Miosina y Citoesqueleto

Dr. Alejandro Claude

d e
lau
Instituto de Bioquímica
UACH

. C
e s o rA
Pr of
Las miosinas son
una familia de Myosin II
proteínas motrices heavy
que se desplazan a chain
motor
lo largo de hebras α-helical domains
de actina al coiled coil light
chains
hidrolizar ATP.

Miosina II posee 2 cadenas pesadas, cada una con un dominio

motriz globular que poseen sitios de unión para ATP y actina.
El resto de las cadenas pesadas forman una cadena lineal α-
hélice del tipo “coiled coil”.
Dos cadenas livianas se asocian en la región de cuello de cada
cadena pesada.Ejemplos de cadenas livianas incluyen
calmodulina o proteínas similares que dan rigidez a la región
de cuello.

1
 Otros tipos de
miosina: Myosin II
heavy
Miosina I solo chain
motor
tiene una cadena α-helical domains
coiled coil light
pesada, con una chains
cola corta & 2 o
single
más cadenas motor
livianas en el Myosin I domain
cuello.
Miosina V tiene 2 cadenas pesadas como miosina II, y
cadenas livianas de calmodulina en el cuello. Pero
miosina V tiene una región coiled-coil corta, seguida por
un dominio globular al final de cada cadena pesada.

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lau
Las colas de las miosinas I & V unen membranas.

. C
e s o rA
Pr of (+) actin (−)
myosin

(−) actin (+)

Las regiones coiled-coil de miosina II pueden unirse para

formar complejos bipolares antiparalelos. Estos pueden
contener desde 2 hasta múltiples moléculas de miosina,
como en los músculos esqueletales.
El movimiento ATP-dependiente de las cabezas de
miosina sobre filamentos de actina requiere hidrólisis de
ATP.
Esto resulta en un acercamiento de los filamentos de
actina, mientras que los complejos bipolares de miosina
“caminan” hacia los extremos (+) de actina antiparalela.

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 Solo las cabezas de miosina son necesarias para el
movimiento sobre actina. Esto de comprobó por
microscopía fluorescente.
Cabezas de miosina, obtenidas por proteólisis, fueron
purificadas y fijadas en portaobjetos de vidrio.
Filamentos de actina, marcados con rodamina-faloidina,
fueron observados al desplazarse sobre las cadenas de
miosina. Este movimiento requiere la hidrólisis de
ATP.

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Pr of
Las cabezas de miosina II interactúan con filamentos de
actina mediante el siguiente ciclo de reacción:
! La unión del ATP a la miosina causa un cambio
conformacional que permite a la miosina despegarse
de la actina.
! El sitio activo se cierra y la hidrólisis del ATP
resultante permite a la miosina cambiar de
conformación y unir débilmente a la actina.
! La liberación del Pi causa un cambio conformacional
mayor en la miosina, con mayor afinidad por la actina
y el desplazamiento neto del filamento por sobre la
cabeza de miosina.
! La liberación del ADP deja a la actina fuertemente
unida a actina. En la ausencia de ATP esto resulta en
rigidez muscular conocida como rigor.

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 El movimiento de la miosina V sobre filamentos
de actina es procesivo, consistente con el rçpapel
de esta miosina en transportar organelos a lo largo
de filamentos de actina.
Las cabezas de miosina V trabajan en forma
sincronizada, y solo se despegan de actina cuando
la otra cabeza se ha unido a otro filamento de
actina

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Pr of
El ATP se une a la cabeza de
PDB1B7T

miosina adyacente a una hoja

β-plegada de 7 segmentos.
Asas que se extienden desde la
hoja β interactúan con los
nucleótidos de adenina. Mg++-ADP

Similaridades en la estructura del sitio de unión a

nucleótidos en miosinas y miembros de la superfamilia de
Ras, sugieren que ambas familias de proteínas están
relacionadas. La homología de secuencias es modesta, pero
las similitudes estructurales sugieren la existencia de un
ancestro común.

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 El sitio de unión a Myosin
head & neck
nucleótidos está adyacente a PDB 1B7T

un surco profundo que

bisecta el dominio de unión
a actina.
Se ha propuesto que la
apertura y cierre del surco
causa el movimiento de la
cabeza de miosina con
respecto a la región del cuello.

Este movimiento es causado por la ocupación de distintas

moléculas en el sitio activo, y produce el desplazamiento
y cambios en la afinidad por actina.
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Pr of Myosin
head & neck
PDB 2MYS
Myosin
head & neck
PDB 1B7T

Confirmando las predicciones del ciclo conformacional,

distintas formas de miosina han sido cristalizadas. La hoja
β adyacente al sitio de unión a ATP está en magenta; las
cadenas livianas en verde y rojo.

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 Ca++ regula la interacción actina-miosina de varios
modos, en distintos tejidos y organismos:
! Algunas miosinas están reguladas por unión de Ca++
a las cadenas livianas de calmodulina en la región del
cuello
! Algunas miosinas están reguladas por fosforilación
de las cadenas livianas, catalizada por quinasas
dependientes de Ca++ o una quinasa activada por
GTPasas pequeñas.
! El complejo de tropomiosina-troponina (similar a
calmodulina) regula la interacción actina-miosina en
el músculo esqueletal.
! Caldesmon, una proteína regulada por fosforilación y

e
Ca++, controla la interacción actina-miosina en el
músculo liso.

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. C
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Pr of
La estructura del
sarcómero
(+) actin (−)
muscular se basa myosin
en esta organización
de miosina-actina. (−) actin (+)

En células no musculares, miosina II (muscular) se encuentra asociada

con paquetes de fibras de actina. Se ha postulado que existen asociados
en forma de sarcómeros bipolares pequeños. Miosina II se encuentra
en:
! Fibras de estrés, paquetes de fibras de actina asociadas a la
membrana plasmática y se contraen bajo ciertas condiciones.
! Fajas de filamentos de actina, que rodean la células epiteliales y
están asociadas con focos de adhesión.
! Anillo contráctil de citoquinesis.
! Malla cortical de filamentos de actina, inmediatamente debajo de
la membrana plasmática.

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 Miosinas I & V, que se unen a membranas,
supuestamente participan en:
! movimiento de organelos sobre fibras de actina,
especialmente en la corteza celular.
! movimientos de la membrana plasmática relativos a
filamentos de actina.
Miosinas I & V están asociadas con membranas del
Golgi, que produce vesículas secretorias y vesículas
sinápticas.
! En levadura, mutaciones del gen de miosina V altera
la secreción de proteínas.
! La células cerebrales son ricas en miosina V.
Mutaciones en miosina V en ratones producen
defectos en la transmisión sináptica.
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Pr of
! Las microvellosidades del epitelio intestinal
contienen paquetes de filamentos de actina, que
proveen rigidez.
Miosina I, asociada a la membrana plasmática
puede estar involucrada en arrastrar la membrana
sobre los filamentos de actina, ya que estos crecen
por adición de monómeros de actina por la punta.
! Una proteína similar a miosina está involucrada en
la circulación del citoplasma alrededor de la
vacuola central en en alga Nitella. Filamentos de
actina se encuentran en esta zona.

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 Movimiento ameboide: Leading edge of an ameboid cell
El extremo delantero de una
célula en movimiento es el − myosin I +
lamelipodio.
La extensión del lamelipodio Arp2/3
es generada por
polimerización de la actina. actin-ADP
Los lamelipodios contienen
una red de filamentos de actin-ATP
actina bifurcados.
Sus extremos positivos están orientados hacia la membrana
plasmática. Múltiples proteínas participan junto con actina
en el avance de los lamelipodios.

e
Su presencia ha sido demostrada por marcación fluorescente

d
lau
en el extremo de los lamelipodios.

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Pr of Leading edge of an ameboid cell
Profilina, que facilita el
intercambio ADP/ATP por − myosin I +
actina-G, para producir la
forma ATP polimerizable,
Arp2/3
se localiza en el extremo
de ataque en un célula que actin-ADP
avanza.
actin-ATP

Arp2/3, que se une a los costados de actina y nuclea el

crecimiento de nuevos filamentos, también está asociada a
filamentos de actina en lamelipodios.

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 Various proteínas Leading edge of an ameboid cell
involucradas en cross-
linking de actina − myosin I +
estabilizan estos filamentos
en lamelipodios. Arp2/3
Marcación por pulso y caza
actin-ADP
ha demostrado que estos
filamentos de actina son actin-ATP
estables mientras que el
lamelipodio que avanza pasa mas allá de estos, para luego
desmantelarse después del avance del borde de la célula.
Miosina I, que se une a la membrana plasmática, tira de la
membrana mientras que avanza hacia el extremo positivo de
los filamentos de actina crecientes.
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. C lau
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Pr of
Cofilina participa en la depolimerización de los filamentos
de actina detrás del borde de avance del lamelipodio.

Gelsolina también ha sido postulada en el

desmantelamiento de estos microfilamentos.

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 Señalización en el movimiento ameboide:
Proteínas de la familia de Rho que unen GTP, en particular
Rac1 & Cdc42, activan WASP, que a su vez activa Arp2/3
para nuclear polimerización de actina en el borde de avance.
La hidrólisis de PIP2 por fosfolipasa C (activada por una
cascada de señalización), resulta en el aumento local de
profilina, cofilina, gelsolina y Ca++ (debido a la producción de
IP3).
Indicadores fluorescentes de Ca++ libre han indicado que:
! [Ca++] citosólico es máxima detrás de una célula que
avanza, donde puede activar la interacciones entre actina y
miosina II.
! [Ca++] citosólico es relativamente baja en el extremo que
avanza, donde el movimiento ocurre principalmente por
ensamblaje de filamentos de actina.
d e
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e s o rA
Pr of
Resumen del movimiento ameboide.

Ameboid movement

Tail region contracts. Actin-ATP polymerization at leading edge

• Ca -activated
++ pushes cell forward.
actin/myosin II • Arp2/3 nucleates actin polymerization.
interaction. • Profilin, released as PIP2 is hydrolyzed,
promotes G-actin having bound ATP.
• Myosin I bound to plasma membrane walks
along F-actin, pulling membrane forward.
• Behind the leading edge, cofilin promotes
actin-ADP dissociation from filaments.

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