HISTORIA DE LA CIENCIA ANIMALES DE LABORATORIO

1900 : Depósitos de animales (galpones ,etc.)

1909 : Líneas genéticas endocriadas : Harvard (C57BL/6)
C3H, AKR
BALB/C
C57BL/10
1935 : Jackson Premio Nobel Sistema de Histocompatibilidad
1950 : Centros de Referencia
1947 : LAC
1949 : VRP/NIH (USA)
1954 : Chales River (USA)
1956 : ICLAS (Mundial)
1957 : ZFV(Alemania)
Agentes patógenos
Técnicas SPF/Gnotobiologia
1957 : Trexler Aisladores
1960 : Diseño de Bioterios en barreras (SPF) con control ambiental
Acreditación
Monitoreo Sanitario
1963 : Guía Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio
Jaulas con tapas filtro rudimentaria
1970 : Seguridad ocupacional (USA)
1972 : Criopreservación de embriones
Dietas definidas
Buenas Practicas de Laboratorio
Especificaciones del ambiente : Estricto control ambiental –
Microaisladores – Flujo Laminar- Rack ventilados.
1980 - 2000 : Calidad Total (ISO – 2000)
1984 : Gerenciamiento en bioterio (USA)
1985 : Principios éticos 3Rs
Diseños eficientes
Educación formal (FELASA A,B,C,D)
Bienestar animal
1996 : Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio
CLASIFICACION SANITARIA DE LOS ANIMALES DE
LABORATORIO
a) Gnotobióticos :
• Axénicos o Germ Free (libres de gérmenes)
• Gnotoxénicos (1 ó 2 microorganismos conocidos).
b) Agnotobióticos :
• Holoxénicos o convencionales : criados bajo condiciones ambientales
no definidas
• SPF : Criados bajo condiciones ambientales especiales.
• Neoholoxénicos : son originariamente Germ Free ó SPF pero
recriados y mantenidos en condiciones ambientales convencionales.

Sistemas de aislamiento a nivel de la jaula

Mini o microaisladores (jaulas con tapa filtro)
Aisladores contenidas en flujos laminares
Aisladores contenidas en cubículos
Aisladores con ventilación y filtración propia
Clasificación de aisladores

Rígidos
Ventaja : Esterilización en autoclave
• Desventaja : Alto costo
No pueden modificarse
b) Flexibles
• Ventaja : Gran flexibilidad
Transparencia
Pueden modificarse
Bajo costo
Presión de aire
• Desventaja : No se pueden esterilizar por calor
Expuestos a pinchaduras

Características de un aislador
Cámara o contenedor con un espacio interior libre de gérmenes
Visor para poder observar desde afuera el interior de la cámara.
Puerta para entrada y salida de animales e insumos sin que se altere la
condición gnotobiótica interna.
Debe contar con sistema de ventilación : presión positiva.

Prácticas seguras en bioterio y en el uso de Animales de Laboratorio

Bioterio : conjunto de instalaciones destinadas a mantener y/o producir

animales de laboratorio.
• Usar uniforme y material de contención.
• No manipular animales sin habilitación para ésta área
• Informar inmediatamente las mordeduras o trauma físico
• Mantener en orden área de trabajo
• No fumar, beber o comer en áreas de animales
• Mantener las manos limpias

Diseño de Bioterios
La Guía para el Cuidado y Uso de Animales de laboratorio recomienda :
- Instalaciones planificadas, construidas y mantenidas apropiadamente.
- El tamaño y diseño dependerá de los fines (investigación, producción)
- La necesidad del diseño se justifica por tres razones :
- Desde el punto de vista ético.
- Estandarización y calidad genética por fines científicos
- Por razones económicas (selección de materiales de construcción,
puertas de metal y abrir hacia dentro (1.10 x 2.15m)

Barrera sanitarias
Estructuras físicas o métodos, mantiene aislado al animal del ambiente
externo produciendo un ambiente especial mas o menos controlado que
lo protege de posibles contaminantes no deseados.
También se define como el conjunto de medios para minimizar el riesgo
de contaminación

Objetivo
Obtención de animales SPF (garantizar ensayos experimentales fiables y
reproducibles)
Ausencia de enfermedades (flora intestinal estable)

Tipos de barreras
Clase I : de máxima seguridad para animales gnotobióticos
Clase II : de seguridad alta para animales SPF
Clase III : de seguridad media para mantener animales sanos de origen
SPF en un área convencional limpia.
Clase IV : de seguridad mínima para animales convencionales.

Clasificación de barreras
I -Instalaciones y otros :
1. Filtración de aire
2. Climatización
3. Renovaciones de aire
4. Sobrepresión
5. Filtración y tratamiento de agua
6. Zonas de seguridad biológica
7. Pasillos (zona limpia y zona contaminada)
8. Vestuarios
9. Restricción de ropa especifica para trabajos en área determinada
10.Ambientes específicos de cuarentena
 11.Sistemas de paso de doble puerta
12.Dispositivos de captura de insectos
13.Restricción de visitantes

II - Equipo

14.Autoclave , luces germicidas etc.

15.Lavadero de jaulas y equipos
16.Incinerador

1. Filtración de aire : consiste en filtrar el aire que ingresa a la sala de

crianza para impedir el ingreso de partículas e insectos voladores.
Grado de filtración : depende del grado de protección que se necesite en
la crianza de animales,
el filtro seleccionado debe tener un pre-filtro que servirán para atrapar
partículas mas grandes y que hará mas duradero el filtro de aire.
El caudal : cantidad de aire transportada por el ventilador, se expresa en
volumen de aire desplazado por unidad de tiempo (m3/hora ,
m3/minuto).

2. Climatización : condicionará la salud de los animales (control de Tº

extremas de la región). Humedad relativa : depende del origen del
animal; por ejemplo un animal SPF que ha tenido microclimas con
temperaturas entre 21º a 22ºC, lo pasamos a un ambiente entre 20º a 26º
C será candidato a sufrir de trastornos respiratorios.

3. Renovaciones de aire : sobredimensionar la necesidad de

renovaciones de aire que necesite; se aconseja 15 a 20 renovaciones /hora
. La renovación de aire permitirá una cantidad mínima de gases tóxicos
(amoníaco, polvo ambiental, calor producido por los animales, etc.)
proporcionará suficiente oxígeno - aire fresco.

4. Sobrepresión : barrera a implantar en un bioterio, su eficacia se

consigue balanceando correctamente impulsión - aspiración del aire; el
orden de sobrepresión será : mayor grado de presión en pasillo limpio,
menor grado en salas de crianza e inferior en pasillos contaminados : el
aire circula en dirección de pasillo limpio a pasillo sucio y nunca al
revés.

5. Zona de seguridad biológica : se planifica para trabajar con agentes

patógenos, ésta zona tiene depresión de aire para evitar salida de
contaminantes, debe contener equipos de esterilización y el acceso debe
ser restringido.

6. Pasillos : En áreas de crianza “ No debe haber Contaminación

Cruzada”.
Se recomienda fijar la presión y circulación de aire relativa, la presión
más alta en zona limpia y la presión mas baja en zona de mayor
contaminación.

7. Tratamiento del agua

a) Clorador : concentración de cloro libre residual de 0.5mg/litro, se
obtiene un poder oxidante tanto sobre sustancias orgánicas como
inorgánicas.
b) Acidificador : se añade ácido clorhídrico hasta obtener ph de 2.5
aprox.(los patógenos no se multiplican en un medio ácido).

8. Vestuarios :
Vestuario de diferente color (zona limpia – contaminada)
La barrera mas “viable”dentro de la unidad : ropa.

9. Cuarentena :
Todo animal nuevo aunque provengan de bioterio acreditado con su
respectivo certificado sanitario debe permanecer aislado bajo control en
zona cuarentenaria

10. Deep – Tahk : sirve para pasar materiales atravesando un medio

líquido, consta de un depósito situado entre la zona limpia – zona
contaminada.

11. Barreras atrapa insectos : lámparas que atrapan insectos voladores.

12. Vaciado sanitario : consiste en retirar todo equipo - implemento de
crianza para realizar la limpieza y desinfección general del
habitáculo(techos, piso, paredes y puertas).

13. Control de visitas : la curiosidad por ver como viven los animales
estropea las barreras implantadas en un bioterio.(no beneficia el objetivo
básico de barreras, sobre todo cuando existe la intención de mantener
animales genéticamente definidos.

II – Equipos.
14. Autoclave : método ideal de esterilización, barreras más eficaz para
destruir patógenos.
15. Lavador de jaulas : automático o manual.
16. Incinerador : eliminación de residuos biológicos.

Alojamiento
Medida básica del cuidado de animales de laboratorio es proporcionar
alojamiento ideal (cama seca, espacio suficiente para moverse,
disponibilidad de agua, comida, evitar hacinamiento.

Características básicas :
• Cómoda
• Resistente a la corrosión
• Esterilizable
• Fácil acceso : alimento - agua
 • Aire circule correctamente por su interior
• Segura
• Fácil limpieza
Las jaulas : policarbonato, polipropileno ó acero quirúrgico.
Cepos o jaulas de sujeción : se usan para inmovilizar animales ,
sirven para inocular, anestesiar, extraer sangre, administrar
fármacos ,etc.
Estanterías : fácil limpieza , ventilación adecuada.
Comederos: según modelo de jaula.
Bebederos: frasco-gotero (gotero de 6-9 mm de diámetro ,con tapa
hermética)
El tamaño de gota varía según material y diámetro del gotero.
Bebederos automáticos : desventaja no se controla el consumo
individual
Cama: debe ser atóxico, poder absorbente , económico y fácil
disponibilidad : coronta molida, viruta de madera blanca.
Se cambiará 2 a 3 veces por semana.

Condiciones requeridas por los animales de laboratorio

Las condiciones ambientales en que se crían los animales influyen

decisivamente en las respuestas a los diferentes tratamientos.
Cuando se buscan respuestas estandarizadas las condiciones en que
se mantienen los animales deben ser fijas y comparable al bioterio
matriz.
Los cambios del ambiente externo son registrados por los receptores
externos de los animales que envían la información al sistema
neuroendocrino para restaurar desbalances homeostáticos.
Cualquier alteración ambiental produce cambios en el modelo
animal.
Principales factores ambientales que afectan a los animales :
• Climáticos (temperatura, humedad, ventilación etc.)
• Físico-quimicos (iluminación , ruido , presencia de
contaminantes, anestésicos, concentración de gases amoniacales)
• Instalaciones (hacinamiento )
• Nutricionales (tipos de dietas , calidad del agua)
• Microorganismos patógenos para la especie
Temperatura
Los ratones son homeotermos (mantienen su Tº corporal); si se
modifica la Tº ambiental abrá :
- Cambios de conducta, alteraciones del grosor de piel, de la
circulación periférica
- Pérdida de calor: sudoración, cambios de la morfología
(tamaño de cola y orejas)
- Velocidad de crecimiento (tamaño de las camadas)
Los animales de laboratorio deben criarse, mantenerse y
experimentarse a temperaturas óptimas para la especie y
estrictamente controladas a través del sistema de renovación de aire,
los ambientes de crianza deben contar con termógrafos para
registrar las variaciones durante el día. Temperatura óptima para
rata , ratón y hamster : 20 – 25 ºC .
Humedad
La humedad relativa es importante en el proceso de
termoregulación, condiciones muy secas aumentan la cantidad de
polvo y por lo tanto la irritación del tracto respiratorio superior y
además se presenta la llamada cola en anillo
Ventilación
Es necesario contar con un buen sistema de renovación de aire que
elimine los gases (amoniaco)
Iluminación
Debemos tener en cuenta que los ratones son de hábitos nocturnos y
sus ojos no están adaptados a la luz muy fuerte, cuando la intensidad
de la luz es elevada causa cambios degenerativos de la retina sobre todo
en los albinos.
Ruido
El ruido es un sonido indeseable que provoca stress . El hombre tiene el
menor limite superior de frecuencia audible y por ello sonidos que el
hombre no oye pueden ser muy estresantes para los animales (griferías
goteantes, ruedas de estanterías, timbres telefónicos, chirrido de puertas,
teclado de computador etc. El efecto de los ruidos ocasiona cambios de
conducta, altera el desarrollo prenatal , sistema neuroendocrino,
hipertensión, hipertrofia cardiaca, perdida de peso
Biología y manejo de las especies más usadas

El Ratón : Mus muscullus, especie mas usada en investigación,

producción, control de vacunas y biológico etc.
Ventaja : bajo costo de mantenimiento, alta prolificidad, precocidad;
existen mas de 500 cepas endogámicas , siendo la mas común la cepa
Balb C.
Manipulación y sujeción : al adulto se sujeta por la piel de la nuca y a
las crías rodeándolas con la mano.
Para una mejor sujeción : asir el animal por la base de la cola y la piel de
la nuca, la cola se puede sujetar con el dedo anular y meñique de la
misma mano.

Fisiología : los parámetros fisiológicos dependen de la cepa, edad ,

factores ambientales y estatus microbiológico; no existen parámetros
básicos , cada cepa tiene los suyos y varían con las condiciones
enunciadas.
Son animales nocturnos, omnívoros ,presentan un par de incisivos muy
desarrollados.

Determinación del sexo :

Por la distancia ano genital
La hembra : poliestrual , precoz ; presenta efecto “Whitten”.
(sincronización del ciclo ante presencia del macho)
Presenta efecto “Bruce”(no hay implantación por feromonas : orina)
Gestación : 21 días, celo post parto.
Recién nacidos : rosados, carecen de pelo, aprox. 10 días : totalmente
cubiertas de pelo y sus ojos están bien abiertos.
Conducta : son nocturnos, se acicalan entre sí y ejercen dominancia.

Datos fisiológicos del ratón :

La temperatura corporal es : 35.8 a 37.4 ºC
Frecuencia cardiaca : 328 a 780 por minuto
Frecuencia respiratoria : 90 a 220 por minuto
Peso del ratón adulto : 25 a 40 gramos
Peso de recién nacido : 1 gramo
Consumo de agua : 4 a 7 ml o 1.5 ml por cada 10 gr. de peso /día
Consumo de alimento : 3 a 6 gramos
Inicio de consumo de : 10 a 12 días
alimentos
Heces : tienen forma de tamaño de granos de arroz
de color marrón oscuro
Orina : tiene olor muy fuerte , es transparente de
color amarilla, orinan
pequeñas cantidades frecuentemente.
Tiempo de vida : 12 a 18 meses
Madurez sexual : 40 a 60 días de edad
Ciclo estrual : 4 a 5 días
Duración del estro : 10 horas
Gestación : 21 días
Vida reproductiva : 8 meses
Tamaño de camada : 6 a 10 crías
Canibalismo : es posible que se presente cuando no hay
buen manejo(si es necesario manipular las
crías : previamente untar la cama)
Destete : 21 días
Método de identificación : perforación de la oreja
Cepa mas común : Balb C

La Rata : mas usada Rattus Norvegicus; la primera rata albina fue

desarrollada por el lab. Wistar de USA.
Es usada para estudios de nutrición, toxicidad y comportamiento.
Es la segunda especie después del ratón
Anatomía y fisiología semejante al ratón , es mas dócil
No posee vesícula biliar
Cuando la humedad relativa disminuye hasta 40% desarrollan cola
anillada
Cobayo : de pelaje corto es el único usado en investigación médica, se
usa para control de vacunas, sueros.
También se usa en estudios de reacciones inmunológicas (complemento-
plasmático de alto poder de actividad,}
En estudios nutricionales de vitamina C
Son herbívoros, coprófagos, muy nerviosos
Temperatura elevada (mas de 28ºC y 70% de humedad )es factor
limitante
Es necesario suplementar vitamina C en el agua de bebida
Conejos
Pertenecen a la familia lagomorfos, son omnivoros
Uso : pruebas de toxicidad, pirógenos, producción de sueros
hiperinmunes, irritación dérmica y ocular
Es coprófago (digestión : diurna – nocturna)
La orina : color amarilla a marrón rojizo
El macho se diferencia por presencia de bolsas testiculares

Nutrición de los animales de laboratorio

Los alimentos para animales varían en el contenido calórico total
Carbohidratos : 4.1 Kcal/gramo
Proteínas : 5.6 Kcal/gramo
Grasas : 9.4 Kcal/gramo
La dieta balanceada debe contener equilibrio de los nutrientes requeridos
para el sustento de cada especie.
Alimentos se presentan : molidos, granulado, extrusado, semihumedo,
enlatado.
Tipos de alimentos comerciables :
• Alimentos normales : generalmente presentan la etiqueta con los
ingredientes e información relacionada con el análisis garantizado.
• Alimento certificado para análisis : es similar a otro alimento , pero el
fabricante certifica el análisis de los nutrientes y mide los
contaminantes (por debajo del nivel particular)
• Alimento para animales esterilizable con autoclave e irradiado : (para
animales libres de gérmenes) éste alimento a sido formulado tomando
en cuenta el efecto de la esterilización en que se pierden ciertos
nutrientes.
• Alimentos purificados : elaborados a base de nutrientes purificados
tales como: almidón, glucosa, sacarosa, caseína(proteína de leche), se
usan en estudios nutricionales.

Buenas Prácticas de Fabricación

Es la guía de Normas de correcta fabricación de medicamentos, cada país
tiene sus propias Guías Normativas para la Elaboración de
Medicamentos.
Entre las asociaciones ó instituciones internacionales encargadas de
regular las GMP destacan :
OMS, OPS, ISO (International Organization for standardization:
Ginebra)
PIC (Pharmaceutical Inspection Convention : Union Europea)
ICH (International Convention for Harmonization)
Las empresas pueden, si lo desean adherirse a alguna de éstas
asociaciones sometiendose a cumplir con las Normativas y
especificaciones para la producción, siendo periódicamente controlada y
auditada ; una vez aprobada contará con la Certificación de Calidad
correspondiente.
Según el nivel de exigencia de la asociación de control, mayor será el
nivel de prestigio de la Certificación del producto registrado y de su
marca.

Buenas Prácticas de Laboratorio para estudios de laboratorio no

clínicos (GLP)
- Conjunto de estándares que definen el sistema organizativo y las
condiciones bajo las cuales los estudios con animales y de otro
tipo (no clínicos) son planeados, realizados, registrados, reportados y
archivados.
- Fuerte requerimiento de documentación y rendición de cuentas sobre
procedimientos, eventos y sobre datos y resultados
obtenidos.
- Objetivo : demostrar seguridad de los artículos no incluye
investigaciones básicas
- Estudios monitoreados por un grupo independiente de garantía de
calidad para asegurar que todo se desarrolla según el protocolo de estudio
y lo establecido en los procedimientos, también audita reporte final.
- El cumplimiento de las Buenas Practicas de Laboratorio está sujeto a
inspecciones de autoridades regulatorias.
- Tratan de : Organización y personal, Operaciones, Artículos de
Ensayo, Protocolos, Registros y Reportes, Descalificación
- 58.43 : Instalaciones cuidado de animales
- 58.45 : Instalaciones, insumos para animales
- 58.81 : Procedimientos estándar escrito (Preparación de salas, Cuidado
de Animales)
- 58.90 : Cuidado de animales (Cuarentena; Evaluación de salud; Estar
libre de enfermedad ó condición que interfiera;
Si contraen enfermedad ó condición, tratarlos si no interfiere en
estudio.
- 58.120 : Protocolo = Contiene proveedor
- 58.185 : Reporte = Proveedor de animales, Circunstancias que puedan
haber afectado calidad ó integridad

Consideraciones generales anestésicas para roedores

- Gran variación en la respuesta a una dosis en la misma especie
(causas genéticas y/o ambientales)
- Pequeño tamaño , masa muscular reducida y pocas venas
periféricas accesibles (vía intraperitoneal)
- Tendencia a la hipotermia y deshidratación.
- Ayuno no mayor de 12 horas (facilita administración IP de drogas,
facilita respiración diafragmática;
para evitar la pérdida de peso, se administra vía oral solución
glucosada al 10 %).

Consideraciones para anestesia inhalatoria en roedores

- Peso corporal reducido
- Dificultad en la intubación endotraqueal
- Altas frecuencias respiratorias
- Alta resistencia en las vías aéreas superiores

Monitoreo anestésico(signos clínicos)

- Reflejo de enderezamiento
- Reflejo podal (de poco valor en cobayos)
- Reflejo corneal (de poco valor en conejos)
- Movimiento de mandíbula, orejas y vibrisas
- Evaluación del dolor : reacción del animal a la compresión : cola,
pata, piel y modificaciones en el tipo respiratorio en respuesta al
dolor)
- Color de las mucosas
- Frecuencia respiratoria y cardiaca
- Presencia de exoftalmia (rata y ratón : en plano anestésico
profundo)
 - Temperatura corporal (anestésico deprime el centro
termorregulador)

Anestésico general
Sustancia que produce ausencia de la percepción de estímulos, permite
producir pérdida de la conciencia, analgesia y relajación muscular
suficiente para realizar procedimiento quirúrgico.
Clasificación :
- Inyectables (depresores no selectivos : barbitúricos y disociativos :
ketamina)
- Inhalatorios (eter, halothano)
Premedicación :
a) Anticolinérgicos : usados para evitar efectos adversos como
bradicardia, sialorrea etc. Ejemplo : sulfato de atropina (0.1 a 3mg/kg,
V.P); las dosis son mas elevadas en algunas cepas de roedores y conejos
por la atropinesterasa.
b) Tranquilizantes : facilitan el manejo del animal y su contención; se
usan para reducir la dosis anestésica.

Eutanasia
Acto de sacrificar animales por métodos que inducen rápidamente a la
pérdida de la conciencia evitando el dolor.
Requisitos :
- Muerte sin signos de dolor
- Rápida pérdida de la conciencia
- Seguro para el operador
- Económico
Métodos :
- Ampliamente aceptados : Barbitúricos, CO2, dislocación cervical,
decapitación
- No aceptados : Estricnina , agentes curariformes, sulfato de
magnesio.

Medidas de Bioseguridad en el manejo de animales de investigación

Las medidas de bioseguridad y salud ocupacional para el personal

involucrado en investigación y uso de animales de laboratorio se dan de
acuerdo a las medidas especificas determinadas por su Comité Interno de
Bioseguridad.