anormal y/o de alguno de sus fragmentos, con las sales de cobre en medio alcalino
paraproteinemias. para formar un quelato coloreado (violeta)
• Circulación en plasma de Ig que entre el ion Cu2+ y los átomos de oxígeno
precipitan al descender la temperatura. del carbonilo y de nitrógeno de la amida del
Crioglobulinemia. enlace peptídico. La concentración de este
• Defectos aislados de alguna fracción. complejo es proporcional a la concentración
de proteína total en la muestra. La
Material absorbencia se determina a 540 nm con un
• Gradilla con 6 tubos de ensayo blanco de reactivos.
• 2 Pipetas de 5 ml, Preparar la siguiente serie de tubos:
• Pipetas automáticas
• Puntas para pipetas automáticas No. de 1. Blanco 2. Estándar 3. Suero
• Reactivo de Biuret para determinación de tubo problema
proteína: tartrato de K-Na 15 mmol/l, Estándar - 25 —l -
yoduro de sodio 100 mmol/l, ioduro de Suero - - 25 —l
potasio 15 mmol/l y sulfato de cobre 5 problema
mmol/l. Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml
• Espectrofotómetro a 540 nm. de Biuret
• Solución reactiva para albúmina: verde de
bromocresol a pH 4.2 Mezclar e incubar 15 min a temperatura
• Espectrofotómetro a 630 nm. ambiente.
• Suero problema.
• Solución estándar de proteínas 7 g/dl. Leer frente al blanco de reactivos a 540 nm.
• Solución estándar de albúmina 5 g/dl. El color es estable durante 30 min.
• Jeringa*, ligadura y torundas con alcohol. Cálculo:
ASuero
Precauciones. Evítese la hemólisis. La X [ Estándar .g / dl ] = [Pr oteína .total . g / dl ]
AEstándar
concentración de las proteínas del plasma
se modifica por la postura, de forma que
Donde A es la absorbencia.
existe un incremento de entre un 10% y un
El resultado se obtiene en g/dl.
20% tras 30 minutos de pasar de la
posición acostada a la ortostática. Además

146
El método es lineal hasta valores de 15 g/dl Referencias
(150 g/l).
Valores esperados: 1. Peters TJ. Clin Chem. 1968; 14: 1147.
Recién nacidos 5.2 - 9.1 g/dl 2. Murray KR, Granner DK, Mayes PA,
Niños (hasta 3 años) 5.4 - 8.7 g/dl Rodwell VW. Bioquímica de Harper. 16a.
Adultos 6.0 - 8.0 g/dl ed. México: Editorial El Manual Moderno;
Para la determinación de albúmina se 2004.
requiere de la fijación específica del verde 3. González de Buitrago JM. Bioquímica
de bromocresol a esta proteína a clínica. Madrid: McGraw-Hill Interamericana;
determinado pH produciéndose un cambio 1999.
de coloración, de amarillo verdoso a verde 4. Laguna-Piña. Bioquímica. 4a. ed.
azulado. El cambio en la coloración es México: Salvat; 1990. Cap. 4.
directamente proporcional a la 5. Pacheco Leal D. Bioquímica médica.
concentración de albúmina en la muestra. México: Editorial Limusa; 2004.
La absorbencia se determina a 630 nm con
un blanco de reactivos.

Preparar la siguiente serie de tubos:

No. de tubo 1. Blanco 2. Estándar 3. Suero


problema
Estándar - 10 —l -
Suero - - 10 —l
problema
Reactivo de 2 ml 2 ml 2 ml
albúmina

Mezclar e incubar 10 min a temperatura


ambiente.

Leer frente al blanco de reactivos a 630


nm.
El color es estable durante 60 min.
Cálculo:
ASuero
X [Estándar.g / dl] = [ Albúmin a.g / dl]
AEstándar

Donde A es la absorbencia.
El resultado se obtiene en g/dl.
El método es lineal hasta valores de 6 g/dl
(60 g/l).
Los valores mayores de 6 deben diluirse
1:2 con solución salina.
Valores esperado de 3.5 a 5 g/dl (50 g/l).

147
Práctica 5

Cinética enzimática.
Efecto de la concentración del sustrato
sobre la velocidad de reacción enzimática

TIEMPO DE PRÁCTICA: 2 HORAS La enzima que sirve de modelo en esta


práctica es la glucosa oxidasa acoplada a la
Objetivo peroxidasa.
El alumno:
1. Explicará el efecto de la concentración INTRODUCCIÓN
de sustrato sobre la velocidad de una Las enzimas son las proteínas más
reacción enzimática. notables de la naturaleza; sin ellas, la vida
2. Calculará por métodos gráficos la como la conocemos no sería posible. Las
enzimas son catalizadores, esto es,
velocidad máxima y la constante de
aceleran la velocidad de las reacciones
Michaelis de una reacción enzimática.
sobre las que actúan sin consumirse en el
3. Conocerá los diferentes tipos de
proceso. El poder catalítico de las enzimas
inhibidores que existen y estudiará su efecto
es mucho mayor que el de los catalizadores
sobre la Km y V máx.
inorgánicos, algunas de ellas están
4. Conocerá aspectos básicos de limitadas solo por la velocidad con que
fotocolorimetría (ver pág, 115). colisionan con sus sustratos; son
Para lograr los objetivos de esta práctica catalizadores perfectos.
contestar las siguientes preguntas: Aunque las reacciones que ocurren
en la célula son termodinámicamente
1. ¿Qué es la velocidad de una reacción favorables, la velocidad a la cual transcurren
enzimática? la mayoría de ellas es extremadamente
2. ¿Cómo se define la constante de lenta; sin la presencia de las enzimas, las
Michaelis (Km) de una reacción enzimática? reacciones necesarias para sostener la vida
3. ¿Cómo se define la velocidad máxima (V ocurrirían a una velocidad incompatible con
máx) de una reacción? ésta. Además de su enorme poder
4. ¿Para qué le sirve a un médico la catalítico, las enzimas son altamente
determinación de la actividad de algunas específicas por sus sustratos y tienen la
enzimas? capacidad de regular su velocidad en
5. ¿Cuáles son las enzimas cuya respuesta a las concentraciones de sustrato
determinación tiene valor diagnóstico? y la presencia de inhibidores, activadores,
reguladores alostéricos, etc. Así pues, las
Hipótesis enzimas desempeñan un papel central en
los procesos biológicos, son las
Si la velocidad de una reacción enzimática responsables de degradar y sintetizar las
es proporcional a la concentración del moléculas que nos forman y de extraer,
sustrato; cuando la concentración del transformar y utilizar toda la energía
sustrato es muy alta, por lo tanto la enzima relacionada con estos procesos. Por último,
se satura y alcanza su velocidad máxima. las enzimas son las responsables de regular
y coordinar todas las reacciones que

148
ocurren en un organismo para lograr el en un efecto terapéutico. La capacidad de
delicado balance que representa la vida. producir enzimas recombinantes abrió la
El primer modelo matemático que posibilidad de utilizarlas rutinariamente con
explicó de manera general la cinética de las fines terapéuticos, tal es el caso de la
enzimas no alostéricas, donde la velocidad estreptocinasa para la terapia fibrinolítica en
de la reacción se incrementa el infarto agudo al miocardio. Es claro que
hiperbólicamente conforme aumenta la todas estas aplicaciones no serian posibles
concentración de sustrato, fue propuesto en sin la previa y profunda comprensión de la
1913 por Leonor Michaelis y Maud Menten a estructura y función de estas fascinantes
partir de los trabajos previos de Victor Henri moléculas.
y Archibald Hill. Este modelo postula la idea
central de que la enzima y el sustrato libres
Fundamento
establecen un equilibrio rápido con el
complejo enzima-sustrato; en un segundo El método se basa en el hecho de que la
paso más lento, este complejo se rompe glucosa, en presencia del oxígeno del aire y
liberando el producto y regenerando la con la participación de la glucosa oxidasa,
enzima libre. La ecuación de Michelis- se oxida hasta ácido glucónico. El peróxido
Menten explica la relación entre la velocidad de hidrógeno que se forma en el curso del
de la reacción catalizada por una enzima y proceso se descompone mediante la
la concentración de sustrato a través de los peroxidasa. El oxígeno atómico que se
dos parámetros de la ecuación, Vmax y Km. desprende en esta última reacción se
La ecuación de Michaelis-Menten puede ser combina con un cromógeno que se colorea
re-arreglada matemáticamente para obtener al oxidarse. La intensidad de la coloración
su forma lineal, permitiendo determinar de del cromógeno oxidado es proporcional a la
manera sencilla los parámetros cinéticos de concentración de glucosa.
una enzima a través del grafico de La glucosa oxidasa (ß-D-glucosa: oxígeno
Lineweaver-Burk. Este mismo gráfico óxidorreductasa, EC1.1.2.4) tiene un peso
permite inspeccionar rápida y visualmente molecular de 160 000. Existe en forma
las diferentes formas de inhibición
dimérica y contiene dos moles de FAD
enzimática.
El estudio de las enzimas es de como grupo prostético por mol de enzima.
suma importancia dentro de las ciencias La glucosa oxidasa es altamente específica,
médicas; las enzimas están implicadas en el hecho que ha permitido su empleo para el
origen, diagnostico y tratamiento de una análisis cuantitativo de glucosa. La reacción
gran cantidad de patologías y es claro que consiste de dos pasos:
en el futuro, su preponderancia será cada
vez mayor. Por ejemplo, la deficiencia de 1. Glucosa + glucosa oxidasa-FAD -
gluconolactona + glucosa oxidasa-FADH2
algunas enzimas, como las proteasas de la
coagulación en la hemofilia, es causa de 2. Glucosa oxidasa-FADH2 + O2 glucosa
enfermedades hereditarias. La presencia oxidasa-FAD + H2O2
anormal de algunas enzimas en el torrente
sanguíneo ayuda a diagnosticar el daño La 4-gluconolactona se hidrata
específico de tejidos, este es el caso de la espontáneamente dando ácido glucónico.
amilasa y lipasa en las patologías La reacción global se expresa:
pancreáticas y las transaminasas en las
Glucosa oxidasa
enfermedades hepáticas. Las enzimas son
también el blanco de varios fármacos: la Glucosa + O2 Acido glucónico +
aspirina inhibe a la ciclooxigenasa, el H2O2
omeprazol a la ATPasa de protones y el La peroxidasa cataliza la transferencia de
captopril a la enzima convertidora de oxígeno del peróxido a un aceptor que es
angiotensina; estas inhibiciones redundan

149
cromógeno como la ortotoluidina, la Método II (sin inhibidor)
ortodianisidina, la 2,2-azino-bis (3- 1.- Preparar nuevamente una serie de tubos
etilbencentiazolin-6-sulfónico) o la 4-amino- como lo indica la tabla 1.
antipirina (y fenol) que se colorean al
oxidarse. La reacción se expresa: 2.- Repetir los paos 3 y 4 del Método I
Leer ambas series de tubos en el
E+S ES E+P fotocolorímetro; utilizar como blanco el tubo
1.
Material y reactivos
• 2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada
Resultados (cuadro 5.2)
una.
• 1 Pipeta de 5 ml. 1. Cálculo de la concentración inicial de
• 2 Pipetas de 5 ml. sustrato en cada tubo; tomar en cuenta que
• 1 Matraz Erlemeyer de 100 ml. la solución de glucosa contiene 40 µmolas
• Fotocolorímetro con filtro azul. ml–1.
• Solución estándar de glucosa 40 mmol/l y 2. La velocidad será igual a las unidades
una dilución 1:10 de ésta para los tubos 2, 3 Klett por .5 min-1 de incubación.
y 4. 3. Con los datos obtenidos completar el
• 2 frascos con solución de enzimas: 41.6 cuadro 5.2 y hacer las dos gráficas en papel
Uml–1 de glucosa oxidasa, 4.6 Uml–1 de milimétrico.
peroxidasa, ortodianisidina 0.21 mmol/l. 4. Hacer una segunda gráfica con los
• Solución de azida de sodio 400 mmol/l valores de 1/v vs 1/[S].
como inhibidor. 5. Calcular el valor de la velocidad máxima
• Gotero con HCl. (Vmáx) y de la constante de Michaelis (Km)
con y sin inhibidor.
6. Determinar el tipo de inhibidor de
Método I (con azida de sodio)
acuerdo con las gráficas del punto anterior.
1. En un matraz Erlenmeyer de 100 ml 7. Analizar si los resultados obtenidos están
preincubar 20 minutos la solución de de acuerdo con la hipótesis planteada.
enzimas con 0.3 ml del inhibidor.
Tubo Solución de H2O Soución
2. Preparar la siguiente serie de tubos (tabla No. glucosa (ml) (ml) de
1). enzimas
(ml)
3.- Considerar un intervalo de 30 segundos 1 0.0 1.0 3
para cada tubo al agregar la enzima. 2 dil 1:10 0.1 0.9 3
3 dil 1:10 0.25 0.75 3
4.- Agitar cada tubo e incubar 5 minutos
4 dil 1:10 0.5 0.5 3
temperatura ambiente y de inmediato
5 0.1 0.9 3
detener la reacción agregando 3 gotas de
6 0.25 0.75 3
HCl concentrado Considerar un intervalo de
7 05. 0.5 3
30 segundos para cada tubo al agregar el
8 1.0 0.0 3
HCl.

150
Referencias
Sons; 1999.
1. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Reverté; 2004.
2. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioquímica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005. Tubo Concentración de Velocidad de la Velocidad de la
3. Mathews CK, van Holde KE. Bioquímica. No. sustrato µmolas reacción reacción con
de glucosa inicial unidades Klett 5 INHIBIDOR
3a. ed. España: McGraw-Hill ml-1 min-1 Unidades Klett
Interamericana; 2003. ABCISAS (X) ORDENADAS (y) 5 min -1
4. Voet D, Voet JG, Pratt C. Fundamentals 1
of biochemistry. USA: John Wiley and 2
3
4
Tubo Concentración de Velocidad de la Velocidad de la
No. sustrato µmolas reacción unidades reacción con
5
de glucosa inicial Klett 5 min-1 1/V INHIBIDOR 1/V 6
ml-1 ORDENADAS (Y) Unidades Klett 7
ABCISAS (X) 5 min–1 (Y)
8
1
Cuadro 5.2 Resultados
2
3
4
5
6
7
8

Cuadro 5.3 Resultados (inverso)

151
Práctica 6
Efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata

Tiempo de Práctica: 2 Horas

Esta práctica es una simulación instrucciones, los objetivos y el fundamento


compuratizada de un fenómeno bioquímico; de la práctica para continuar con la parte
tiene el propósito de que los alumnos se experimental.
ejerciten en el manejo de los datos 3. Seguir todos los pasos de la práctica;
obtenidos por medio de experimentación poner especial atención en la obtención de
simulada estrictamente controlada. los datos experimentales que dberán ser
anotados en papel como cualquier práctica
Objetivos convencional.
4. Repetir el experimento las veces que el
1. Que el alumno compruebe el efecto de la usuario quiera, o las veces que sean
insulina sobre la glucemia de la rata. necesario, hasta obtener los datos
2. Relacione sus conocimientos sobre el completos del experimento. Se sugiere
metabolismo de la glucosa y los repetirlo por lo menos dos veces y hacer un
mecanismos del control de la glucemia y los promedio de los datos obtenidos.
mecanismos del control de la glucemia en 5. Hacer una tabla con dichos datos,
un modelo experimental sencillo. graficarlo, analizar el significado de los
mismos y, de acuerdo a lo anterior, validar o
Conteste a las siguientes preguntas: rechazar la hipótesis del experimento.

1. ¿Qué es la insulina y cuál es su función? Análisis de resultados


2. ¿Dónde se sintetiza y cuántas cadenas
tiene? 1. Analizar si los resultados obtenidos están
3. ¿Qué se sabe del mecanismo por medio de acuerdo con la hipótesis planteada.
del cual actúa? 2. Plantear cuál sería el resultado esperado
4. ¿Por qué la insulina se tiene que inyectar si se hubiera trabajado con ratas diabéticas.
y no se debe administrar por vía bucal? 3. Relacionar los datos con el control
hormonal de la glucemia.
Hipótesis 4. Hacer el informe de la práctica con los
Si la glucemia en la rata se modifica por la resultados y las conclusiones que de éstos
acción de la insulina, la rata control se deriven.
mostrará una glucemia diferente a la
experimental. Analizar la hipótesis Referencias
apropiada.
1. Stryer L. Bioquímica. 5a. ed. Barcelona:
Método Editorial Reverté; 2003.
1. Encender la computadora y localizar el 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
icono del programa. El efecto de la insulina aplicaciones clínicas. 5a. ed. Barcelona:
sobre la glucemia de la rata. Hacer doble Editorial Reverté; 2001.
clic sobre este icono. 3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
2. Hacer clic sobre los botones que indican bioquímica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
cada de las partes de la práctica; empezar Omega; 2005.
por leer las

152
Práctica 7
Estudio del bombeo de protones por levaduras;
efecto de los inhibidores de la cadena de
transporte de electrones y de los desacoplantes

Tiempo de práctica: 2 horas células eucariontes, las levaduras tienen


un núcleo ; ; en donde reside la
Objetivos información genética de la célula; ,
mitocondrias ; en donde se lleva a cabo la
1. Que el alumno relacione el consumo de
síntesis de ATP; y un retículo
glucosa con los cambios de pH producidos
endoplásmico y aparato de Golgi que se
por las levaduras.
encargan de la síntesis de proteínas cuya
2. Que el alumno describa las vías por las
localización final es la membrana
cuales la glucosa genera los cambios de
plasmática o el exterior.
pH.
A nivel de la membrana plasmática, las
3. Que el alumno interprete el efecto de
levaduras tienen una ATPasa de H+ que
los inhibidores y los desacoplantes sobre
acopla la hidrólisis del ATP con el bombeo
la salida de protones.
de protones hacia afuera de la célula.
Responda a las siguientes preguntas:
Esta proteína es semejante desde un
1. ¿Cuáles son las fuentes de carbono punto de vista estructural y funcional a la
que usa la levadura? ATPasa de Na+/K+ de las células
2. ¿Cuáles son las vías metabólicas que animales y, al igual que la bomba de
catabolizan a los carbohidratos? sodio/potasio, se inhibe con
3. ¿En qué consisten la glucólisis y la concentraciones micromolares de
fosforilación oxidativa? vanadato. Como resultado de la actividad
4. ¿Cuáles son los productos finales del de la ATPasa de H+ en la levadura, se
catabolismo de los carbohidratos en las genera un gradiente electroquímico de
levaduras? protones que se utiliza para impulsar el
5. ¿Cuáles son los inhibidores de la transporte de nutrientes al interior de la
cadena respiratoria de los sitios I, II y III? célula, proceso catalizado por sistemas de
Describa su efecto sobre el consumo de transporte llamados simportadores o
O2 y la síntesis del ATP. uniportadores. Para darse una idea de la
6. ¿Cuál es el mecanismo por medio del importancia de esta enzima en la
cual los protonóforos desacoplan la economía celular y en la energización de
fosforilación oxidativa? Describa su efecto la membrana celular, basta decir que la
sobre el consumo de O2 y la síntesis del ATPasa de H+ consume hasta un 25 %
ATP. del ATP que se sintetiza en la célula.
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae Además de esta ATPasa de H+ de la
son organismos unicelulares que se membrana plasmática, las levaduras
dividen por gemación. En común con otras tienen otra bomba de protones en la

153
membrana interna de las mitocondrias, la
ATP sintasa, que se encarga de la síntesis Método
del ATP. En contraste con la enzima de
membrana plasmática, el flujo de protones Experimento 1 (control)
a través de la ATP sintasa induce la
1 .Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
síntesis de ATP. Uno de los inhibidores
agua destilada.
más efectivos de esta enzima es la
2. Determinar el pH de la solución y repetir
oligomicina.
la medición dos veces más con intervalos
Así, se puede proponer uno de los
de 3 minutos para obtener la línea basal.
muchos ciclos en los que interviene el
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar
ATP en la levadura: por un lado, el ATP se
y medir el pH.
sintetiza en la mitocondria por medio de la
4. Determinar el pH de la solución cada 5
ATP sintasa, y a nivel de la membrana
minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos
plasmática, la ATPasa de H+ lo hidroliza 2 veces más.
para bombear protones al exterior de la
célula. El factor común en ambos casos es EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
un flujo de protones a través de la
membrana. 1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
agua destilada.
2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.2
Hipótesis ml de la solución de dinitrofenol 40 mmol/l,
Si las levaduras consumen glucosa, se concentración final de 200 µmol/l.
observará una disminución progresiva de 3. Determinar el pH de la solución y repetir
su concentración en el medio de cultivo la medición dos veces más con intervalos
con el tiempo y cambios en el pH de 3 minutos para obtener la línea basal.
extracelular. 4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento
Material control.
• Tres vasos de precipitado de 100 ml.
EXPERIMENTO 3 (AZIDA)
• Pipetas de 5 y 10 ml.
• Potenciómetro. 1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
• Piceta para enjuagar el electrodo del agua destilada.
potenciómetro. 2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.5
• Levadura (Saccharomyces cerevisiae) ml de la solución de azida de sodio 400
200 mg/ml. mmol/l, concentración final de 5 mmol/l.
• Solución de glucosa (10%) para una Agitar con cuidado.
concentración final de 1%. 3. Determinar el pH de la solución y repetir
• Solución de dinitrofenol 40 mmol/l en la medición dos veces más con intervalos
etanol. de 3 minutos para obtener la línea basal.
• Solución de azida de sodio 400 mmol/l. 4. Esperar 5 minutos.
• Agua destilada. 5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento
control.
6. Registrar sus datos en la siguiente
tabla.

154
mamíferos (ver fig. 7.1).

pH
Referencias
Tiempo Glucosa Azida de
(min) Dinitrofe sodio 1. Peña A. Studies on the mechanism of
nol
K+ transport in yeast. Arch Biochem
0 Biophys. 1975; 167:397-409.
5
2. Pardo JP. La ATPasa de H+ de la
10 membrana plasmática de los hongos.
15 Mensaje Bioquímico. 1990; 13: 119-172.
20
Glucosa
30
40
Análisis de resultados
ADP + Pi
Glucosa
1. Hacer una gráfica de cada uno de los H
+
H
+

experimentos; utilizar los valores de las ATP ADP


lecturas de pH contra tiempo. ATP
Etanol
2. Analizar el significado de los cambios
de pH en el experimento control, con H
+ +
H H
+

dinitrofenol como desacoplante y con


azida de sodio. +
H
3. Hacer una relación de las vías que NAD NADH ADP + Pi
producen estos cambios; tomar en cuenta
ATP
que las levaduras poseen una ATPasa de
protones en la membrana mitocondrial que Acetaldehído

se encarga de sintetizar ATP y que tienen Mitocondria ADP


otra ATPasa de protones en la membrana ADP
plasmática cuya función es similar a la
bomba de Na+/K+ en las células de los

155
Práctica 8

El efecto del etanol sobre la lipoperoxidación

Tiempo de Práctica: 2 Horas


experimentales que deberán ser anotados
Esta práctica es una simulación en papel como cualquier práctica
compuratizada de un fenómeno bioquímica; convencional.
tiene el propósito de que los alumnos se 4. Repetir el experimento las veces que el
ejerciten en el manejo de los datos usuario quiera, o las veces que sean
obtenidos por medio de experimentación necesario, hasta obtener los datos
simulada estrictamente controlada. completos del experimento. Se sugiere
repetirlo por lo menos dos veces y hacer un
Método promedio de los datos obtenidos.
1. Encender la computadora y localizar el 5. Hacer una tabla con dichos datos,
icono del programa. El efecto de la insulina graficarlo, analizar el significado de los
sobre la glucemia de la rata. Hacer doble mismos y, de acuerdo a lo anterior, validar o
clic sobre este icono. rechazar la hipótesis del experimento.
2. Hacer clic sobre los botones que indican
cada de las partes de la práctica; empezar Referencias
por leer las instrucciones, los objetivos y el
fundamento de la práctica para continuar 1. Stryer L. Bioquímica. 5a. ed. Barcelona:
con la parte experimental. Editorial Reverté; 2003.
3. Seguir todos los pasos de la práctica; 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
poner especial atención en la obtención de aplicaciones clínicas. 5a. ed. Barcelona:
los datos Editorial Reverté; 2001.
3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioquímica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005.

156
Práctica 9
Estudio general del metabolismo
de los carbohidratos

Tiempo de práctica: 3 horas galactosa, diabetes mellitus, secuelas de


la diabetes, glucogenosis, etcétera)?
Objetivos
7. ¿Cuál es el mecanismo por el cual la
1. Aplicar los conocimientos generales glucosa puede causar daño a los tejidos
sobre los carbohidratos a su estudio en los (glucosilación proteica: formación de
tejidos o líquidos corporales. bases de Schiff, puentes glucosídicos
2. Conocer el metabolismo de la glucosa. AGE).
3. Conocer las alteraciones más
8. ¿Cuáles son las pruebas de laboratorio
frecuentes del metabolismo de los
más utilizadas para el estudio de los
carbohidratos.
carbohidratos corporales?
4. Conocer los aspectos básicos de las
determinaciones del laboratorio clínico INTRODUCCIÓN
para valorar el funcionamiento del La glucosa es cuantitativamente el
metabolismo de los carbohidratos. carbohidrato más importante del que
5. Describir los principios analíticos para la dispone el cuerpo, ya sea por absorción
determinación de glucosa y fructosaminas, de la dieta o por síntesis interna. Por
llevar a cabo sus determinaciones y consiguiente, la mayoría de las pruebas
correlacionar los valores obtenidos con clínicas están basadas en el estudio del
los valores normales de glucosa y metabolismo de la glucosa. Se conocen
fructosaminas en suero o plasma. varias alteraciones de este metabolismo,
clasificándolas como:
Conteste las siguientes preguntas:
•Primarias, alteraciones en el metabolismo
1. ¿Qué son los carbohidratos y cómo se de carbohidratos (diabetes mellitus,
clasifican?
hiperinsulinismo, entre otras).
2. ¿Cuáles son las funciones que
desempeñan los carbohidratos en el •Secundarias, manifestaciones que
organismo humano? acompañan a otras enfermedades
(síndrome de Cushing, afecciones
3. ¿Cómo se lleva a cabo la digestión y
hepáticas, hipofisiarias o tiroideas, entre
absorción de los carbohidratos?
otras).
4. ¿Cuáles son las vías metabólicas en las
que participan los carbohidratos? Entre los procedimientos diagnósticos
para valorar el funcionamiento del
5. ¿Qué es la glucemia y cómo se regula? metabolismo de los carbohidratos los más
6. ¿Cuáles son las principales alteraciones importantes son los siguientes:
de la digestión, absorción y metabolismo • Glucosa plasmática en ayunas.
de los carbohidratos (déficit de • Glucosa en orina.
glucosidasas intestinales, malabsorción • Cuerpos cetónicos en sangre
intestinal de azúcares, enfermedades del (cetonemia) y en orina (cetonuria).
metabolismo de la fructosa y de la

157
• Prueba oral de tolerancia a la glucosa. Método
• Hemoglobina glucosilada.
DETERMINACIÓN DE LA GLUCEMIA BASAL
• Fructosaminas.
POR GOD-POD/TRINDER
• Determinación de hormonas
relacionadas con el metabolismo de El método más utilizado en el laboratorio
carbohidratos (insulina, péptido "C" y clínico es el de la glucosa oxidasa (GOD).
glucagón). Esta enzima cataliza la reacción de la
• Determinaciones de enzimas y sustratos glucosa presente en la muestra.
hidrocarbonados en células y tejidos. GOD
• Otras determinaciones Glucosa + O2 + H2O H2O2 +
(microalbuminuria, determinaciones Gluconato
inmunológicas y determinación de
receptores).
La cuantificación de los resultados puede
Para llevar a cabo la determinación de llevarse a cabo de la siguiente manera:
glucosa plasmática en ayunas (basal)
Mediante polarografía, determinación del
utilizaremos un método enzimático
consumo de oxígeno con la ayuda de un
colorimétrico y para la determinación de
electrodo de oxígeno. La cantidad de
glucosa y cuerpos cetónicos en orina
glucosa en la muestra es directamente
utilizaremos tiras reactivas.
proporcional a la cantidad de oxígeno
consumido. Método muy utilizado en
Material
sistemas automatizados de análisis
• Gradilla con 3 tubos de ensayo.
clínico.
• Pipetas de 0.1 y 1 ml.
Enzimático colorimétrico, por
• Solución reactiva para glucosa: TRIS 92
determinación de la quinona producida por
mmol/l, pH 7.4; fenol 0.3 mmol/l, glucosa
la acción de la peroxidasa (POD), en
oxidasa 15 000 U/l, peroxidasa 1000 U/l y
donde un cromógeno pasa de su forma
4-aminofenazona 2.6 mmol/l.
reducida (incolora) a su forma oxidada
• Solución reactiva para determinación de
(coloreada). El método utilizado para esta
fructosaminas 1: proteinasa K 786 U/ml,
determinación es el de Trinder. En él la
peroxidasa 60 U/ml, amortiguador de pH y
intensidad del color es directamente
diversos estabilizadores.
proporcional a la cantidad de glucosa
• Solución reactiva para determinación de
presente en la muestra.
fructosaminas 2: cetoamina oxidasa 9
U/ml, 4-aminoantipirina 10.5 mmol/l, EDTA POD
50 mmol/l, amortiguador de pH y 2H2O + Fenol + 4-AF Quinona +
estabilizadores. H2O
•Solución estándar de glucosa 100 mg/dl. Preparar la siguiente serie de tubos:
•Solución estándar de fructosamina 150
µmol/l. No. de tubo 1. Blanco 2. Estándar 3. Suero
•Curva patrón de fructosaminas (DA problema
contra concentración) 50, 100, 200, 400 Estándar - 10 µl -
µmol/l. Gráfica proporcionada por la
coordinación.
Suero - - 10 µl
•Suero o plasma problema (estable 3 días
a 2-8°C). problema
• Espectrofotómetro a 505 y 620 nm. Solución
reactiva para 1 ml 1 ml 1 ml
glucosa
Mezclar e incubar 15 minutos a
temperatura ambiente.

158
La coloración es estable 30 minutos. libres de las proteínas, por un mecanismo
Medir la absorbencia (A) frente a blanco diferente al empleado en la reacción
de reactivos a 505 nm. catalizada por las enzimas
Cálculo: glucosiltransferasas, por lo que la unión
que se establece entre el azúcar y la
ASuero proteína no es de naturaleza glucosídica.
X [Estándar.g / dl] = [ Albúmin a.g / dl]
AEstándar Se prefiere el uso del término glicación en
lugar de glicosilación o glucosilación (para
El resultado se obtiene en mg/dl (x 0.0555 el caso de la unión de glucosa con la
= mmol/l). proteína) para este tipo de reacción. La
El método es lineal hasta valores de 500 glicación es una reacción de
mg/dl. condensación entre la función aldehído o
Diluir el suero 1:2, si la concentración de cetona de un azúcar reductor y un grupo
glucosa es mayor a 500 mg/dl con amino libre de una proteína (residuo
solución salina. amino terminal o épsilon amino de una
La hemólisis hasta 0.3 g/dl de lisina) en la que se genera una base de
hemoglobina no interfiere. Schiff, que se transforma en una
Los anticoagulantes como el EDTA, cetoamina estable llamada producto de
oxalato, heparina o fluoruro no afectan a Amadori o fructosamina.
los resultados. Los productos de Amadori pueden sufrir
La glucosa en suero o plasma es estable una serie de modificaciones como la
tres días a 2-8°C. A temperatura condensación entre dos de ellos para
ambiente, la glucosa presente en una formar productos complejos de estructura
muestra de sangre entera puede química no del todo aclarada llamados
desaparecer por completo al cabo de 6 AGE (Advanced Glycation End products, o
horas debido a la glucólisis en los productos de glicación avanzada) ver la
eritrocitos. Además, la contaminación figura 10.1.
bacteriana y la presencia de cantidades La glicación depende exclusivamente de
elevadas de leucocitos, pueden también los niveles de glucosa en los líquidos
aumentar dicho proceso, por corporales y del tiempo de contacto entre
consiguiente: ésta y las proteínas. De ahí que, la
Siempre que la muestra sea sangre total, determinación de los productos de
la determinación de la glucosa debe glicación puede emplearse como medida
realizarse durante la media hora siguiente del nivel promedio de la glucosa
a su recolección. sanguínea durante un cierto período de
De lo contrario, añadir un conservador que tiempo, el cual dependerá de la vida
inhiba la glucólisis (fluoruro sódico). media de la proteína que se analice.

GLICACIÓN NO ENZIMÁTICA DE PROTEÍNAS.


FRUCTOSAMINAS Y HEMOGLOBINA GLICADA
El término glicosilación no enzimático de
las proteínas se refiere a la reacción entre
los azúcares reductores con los grupos
amino

159
!"#$%&' !"#$%&' !"#$%&' !"#$%&'
entre la determinación instantánea de la
)
(
)
( (*) glucemia y la valoración a largo plazo
)*+*)
)
+
,
)*+
)*+*,) ,
(
dada por la HbA1.
)*+* ,
La determinación de la Hb glicada puede
( ,
)*+*,) ),*+*) ),*+*) ,
),*+*) )*+*,) )*+*,) diferenciar un proceso agudo que cursa
)*+*,)
)*+*,)
)*+*,) )*+*,)
+) -*,) !"#$%&'
con hiperglucemia, una hiperglucemia
+) -*,)
+) -*,) !"501#"45$4:;'5"!8 !"501#"245$4</81'18=&444444
4
transitoria secundaria al estrés y una
diabetes mellitus.
./01"2' 3'2$45$461 7899 4444 +$#"';8&' '>'&?'5' :.@

!
La determinación del nivel de glicación de
Fig. 10.1. Productos de la glicación la albúmina plasmática (glicoAlb), que
avanzada tiene una vida media de 14 a 20 días,
refleja el promedio de la glucemia (y por
La hemoglobina glicada y las proteínas tanto, el grado de control del paciente) en
séricas glicadas (fructosaminas) se utilizan un periodo que va desde 1 a 3 semanas
como parámetros de medida a largo plazo previas a la extracción de sangre. Aunque
de la evaluación del estado del la albúmina es el componente sérico
metabolismo de los carbohidratos en el glicado cuantitativamente más importante,
diagnóstico, control y tratamiento de la otras proteínas séricas también sufren
diabetes (una enfermedad caracterizada glicación. La vida media de estas
por los niveles de glucosa circulante proteínas circulantes es de sólo unos
elevados). Hay un consenso general en pocos días, por lo cual la determinación de
que las complicaciones crónicas de la las proteínas séricas glicadas totales
diabetes como las retinopatías, (PSG) refleja la glucemia promedio de los
nefropatías, neuropatías y la 15 días previos a la toma de muestra.
aterosclerosis acelerada, entre otras, son La determinación de estos productos
consecuencia de los niveles altos de glicados se lleva a cabo mediante las
glucosa en la sangre, los que pueden ser siguientes reacciones: La proteinasa K
determinados midiendo la concentración digiere las proteínas glucosiladas para dar
de proteínas glicadas. fragmentos de proteínas, los cuales por
El primer indicador retrospectivo del curso medio de la cetoamida oxidasa, oxidan
de la glicemia en el tiempo, que se puso al sus enlaces cetoamida, dando como
alcance de los laboratorios clínicos fue la resultado aminoácidos y peróxido de
hemoglobina glicada (HbA1 ó HbA1c). hidrógeno. La peroxidasa cataliza la
Ésta refleja el promedio de la glucemia de transferencia de oxígeno del peróxido a un
las 6 a 8 semanas previas a la toma de la aceptor que es un cromógeno, que se
muestra. La hemoglobina tiene una colorea al oxidarse. La absorbencia del
velocidad de recambio menor que las cromógeno oxidado a 620 nm es
proteínas plasmáticas, por lo que, la proporcional a la concentración de
determinación de fructosaminas puede proteína glicada.
emplearse como índice del control de la La reacción completa es la siguiente:
glucemia en un periodo más corto, de
alrededor de dos semanas previas a la Proteinasa K
toma de sangre. Es decir, que cubre un Proteína glicada Fragmentos de proteína
periodo de tiempo intermedio glicada

160
Cetoamina oxidasa Colocar la tira reactiva horizontalmente
Fragmentos de proteína Aminoácidos sobre un papel absorbente, en el
+ H2O2 transcurso de 30 segundos a 2 minutos
Peroxidasa interpretar los resultados para ello:
H2O2 + Cromógeno Cromógeno Comparar la tira reactiva con los bloques
oxidado + H2O de colores que aparecen en la caja de las
Procedimiento para la determinación de tiras reactivas (cambios en la coloración
fructosaminas: después de 2 minutos no tienen
importancia clínica).
1. Vaciar en un tubo de ensayo 0.5 ml (500 µl)
Composición de las tiras reactivas es la
de reactivo 1 para fructosaminas.
siguiente:
2. Agregar 0.02 ml (20 µl) de suero o plasma
problema. Glucosa, 10.54% de glucosa oxidasa
(Aspergillus, 250 UI), 0.2% de peroxidasa
3. Incubar 10 minutos a temperatura
(rábano, 2500 UI) y 5% yoduro de potasio.
ambiente.
Cetonas, 4.5% de nitroprusiato de sodio.
4. Agregar 0.1 ml (100 µl) de reactivo 2 para
fructosaminas. Referencias
1.González de Buitrago JM. Bioquímica
5. Mezclar, leer la absorbencia inicial al cabo
clínica. McGraw-Hill Interamericana
de 30 segundos a 620 nm.
Editores; 1999.
6. Leer nuevamente la absorbencia al cabo de 2.D’Ocon, C. Fundamentos y técnicas de
1 minuto. análisis bioquímico. Editorial Paraninfo;
1998.
Cálculo:
3.Chernecky CC. Pruebas de Laboratorio
Anotar la A del tubo e interpolar en la gráfica y Procedimientos Diagnósticos. 2a. ed.
de A contra concentración de fructosamina McGraw-Hill Interamericana Editores;
en µmol/l que será proporcionada en la 1999.
coordinación de prácticas. 4.Gaw, A. Bioquímica clínica. 2a. ed.
Valores esperados 122 - 236 µmol/l. Editorial Harcourt; 2001.
5.Anderson SC, Cockayne S. Química
El método es lineal hasta 1734 µmol/l.
clínica. México: McGraw-Hill
Determinación de glucosa y de cuerpos
cetónicos en orina con tiras reactivas Interamericana Editores; 1995.
6.Actis SM, Rebolledo O. Avances en la
Aunque los cuerpos cetónicos son productos valoración de fructosamina: ventajas de un
intermedios del metabolismo de los ácidos nuevo equipo diagnóstico aplicado a
grasos, la variación de sus niveles en sangre estudios poblacionales. Acta Bioquím Clín
y en orina informa indirectamente acerca del Latinoamer. 1991; 25 (4): 391-402.
metabolismo de los carbohidratos.

Recolectar una muestra de orina en un


recipiente de plástico o de vidrio limpios (si la
muestra no se procesa durante la primera
hora después de su obtención, deberá
refrigerarse).
Sumergir la tira reactiva en la orina y retirarla
inmediatamente.

161
Práctica 10
Determinación de lípidos
y lipoproteínas plasmáticas.

Tiempo de práctica: 2 horas circulan en el plasma humano son los


quilomicrones, las lipoproteínas de muy
Objetivos baja densidad (VLDL), las lipoproteínas
de baja
1. Recordar la estructura de los diferentes
lípidoscirculantes y sus funciones.
densidad (LDL) y las lipoproteínas de
2. Describir las diferentes fuentes de colesterol,
alta densidad (HDL).
su función y la dinámica del colesterol
El colesterol es esencial para el
plasmático.
crecimiento y la viabilidad de las células
3. Investigar el papel del colesterol y otros lípidos
de los organismos superiores; sin
en el desarrollo de la aterosclerosis.
embargo, los altos niveles de colesterol
4. Describir la composición y la función de las
sérico son considerados como un
lipoproteínas.
importante factor de riesgo de
5. Describir los principios analíticos para la
enfermedad y muerte porque
determinación del colesterol total, colesterol de
contribuyen a la formación de placas
HDL y de LDL, apolipoproteínas y triacilgliceroles
ateroscleróticas. El colesterol se
plasmáticos.
transporta en la sangre por tres
6. Calcular la concentración de colesterol de
diferentes lipoproteínas: LDL, HDL y
VLDL y de LDL a partir de las concentraciones
VLDL. Los estudios epidemiológicos
de colesterol total, de colesterol de HDL y
han establecido con claridad que
triacilgliceroles.
mientras mayor sea el valor del
colesterol-LDL mayor será el riesgo de
INTRODUCCIÓN
enfermedad cardiaca aterosclerótica;
Los dos lípidos de la sangre con un máximo por el contrario, mientras mayor sea la
interés en el diagnóstico clínico son el concentración del colesterol-HDL
colesterol y los triacilgliceroles (TAG); ambos menor será el riesgo de enfermedad
se transportan en las lipoproteínas, que son cardiaca coronaria. En otras palabras,
partículas globulares de alto peso molecular las cifras elevadas de LDL son
con un núcleo formado por lípidos aterógenas, en tanto que las de HDL
hidrofóbicos ; TAG y ésteres de colesterol; , son protectoras, por lo que el cálculo
los cuales aportan la mayor parte de la masa del cociente colesterol-HDL/colesterol-
de la partícula, y por una sola capa LDL –que es normalmente de 0.34 ±
superficial de moléculas de fosfolípidos, 0.11– constituye un índice de
colesterol y proteínas o polipéptidos que aterogenicidad.
rodean al núcleo y estabilizan la partícula En general, se cree que las
para que permanezca en solución dentro del lipoproteínas que contienen apoB 100
plasma. Las lipoproteínas principales que son potencialmente aterógenas.

162
ALTERACIONES DE LAS LIPOPROTEÍNAS probablemente la primera anomalía celular
de la aterogénesis.
PLASMÁTICAS Y ATEROGÉNESIS
Según la hipótesis de respuesta a la
Desde el punto de vista clínico se ha atribuido a lesión, la más aceptada sobre la
determinadas lipoproteínas el papel de factores patogénesis de la aterosclerosis,
esenciales directos en el desarrollo o en la cualquier lesión en el endotelio o
prevención de ciertas enfermedades, músculo liso de la pared vascular que
principalmente de tipo vascular. Las anomalías puede ser causada por la
en el transporte de lípidos ocurren básicamente hipercolesterolemia,
en los sitios de producción o en los de utilización hipertrigliceridemia, el estrés mecánico
de las lipoproteínas del plasma y provocan varios de la hipertensión arterial, agresiones
tipos de hipo e hiperlipoproteinemias disminución químicas como el
o elevación de los niveles plasmáticos de tabaquismo, etcétera altera la relación
lipoproteínas. existente entre el endotelio vascular, las
El análisis de las lipoproteínas plasmáticas tiene células del músculo liso, los monocitos,
valor diagnóstico, ya que permite el los macrófagos, las plaquetas y los
reconocimiento de defectos primarios componentes de la sangre circulante,
hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia en particular los lípidos, y genera una
familiares, deficiencia familiar de lipoproteína respuesta inflamatoria fibroproliferativa,
lipasa o apoproteína CII, etcétera; y es de gran con la participación de un gran número
valor para describir la alteración lipoproteica de factores de crecimiento, citocinas y
subyacente a otro trastorno clínico, como la moléculas vasorreguladoras, que dan
diabetes, la obesidad, la hepatitis, el origen a las placas ateroscleróticas.
hipotiroidismo, el consumo de alcohol, el uso de Por otro lado, se ha observado que las
anticonceptivos orales. partículas LDL oxidadas por los
Cabe destacar que la mayor parte de las macrófagos lo cual ocurre normalmente
hiperlipo-proteinemias, aquellas que consisten causan lesión al endotelio, lo que
en una elevación de la concentración de puede ser, de manera particular,
colesterol de LDL, de VLDL y de Lp(a), conllevan aterógeno. La formación de anticuerpos
un alto riesgo de producir accidentes cardio y contra LDL oxidadas también puede ser
cerebrovasculares, necrosis o pérdida de la importante en la formación de la placa.
función en las extremidades, lo cual se debe a Por tanto, hay un interés clínico cada
que el colesterol es el agente causal de la vez mayor en la función de los
aterosclerosis subyacente en dichos antioxidantes, como las vitaminas C, E
padecimientos. De ahí el interés actual por el y el -caroteno. Los estrógenos
diagnóstico temprano y el tratamiento de estas también pueden actuar como
hiperlipoproteinemias. antioxidantes en la prevención de
Se desconoce el mecanismo exacto por el cual aterosclerosis. Inclusive, se ha visto
la hipercolesterolemia conduce a la que las lipoproteínas HDL tienen
aterosclerosis. Sin embargo, se cree que al efectos antioxidantes in vitro.
alterarse la relación colesterol/fosfolípido que Tradicionalmente, las anomalías de los
lleva consigo un incremento en la viscosidad y lípidos sanguíneos se han valorado con
maleabilidad de las membranas se inducen un examen global de colesterol y TAG.
cambios en el endotelio y en los monocitos con En la actualidad estos datos son
un aumento en su migración y adherencia insuficientes para valorar correctamente
una hiperlipemia, por lo que se deben

163
investigar también las diferentes fracciones
lipoproteicas. Determinación de triacilgliceroles. El
método utilizado se basa en la hidrólisis
FUNDAMENTO DE LAS DETERMINACIONES de los TAG por una lipasa y la
determinación del glicerol liberado en la
La evaluación de pacientes en los que se
reacción. Para ello, el glicerol es
sospecha alguna alteración en los lípidos
fosforilado por la glicerol cinasa
plasmáticos puede incluir la medición de
formando glicerol-3-fosfato, el cual se
colesterol total y TAG y de una o más
oxida por la glicerolfosfato oxidasa a
lipoproteínas. Además, la cuantificación de Lp(a),
dihidroxiacetona fosfato generando en
apoAI y apoB, o la actividad de la lipoproteína
la reacción peróxido de hidrógeno. La
lipasa u otras enzimas, está siendo ampliamente
peroxidasa cataliza la transferencia de
valorada para incluirla como procedimiento
oxígeno del peróxido a un aceptor que
clínico de rutina.
es cromógeno, como la 4-
Determinación del colesterol total. El colesterol aminoantipirina (4-AAP) y el 3,5-dicloro-
total es igual a la suma del colesterol contenido 2-hidroxibencensulfonato (DHBS), que
en las tres lipoproteínas que lo transportan: se colorean al oxidarse. La absorbencia
Colesterol total = colesterol VLDL + colesterol del cromógeno oxidado a 520 nm es
HDL + colesterol LDL proporcional a la concentración de
TAG.
La reacción completa se expresa:
Además, el colesterol existe en el organismo en Lipasa
dos fracciones: una en estado libre y otra TAG glicerol + ácidos grasos
esterificado –60 a 75%–, por lo que, para la
determinación del colesterol total, se utiliza una Glicerol cinasa
serie de reacciones enzimáticas en donde, en Glicerol + ATP glicerol-3-fosfato +
una primera reacción, los ésteres se hidrolizan ADP
dejando libre el grupo 3-OH del colesterol. En la Glicerolfosfato oxidasa
segunda reacción este grupo se oxida y se Glicerol-3-fosfato + O2
obtiene, como dihidroxiacetona fosfato + H2O2
un producto, el peróxido de hidrógeno, el cual, Peroxidasa
por efecto de la peroxidasa, transfiere uno de H2O2 + 4-AAP + DHBS cromógeno
sus oxígenos a un aceptor cromógeno. La oxidado + H2O
absorbencia del cromógeno 4-benzoquinona-
monoimino-fenazona) se determina a 546 nm y Determinación de colesterol-HDL. Por regla
es proporcional a la concentración de colesterol. general, el análisis de las lipoproteínas del
La reacción global es la siguiente: plasma requiere, primero, la separación de
las clases de lipoproteínas y, segundo, la
Colesterol esterasa medición de la lipoproteína o del
Ésteres de colesterol colesterol + ácidos componente lipoproteico de interés.
grasos La determinación es relativamente simple
Colesterol oxidasa si se precipitan todas las lipoproteínas que
Colesterol + O2 4-colestoma + H2 O2
contienen apoB100 –VLDL, IDL, LDL y
Peroxidasa Lp(a)– a excepción de las HDL con un
2 H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol cromógeno +
polianión, generalmente
H2O
glucosaminoglicanos con carga negativa –

164
heparina, dextran o fosfotungsteno– y un catión precisa del nivel de LDL en la mayoría de
bivalente–por lo común, Mn2+ o Mg2+ y se las personas. Por ello es posible estimar
determina el colesterol-HDL que queda en con bastanteexactitud, en casi todos los
solución por el método descrito para el colesterol casos, la concentración de LDL sobre la
total. base del conocimiento de la concentración
La relación colesterol total/colesterol-HDL se de VLDL (estimada por los TAG) y la del
considera como un indicador de riesgo coronario. colesterol total. No obstante, para estimar
Normalmente esta relación es menor de cinco; con mayor exactitud la concentración de
mientras menor sea el valor, mejor será el LDL debe cuantificarse la concentración de
pronóstico para el paciente. colesterol de las HDL, lo cual es
relativamente simple.
Determinación de colesterol-VLDL. En general,
Las LDL se estiman como sigue:
la concentración de TAG en el plasma sanguíneo
Colesterol LDL = colesterol-total –
proporciona un parámetro excelente de la
(colesterol-HDL + colesterol-VLDL)
concentración de las lipoproteínas ricas en TAG
como las VLDL. Esta apreciación parte de que Si se determina la concentración de lípidos
en condiciones normales de ayuno no se en moles en lugar de en peso y se
encuentran quilomicrones en el plasma y la sustituye el valor estimado de VLDL a partir
proporción TAG/colesterol de la VLDL es de la concentración de TAG, la fórmula
invariable –de 5:1 en mg/dl o de 2.2:1 en mmol/l– equivalente se transforma en la expresión
, de tal modo que la cuan-tificación de la descrita por Fridewald (1972):
concentración de TAG es suficiente para calcular Colesterol LDL = colesterol total –
la concentración de la VLDL con un porcentaje (colesterol HDL + TAG/2.2)
de error pequeño en la estimación. Si la
concentración de colesterol-VLDL es la quinta
parte de la concentración de TAG cuando ésta Otra forma sencilla de determinación
se expresa en mg/dl, entonces: indirecta del colesterol-LDL es el método
del polivinilsulfato (PVS). El PVS provoca la
precipitación de las LDL y deja en el
TAG sobrenadante las VLDL y las HDL. El valor
Colesterol- VLDL = ----------- del colesterol-LDL se calcula restando al
5 valor del colesterol total (colesterol en
o si las concentraciones se expresan en mmol/l: VLDL, LDL y HDL) el valor del colesterol en
TAG el sobrenadante de la precipitación
Colesterol- VLDL = ----------- (colesterol en VLDL y HDL).
2.2
Colesterol LDL = colesterol total –
colesterol en el sobrenadante (colesterol-
Esta fórmula no es apropiada para muestras con
HDL y colesterol-VLDL)
una concentración de TAG mayor a 400 mg/dl
(10.390 mmol/l) o en muestras que tengan La determinación de LDL se puede hacer
quilomicrones. directamente mediante procesos
inmunoquímicos que requieren una
Determinación del colesterol LDL.
especial destreza y un equipamiento
Aproximadamente las dos terceras partes del
específico, por lo que resulta de difícil
colesterol plasmático total son transportadas en
adaptación a fines académicos. La técnica
las LDL de tal manera que, la concentración de
consiste en hacer reaccionar esferas de
este lípido proporciona una medida bastante

165
látex revestidas con anticuerpos contra inmunoanálisis ligado a enzimas y de
apolipoproteínas de las LDL. Estas partículas se fluorescencia (ELISA).
separan del resto y se determina el colesterol.
Quilomicrones. Cuando existen quilomicrones Material
pueden ser detectados si se deja el tubo de
• Gradilla con 8 tubos de ensayo.
ensayo que contiene el plasma sanguíneo en el
• Pipetas de 5 y 10 ml.
refrigerador durante una noche. Los
• Pipetas automáticas
quilomicrones de mayor tamaño, pero no las
• Puntas para pipetas automáticas
VLDL, se ubicarán en la superficie del tubo
•Solución de enzimas para colesterol:
formando una capa cremosa que puede
amortiguador Tris 100 mmol/l, pH 7.7;
detectarse visualmente. La presencia de MgCl2 50 mmol/l, 4-amino-antipirina 1
quilomicrones en el plasma en ayunas se
mmol/l, fenol 6 mmol/l; colesterol esterasa
considera anormal.

; 160 U/l, colesterol oxidasa
100 U/l y
Determinación de Lp(a). La Lp(a) se determina peroxidasa
2 000 U/l.
directamente por métodos inmunoquímicos al •Patrón de colesterol de 170 ó de 200
igual que las LDL y, como ya se dijo, su mg/dl (5.17 mmol/l) –para colesterol total.
concentración constituye un factor independiente •Solución de enzimas para TAG:
de riesgo coronario. Normalmente la Lp(a) se amortiguador Tris 100 mmol/l, pH 6.7, ATP
precipita junto con las lipoproteínas que 0.7 mmol/l, MgCl2 4 mmol/l, 4-
contienen apoB, por lo que la medición del aminoantipirina 0.4 mmol/l, 3,5-dicloro-2-
colesterol de la LDL incluye la contribución de hidroxibencen-sulfonato 0.8 mmol/l, lipasa
colesterol de la Lp(a).
1 000
U/l; glicerol cinasa
1000 U/l, glicerol
Determinación de apoAI y apoB. La fosfato oxidasa 4000 U/l y peroxidasa

determinación de apolipoproteínas, 2000 U/l.


particularmente la apoA y la apoB, es un dato •Patrón de TAG (trioleína) de 250 mg/dl
complementario para la cuantificación de otros (2.8 mmol/l) o de 100 mg/dl.
componentes lipoproteicos y ayuda a evaluar si •Reactivo precipitante para HDL: sulfato de
un individuo tiene un riesgo aumentado de dextrán 10g/l, MgCl2 0.5 mol/l.
cardiopatía coronaria, sobre todo en los estados •Espectrofotómetro a 520 y 540 nm.
hiperlipidémicos donde hay un aumento de TAG •Jeringa, ligadura y torundas con alcohol.
en los quilomicrones o en las VLDL, y cuando las •Gotero con anticoagulante.
LDL y HDL contienen menos cantidad de ésteres
de colesterol y más TAG en su núcleo debido al Método
intercambio de los componentes de éstos entre 1.Obtener plasma de un voluntario. El
las lipoproteínas. En tales circunstancias, la plasma posprandial contiene
cuantificación de las apoproteínas proporciona quilomicrones, lo que puede aumentar
cálculos más seguros y útiles de la marcadamente la concentración plasmática
concentración de partículas lipoproteicas. de TAG, por ello es importante permanecer
La mayoría de los métodos de en ayunas durante 12 horas antes de la
cuantificación, todos los cuales requieren un punción venosa. La estabilidad del plasma
equipamiento especial, se basan en la
es de 3 días a 4o C.
identificación inmunológica de las
apolipoproteínas. La técnica más usada es el

166
Proceder a determinar colesterol total, TAG y Agregar a todos los tubos 1 ml de solución
colesterol-HDL como se describe a continuación de enzimas para TAG.
2. A 0.5 ml de plasma agregarle 0.05 ml (50 µl) Mezclar e incubar a temperatura ambiente
de la solución precipitante –de VLDL y LDL– durante 10 min.
para determinación de colesterol-HDL; mezclar 4. Leer la absorbencia (A) en el
perfectamente y dejar reposar 10 minutos. espectrofotómetro a 540 nm; calibrar a cero
Centrifugar 10 minutos a con el blanco.
3 000 rpm. El sobrenadante libre de
lipoproteínas, excepto HDL que continúa siendo Resultados
soluble, será utilizado para determinar el
1. De acuerdo al estándar de colesterol,
colesterol.
calcular la concentración de colesterol
3. Para la determinación de colesterol total y
correspondiente a los tubos 3 y 4 (tubos
colesterol-HDL preparar la siguiente serie de
que contienen el plasma y el sobrenadante)
tubos:
de la siguiente manera:
Preparación de los tubos (volumen en ml) Cs
Tubo 1 2 3 4 [Colesterol] = ------ X Ap
H2O (blanco) 10 µl - - - As

Estándar de - 10 µl - - Cs = Concentración del estándar en mg/dl


colesterol o mmol/l.
Plasma - - 10 µl - As = Absorbencia del estándar.
Ap = Absorbencia del problema.
Sobrenadante - - - 20 µl
con HDL 2. Calcular la concentración de TAG de
la siguiente manera:
Agregar a todos los tubos 1 ml de solución de
enzimas para colesterol. Mezclar e incubar a Cs
temperatura ambiente durante 10 min. [Triacilgliceroles] = ------ X Ap
As
4. Leer la absorbencia (A) en el
espectrofotómetro a 520 nm; calibrar a cero con
el blanco.
Cs = Concentración del estándar en mg/dl
Para determinar los TAG preparar la siguiente
serie de tubos: o mmol/l.
As = Absorbencia del estándar.
Preparación de los tubos (volumen en ml). Ap = Absorbencia del problema.
Tubo 1 2 3 3. Compare sus resultados con los valores
Blanco - - normales del colesterol total, del colesterol-
- HDL y de los triacilglicéridos en el plasma.
Estándar - 10 µl - 4. Calcular la concentración de colesterol
de TAG VLDL por la fórmula: colesterol-VLDL=
Plasma - - 0.01 µl TAG/5.

167
5. Calcular la concentración de colesterol LDL a • Completar los datos que hacen falta en
partir de las concentraciones de colesterol total, los cuadros anteriores (tomar en cuenta
HDL y VLDL. que no puede hacerse el cálculo de la
6. Estimar el cociente colesterol-HDL/colesterol- concentración de VLDL si los TAG son
LDL y de colesterol total/colesterol-HDL (índices mayores de 400 mg/dl).
aterogénicos). • Constatar la evolución temporal de los
7. Analizar el significado de los datos obtenidos y niveles de colesterol y TAG.
hacer un informe de los resultados y de las • Detectar la presencia de hábitos de alto
conclusiones que de éstos se deriven. riesgo y hacer notar la importancia de las
8. A continuación se resumen dos casos modificaciones en esos hábitos.
clínicos: • Al ser iguales todos los factores de riesgo
para ambas personas: ¿cuál tendría mayor
En enero de 1997, un hombre de 38 años riesgo de enfermedad coronaria?
asistió a una evaluación médica. Pesó 93 kg, • Detectar cómo dos personas con el
tenía presión arterial alta –160/108–, realizaba mismo colesterol total tienen perfiles
poco ejercicio, tomaba de 5 a 10 cervezas y lipídicos distintos.
fumaba 2 a 3 cajetillas de cigarros a la semana.
El peso y las concentraciones de los lípidos Ene 97 Oct 97 Feb 98
durante los meses siguientes están resumidos Peso (Kg) 93 90 95
en la tabla siguiente: Colesterol total mg/dl 275 295 320
TAG mg/dl 490 470 550
B) Una mujer de 23 años de edad solicita una HDL mg/dl 35 33 29
determinación de lípidos debido al LDL directa mg/dl - - 259
antecedente familiar importante de Colesterol total/ - - -
cardiopatía. La paciente no fuma y pesa colsterol-HDL
55 kg. Los resultados de la determinación (índice aterógeno)
de los lípidos iniciales después de un año
y tres meses de haber iniciado la Referencias
administración de anticonceptivos orales 1.Allain CA, Poon LS, Chan CSG,
–desogestrel–, son los siguientes: Richmond W, Fu PC. Enzymatic
determination of total serum cholesterol.
Ene Ene Abr Clin Chem. 1974; 20: 470-475.
97 98 98 2.Montgomery R. Bioquímica. Casos y
Peso (kg) 55 56 58 texto. 6a.ed. Barcelona: Editorial Harcourt-
Colesterol total 285 263 315 Brace; 1998: 332-389.
mg/dl 3. Pennachio D. Lineamientos para la
TAG mg/dl 85 90 124 detección de hipercolesterolemia. Atención
HDL mg/dl 40 37 44 Médica. 1997; 10/2: 30-43.
Colesterol-VLDL 4.Alba Zayas EL, Pereira RG, Aguilar BA.
LDL mg/dl Lipoproteína (a): estructura, metabolismo,
Colesterol genética y mecanismos patogénicos. Rev
total/colesterol-HDL Cubana Invest Biomed. 2003; 22(1): 32-40.
(indice aterógeno) 5. Masa-aki K, Rader JD. Gene therapy
for lipid disorders. Curr Control Trials
Cardiovasc Med. 2000; 1:120-127.

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6. Russet G.W. Dextran sulfate-Mg2+
precipitation procedure for quantitation of HDL
cholesterol. Clin Chem. 1982; 28(6): 1379-88.
7.Samaniego V, López D. Lípidos. Sinopsis del
informe del panel de expertos sobre niveles de
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8.Vogel AA. Coronary risk factors, endothelial
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9. Velázquez CA. Papel de las especies
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10. Mohammed HM, Frohlich J. Effects of dietary
phytosterols on cholesterol metabolism and
atherosclerosis: clinical and experimental
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169
Práctica 11

El efecto del tetracloruro de carbono sobre


las transaminasas

Tiempo de Práctica: 2 Horas


experimentales que deberán ser
Esta práctica es una simulación anotados en papel como cualquier
compuratizada de un fenómeno práctica convencional.
bioquímica; tiene el propósito de que los 4. Repetir el experimento las veces que
alumnos se ejerciten en el manejo de los el usuario quiera, o las veces que sean
datos obtenidos por medio de necesario, hasta obtener los datos
experimentación simulada estrictamente completos del experimento. Se sugiere
controlada. repetirlo por lo menos dos veces y hacer
un promedio de los datos obtenidos.
Método 5. Hacer una tabla con dichos datos,
1. Encender la computadora y localizar el graficarlo, analizar el significado de los
icono del programa. El efecto de la mismos y, de acuerdo a lo anterior,
insulina sobre la glucemia de la rata. validar o rechazar la hipótesis del
Hacer doble clic sobre este icono. experimento.
2. Hacer clic sobre los botones que
indican cada de las partes de la práctica; Referencias
empezar por leer las instrucciones, los
objetivos y el fundamento de la práctica 1. Stryer L. Bioquímica. 5a. ed.
para continuar con la parte experimental. Barcelona: Editorial Reverté; 2003.
3. Seguir todos los pasos de la práctica; 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto
poner especial atención en la obtención con aplicaciones clínicas. 5a. ed.
de los datos Barcelona: Editorial Reverté; 2001.
3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioquímica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones

170
Práctica 12
Estudio de los productos finales
del metabolismo nitrogenado

Tiempo de práctica: 2 horas Los compuestos derivados de aminoácidos,


además de las proteínas celulares, incluyen
Objetivos hormonas (como la tiroxina, epinefrina e
insulina), neurotransmisores, creatina
1. Identificar los sustratos, enzimas y
fosfato, el hemo de la hemoglobina y de los
productos finales del catabolismo de los
citocromos, el pigmento de la piel (la
compuestos nitrogenados.
melanina), las purinas y las pirimidinas,
2. Identificar al amoníaco y a la urea como
etanolamina, colina, esfingosina, el glutatión,
los productos finales del metabolismo de las
los ácidos glicocólico y taurocólico, la
proteínas y los aminoácidos.
tioetanolamina de la CoA, el óxido nítrico y
3. Identificar a la creatinina y al ácido úrico
las poliaminas entre muchos otros. Se puede
como productos mayoritarios del
decir que todos los compuestos
metabolismo de otros compuestos
nitrogenados del organismo son sintetizados
nitrogenados.
a partir de aminoácidos.
4. Conocer las causas y consecuencias de la
Los aminoácidos son fuente de energía, sus
sobreproducción de los productos finales del
esqueletos de carbono son directamente
metabolismo nitrogenado.
oxidados o convertidos a glucosa y ésta es
5. Conocer las técnicas analíticas y los
oxidada o almacenada en forma de
requerimientos para la determinación de los
glucógeno. Los aminoácidos también
principales productos finales del
pueden ser convertidos en triacilgliceroles
metabolismo nitrogenado en suero y/o orina.
para ser almacenados en el tejido adiposo.
6. Llevar a cabo las determinaciones
A pesar de la uniformidad de los
analíticas de urea, creatinina y ácido úrico en
aminoácidos como bloques estructurales de
suero o plasma e interpretar los resultados
las proteínas, no existe un planteamiento
obtenidos.
unitario en cuanto a su metabolismo, ya que
su estructura hidrocarbonada es diversa y,
INTRODUCCIÓN
aunque algunos de ellos pueden
interconvertirse mediante reacciones
Las proteínas de la dieta son la fuente
metabólicas, cada uno es un compuesto
primaria de nitrógeno en el cuerpo. Los
único, con un metabolismo y funciones
aminoácidos producidos por la digestión de
biológicas individuales. Quizá la parte de su
proteínas son absorbidos a través del
metabolismo más uniforme sea el destino de
epitelio intestinal y entran a la circulación
su parte nitrogenada. El nitrógeno se libera
portal. Las células incorporan los
como amoníaco, cuya mayor parte se
aminoácidos, los cuales son usados para la
convierte en urea, un compuesto no tóxico,
síntesis de proteínas y otros compuestos
muy soluble en agua, que se excreta
nitrogenados o son oxidados para producir
fácilmente por los riñones.
energía.

171
La síntesis se realiza principalmente en el Azoemia es una designación bioquímica que
hígado, donde se lleva a cabo la mayor parte se refiere a cualquier aumento de la
de la biosíntesis de aminoácidos no
esenciales y Compuesto Concentración Cantidad

gran parte de la degradación de todos los Nitrogenado Plasmática Excretada

aminoácidos. En orina/dÍa
Urea 20-30 mg/dl 12-20 g de
EL NITRÓGENO NO PROTEÍNICO EN LA nitrógeno
SANGRE ureíco
El nitrógeno no proteínico en la sangre se Ácido úrico 3-6 mg/dl 250-750 mg
encuentra en un grupo heterogéneo de
sustanciasque incluye la urea, la creatinina, Creatinina 1-2 mg/dl Hombres:14-26
la creatina, el ácido úrico, los aminoácidos mg/Kg
no proteicos ornitina y citrulina, algunos Mujeres:11-20
péptidos como el glutatión y otros, con una mg/Kg
concentración total de nitrógeno de 25 a 40 NH4+ 10-70 µl/dl 140-1500 mg de
mg/dl. La urea es el principal compuesto nitrógeno de
nitrogenado no proteico del plasma, otros amonio
constituyentes principales en orden concentración plasmática de compuestos
decreciente de contribución de nitrógeno son nitrogenados no proteicos, principalmente
los aminoácidos, el ácido úrico, la urea y creatinina.
creatinina, la creatina y el amonio.
Las cantidades exactas de cada componente Material
varían según la ingesta de proteínas y el • 3 Gradillas con 2 y 3 tubos.
estado fisiológico del organismo. • y Pipetas automáticas
Aunque la urea es el mayor producto final • Puntas para pipetas automáticas
del metabolismo nitrogenado, el nitrógeno es • 3 Pipetas de 1 ml.
también excretado en otros compuestos: la • Suero y orina.
creatinina es producida a partir de la creatina • Estándar de urea 50 mg/dl.
fosfato, el ácido úrico a partir de la • Estándar de creatinina 2 mg/dl.
degradación de las bases púricas y el • Estándar de ácido úrico 5.3 mg/dl.
amonio es liberado por la glutamina, • Espectrofotómetro a 340, 492 y 520 nm.
particularmente en el riñón como una vía de UREA DE LA SANGRE O NITRÓGENO DE LA UREA
excreción de H+ por la orina. Otros DE LA SANGRE (BUN-BLOOD UREIC NITROGEN)
productos nitrogenados derivados del
La urea es el principal producto final del
metabolismo de neurotransmisores,
catabolismo proteínico. Se forma en el
hormonas y demás compuestos
hígado y en el riñón a partir de bióxido de
especializados son excretados también por
carbono y amoniaco en el ciclo de la urea.
la orina aunque representan una mínima
parte del nitrógeno eliminado. Algunos de
La expresión "nitrógeno ureico" surge del
estos productos, como la bilirrubina (formado
hecho de que tradicionalmente la urea se
en la degradación del grupo hemo), son
determina a partir del nitrógeno contenido en
excretados principalmente en las heces.
el amoniaco que se forma por la acción de la
enzima ureasa sobre la urea. Aunque es un
término similar, no es equivalente al de urea,

172
y se puede establecer una correlación entre tanto retención de urea como consecuencia
ambos mediante la expresión: urea (mg) = de una enfermedad renal crónica o aguda.
nitrógeno ureico (mg) x 2.14 (el peso Por último, las causas posrenales se deben
molecular de la urea es de 60 e incluye 2 a padecimientos que causan obstrucción de
átomos de nitrógeno por molécula. Por lo las vías urinarias inferiores, con paso de la
tanto el BUN = 60/28= 2.14). Por ello un urea de la orina estancada a la circulación
valor de BUN de 20 mg/dl equivale a una sanguínea.
urea de 20 x 2.14 ó 42.8 mg/dl. También son significativos los valores bajos
La concentración sérica de urea varía de urea en la enfermedad hepática grave, ya
bastante en los individuos normales y que un hígado lesionado es incapaz de
depende de factores tan diversos como la sintetizar urea, lo cual permite la
ingesta dietética de proteínas y el estado de acumulación de amonio en la sangre
hidratación del organismo. causando encefalopatía hepática (asterixis,
La elevación de sus valores en el torrente ataxia, coma, confusión, estupor, lenguaje
circulatorio se denomina uremia. Los lento y somnolencia).
síntomas clínicos pueden presentarse con La determinación de urea, por sí sola, es de
valores cercanos a 50 mg/dl (>8 mmol/l). El poco valor diagnóstico, y deben realizarse
catabolismo proteínico rápido y el deterioro valoraciones comparativas a lo largo del
de la función renal son las principales tiempo o utilizarse conjuntamente con otras
causas de su elevación. pruebas.
La urea se filtra normalmente libre a través La determinación de urea se basa en la
de los glomérulos renales de modo que, una acción de la enzima ureasa sobre la urea
pequeña cantidad se absorbe en los túbulos para producir amoniaco y ácido carbónico. El
y el resto se excreta en la orina. Sin amonio formado se valora haciéndolo
embargo, el cambio en la concentración de reaccionar con ácido -cetoglutárico en
la urea sanguínea no es indicativo de una presencia de la glutamato deshidrogenasa.
causa determinada ya que muchas La disminución de la absorbencia frente al
enfermedades pueden provocar alteraciones tiempo ( Absorbencia) a 340 nm,
en su concentración. Las modificaciones en correspondiente a la oxidación de NADH a
la concentración de urea sérica suelen NAD+, es proporcional a la concentración de
clasificarse por su origen en prerrenales, urea.
renales o postrenales.
Las causas prerrenales pueden agruparse Urea + H2O + 2 H+ 2 NH4+ + CO2
en factores que resultan de perfusión renal
inadecuada y, por tanto, de una menor 2 NH4+ + 2 α-cetoglutarato + 2 NADH
filtración glomerular (deshidratación, shock,
disminución del volumen sanguíneo y fallo H2O + 2 NAD+ + 2 glutamato
cardiaco congestivo) o trastornos resultantes Método
de valores anormalmente altos de proteínas Como la urea es degradada rápidamente por
sanguíneas. La ingestión excesiva de acción bacteriana, las muestras tomadas
proteínas y el incremento del catabolismo de para proceder a su determinación deben ser
las proteínas (fiebre, estrés y quemaduras) refrigeradas hasta su procesamiento.
son otras causas adicionales del incremento
de urea sérica.
Las causas renales son aquellas con
alteración de la filtración glomerular y, por

173
Pipetear en los siguientes tubos: destoxificación y a la excreción renal, se
Tubo 1 2 encuentran presentes en la sangre; la
Muestra - concentración normal del nitrógeno del suero
(suero, plasma u 10 µl debido al ion amonio suele ser menor de 70
orina mg/dl.
Estándar - En vista de la toxicidad del amonio, una
elevación apreciable de los niveles de
10 µl
amoníaco en sangre podría afectar
Solución reactiva 1 ml 1 ml
seriamente el equilibrio ácido-base y a la
para urea
función cerebral.
Mezclar y poner en marcha el cronómetro,
anotar las absorbencias a los 30 (A1) y a los Las hepatopatías graves traen como
consecuencia un aumento de la
90 (A2) segundos, calcular: ∆ = A1 - A2.
concentración del amonio en la sangre, el
Leer frente a agua destilada en el plasma y el líquido cefalorraquídeo. Las
espectrofotómetro a 340 nm. enfermedades hepáticas en las que se
Con las diferencias de absorbencia encuentran tales elevaciones tienen muy mal
anotadas (A), aplicar la siguiente ecuación: pronóstico, ya que indican lesión intensa del
∆A Muestra hígado con inminente insuficiencia hepática,
X [Estándar] = la cual va acompañada de diversas
[Urea] manifestaciones tóxicas, particularmente en
el cerebro.
∆A Estándar Las deficiencias de cualquiera de las
El resultado se obtiene en mg/dl (x 0.1665 = enzimas del ciclo de la urea, aunque muy
mmol/l); mg/dl de urea x 0.466 = mg/dl de poco frecuentes, son todas ellas causas
urea /BUN. importantes de incremento de los niveles
El método es lineal hasta valores de 500 plasmáticos de amoníaco y de las
mg/dl. manifestaciones tóxicas.
Diluir la orina 1:50 con agua destilada. En las acidosis metabólicas, la excreción
No emplear suero o plasma turbios o renal del ión amonio (por la hidrólisis de
hemolizados. glutamina) aumenta porque el riñón lo
secreta para eliminar junto con él protones
AMONIO en la orina.
Las muestras para la determinación del
La producción de urea es un medio de
amonio deben obtenerse de preferencia de
destoxificación del amonio derivado del
sangre arterial o de los capilares del lóbulo
catabolismo proteico, de la flora intestinal y
auricular, ya que el metabolismo del amonio
de la desaminación oxidativa de los
en el músculo aumenta los valores de éste
aminoácidos.
en sangre venosa y, por lo tanto, también el
El intestino es una fuente importante de
ejercicio puede causar un aumento en la
amonio, en donde se forma por degradación
concentración de amoníaco. La muestra de
bacteriana de las proteínas de la dieta y de
sangre recién obtenida se debe vaciar en un
la urea. La mayor parte de este amonio es
tubo refrigerado, colocarse en agua helada y
separado de la sangre de la vena porta por
enviarse de inmediato al laboratorio para su
el hígado para ser convertido en urea.
análisis (el retraso en el procesamiento
En otras condiciones, las pequeñas
puede ocasionar resultados falsamente
cantidades de amonio que escapan a la
elevados).

174
Los niveles de amoníaco varían con la siendo la masa muscular el factor
ingestión de proteínas. condicionante más directo de su formación y
Este compuesto es principalmente excretado excreción total por día.
por la orina pero también hay pérdidas La depuración de la creatinina es una prueba
importantes por las heces y la piel. rutinaria de elección por la facilidad con que
La medición de amonio se basa en el mismo se practica. No es, sin embargo, una medida
principio que la determinación del nitrógeno real de la filtración glomerular, ya que una
de la urea. pequeña parte de la creatinina se secreta a
nivel tubular. A pesar de ello es una prueba
CREATINA Y CREATININA adecuada para seguir la evolución de los
padecimientos que afectan al glomérulo.
Estas sustancias nitrogenadas no proteicas
Debido a que el riñón la excreta continua y
junto con la urea pueden ser consideradas
fácilmente, los valores aumentados en suero
en su conjunto porque las concentraciones
y disminuidos en orina indican disminución
que alcanzan en el suero muy
en la velocidad de filtración glomerular.
frecuentemente se ven afectadas
Por consiguiente, la creatinina es un
simultáneamente en cualquiera de las dos
indicador muy específico de la función renal.
direcciones (aumento o disminución) por los
La variación diurna de la creatinina puede
mismos factores.
estar relacionada con los alimentos, con
La creatina es sintetizada en el hígado y en
valores mínimos que se presentan alrededor
el riñón a partir de tres aminoácidos:
de las 7:00 horas y valores máximos
arginina, glicina y metionina en forma de S-
alrededor de las 19:00 horas. Por tanto, esta
adenosilmetionina. La creatina así formada
prueba realizada con un espécimen urinario
es transportada a los músculos por la
recolectado en 24 horas refleja tanto los
sangre, donde es fosforilada hasta formar
valores máximos como los mínimos de
fosfato de creatina, compuesto de gran
creatinina. Las mediciones de creatinina se
importancia como fuente de energía para la
hacen en suero y en orina de 24 horas.
contracción muscular intensa durante breves
La recolección de orina debe ser de
periodos. Normalmente, la fosfocreatina se
preferencia en un periodo de 24 horas, pero
desdobla en creatinina. En algunos
esto no es necesario si se conoce el tiempo
padecimientos, en particular las
de la recolección con exactitud, aún si es
enfermedades musculares, se libera creatina
menor, por ejemplo 22 ó 4 horas.
en cantidades mayores a la circulación y se
La medición se basa en la reacción de Jaffé,
puede determinar en la orina.
en la que la creatinina se trata con solución
La creatinina se forma de manera continua
alcalina de picrato (17.5 mmol/l) para
en los músculos a partir del fosfato de
producir un complejo de color naranja rojizo
creatina; alrededor de 2% de la creatina se
brillante. Hay varias sustancias en el suero y
convierte directamente en creatinina; posee
orina que actúan como cromógenos
gran difusibilidad y es fundamentalmente
inespecíficos (glucosa, proteínas y otros
excretada por los riñones, además de las
cromógenos no derivados de la creatinina),
pequeñas cantidades que se eliminan por
lo que representa un problema para la
heces.
determinación. Por este motivo se adapta la
La concentración sérica de creatinina es
reacción de Jaffé a un método, que consiste
relativamente constante en virtud de su
en medir el cambio en la absorbancia
relativa independencia de factores como la
durante un breve período de tiempo. La
dieta (ingesta de proteínas), grado de
medida del incremento de color al inicio de la
hidratación o metabolismo de proteínas,

175
reacción valorará principalmente la la xantina oxidasa en una reacción que
creatinina, ya que ésta reacciona más requiere de oxígeno molecular.
rápidamente con el picrato alcalino que los En animales inferiores, el ácido úrico es
otros cromógenos inespecíficos. El oxidado por acción de la uricasa y se
incremento de color detectado al poco transforma en alantoína, que es su producto
tiempo de iniciarse la reacción será debido de excreción. Algunos peces excretan ácido
únicamente a la concentración de la alantoico; los anfibios y peces, urea; y
creatinina presente y, por tanto, no valorará finalmente, los invertebrados marinos,
las posibles interferencias. amonio.
La cantidad de ácido úrico formado depende
Método de la velocidad del catabolismo de las
purinas endógenas y de la degradación de
Pipetear en los siguientes tubos:
las purinas provenientes de la dieta. El
TUBO 1 2 aumento del nivel de ácido úrico en la
MUESTRA 100 µl - sangre puede deberse a un aumento en el
ESTANDAR - 100 µl metabolismo de purinas endógenas, una
SOLUCION 1 ml 1 ml disminución en la eliminación de ácido úrico,
REACTIVA DE un aumento en la ingestión de purinas o a
CREATININA una reutilización disminuida de purinas.
La medición del ácido úrico del suero es muy
Mezclar y poner en marcha el cronómetro, útil para el diagnóstico de la gota, que es un
anotar las absorbancias a los 30 (A1) y a los síndrome provocado por la acumulación de
90 (A2) segundos, calcular: ∆ = A2 -A1. cristales de ácido úrico en las articulaciones
y el riñón.
Leer en el espectrofotómetro frente a blanco
El método de determinación de ácido úrico
de reactivos a 492 nm.
consiste en incubar el suero con uricasa, que
Cálculos: cataliza la hidrólisis específica de ácido úrico
Con las diferencias de absorbencia anotadas a alantoína. En una reacción catalizada por
(A), aplicar la siguiente ecuación: la peroxidasa (POD), el peróxido de
∆A MUESTRA hidrógeno formado en la reacción anterior
oxida al indicador (ácido 2,4,6-tribromo-3-
------------------- X [ESTANDAR] = [CREATININA] ácido hidroxibenzoico y 4-aminoantipirina,
∆A ESTANDAR compuestos que son incoloros en su forma
El resultado se obtiene en mg/dl reducida.) originando un derivado colorido
mg/dl Creatinina x 88.4 = mmol/l. (quinoneimina). La intensidad del color es
No utilizar sueros lipémicos. proporcional a la concentración del ácido
La creatinina tiene una estabilidad de menos úrico en la muestra; se mide en el
de 24 horas en refrigeración. fotocolorímetro a 520 nm.
El método es lineal hasta valores de 15
mg/dl.
Diluir la orina 1:50 con agua destilada.
ÁCIDO ÚRICO
El ácido úrico es el producto final del
catabolismo de las purinas en el hombre y se
forma a partir de la xantina, por la acción de

176
Método
Pipetear en los siguientes tubos: 5. D’Ocon, C. Fundamentos y técnicas
de análisis bioquímico. Editorial
TUBO 1 2 Paraninfo; 1998.
MUESTRA 100 µl - 6. Chernecky CC. Pruebas de laboratorio
ESTANDAR - 100 µl y procedimientos diagnósticos. 2a. ed.
SOLUCION 1 ml 1 ml México: McGraw-Hill Interamericana
REACTIVA DE Editores; 1999.
ACIDO URICO 7. Gaw A. Bioquímica clínica. 2a. ed.
Editorial Harcourt; 2001.
Mezclar e incubar 10 min. a temperatura
ambiente.
Leer la absorbencia (A) en el
espectrofotómetro frente a blanco de
reactivos a 520 nm.
La estabilidad del suero es de 3 días en
refrigeración.
Cálculo de la concentración de ácido úrico:
MUESTRA

------------------- X [ESTANDAR] = [ACIDO URICO]


ESTANDAR
El método es lineal hasta valores de 25
mg/dl.
Expresar el resultado obtenido en mg/dl y
mmol/L (peso molecular del ácido úrico
168.1).
Compare sus resultados con los valores
normales de ácido úrico en suero.

Referencias
1. González de Buitrago JM. Bioquímica
clínica. México: McGraw-Hill Interamericana
Editores, 1999.
2. Fossati P. Use of 3,5-dichloro-2-
hydroxy-benzensulfonic acid/4-
aminophenazone chromogenic system in
direct enzymic assay of uric acid in serum
and urine. Clin Chem. 1980;26:227.
3. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto
con aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Reverté; 2004.
4. Montgomery R. Bioquímica: Casos y
texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-
Brace; 1998.

177
Práctica 13
Huella génica
Objetivos DNA. Un ejemplo de esta secuencia puede
1. Que el estudiante conozca la aplicación de ser la siguiente.
las técnicas de DNA recombinante. ATTCGGTATTCGGTATTCGGT. A estas
2. Que el estudiante sea capaz de analizar e secuencias se les denomina STR por sus
interpretar los datos generados a partir de una siglas en inglés (Short Tandem Repeat). El
prueba de huella génica. genoma eucariótico contiene muchas de estas
3. El alumno adquirirá la capacidad de secuencias de DNA, y se ha visto que el
manejar muestras para análisis de ácidos número de unidades repetidas presenta
nucleicos. diferencias de individuo a individuo que con
4. El alumno desarrollará destreza en las huellas digitales. En el caso de gemelos
la interpretación de resultados de idénticos estas secuencias son idénticas.
metodologías básicas de análisis molecular. Estas regiones pueden ser aisladas del DNA
con enzimas de restricción apropiadas y
FUNDAMENTO separadas de acuerdo a su longitud mediante
El DNA es un polímero lineal formado electroforesis en gel. Cuando se completa el
por desoxirribonucleótidos que contienen a las proceso de separación el resultado se parece
bases nitrogenadas adenina, guanina, a un código de barras de un envase de
citosina, timidina. La interacción de las bases supermercado. Este código de barras de DNA
nitrogenadas por puentes de hidrógeno ha permitido esclarecer algunos hechos
permite la formación de la doble cadena de criminales y pruebas de paternidad, a la cual
DNA. Cada grupo fosfato está unido al se denomina técnica de “Huella génica”
carbono 5´ de una subunidad de azúcar y al Es muy frecuente que en la escena de
carbono 3´ de la subunidad de azúcar del un crimen se encuentren, en pequeñas
nucleótido contiguo. cantidades muestras de naturaleza biológica a
Las cadenas se mantienen unidas por partir de las cuales se puede extraer el DNA
puentes de hidrógeno entre las bases. Las como son la sangre, la saliva, la piel, el
cuales son completamente lineales. músculo, el cabello, el semen, los dientes y el
En la molécula de DNA que reside la hueso, entre otros.
información genética de un organismo, Un método que permite tomar una
específicamente en la secuencia de los pequeña cantidad de DNA y en pocas horas
nucleótidos, de tal manera que cada tres sintetizar millones de copias de una porción,
bases forman un codón que corresponde a su es el método de amplificación conocido como
vez a uno de los 20 aminoácidos, teniendo un PCR (reacción en cadena de la polimerasa),
total de 64 codones posibles, los cuales el cual se desarrollo por K. Mullis (1990), En
conforman el código genético. En el DNA se este método se requiere conocer la secuencia
encuentran dos tipos de secuencia, la que es de nucleótidos de los extremos del fragmento
capaz de ser leída para dar origen a una que se desea amplificar. Estas secuencias se
proteína lo que permite que una célula u usan para diseñar desoxioligonucleótidos
organismo crezca desarrolle también la no sintéticos de DNA complementarios a cada
codificante una que codifica para las uno de estos extremos de la cadena de la
funciones celulares y otra no codificante, que doble hélice. La muestra de DNA se coloca en
participa en la regulación de su expresión. una solución que contiene una DNA
Algunas de las secuencias de nucleótidos no polimerasa, grandes cantidades de
codificantes se caracterizan por ser cortas, desoxinucleótidos y los desoxioligonucleótidos
están alineadas en tándem y se repiten miles sintetizados previamente. El método se basa
de veces de manera constante a lo largo del en la repetición cíclica de tres reacciones

178
sucesivas: en la primera reacción, la solución forense. Acta Científica Venezolana. 50: 24-
se calienta para que el molde de DNA se 28, 1999.
separe en sus dos cadenas. En la segunda
reacción, la temperatura se reduce para Andréa Carla de Souza Góes, Dayse
permitir que los desoxioligonucleótidos se Aparecida da Silva, Cristiane Santana
apareen por complementariedad de bases Domingues, Joáo Marreiro Sobrinho, Elizeu
con el DNA molde y en la tercera reacción, la Fagundes de Carvalho. Identification of a
DNA polimerasa cataliza la síntesis criminal by DNA typing in a rape case in Rio
simultánea de las dos cadenas a partir de de Janeiro, Brazil. Sáo Paulo Medical Journal.
cada desoxioligonucleótido que actúa como Revista Paulista de Medicina. 120 (3): 77-80,
cebador. Al cabo del primer ciclo de tres 2002.
reacciones, el fragmento de DNA elegido se
ha duplicado y por lo tanto, la cantidad de Centre for Genetics Education. Genetic
DNA molde disponible para el segundo ciclo Testing and Screening II –Forensic and Other
es doble, lo mismo ocurre cada ciclo de Applications. Directory of Genetics Support
duplicación. Groups, Services and Information. Genetics.
La obtención de múltiples copias requiere 20 235-239, 2004-2005.
a 40 veces la repetición de los ciclos. El éxito
de esta técnica radica en el uso de una DNA Jeffreys Alec Genetic Fingerprinting Naure
polimerasa termoestable, que no se Medicine Vol 11(10).1035-1039. 2005.
desnaturaliza por los repetidos ciclos de
calentamiento. Esta enzima se aisló Mullis K.B the Unusual Origen of the
originalmente de la bacteria termófila Thermus Polymerase Chain Reaction Science Am. 262
aquaticus. (4) 56-65. 1990.
La base de la técnica conocida como
huella génica se basa en las diferencias
individuales de estas secuencias. Esto,
generalmente se trata de cambios en un solo
par de bases pertenecientes a diferentes
individuos, que se presentan una vez cada
500 a 1,000 pares de bases, como promedio.

Referencias
Curtis, H; Barnes, N; Biología. Sexta edición.
Editorial Médica Panamericana.

Lewin, B; Genes VI. Editorial Oxford.


Nelson, D; Cox, M; Lehninger. Principios de
Bioquímica. Tercera edición. Ediciones
Omega.

Yuri Sivolap, Ph.D., G. Krivda, Ph.D., N.


Kozhuhova., S. Chebotar., and Mark Benecke,
PH.D. A Homicide in the Ukraine. DNA-based
identification of a Boiled, Skeletozined, and
Varnished Human Skull, and of Bone
Fragments Found in a Fireplace. The
American jouenal of Forensic Medicine and
Pathology. 22 (4): 412-414 ,2001.

Lennie Pineda Bernal. El análisis de DNA


para pruebas de paternidad e identificación

179
SESIÓN 1 DE LABORATORIO PARA LA tratamiento dental, ya que ha presentado
PRÁCTICA DE HUELLA GÉNICA sangrado y pérdida de algunas piezas
dentales. Los otros sospechosos son los dos
ESCENA DEL CRIMEN empleados de la casa, el jardinero que tiene
El crimen se lleva a cabo en la calle Lago una antigüedad de 4 años y presenta una
Manitoba No. 520, Col. Ampliación Granada, lesión en el brazo que confiesa se hizo
Delegación Miguel Hidalgo, en el sofá de la arreglando el jardín y la cocinera quien tiene
sala se encuentra el cuerpo de la dueña de la sólo 3 meses laborando en la casa.
casa, una mujer de 42 años de edad. El Con esta evidencia se compara el DNA de
cadáver presenta signos de estrangulamiento cada sospechoso para encontrar al culpable
pero sin marcas de sogas o cinturones; o culpables del crimen, por lo que debe
tampoco se encuentran huellas digitales en su determinar si las muestras de sangre,
cuello. La víctima presenta una lesión cabellos, pieza dental y saliva sirven para
defensiva en el brazo derecho con arma estudiar el DNA y establecer las
punzo cortante. En el sofá se observan varias características que permiten utilizar alguna o
manchas de sangre, algunas de ellas secas. todas las muestras para el estudio.
Las más abundantes todavía están frescas. Cada equipo debe escoger alguna de las
Se ignora si la sangre pertenece a la víctima o evidencias previamente descritas y justificar
a sus agresores. su elección.
El laboratorio forense se encarga de recopilar Para realizar la comparación entre el DNA
la información de la escena dando a conocer encontrado en la escena con el DNA de los
los siguientes aspectos: el cuerpo de la sospechosos deben contarse con muestras
víctima se descubrió 20 minutos después del proporcionadas por los mismos. Mencione de
asesinato. Presentaba con un golpe en la dónde obtendría dicho material. En el caso del
cabeza, presenta señales de forcejeo en su esposo debe tenerse en cuenta que no se
brazo y debajo de las uñas se encuentran conoce su paradero, por lo cual la muestra
depositados restos de piel, sangre, y de debe ser extraída de algún objeto de uso
cabellos. Algunos de ellos presentan folículos. personal; defina cuál sería éste y justifique la
Todo señala que la víctima forcejeó con su o elección del mismo.
sus agresores.
En el lugar también se halló un florero con
restos de sangre, la cual no se sabe si
corresponde a la de la víctima o a los
agresores. En un extremo del sofá se
encuentra una pieza dental y, debido a que la
víctima conserva su dentadura completa, es
probable que el diente sea del victimario. En
el brazo izquierdo, la victima presenta varias
mordidas, algunas con sangre coagulada y
otras con restos de saliva mezclados con
sangre.
En el interior de la casa faltan algunas piezas
de valor, lo que sugiere que el móvil fué el
robo.
La policía cuenta con varios sospechosos,
entre los que se encuentra el esposo, con el
cual la víctima tuvo una discusión la noche
anterior. Se desconoce el tema de la
discusión y el paradero el esposo. Otros
sospechosos son los dos repartidores del gas
que una hora antes habían proporcionado el
servicio. Uno de ellos tiene problemas con la
dentadura y aclara que se encuentra en

180
SESION 2 DE LABORATORIO PARA LA 3.-A cada tubo adicionar 10 µl de la muestra
PRÁCTICA FINGERPRINTING correspondiente; utilizar una punta nueva para
MATERIAL cada muestra.
- DNA de la escena del crimen con
amortiguador. 4.-Adicionar 10 µl de la mezcla de enzimas de
- DNA del sospechoso 1 con amortiguador. restricción a cada uno de los tubos que
- DNA del sospechoso 2 con amortiguador. contienen la muestra de DNA. Se debe tener
- DNA del sospechoso 3 con amortiguador. cuidado de no contaminar la mezcla de
- DNA del sospechoso 4 con. Amortiguador. enzimas, por lo cual se sugiere el empleo de
- DNA del sospechoso 5 con amortiguador. una punta nueva por cada tubo.
- Mezcla de enzimas de restricción EcoRI/Pstl,
1800 U. Muestras Enzimas de Volumen
- Agua estéril, 2.5 ml. de DNA restricción total de
- Marcador de DNA de fago lambda digerido EcoRI y la
con Hind III 0.2µg /µl, 100 µl. PstI reacción
1.- 23,130 pb
2.- 9,416 pb Muestra de 10 µl 10 µl 20 µl
3.- 6,557 pb la escena
4.- 4,361 pb Sospechoso 10 µl 10 µl 20 µl
1 azul
5.- 2,322 pb
Sospechoso 10 µl 10 µl 20 µl
6.- 2,027 pb 2 naranja
- Colorante de DNA (Biorad biosafe). Sospechoso 10 µl 10 µl 20 µl
- Microtubos de colores. 3 violeta
- Microtubos blancos. Sospechoso 10 µl 10 µl 20 µl
- Geles de agarosa al 1.0%. 4 rojo
- Amortiguador de electroforesis TAE (Tris- Sospechoso 10 µl 10 µl 20 µl
Acetato-EDTA). Tris-base 39 mM, ácido 5 amarillo
acético glacial 18 mM, EDTA 10 mM.
- Gradillas para microtubos. 5.-Cierre los microtubos y mezcle la muestra
- Recipiente para teñir geles. golpeando suavemente los tubos con los
- Pipeta automática de 10-100 µl. dedos. Si se cuenta con una microfuga
- Puntas para pipetas automáticas. aplique un pulso de 2 segundos para
- Marcador indeleble. asegurarse que toda la muestra se quede en
- Fuente de poder. el fondo del microtubo, permitiendo que se
- Cámara horizontal de electroforesis. mezcle adecuadamente y se lleve a cabo la
- Parrilla para baño maría. reacción.
- Vaso de precipitado de 300 ml.
- Recipiente con hielo. 6.-Coloque los tubos en la gradilla e incúbelos
- Microfuga. a 37ºC por 45 minutos.

PROCEDIMIENTO 7.-Transcurrido el tiempo de incubación,


1.-Marcar los microtubos de la siguiente adicione 10 µl del amortiguador de carga a
forma: cada tubo tápelos y agítelos suavemente con
a) Tubo verde (muestra de la escena) los dedos.
b) Tubo azul (sospechoso 1)
c) Tubo naranja (sospechoso 2) 8.-Coloque en la cámara de electroforesis el
d) Tubo violeta (sospechoso 3) gel de agarosa, teniendo cuidado que los
e) Tubo rojo (sospechoso 4) pozos se encuentren orientados hacia el
f) Tubo amarillo (sospechoso 5) cátodo [polo negativo (terminal negra)].

2.-Colocar los tubos marcados en la gradilla. 9.-Adicione 275 ml del amortiguador de


corrida o lo que se requiera para que se
cubran los pozos.

181
del pozo y el centro de la banda de DNA. Con
10.-Coloque las muestras en el gel los datos obtenidos se llena la siguiente tabla.
empleando una punta nueva para cada B. Estructura de los ácidos nucleicos y sus
muestra, las cuales se depositan de izquierda funciones
a derecha amortiguador en el siguiente orden:
Referncias
a) Carril 1: marcador de peso 1.-Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting
molecular, HindIII,10; µl Kit
b) Carril 2: escena del crimen verde, Instruction Manual BIORAD
10 µl
c) Carril 3: sospechoso 1 azul, 10 µl
d) Carril 4: sospechoso 2 naranja, 10
µl
e) Carril 5: sospechoso 3 violeta, 20
µl
f) Carril 6: sospechoso 4 rojo, 10 µl
g) Carril 7: sospechoso 5 amarillo,
10 µl
11-Cierre la cámara de electroforesis y
asegúrese que concuerden las terminales rojo
con rojo y negro con negro. Conecte la
cámara a la fuente de poder, manteniendo la
orientación de las terminales.

12.-Encienda la fuente de poder. Ajuste el


voltaje a 100 V y realice la electroforesis por
40– 60 minutos.
Cortar en pequeñas
13.-Detenga la electroforesis cuando la piezas con enzimas -ve Más
muestra llegue a una distancia aproximada de de restricción grandes
2 cm del final del gel. Apague la fuente de
poder, remueva la tapa y retire DNA total Fragmentos
cuidadosamente el gel. de una de DNA en el
persona gel

14.-Coloque en una charola 120 ml de la


+ve
solución teñidora 100X y el gel, asegurándose
que se encuentre sumergido en la solución.
Fragmentos separados y
Tiña los geles por 2 minutos. transferidos a membrana
de nylon
15.- Después se deben colocar los geles en Más
pequeñas
una charola que contenga 500 – 700 ml de
agua limpia y caliente (40-55ºC), agite
suavemente el gel por aproximadamente 10
segundos y retire el agua, realizar los lavados
que sean necesarios con agua limpia hasta la
aparición de las bandas de DNA y hacer la
comparación de las muestras.

16.- Para realizar un análisis cuantitativo de


las muestras, se debe medir con una regla la
distancia que migró cada uno de los
fragmentos de las muestras (en mm),
Tomando como punto de partida la parte baja

182
Práctica 14
Determinación de glucosa en sangre total

Algunos minutos después de la ingesta de una


Objetivos comida, los niveles de insulina sanguínea
1. Que el estudiante comprenda el metabolismo de aumentan. La glucosa y los aminoácidos de la
la glucosa en sujetos sanos en diferentes dieta tales como la leucina, isoleucina y lisina,
condiciones metabólicas. son estimulantes potentes de las células beta
del páncreas haciendo que éstas segreguen
2. Que el estudiante corrobore los cambios de insulina. La mayor parte de las células
glucosa que ocurren después de la ingesta de periféricas responden al aumento de la
alimentos. glucosa sanguínea con un aumento rápido del
transporte de la glucosa dentro de las células.
4. Que el alumno sea capaz de analizar e De esta manera, los niveles de glucosa
interpretar los resultados obtenidos a partir de la sanguínea aumentan solamente de un 20% a
determinación de glucosa en sangre total. un 40% en los individuos no-diabéticos. Sin
embargo, aproximadamente el 80% de la
INTRODUCCIÓN entrada de glucosa no es insulino dependiente,
La glucosa es el proveedor de energía más ya que el cerebro, los glóbulos rojos, el hígado
importante del organismo junto con los ácidos y los intestinos no requieren de insulina para la
grasos y los cuerpos cetónicos. entrada creciente de glucosa cuando está
El principal aporte proviene del intestino (glucosa presente glucosa sanguínea elevada. El
alimentaria), el hígado y los riñones. músculo es el tejido dependiente de insulina
En los animales superiores el metabolismo de los más importante. Los niveles crecientes de
carbohidratos está sujeto a mecanismos de insulina y glucosa sanguíneas inhiben la
regulación complejos en los que participan las lipólisis así como a aproximadamente el 60%
hormonas, los metabolitos y las coenzimas. de la liberación normal de glucosa hepática3.
El cerebro, la médula suprarrenal y los eritrocitos Se han realizado estudios del comportamiento
son los que más dependen del suministro continuo de la glucosa en sangre en sujetos normales
de glucosa, por que no disponen de ninguna en la cual se puede observar que a los 30 a 60
reserva importante de la misma1. minutos posteriores a la ingesta de alimentos
El sistema nervioso requiere de aproximadamente la concentración de glucosa alcanza su
150 gr de glucosa al día para realizar sus funciones concentración máxima y a las dos horas
normales2. vuelve a su estado basal6.
La principal función bioquímica de la glucosa Algunos minutos después de la ingesta
es la de proporcionar energía para los de una comida, los niveles de insulina
procesos de la vida. El adenosín trifosfato sanguínea aumentan6.
("ATP") es la fuente de energía universal para Las concentraciones de glucosa en el suero
las reacciones biológicas. La oxidación de la son aproximadamente 15% más altas que las
glucosa por las vías glucolítica y del ácido concentraciones de glucosa en la sangre total
cítrico es la fuente principal de energía para la esto es debido a que la glucólisis continúa en
biosíntesis del ATP. los eritrocitos.
El exceso de glucosa es almacenado en las El uso del glucómetro es de mucha utilidad en
células como el polímero glucógeno para el autocontrol de pacientes diabéticos, lo que
demandas posteriores de energía. ayuda a medir una glucosa en sangre casual.
El papel de la insulina es desviar la glucosa El valor calórico total diario de los alimentos
extracelular a los sitios de almacenamiento deberá ser entre 25 y 30 Kcal/Kg/día, para las
intracelular en la forma de macromoléculas personas sedentarias y de 30 a 40 Kcal/Kg/día
(como el glucógeno, lípidos y proteínas). Es así para una persona físicamente activa o que
que la glucosa es almacenada en tiempos de realiza ejercicio de manera regular4,5.
abundancia para los momentos de necesidad.

183
Referencias 2.- Dos sujetos con actividad física constante, uno
1.-Koolman J, Roehm KH (2004). Bioquímica de los cuales consumirá una dieta rica en
Texto y Atlas: 3ª Edición, Ed. Médica carbohidratos y el otro una dieta rica en lípidos.
Panamericana, pp.: 158, 308-310 3.- A cada uno de los sujetos en cualquiera de
las condiciones y consumo de dietas se les
2.-Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M. (2005). determinará la concentración de glucosa en
Marks’ Basic Madical Biochemestry. 2a Edición. sangre total por medio de un glucómetro en los
Ed. Lippincott Williams & Wilkins. Pag. 24-26 siguientes tiempos:

3.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química Clínica. 0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
Teoría, análisis y correlación. 3ª Edición. Ed.
Pesce Kaplan Publicaciones, Capítulo: 32. 30 minutos, 60 minutos y 120 minutos,
después de ingerir los alimentos
4.- NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-
SSA2-1994, “Para la prevención, tratamiento y Para realizar la determinación de glucosa en
control de la diabetes mellitus en la atención sangre total seguir los siguientes pasos:
primaria”. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de la Secretaría de Salud. 4.-Para Insertar la lanceta
a) Gire la tapa One Touch
5.-MODIFICACIÓN a la Norma Oficial Mexicana UltraSoft hacia la izquierda
NOM-015-SSA2-1994, Para la prevención, para quitarla
tratamiento y control de la diabetes. Listado de
Normas Oficiales Mexicanas de la Secretaría de
b) Inserte una lanceta en el
Salud.
portalancetas y empújela
firmemente hasta que quede
6.- Manual para el manejo de las insulinas 2001.
bien asentada
2ª Edición. Subsecretaría de Prevención y
Protección de la Salud. Centro Nacional de
Vigilancia Epidemiológica. SSA. Mexico.
5.- Cargue el dispositivo de
Material
punción. Deslice el botón
cargador hacia atrás hasta que
• Dietas:
haga clic. El dispositivo de
a).-Rica en carbohidratos (X gr. spaghetti).
punción ya esta preparado
b).- Dieta rica en lípidos (hamburguesa).
para su uso.
• Dos sujetos sanos sedentarios y dos horas
mínimas de ayuno.
6.- Lave sus manos y limpie
• Dos sujetos con actividad física constante y dos
con una torunda de algodón
horas mínimas de ayuno.
con alcohol la zona donde se
• Glucómetros One Touch Ultra.
realizará la punción.
• Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa oxidasa
(Aspergillus níger)].
• Dispositivo de punción.
• Lancetas estériles con discos protectores One 7.- Coloque el dispositivo
Touch UltraSoft. de punción en posición.
• Recipiente para material punzo cortante. Sostenga el dispositivo
• Recipiente para material biológico-infeccioso. firmemente contra el
• Jabón para manos. costado de su dedo.
• Torundas de algodón con alcohol. Presione el botón de
liberación
Método

1.- Dos sujetos sedentarios, uno de los cuales 8.- Aplique masaje a la
consumirá una dieta rica en carbohidratos y el otro punta de su dedo.
una dieta rica en proteínas.

184
Un suave masaje en la punta del dedo le ayudará 14.-Es importante desechar con mucho
a obtener cuidado la lanceta usada luego de cada uso,
una gota de sangre adecuada. con el fin de evitar que se produzcan lesiones
No exprima en exceso el área de punción. accidentales con las
puntas de la lancetas.
9.- Inserte la tira reactiva en el puerto de análisis, Para el desecho de
con el extremo de las barras de contacto de las lancetas siga los
primero y mirando hacia arriba. siguientes pasos:
Empújela hasta que no

10.-Acerque y mantenga la 15.- Gire la tapa One


gota de sangre en el canal Touch Ultra Soft en
estrecho del borde superior de dirección contraria a
la tira reactiva las manecillas del
reloj.

11.- Hasta que la ventana de 16.- Apunte el


confirmación este dispositivo de punción hacia a hacia usted.
completamente llena de Presione el botón de liberación
sangre, antes que el medidor para asegurarse que el dispositivo de punción
comience la cuenta regresiva. no esté en posición de cargado. Deslice el
botón cargador hacia delante y deposite la
lanceta en un recipiente para material punzo
a) Muestra adecuada cortante
b) Muestra insuficiente
17.- Desechar las tiras reactivas en una bolsa
para material biológico-infeccioso junto con las
torundas de algodón empleadas en la práctica.
b
18.-Con los datos obtenidos completar el
cuadro 14.1 y hacer una gráfica de todas las
12.- Inserte la tira reactiva en variantes en papel milimétrico.
el puerto de análisis, con el
extremo de las barras de
contacto de primero y Tabla 14.1 Resultados
mirando hacia arriba.
Empújela hasta que no Fecha:_________________
avance más.
Nombre:
Edad: Sexo:
13.-Lectura Sedentario:
El resultado de la prueba de Actividad física constante:
glucosa de su sangre Tipo de dieta
aparecerá después de que el
medidor cuente en forma Tiempo [Glucosa mg/dl]
regresiva de 5 a 1. (min.)
Anotar el resultado en la 0
tabla correspondiente Tabla 30
14.1. 60
120

185
Práctica 15
Integración Metabólica
15

Integración Metabólica

Objetivos fuente de energía. Algunos tipos celulares


1.-Que el alumno pueda integrar las vías son dependientes de la liberación de
metabólicas de los carbohidratos, de los insulina por el páncreas como es el caso
lípidos y proteínas en (condiciones de las células musculares. Si la insulina no
normales) en un paciente sano. funciona adecuadamente, la glucosa se
2.-Que el alumno reconozca los sitios queda en el flujo sanguíneo causando
denominados encrucijadas metabólicas y elevación de los niveles de glucosa en la
las enzimas de las vías reguladoras. sangre y a esto se le denomina
3.-Que el alumno pueda correlacionar el hiperglucemia; una de las enfermedades
papel que tienen las hormonas en la que se caracteriza por la hiperglucemia en
regulación de las vías. sus primeras etapas es la diabetes
4.-Que el alumno sea capaz de analizar mellitus.
los datos de las pruebas clínicas en un La diabetes mellitus esta caracterizada por
sujeto normal. una hiperglucemia resultante de defectos
5.-Que el alumno relacione que vías se en la secreción de insulina, en la acción de
encuentran alteradas en un paciente la insulina o en ambas. La hiperglucemia
diabético. crónica de la diabetes está asociada a
lesiones, disfunción y fallo de varios
Los alimentos que ingerimos deben estar órganos, especialmente de los ojos, los
constituidos por los 6 componentes riñones, el corazón y los vasos
básicos que son proteínas, carbohidratos, sanguíneos.
lípidos, vitaminas, minerales y agua, la Varios procesos patogénicos están
cantidad que se requiere ingerir de cada implicados en el desarrollo de la diabetes.
uno de los componentes varía de acuerdo Estos van desde una destrucción
a la constitución y la actividad física que se autoinmunológica de las células  del
realiza, tanto la falta como en el exceso de páncreas, con la consiguiente deficiencia
consumo de alguno de los componentes de insulina, hasta anormalidades, en las
básicos conlleva a diversos trastornos que el páncreas no produce suficiente
metabólicos. insulina o la que produce no es eficiente.
Aproximadamente del 40 al 45% de La acción deficiente de la insulina en los
nuestra ingesta calórica proviene del tejidos diana es la responsable del
consumo diario de carbohidratos metabolismo anómalo de los carbohidratos
complejos los cuales al ser digeridos dan de carbono, grasas y proteínas en la
lugar a los diferentes monosacáridos entre diabetes.
los que se encuentra la glucosa, la cuál se La acción deficiente de la insulina
distribuye por la sangre a las células para ocasiona una respuesta inadecuada en
poder captar la glucosa, siendo la principal uno o más puntos de la compleja trama

186
metabólica en la que esta hormona tiene lipoproteínas de muy baja densidad
papel regulatorio. (VLDL), secretados al torrente sanguíneo
Frecuentemente coexisten en el mismo siendo almacenados en tejido adiposo.
paciente una inadecuada secreción de Para su consumo los triacilgliceroles son
insulina así como defectos de la acción de hidrolizados a glicerol y ácidos grasos. En
ésta, en la actualidad no se sabe si una de la dieta es importante la presencia de
estas anormalidades es la consecuencia o lípidos ya que son precursores de
la causa de la otra. En cualquier caso, el diferentes componentes de la célula como
resultado es la hiperglucemia. los fosfolipidos, uno de los lípidos que
La gran mayoría de los casos de diabetes tiene una gran importancia en la célula es
pueden incluirse en dos amplias el colesterol, ya que proporciona rigidez a
categorías etiopatogénicas. En el primer las membranas celulares y es precursor de
caso (diabetes de tipo I) la causa es una las sales biliares así como de hormonas
deficiencia absoluta en la secreción de esteroideas. El colesterol se puede
insulina. Los individuos con alto riesgo de obtener por la alimentación y por síntesis
desarrollar este tipo de diabetes pueden del propio organismo, siendo las células
ser a menudo identificados mediante hepáticas y las suprarrenales las de mayor
evidencias serológicas de un proceso síntesis. Para llevar a cabo la síntesis de
autoinmune que se produce en los islotes colesterol se requiere la presencia de
pancreáticos y también mediante acetil-CoA el cual proviene de la
marcadores genéticos. En la segunda degradación de glucosa, ácidos grasos y
categoría (diabetes de tipo II), mucho más aminoácidos por lo cual se denomina a la
prevalente, la causa es una combinación acetil-CoA la encrucijada metabólica.
de una resistencia a la acción de la El colesterol es insoluble en agua por lo
insulina y de una inadecuada respuesta que transportado en la sangre por tres
secretora compensadora. La diabetes tipo lipoproteínas que son de muy baja
II se caracteriza por estar presente densidad (VLDL), de baja densidad (LDL)
muchos años antes de ser detectada una y las de alta densidad (HDL). Los niveles
hiperglucemia sin síntomas clínicos (sed, normales de colesterol total en sangre en
perdida de peso), pero suficiente para un adulto son de < 200 mg/dl y cuando
ocasionar cambios patológicos y estos valores se ven aumentados se
funcionales sobre los órganos blanco. asocian a la formación de placas
Durante este período asintomático, es ateroscleroticas que pueden ocluir los
posible demostrar trastornos en el vasos sanguíneos y como consecuencia
metabolismo de los carbohidratos provocar infarto al miocardio y alteraciones
midiendo la glucosa plasmática en ayunas cardiovasculares.
o después de una sobrecarga de glucosa La cuantificación de las LDL representa un
por vía oral. papel clave en la esclerosis coronaria ya
El exceso en la ingesta de carbohidratos que concentraciones elevadas indican
no solamente mantiene la reserva de desarrollo de la aterosclerosis.
energía en forma de glucógeno sino que En el caso de las HDL al dismunuir su
también el exceso de carbohidratos es concentración aumenta el riesgo de
convertido en triacilgliceroles. En el hígado desarrollar aterosclerosis.
los triacilgliceroles se sintetizan a partir de Las proteínas constituyen la fuente
acil CoA y glicerol 3-fosfato siendo primaria del metabolismo del nitrógeno en
empaquetados con apoproteínas y en el organismo,

187
Los aminoácidos producto de la digestión proporcional a la masa muscular corporal.
de las proteínas que se consumen en los La cantidad de creatinina que se elimina
alimentos, son utilizados para la síntesis diariamente puede utilizarse como
de proteínas y de compuestos indicador de la normalidad de la función
nitrogenados o se puede oxidar para renal
producir energía.
El hígado es el órgano principal en donde Material.
se realiza la oxidación de los aminoácidos. Dietas:
El nitrógeno de los aminoácidos forma Dos sujetos sanos sedentarios y dos horas
amoniaco el cual es toxico para el mínimas de ayuno.
organismo. El amoniaco y los grupos Dos sujetos con actividad física constante
amino se convierten en urea en el hígado, y dos horas mínimas de ayuno.
que no es toxica y se elimina fácilmente a).-Dieta rica en carbohidratos (g
por la orina ya que es hidrosoluble. spaghetti).
Otro de los componentes del metabolismo b).-Dieta rica en lípidos (Hamburguesa).
nitrogenado son los nucleotidos. Las Determinación de glucosa
purinas y las pirimidinas, que son Glucómetros One Touch Ultra.
esenciales para la síntesis de nucleótidos Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa
y ácidos nucleicos. oxidasa (Aspergillus níger)].
Los nucleótidos son precursores del DNA Dispositivo de punción.
y el RNA, así como también forman parte Lancetas estériles con discos protectores
de la estructura de muchas coenzimas One Touch UltraSoft.
además de ser componentes del Recipiente para material punzo cortante.
metabolismo energético. Recipiente para material biológico-
La degradación de las purinas no genera infeccioso.
energía y el producto de la degradación Jabón para manos.
del anillo purínico es el ácido úrico, que se Torundas de algodón con alcohol.
elimina por la orina, tiene una solubilidad Glucómetros.
limitada por lo que su exceso da como Determinación de colesterol y
resultado la formación de cristales en triacilgliceroles
regiones del organismo como pueden ser Accutrend Roche para determinación de
los dedos gordos del pie, trastorno que se colesterol y triacilgliceroles.
conoce como gota. Tiras reactivas para determinación de
Los valores elevados de ácido úrico se colesterol.
presentan en: ingestión de alimentos ricos Tiras reactivas para determinación de
en nucleoproteínas, insuficiencia renal, triacilgliceroles.
azoemias prerrenales. Lancetas estériles.
Otro de los componentes del metabolismo
nitrogenado es la creatinina que en el Determinación de hemoglobina
músculo en su forma fosorilada sirve como glicosilada.
almacén de alta energía y se transforma Micromat HbA1c BIO-RAD para
con facilidad en ATP por la enzima determinación de hemoglobina glicosilada
creatina fosfocinasa. La creatina fosfato es en sangre total.
inestable y se cicla espontáneamente Lancetas estériles.
forma la creatinina que se elimina en la Las determinaciones de urea, creatinina y
orina. La producción de creatinina es ácido úrico, se realizaran en orina.

188
La muestra de orina deberá ser del alumno realizar la determinación de glucosa en
a quien se le haya determinado glucosa, sangre total seguir los
colesterol y triacilgliceroles para poder siguientes pasos:
discutir todos los valores en conjunto y
poder enlazar en un mismo individuo el 4.-Para Insertar la lanceta
efecto que tiene la dieta sobre el a) Gire la tapa One Touch
metabolismo. UltraSoft hacia la izquierda
Determinación de urea para quitarla.
Pipetas automáticas (10 a 200µl)
Puntas para micropipetas b) Inserte una lanceta en el
Propipetas. portalancetas y empújela
Reactivo para urea. firmemente hasta que quede
Estándar de urea (50 mg/dl). bien asentada.
Espectrofotómetro.
Celdas.
Agua destilada.
Pipetas Pasteur de plástico. 5.- Cargue el dispositivo de
Determinación de creatinina punción. Deslice el botón
Reactivo para creatinina. cargador hacia atrás hasta
Estándar de creatinina (2 mg/dl). que haga clic. El dispositivo de
Determinación de ácido úrico punción ya esta preparado para
Pipetas de 5 ml. su uso.
Gradilla con 2 tubos de ensaye.
Reactivo para ácido úrico. 6.- Lave sus manos y limpie
Estándar de ácido úrico (6 mg/dl). con una torunda de algodón
con alcohol la zona donde se
Método realizará la punción.
Determinación de glucosa
1.-Dos sujetos sedentarios, uno de los
cuales consumirá una dieta rica en 7.- Coloque el dispositivo de
carbohidratos y el otro una dieta rica en punción en posición. Sostenga
lípidos. el dispositivo firmemente contra
2.-Dos sujetos con actividad física el costado de su dedo.
constante, uno de los cuales consumirá Presione el botón de liberación.
una dieta rica en carbohidratos y el otro
una dieta rica en lípidos. 8.- Aplique un suave masaje a
3.-A cada uno de los sujetos en cualquiera la punta de su dedo que le
de las condiciones y consumo de dietas se ayudará a obtener una gota de
les determinará la concentración de sangre adecuada No exprima
glucosa en sangre total por medio de un en exceso el área de punción.
glucómetro en los siguientes tiempos:
9.-Acerque y mantenga la gota
0 minutos (antes de ingerir los alimentos). de sangre en el canal estrecho
30 minutos, 60 minutos y 120 minutos, del borde superior de la tira
después de ingerir los alimentos. Para reactiva

189
a b

10 a) Muestra adecuada b) 16.- Apunte el dispositivo de punción hacia


Muestra insuficiente el recipiente para el material punzo
cortante Presione el botón de liberación
para asegurarse que el dispositivo de
punción no esté en posición de cargado.
Deslice el botón cargador hacia delante
11.- Inserte la tira reactiva y deposite la lanceta en un recipiente
en el puerto de análisis, para material punzo cortante.
con el extremo de las
barras de contacto de b17.- Desechar las tiras reactivas en una
primero y mirando hacia bolsa para material biológico-infeccioso
arriba. Empújela hasta que junto con las torundas de algodón
no avance más. empleadas en la práctica.

18.-Con los datos obtenidos


12.- Hasta que la ventana completar el cuadro 15.1 y hacer
de confirmación este una gráfica de todas las variantes
completamente llena de en papel milimétrico.
sangre, antes que el
medidor comience la Cuadro 15.1 Resultados
cuenta regresiva.
13.-Lectura el resultado de la prueba de Fecha:_________________
glucosa de su sangre aparecerá después
de Nombre:
que el medidor cuente en forma regresiva Edad: Sexo:
de 5 a 1. Sedentario:
Actividad física constante:
Anotar el resultado en la Tipo de dieta
tabla correspondiente Tabla 15.1
Tiempo [Glucosa mg/dl]
14.-Es importante desechar con mucho (min.)
cuidado la lanceta usada luego de cada 0
uso, con el fin de evitar que se produzcan 30
lesiones 60
accidentales con las puntas de la 120
lancetas.
Determinación de colesterol y
Para el desecho de las lancetas siga los triacilgliceroles
siguientes pasos: Accutrend®GCT.
1.-Lavarse las manos cuidadosamente
15.- Gire la tapa One esto es con la finalidad de retirar residuos
Touch Ultra Sofá en de crema o grasa en las manos para
dirección contraria a las evitar determinaciones erróneas
manecillas del reloj. principalmente cuando se realiza la
determinación de triacilgliceroles.

190
2.- Con la ayuda de unas pinzas extraer 9.-Girar el cartucho a la posición 3, sacar
una tira reactiva del envase y taparlo el tubo de la solución eluyente (tapón
inmediatamente para evitar que las tiras se transparente).
sequen. 10.-Verter el eluyente al embudo central.
3.-Con la tapa cerrada D inserte en la 11.-Girar el cartucho a la posición de
ranura F, en la dirección indicada por la partida.
flecha, la tira reactiva con el cuadrado 12.-Extraer el cartucho de análisis, el
amarillo hacia arriba hasta que encaje y resultado se observará en la pantalla.
deje verse la marca TG o CHOL impresa 13.-Presionar enter para un nuevo análisis.
en la tira reactiva.
4.-Frote y masajee la yema del dedo para Determinación de urea en orina
facilitar la extracción y aplicación de la La urea presente en la muestra reacciona
sangre. con el o-ftaldehído en medio ácido
5.-Con la lanceta introduzca para hacer la originando un complejo coloreado puede
punción y realice la toma de muestra. identificarse espectrofotométricamente.
6.-Aplicar directamente la gota de sangre a
la tira reactiva y proceder a la lectura de la Urea + o-ftaldehído Isoindolina
concentración de colesterol y
triacilgliceroles según sea el caso, si no se La urea es estable 5 días a 2-8 °C.
llena completamente el equipo le marca R- 1.-Diluir la muestra 1:50 con agua
5. destilada mezclar y multiplicar el resultado
7.-Realice la lectura. por el factor de dilución (50).
8.-Anote la lectura. 2.-Para realizar la dilución 1:50 recupere la
9.-Si esto llegara a suceder volver a tomar orina con la pipeta
otra tira reactiva para proceder a iniciar
Celda 1 2
completamente desde el paso uno.
Orina 100 -
µl
Determinación de hemoglobina
Estándar - 100
glicosilada
µl
Guía rápida Micromat II. (Detección de
hemoglobina glicosilada). Solución 1 ml 1 ml
1.-Insertar el cartucho de análisis. reactiva
2.-Girar el cartucho a la posición 1. de creatinina
3.-Extracción de muestra capilar o venosa. Pasteur de plástico hasta la marca (lo que
4.-Comenzar la incubación, presionar corresponde a 0.5 ml) y colóquelo en un
enter tubo Falcón que ya contiene 24.5 ml de
5.-Invertir 3 veces. agua, con ello se tendrá una dilución 1:50,
6.-Dispensar la muestra en el embudo de ahí tomar la muestra como se
central. esquematiza en el cuadro.
7.-Girar el cartucho a la posición 2, sacar La determinación se realiza directamente
el tubo de la solución de lavado (tapón en las celdas con la finalidad de tomar la
azul). lectura de las absorbancias exactamente
8.-Verter la solución de lavado al embudo al minuto (A1) y a los dos minutos (A2).
central.

191
Celda 1 2 Con las diferencias de absorbancias
Muestra 25 µl -- anotadas A, aplicar la siguiente ecuación:
A Muestra X [Estándar] = [Creatinina]
Estándar -- 25 µl
A Estándar
Solución reactiva 1 ml 1 ml
para urea
El resultado se obtiene en mg/dl.
Mezclar y poner en marcha el cronómetro,
Determinación de ácido úrico en orina.
anotar las absorbancias a los 60 (A1) y 120
1.-Diluir la muestra 1:10 con agua
(A2) segundos.
destilada, mezclar y multiplicar el resultado
Leer frente blanco de reactivos en el
por el factor de dilución (10).
espectrofotómetro a 520 nm.
2.-Para realizar la dilución 1:10 recupere la
Calcular el incremento de la absorbencia
orina con la pipeta Pasteur de plástico
A = A2 – A1.
hasta la marca (lo que corresponde a 0.5
Con las diferencias de absorbancias
ml) y colóquelo en un tubo Falcón que ya
anotadas A, aplicar la siguiente ecuación:
contiene 9.5 ml de agua, con ello agregue
agua hasta la marca de 5 ml con ello
A Muestra X [Estándar] = [Urea]
tendrá una dilución 1:10 de ahí tomar la
A Estándar
muestra como se esquematiza en el
El resultado se obtiene en mg/dl.
cuadro.
La determinación se realiza en tubos de
Determinación de creatinina en orina
ensaye.
1.-Diluir la muestra 1:50 con agua
destilada mezclar y multiplicar el resultado
Mezclar e incubar 10 minutos a
por el factor de dilución (50).
temperatura ambiente.
2.-Para realizar la dilución 1:50 recupere la
Leer la absorbancia (A) en el
orina con la pipeta Pasteur de plástico
espectrofotómetro frente a blanco de
hasta la marca (lo que corresponde a 0.5
reactivos a 520 mn.
ml) y colóquelo en un tubo Falcón que ya
contiene 24.5 ml de agua, con ello se
Cálculo de la concentración de ácido úrico.
tendrá una dilución 1:50, de ahí tomar la
muestra como se esquematiza en el
A Muestra X [Estándar] = [Ácido úrico]
cuadro.
A Estándar
La determinación se realiza directamente
en las celdas con la finalidad de tomar la
El resultado se obtiene en mg/dl.
lectura de las absorbancias exactamente a
los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
Tubo 1 2
Mezclar y poner en marcha el cronómetro, Orina 100 µl -
anotar las absorbancias a los 30 (A1) y a Estándar - 100 µl
los 90 (A2) segundos. Solución reactiva 1 ml 1 ml
Leer frente blanco de reactivos en el de ácido úrico
espectrofotómetro a 492 nm.
Calcular el incremento de la absorbencia
A = A2 – A1.

192
Referencias
1.-Koolman J, Roehm KH (2004).
Bioquímica Texto y Atlas: 3ª Edición, Ed.
Médica Panamericana, pp.: 158, 308-310

2.-Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M.


(2005). Marks’ Basic Madical
Biochemestry. 2a Edición. Ed. Lippincott
Williams & Wilkins. Pag. 24-26

3.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química


Clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª
Edición. Ed. Pesce Kaplan Publicaciones,
Capítulo: 32.
4.- NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-
015-SSA2-1994, “Para la prevención,
tratamiento y control de la diabetes
mellitus en la atención primaria”. Listado
de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretaría de Salud.

5.-MODIFICACIÓN a la Norma Oficial


Mexicana NOM-015-SSA2-1994, Para la
prevención, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales
Mexicanas de la Secretaría de Salud.

6.- Manual para el manejo de las insulinas


2001. 2ª Edición. Subsecretaría de
Prevención y Protección de la Salud.
Centro Nacional de Vigilancia
Epidemiológica. SSA. México.

7.- NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-


030-SSA2-1999, Para la prevención,
tratamiento y control de la
hipertensión arterial. Listado de Normas
Oficiales Mexicanas de la Secretaría de
Salud.

193
III

Casos de correlación bioquímica


y práctica médica

194
Caso 1
Cólera

Conceptos y áreas de aprendizaje


Un hombre de 38 años de edad con peso
1. Describir la composición, las
de 71 kg relata que su padecimiento actual
propiedades y las funciones de las
se inició con anorexia, dolor abdominal y
membranas biológicas.
diarrea. Un día después siguió con náusea
2. Estudiar la base bioquímica de algunos
intensa, vómito y diarrea muy abundante y
trastornos que afectan la función de las
líquida. Ingresó al hospital con hipotensión
membranas.
postural y deshidratación. Se pudo aislar
3. Modelos de transporte transepitelial.
Vibrio cholerae toxígeno de sus heces. El
4. Describir los mecanismos por los cuales
paciente mejoró rápidamente al reponerle
los organismos enteropatógenos
agua, electrólitos y administrarle tetraciclina
ocasionan pérdida intestinal de agua y
por vía oral.
electrolitos.
5. Control del agua y de la osmolaridad.
Preguntas de bioquímica
6. Equilibrio ácido-base.
1. ¿Qué procesos de la membrana
7. Deshidratación y tratamiento de
resultan afectados por Vibrio cholerae
reposición hidroelectrolítica.
en un caso de cólera?
2. ¿Qué valores de laboratorio clínico
REFERENCIAS
podrían estar alterados en este
1. Villazón SA, Cárdenas CO, Villazón DO,
paciente?
Sierra UA. Fluidos y electrólitos. México:
3. ¿Cuáles serían los datos de laboratorio
JGH Editores; 2000.
que permitirían precisar el tratamiento 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto
hidroelectrolítico? con aplicaciones clínicas. 4a. ed.
4. ¿Por qué en este caso hay que añadir Barcelona: Editorial Reverté; 2004.
glucosa al tratamiento hidroelectrolítico 3. Montgomery R. Bioquímica: Casos y
por vía oral? texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial
5. ¿Cuáles son los signos de Harcourt-Brace; 1998: cap. 4 y 12.
deshidratación?
6. ¿Cuál fue la situación ácido-base del
paciente al momento de su ingreso al
hospital?

195
Caso 2

Oclusión intestinal. Acidosis metabólica.


Deshidratación grave

Se trata de un paciente masculino de 35 El tratamiento consistió, primero, en el


años de edad quien acude al servicio de restablecimiento del balance de líquidos
urgencias de un hospital por presentar con solución salina a 0.9%, electrólitos
+
dolor abdominal intenso acompañado de (reposición de K ) y cirugía.
vómitos frecuentes y abundantes de
contenido intestinal. El paciente presenta Preguntas de bioquímica
un cuadro de deshidratación importante. 1. Evaluar el estado ácido-base del
A la exploración física se obtuvieron los paciente; tomar en cuenta los valores
siguientes datos: de pH y presión parcial de bióxido de
Tensión arterial (TA): 80/50 mmHg carbono (pCO2), el valor de bicarbonato

Frecuencia cardiaca (Fc): 120/min plasmático (HCO3 ), etcétera.
Frecuencia respiratoria (Fr): 32/min
2. ¿Es normal el estado ácido-base del
Temperatura (T): 36o C paciente? ¿Qué tipo de desequilibrio
Los estudios de laboratorio mostraron lo presenta? ¿Cuál podría ser la causa de
siguiente: ese desequilibrio?
3. ¿Qué relación existe entre el
Electrolitos séricos:
+ metabolismo de los electrolitos y el
Na = 128 mEq/l
+ agua y entre los trastornos ácido-base y
K = 2.8 mEq/l
– los electrolitos?
Cl = 100 mEq/l
4. ¿Qué tipos de alteraciones de líquidos y
Gasometría arterial: electrolitos corporales existen?
CO2t = 12 5. Calcule la osmolaridad sérica (tome en
pH = 7.29 cuenta la concentración de las
pCO2 = 24 mmHg sustancias que mayormente contribuyen
pO2 = 95 mmHg a establecerla) como aparecen en las
HCO - = 11.2 mmol/l
3
pags. 98 y 113.
6. ¿Cuáles son los signos de
EB (exceso de base) = 20
deshidratación?
Química sanguínea: 7. ¿Qué terapéutica recomendaría a este
Glucosa = 5.2 mmol/l (95 mg/dl) paciente para equilibrar sus líquidos y
BUN = 15 mmol/l electrolitos?

Conceptos y áreas de aprendizaje


1. Propiedades fisicoquímicas del agua.
2. Concepto de pH.

196
3. Explicar el significado de las variaciones REFERENCIAS
de los valores normales de pH y de la 1. Harrison. Principios de medicina interna.
composición electrolítica de la sangre. 15a. ed. Madrid: McGraw-Hill
4. Sistemas amortiguadores del plasma, Interamericana Editores; 2001; cap:
líquido intersticial y células. La Líquidos y electrólitos y Obstrucción
aplicación de la ecuación de Henderson intestinal aguda. p. 184.
y Hasselbalch al cálculo del pH y de la 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto
concentración de bióxido de carbono y con aplicaciones clínicas. 4a. ed.
bicarbonato. Barcelona: Editorial Reverté; 2004.
3. Montgomery R. Bioquímica: Casos y
5. Equilibrio ácido-base y su
texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial
mantenimiento.
Harcourt-Brace, 1998; cap. 4.
6. Equilibrio hidroelectrolítico y su
4. Laguna J, Piña E. Bioquímica de
mantenimiento.
Laguna. 5a.ed. México: Editorial El
Manual Moderno; 2002: 41-76.
5. Villazón SA, Cárdenas CO,Villazón DO,
Sierra UA. Fluidos y electrólitos. México:
JGH Editores; 2000.

197
Caso 3

Hipoglucemia secundaria
a intoxicación alcohólica

Se trata de un paciente de 58 años,


3. El alcoholismo es la base de muchas
alcohólico crónico , cuyos familiares relatan
deficiencias vitamínicas. ¿Qué
que ha ingerido una gran cantidad de
implicaciones metabólicas tienen estas
alcohol en los dos últimos días con un
deficiencias (complejo B)?
consumo muy escaso de alimentos. Inició
su padecimiento con náusea, vómito,
Conceptos y áreas de aprendizaje
mareo, sudación, cefalea, visión borrosa y
1. Hipoglucemia. Regulación de la glucemia.
confusión; presentó, en una sola ocasión,
2. Acidosis láctica.
una convulsión, por lo que es llevado al
3. Metabolismo de carbohidratos.
servicio de urgencias. A la exploración se
4. Trastornos del metabolismo de vitaminas.
encuentra semiconsciente con aliento
5. Metabolismo del etanol.
alcohólico e hipotermia.
Se procede a un lavado gástrico para REFERENCIAS
remover el alcohol aún no absorbido; se 1. Murray KR, Granner DK, Mayes PA,
mantienen permeables las vías Rodwell VW. Bioquímica de Harper. 16a.
respiratorias; se instala oxígenoterapia y se ed. México: Editorial El Manual Moderno;
le administra solución glucosada por vía 2004. p. 980-981
endovenosa. 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
Los resultados de laboratorio muestran: aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
Alcohol 300 mg/dl Editorial Reverté; 2004.
Glucosa 2.0 mmol/l 3. Harrison. Principios de medicina interna.
Lactato 9.0 mmol/l 15a. ed. Madrid: McGraw-Hill
pH 7.2 Interamericana Editores; 2001. Capítulos:
Acidosis láctica, hipoglucemia, alcohol y
Preguntas de bioquímica alcoholismo, deficiencia y exceso de
1. ¿Cuáles son los síntomas de la vitaminas.
hipoglucemia? 4. Academia Nacional de Medicina. Tratado
2. ¿De qué forma el etanol produce acidosis de medicina interna. 2a. ed. México:
Editorial El Manual Moderno; 1994.
láctica e hipoglucemia? ¿Cómo se
Capítulos: Acidosis láctica e intoxicación
encuentra la relación intracelular de
+ aguda por alcohol etílico.
NADH/NAD ? ¿Qué procesos metabólicos
se favorecen con los niveles altos de
NADH?

198
Caso 4

Cetosis por inanición. Obesidad

Una mujer de 27 años llega al servicio de el estado de ayuno temprano y en la


urgencias médicas después de haber sufrido inanición?
un desmayo. Al interrogarla, relata que lleva 5. ¿Cuál es el papel de los cuerpos
15 días a dieta de agua, té y verduras cetónicos en el metabolismo?
cocidas para bajar de peso, sin ningún 6. ¿Qué régimen dietético recomendaría a
control médico. Se detectó aliento con olor a esta persona para bajar de peso?
manzana, cetonuria, cetonemia, ácidos
grasos libres elevados, triacilgliceroles Conceptos y áreas de aprendizaje
elevados, hipoglucemia y presión arterial 1. Describir las principales rutas de
baja; su peso al iniciar la dieta era de 78 kg y biosíntesis, catabolismo y
su estatura de 1.59 m. Se diagnostica almacenamiento de lípidos.
cetoacidosis por inanición y obesidad 2. Conocer la estructura y función de los
exógena. triacilgliceroles, ácidos grasos y cuerpos
El estudio de su dieta mostró que gran cetónicos.
parte de su ingesta calórica era en forma de 3. Establecer las bases bioquímicas de la
carbohidratos (galletas, chocolates, pasteles, cetosis y obesidad producidas por
refrescos, dulces, etcétera). anomalías en el metabolismo de los
El tratamiento consistió en administrar lípidos.
parenteralmente solución glucosada y 4. Describir las alteraciones del equilibrio
continuar con una dieta normocalórica. ácido-base que se producen en la cetosis.
5. Conocer las interrelaciones metabólicas
Preguntas de bioquímica de los principales tejidos corporales en los
1. En esta mujer de 27 años: ¿corresponde estados de buena nutrición, de ayuno
el peso a su talla? Determinar su índice temprano, de inanición, de renutrición, de
de masa corporal, grado de obesidad y el homeostasis calórica, etcétera.
porcentaje de sobrepeso.
2. ¿Cómo es posible que se formen grandes REFERENCIAS
almacenes de energía en forma de 1. Harrison. Principios de medicina interna.
grasas, si la dieta contiene 15a. ed. Madrid: McGraw-Hill
predominantemente carbohidratos? Interamericana Editores; 2001.
3. ¿Cuáles son las interrelaciones 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
metabólicas de los principales tejidos aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
(hígado, tejido adiposo, Editorial Reverté; 2004.
cerebro, músculo, etcétera) en la 3. Montgomery R. Bioquímica: Casos y texto.
obesidad? 6a. ed. Harcourt-Brace; 1998.
4. Casanova E. Nutriología médica. Editorial
4. ¿Cuáles son las interrelaciones
Médica Panamericana; 1995.
metabólicas de los principales tejidos en

199
Caso 5

Hipercolesterolemia y aterosclerosis

Un hombre de 56 años acudió al médico por 6. ¿Por qué se le ha llamado al colesterol-LDL:


presentar dolor precordial en reposo que se “colesterol malo” y al colesterol-HDL:
incrementaba con el esfuerzo. Se le detectó “colesterol bueno”?
hipercolesterolemia que, al análisis de los 7. ¿Cómo puede la hipercolesterolemia producir
lípidos plasmáticos, mostró que la mayoría aterosclerosis, infarto del miocardio,
del colesterol plasmático elevado se xantomatosis, etcétera?
encontraba en la fracción de lipoproteína de 8. ¿Por qué el hecho de disminuir la
baja densidad (LDL). Se le realizó una concentración plasmática de colesterol puede
arteriografía coronaria la cual mostró un ser útil para la salud de este paciente?
estrechamiento de las arterias. La evaluación 9. ¿Qué papel desempeña la HMG-CoA
de la dieta indicó que consumía gran reductasa en la biosíntesis del colesterol?
cantidad de alimentos ricos en colesterol, 10. ¿Cuál es la razón del uso de la lovastatina
aunque en los últimos meses había seguido para el tratamiento del paciente?
una dieta baja en grasas.
Fue diagnosticado de aterosclerosis en las Conceptos y áreas de aprendizaje
arterias coronarias. 1. Estructura del colesterol y otros esteroles
El tratamiento consistió en una dieta sin importantes.
colesterol y en administrar preparados de 2. Biosíntesis, metabolismo y excreción del
lovastatina, un inhibidor de la HMGCoA colesterol y de los ácidos biliares.
reductasa. 3. Describir la función de la bilis y su relación
Fue tratado también con colestiramina, con el colesterol.
una resina que capta las sales biliares. La 4. Considerar el papel del colesterol en el
resina no se absorbe y permanece en la luz desarrollo de la aterosclerosis y de la relación
intestinal donde se une a las sales y aumenta entre hipercolesterolemia e ingesta dietética
la cantidad de las mismas que se excreta con de lípidos en esta enfermedad.
las heces. 5. Comentar los principios del transporte de
lípidos en el sistema circulatorio.
Preguntas de bioquímica 6. Describir la composición, estructura,
1. ¿Cuáles son algunos alimentos ricos en metabolismo y función de los principales
colesterol? tipos de lipoproteínas plasmáticas.
2. ¿Cuál es el destino del colesterol de la dieta? 7. Describir los defectos del metabolismo
3. ¿Cuál es la función de la bilis en la digestión? lipídico que tienen relevancia clínica en
4. ¿Qué conexión metabólica existe entre el relación con la hipercolesterolemia.
colesterol y las sales biliares?
5. ¿Cómo disminuye la resina de colestiramina REFERENCIAS
la concentración plasmática de colesterol? 1. PLM. Diccionario de especialidades
farmacológicas. 49 ed. 2004.

200
2. Montgomery R. Bioquímica. Casos y texto.
6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-Brace,
1998: cap. 10 y 11.
3. Harrison. Principios de medicina interna. 15a.
ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana
Editores; 2001: Capítulos: Aterosclerosis y
otras formas de arteriosclerosis e
hiperlipoproteinemias y otros trastornos del
metabolismo lipídico.
4. Pennachio D. Lineamientos para la detección
de hipercolesterolemia. Atención Médica
1997;10/2:30-43.
5. Vogel RA. Coronary risk factors, endothelial
function, and atherosclerosis. Clin Cardiol
1997; 20:426-432.
6. Goodman & Gilman’s. The pharmacological
basis of therapeutics. 10th ed. McGraw-Hill
Interamericana Editores; 2002.
7.Mecanismo de acción de los
hipercolesterolemiantes. Rev Médico
General. 1997; 2(7): 71-74.

201
Caso 6

GOTA

Un hombre de 53 años relata que su 8. ¿Qué régimen dietético le recomendaría a


padecimiento actual se inició con una esta persona para mejorar sus niveles de
inflamación aguda del ortejo mayor del pie ácido úrico?
derecho e intenso dolor, el cual se 9. ¿Cuál es la base bioquímica para la acción
intensificaba con el frío y el movimiento. de los medicamentos utilizados en la gota?
Además, asegura que poco antes de
presentar este episodio agudo el paciente Conceptos y áreas de aprendizaje
había incrementado el consumo de carne, 1. Características estructurales de los ácidos
vísceras, leguminosas y vino de mesa en nucleicos.
abundancia. 2. Biosíntesis y catabolismo de purinas y
Fue tratado con fenilbutazona, pero pirimidinas.
presentó daño gástrico, por lo que se cambió 3. Explicar cómo interfieren algunos
el medicamento por alopurinol y naproxén. medicamentos utilizados en el tratamiento de
la gota con el metabolismo de los
Preguntas de bioquímica nucleótidos.
1. ¿Qué alteraciones metabólicas pueden traer
como consecuencia un aumento en los REFERENCIAS
niveles séricos de ácido úrico? 1. Harrison. Principios de medicina interna. 15a.
2. ¿Son necesarias las purinas y las pirimidinas ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana
en la dieta? Editores; 2001.
3. ¿Qué alimentos son ricos en purinas y 2. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
pirimidinas?
Editorial Reverté; 2004.
4. ¿Qué valores de laboratorio podrían estar
3. Montgomery R. Bioquímica: Casos y texto.
alterados en este paciente?
6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-Brace;
5. ¿Son importantes los antecedentes familiares
1998: Cap. 13.
de este paciente?
4. Rodríguez Carranza R y col. Vademécum
6. ¿Cuál es la base bioquímica para sospechar
académico de medicamentos. 4a. ed.
que una dieta rica en proteínas puede México: Facultad de Medicina, UNAM y
provocar ataques de gota en pacientes McGraw-Hill Interamericana Editores; 2004.
susceptibles?
7. ¿Cómo se relaciona la ingestión de etanol
con el incremento de la concentración
plasmática de ácido úrico?

202

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