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Manual de Procedimientos
Tinción e interpretación
de la Muestra de
Citología Cervical
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Manual de Procedimientos
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Manual de Procedimientos
Contenido
Introducción 5
III. Procedimientos
1. Recepción de laminillas
de citología exfoliativa
cérvico – uterina. 10
2. Tinción y montaje
de las laminillas 16
3. Lectura e interpretación
de las muestras de citología
exfoliativa cérvico – uterina 27
Glosario de términos 42
Anexo: Figuras 47
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Introducción
El cáncer cérvico uterino es un padecimiento que se espera recibir para alcanzar una cobertura de
puede ser detectado a través de pruebas de tami- tamizaje de 70 a 80%.
zaje como la citología exfoliativa o Papanicolaou y
la visualización directa con ácido acético. No obs- El control de calidad debe considerar condiciones de
tante que existen pruebas biomoleculares para de- trabajo óptimas, las que incluyen manuales de pro-
tectar diferentes tipo de VPH (virus de papiloma cedimientos técnicos y normas de seguridad, de
humano) como son la Reacción de la Polimeriaza acuerdo con las Normas Oficiales Mexicanas para el
en Cadena (RPC) y la captura de híbridos, la cito- manejo de deshechos, materiales infecciosos, con-
logía es el método más usual en los programas taminantes, inflamables y tóxicos. Los manuales
de prevención de cáncer cérvico uterino, debido a deberán estar siempre actualizados, disponibles y
que es una prueba de bajo costo y accesible a la seguirse tal como se indica en cada uno de ellos.
mayor parte de la población, y ha demostrado ser
efectiva en la reducción de la incidencia y mortali- Otro de los aspectos y tal vez uno de los más im-
dad por esta patología en muchos países. portantes del control de calidad del laboratorio,
es la capacidad técnica y profesional del perso-
Una parte fundamental del programa de preven- nal que ahí labora. El responsable del laboratorio
ción de cáncer cérvico uterino es la existencia de debe ser un médico con amplia experiencia en la
infraestructura de salud adecuada, donde el la- interpretación citológica: un citólogo, patólogo o
boratorio de citología es un componente esencial citopatólogo. Además, el personal de apoyo los
dentro del programa y parte del éxito del mismo. citotecnólogos, deben contar con una formación
El laboratorio de citología debe garantizar niveles calificada y con experiencia suficiente para lograr
de alta calidad, por lo que es recomendable que un grado óptimo de certeza diagnóstica, por lo
sus servicios se encuentren centralizados. A ma- que se debe enfatizar la importancia de que el
yor centralización, mayor eficiencia, por lo que en personal que ahí se desempeña participe en pro-
nuestro país sería importante que los laboratorios gramas de educación continua. Con lo anterior se
se organicen a nivel estatal o regional, dependien- espera realizar un trabajo óptimo que garantice la
do de su población de mujeres a atendider. efectividad y eficiencia de los laboratorios de ci-
tología cérvical.
De acuerdo con la Organización Mundial de la Sa-
lud (OMS, 2002), un laboratorio de citología de- Este manual requerirá de actualización periódica
bería procesar un mínimo de 15 a 25 mil citologías para incorporar los avances tecnológicos y cientí-
por año o cincuenta laminillas por citólogo en una ficos más recientes y las posibles modificaciones
jornada de ocho horas diarias. El tiempo estimado que pudiera experimentar la organización de los
para la interpretación de una laminilla es de aproxi- servicios de salud.
madamente seis minutos, cinco para la lectura y
uno para escribir el reporte. De acuerdo con lo anterior será imperioso incluir
un apartado referente al Control de Calidad Ex-
Para brindar un servicio adecuado en el laboratorio terno, lo cual será importante que se realice de
de citología se deben hacer estimaciones de los manera sistemática, a través de diferentes instancias
requerimientos de citotecnólogos necesarios para e instituciones, aplicando evaluaciones académicas
atender a su población blanco, es decir, el personal a los integrantes del equipo del laboratorio y de
debe ser proporcional al volumen de laminillas que reproducibilidad diagnóstica.
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Establecer los lineamientos generales de operación recepción, tinción, montaje, lectura e interpretación,
que contribuyan a mejorar la calidad de los procesos archivo y control de calidad de las muestras citológi-
y resultados que realiza tanto el personal secretarial, cas de las mujeres atendidas en las unidades médicas
como el de capturistas, citotecnólogos, citólogos, de la Secretaría de Salud, para su procesamiento y la
técnicos en tinción y patólogos, en relación con la detección oportuna del cáncer cérvico-uterino.
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Recepción de muestras
Uno de los objetivos de la recepción es lograr que • Toda muestra - solicitud que llegue al laboratorio
las muestras del examen de Papanicolaou sean debe cumplir con cada uno de los requisitos para
representativas de las pacientes, adecuadamente ser aceptada en el laboratorio.
recolectadas, preservadas, etiquetadas, transpor- • Todas las muestras - solicitud deberán ser iden-
tadas y que los formatos de solicitud y reporte de tificadas con un número único correlativo, en el
resultados (FSRR) sean legibles y contengan toda laboratorio, manteniendo la correspondencia en-
la información definida como necesaria. tre ambas (muestra solicitud).
• La recepción e identificación de muestras–so-
Así mismo, mantener un flujo relativamente es- licitud, deberá quedar debidamente documentada
table en tiempo para optimizar la capacidad insta- en el sistema de información del laboratorio.
lada del laboratorio, para no sobrecargar o subuti-
lizar el laboratorio. Un aspecto importante en cuanto a seguridad la-
boral es que:
Si queremos que la recepción de muestras tenga
éxito, se deberá realizar lo siguiente: La laminilla de la unidad muestra-solicitud contiene
material biológico proveniente del cuello uterino y el
• El flujo de muestras - solicitud recibidas en cuan- personal del laboratorio deberá tomar las precauciones
to a volumen y calendario, se deberá ajustar a la del caso cuando retire el material de los maletines o
programación establecida. cajas, revise y de número a las muestras-solicitud.
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TERMINA PROCEDIMIENTO
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El área de tinción debe estar físicamente separada Se deberán tener los siguientes cuidados:
de otros espacios, con una excelente ventilación ha-
cia el exterior, ya que debido a los contaminantes Verificar que las soluciones estén rotuladas indicando:
químicos, es una área de alto riesgo. fecha de compra, nombre de la solución, titulación,
concentración, advertencias para su manejo y fecha
Deben estar señalizadas las medidas a tomar en caso de vencimiento.
de siniestro, debido a que muchas de las sustancias
que aquí se manejan son inflamables, por lo que Mantener los colorantes en envases oscuros, bien
es importante contar con regadera antiincendios y tapados porque son sensibles a la luz y se oxidan a
extintores, y de igual manera, también debe contar temperatura ambiente.
con campana de extracción de gases tanto para la
tinción, como para el montaje. El tren de tinción debe cambiarse cada 2000 lamini-
llas teñidas o cada 6 u 8 semanas.
En cuanto a los insumos y material se recomienda
sean de buena calidad, como: las cajas de vidrio, los Se deberá realizar el mantenimiento general y especí-
cubreobjetos y porta objetos, etc. fico de los colorantes, de la siguiente manera:
Se podrá obtener una tinción de calidad si: Mantenimiento general. Filtrar los colorantes cada
• Todas las laminillas aceptadas son procesadas en ocho días; rutinariamente y cuando se requiera se
el tiempo establecido y se mantiene su integridad e hará diariamente, ésto deberá hacerse antes de usar-
identificación durante el proceso. los, para remover cualquier material celular que se
• Todas las laminillas se tiñen obteniendo una bue- haya desprendido de las laminillas. Se podrá usar un
na definición del detalle nuclear y una transparencia papel filtro de mediana velocidad (Whatman N° 1).
del citoplasma para poder observar la diferenciación
celular. Limpiar las cajas de todo residuo de colorante.
• Todas las laminillas están montadas adecuada-
mente, lo que significa que el frotis está protegido Controlar diariamente el nivel de las soluciones del
de sequedad, del encogimiento y de desteñirse por la tren de tinción para asegurar que las laminillas pro-
oxidación. Además, proporciona una imagen trans- cesadas se cubran totalmente. Rellenar las cubetas
parente en el microscopio. con el colorante correspondiente.
• Las charolas para los citotecnólogos están prepara-
das correctamente, lo que significa que contienen el El mantenimiento específico se refiere al cuidado de
número de laminillas que corresponde, están libres los tres colorantes de manera particular, y se detalla
entre sí (no pegadas) y colocadas en orden correla- posteriormente en cada uno de los pasos correspon-
tivo con el número de registro citológico. dientes a su uso en el proceso de tinción.
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La tinción de Papanicolaou es un método de tinción ficada, luego se remueve el exceso de tinción con áci-
policrómico que consta de una tinción nuclear y do clorhídrico diluido. Después de algunos minutos
un contraste citoplásmico. Tiene como ventaja una en Hematoxilina las células son deshidratadas gradual
buena definición del detalle nuclear, evidenciando el o abruptamente antes de efectuar las tinciones de con-
patrón de cromatina; un aspecto transparente del ci- traste.
toplasma, que permite apreciar los grados de diferen-
ciación celular y actividad metabólica. Tinción del citoplasma
La tinción con Orange G es una tinción monocromáti-
La tinción de Papanicolaou utiliza tres colorantes: la ca que colorea la queratina de un naranja brillante y
Hematoxilina que tiñe selectivamente los núcleos, el penetra rápidamente al citoplasma. La queratina no
Orange G y la Eosina Alcohol 50 que tiñe los citoplas- se encuentra en condiciones normales en el epitelio
mas. Los pasos de la tinción están entremezclados cervical vaginal (se encuentra en carcinomas que-
con soluciones que hidratan, deshidratan y enjuagan ratinizados).
las células.
La Eosina A 50 es una tinción policroma compuesta
La hidratación antes de la inmerción en Hematoxilina de Eosina, verde luz y café Bissmark. La Eosina tiñe
puede ser gradual, usando alcohol en concentracio- el citoplasma de las células escamosas maduras, nu-
nes decrecientes (80, 70, 50%) o abrupta, sumer- cleolos y cilios. El verde luz tiñe las células que son
giendo el material celular desde altas concentracio- metabólicamente activas, como las células parabasa-
nes de alcohol y al agua directamente. les, intermedias y columnares. Las células superficiales
se tiñen rosadas con la Eosina y por ello se describen
El enjuague se realizara con agua corriente y/o agua como eosinofílicas. Las células parabasales e interme-
destilada, pero siempre hay que verificar que el pH dias se tiñen de verde azul, dependiendo del tiempo
del agua se encuentre entre 6.5 y 7. de la tinción EA y se llaman cianofílicas.
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Fig. 2 2.4 Incluir 24 pasos para el tren de tinción, con Técnico en tinción
sus respectivas cajas de tinción. o citotecnólogo
capacitado
2.8 Filtrar cada ocho días los colorantes Orange y Técnico en tinción
EA 50, ya que pierden su poder más rápidamente o citotecnólogo
que la Hematoxilina. Reemplazar los colorantes capacitado
cada semana, se deberá completar el volumen
inicial con colorante nuevo. Si la coloración es
pálida, o las células parecen grises, nebulosas o
sin colores nítidos y contrastantes, cambiar todo
el colorante. Si los colorantes no son de buena
calidad se deberán filtrar diariamente.
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Fig. 6 y 7 2.29 5° Paso. Pasar las laminillas por agua Técnico en tinción
corriente, hasta que el agua se aclare, poste- o citotecnólogo
riormente dejar escurrir la canastilla. capacitado
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Este paso consiste en proporcionar una inter- • Proporcionar una interpretación de resultado ci-
pretación o resultado citológico preliminar, que tológico preliminar, exacto y oportuno, expresada de
distinga entre los frotis inadecuados, insatisfac- acuerdo con la clasificación diagnóstica vigente, utili-
torios, negativos, y los anormales, mediante la zando los antecedentes contenidos en el formato, así
observación al microscopio de las muestras en como, en el archivo de sus laminillas y la información
laminillas ya teñidas y montadas. capturada en el sistema de información en relación
con la solicitud de la misma paciente.
El resultado citológico incluye los siguientes aspectos: • Mantener la identidad de la muestra-solicitud al
a) Validación de la calidad de la muestra. momento de registrar el resultado citológico en la so-
b) Detección de cambios premalignos. licitud respectiva, y responsabilizarse del resultado o
c) Detección de malignidad. interpretación preliminar del laboratorio.
• Retroalimentar sobre la calidad de la toma de la
Si deseamos que este paso finalice de manera exitosa muestra a las unidades médicas, para mejorar el pro-
habrán de considerarse los siguientes aspectos: cesamiento de la laminilla en el laboratorio.
Área
La observación de muestras citológicas se realizará en binocular con oculares 10X de campo amplio y
un área idealmente estructurada en forma modular, objetivos de 4x, 10x 40x y 100 x para apoyar la
aislada con paneles, con una superficie de trabajo de educación continua.
60 m2 mínima, no reflejante, adecuada para poner y
operar el microscopio, colocar la charola de laminillas El personal necesita lápices para registrar el ci-
y poder registrar en los formatos de solicitud y resul- todiagnóstico en la solicitud y lápices de tinta
tado. Esta área debe contar con buena iluminación indeleble para puntear las laminillas positivas o
natural y adecuada ventilación. sospechosas.
Es deseable que los citotecnólogos y citopatólogos Es ideal contar con 5 a 8 citotecnólogos por un ci-
cuenten con un microscopio de co-observación topatólogo o patólogo.
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Para dar una interpretación o resultado definitivo será ser reobservadas por el patólogo o citopatólogo que
necesario observar una o más veces un conjunto de es el responsable del resultado definitivo.
laminillas que ya tienen un resultado prelimar y dar
un resultado definitivo. El objetivo de este paso es Un grupo de laminillas correspondientes a pacientes
reducir el error de la interpretación o resultado. con factores de riesgo para cáncer cervical de acuer-
do con los antecedentes especificados en la solicitud
Para lo cual es importante hacer las consideraciones del examen y/o la historia citológica previa, es conve-
siguientes: niente que sean observadas nuevamente.
• ¿Cuántas laminillas actuales del total se vuel-
ven a observar? Este paso del proceso será exitoso si:
• ¿Cuáles de estas laminillas se observan de nuevo?
• ¿Cuáles de estos casos se someten a reobservación • Se mantiene la identidad de la muestra–solicitud, al
de sus laminillas antiguas? registrar la interpretación o resultado definitivo en la
• ¿Cuántas veces se reobserva una laminilla? solicitud respectiva y se identifica el responsable del
• ¿Con qué metodología se reobserva? resultado en la solicitud.
• Se produce un citoresultado definitivo correcto,
Actualmente no es posible conocer el efecto de las oportuno, usando los antecedentes y la historia ci-
distintas combinaciones que realiza el evaluador; en tológica previa de la paciente
este caso, el patólogo o citópatólogo, sin embargo, • Se comunica a los citotecnólogos las discre-
las guías citológicas elaboradas por expertos coinci- pancias encontradas entre la interpretación o
den en señalar que: resultado preliminar y el definitivo, y se realiza
una revisión conjunta o retroalimentación para
Todas las laminillas con interpretación o resultado mejorar las habilidades diagnósticas de los cito-
preliminar positivo (premalignas o malignas) deben tecnólogos.
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Glosario de Terminos
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Bibliografía
Takahashi. Atlas, Color Citología del Cáncer, Takahashi. 2ª. Edición 1982/1985. Buenos Aires, Argentina:
Ed. Panamericana.
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Anexo
Procesos del Laboratorio de
Citología Cérvico Uterina
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Imagen 1
Fig. 1
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Tren de Tinción
0.5° de ácido
clohídrico
+
96° Alcohol etílico Agua corriente Agua destilada Hematoxilina Agua corriente 96° Alcohol etílico
96° Alcohol etílico EA-50 96° Alcohol etílico 100° Alcohol etílico
Fig. 2
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Procedimiento
Fig. 3
Fig. 4
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Fig. 6 Fig. 7
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Fraccionamiento
Fig. 7
Fig. 8 Fig. 9
Fig. 10
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A continuación
Fig. 11
El (pH) de la Hematoxilina y la tinción
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Fig. 13
Fig. 14
Fig. 15
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Fig. 17
Fig. 18
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Fig. 19
Fig. 20
Fig. 21 Fig. 22
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Alcohol 96°
Fig. 23
Fig. 24
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Fig. 25
Xileno Xileno
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Montaje de Laminillas
Secar la parte posterior a la muestra para proce-
der con el montaje.
Fig. 26
Imagen 2 Fig. 27
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Fig. 28
Fig. 29
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