Harold S. Morales M. ; 2​ ​Jennifer L. Hernández R.

; 3​ Jonathan
1​ ​
D.
Valbuena D.
Código: ​ 20161150026 ; 2​ ​20152150036 ; 3​ ​20161150016
1​

Universidad Distrital Francisco José de Caldas, Facultad de Ciencias y Educación,

Proyecto Curricular Licenciatura en Química,
Bioquímica
Docente: Harold Salamanca.

RESUMEN: ​En esta práctica se realizó la extracción o aislamiento de glucógeno en tejidos

de músculo e hígado animal mediante el método de hidrólisis ácida e hidrólisis básica, la cual
se trató con TCA para precipitar proteínas y ácidos nucléicos en la mezcla y también etanol
con el fin de precipitar polisacáridos (glucógeno) y eliminar monosacáridos solubles.
Posteriormente se realizó la cuantificación por espectroscopia UV y también por relación de
pesos calculando el rendimiento final de la extracción. Como resultados se obtuvieron que
para las muestras de músculo e hígado en hidrólisis ácida existió mayor porcentaje de error
de acuerdo a los valores estándares de glucógeno en estos tejidos reportados por la literatura,
lo contrario arrojó la hidrólisis básica que dió un porcentaje de error bastante menor respecto
a este.

ABSTRACT​: ​In this practice the extraction or isolation of glycogen was performed in
animal muscle and liver tissues by the method of acid hydrolysis and basic hydrolysis, which
was treated with TCA to precipitate proteins and nucleic acids in the mixture and also ethanol
in order to precipitate polysaccharides (glycogen) and eliminate soluble monosaccharides.
Subsequently, quantification was performed by UV spectroscopy and also by weight ratio,
calculating the final yield of the extraction. As results were obtained that for the samples of
muscle and liver in acid hydrolysis there was a greater percentage of error according to the
standard values ​of glycogen in these tissues reported by the literature, the opposite was the
basic hydrolysis that gave a much lower percentage of error regarding this.

PALABRAS CLAVE: Hidrólisis ácida, hidrólisis básica, glucógeno, extracción,

espectroscopia UV

KEYWORDS: ​Acid hydrolysis, basic hydrolysis, glycogen, extraction, UV spectroscopy

INTRODUCCIÓN:
El glucógeno es la forma de tejidos animales. Se encuentra
almacenamiento de la glucosa en los principalmente en el hígado y en el
músculo representando aproximadamente
un 10% y un 1-2% en peso húmedo,
respectivamente. Está formado por
unidades de glucosa unidas por enlaces
α(1-4) y ramificaciones α(1-6).
Imagen 1: estructura del glucógeno.
Tabla 1. diferencias entre almidón y glucógeno.
Glucógeno Almidón
Gracias a la capacidad de almacenamiento
de glucógeno, se reducen al máximo los
cambios de presión que la glucosa libre
podría ocasionar tanto en el interior de la
célula como en el medio extracelular.
Cuando el organismo o la célula requieren
de un aporte energético de emergencia,
como en los casos de tensión o alerta, el
glucógeno se degrada nuevamente a
glucosa, que queda disponible para el
metabolismo energética
Diferencias
El ​almidón es la reserva
nutricional de las plantas.
Existen dos formas de
almidón: la ​amilosa o
almidón no ramificado q​ ue
consiste en una serie de
residuos de glucosa unidos
mediante enlaces 1,4 y la
amilopectina o ​forma
ramificada del almidón que
tiene un enlace 1,6 cada
treinta enlaces, de modo
que es semejante al
glucógeno, pero mucho
menos ramificada.
Mecanismo de acción del lugol para
producir colores característicos:
Reacción del glucógeno en degradación.
Imagen 1. Degradación del glucógeno.
El glucógeno se libera de los tejidos que lo
contienen por calentamiento con una base
RESULTADOS.
Tabla 2. Resultados e interpolaciones.
fuerte (KOH) hasta la destrucción total del
tejido.
La separación del glucógeno del tejido se
consigue mediante la adición de etanol
(precipita polisacáridos y elimina los
monosacáridos solubles) y sulfato de sodio
(coprecipitante). Así, se produce un
precipitado que contiene una mezcla de
glucógeno, proteínas y ácidos nucleicos,
que han resistido el calentamiento anterior.
El tratamiento con antrona (que contiene
(H2SO4) es un método rápido para la
determinación de hexosas y alopentosas
constituyentes de un polisacárido.
Mediante este método, el glucógeno es
hidrolizado por un ácido (H2SO4) hasta
sus unidades elementales (monosacáridos),
que pueden ser luego deshidratadas dando
furfural, y éste último, reacciona con la
antrona y se forma un producto coloreado
(azul-verdoso) con un máximo de
absorbancia a 620 nm. El valor resultante
se compara con los obtenidos al preparar
una recta estándar con glucosa pura,
usando el mismo método.
Gráficas:
Gráfica 1. Datos de muestras de músculo e hígado interpolados dentro de la grafica.

Gráfica 2. Corrección por mínimos cuadrados de los datos.

Se puede identificar que los datos obtenido si se lograron interpolar dentro de la gráfica, sin
embargo, la concentración de hígado en medio básico arrojó un dato de 12, 44 esta se
encuentra fuera de los datos de la gráfica, al interpolar se logró poner este punto dentro de la
línea de tendencia.
CÁLCULOS:

Concentración de glucógeno:
● Hidrólisis Ácida:
M úsculo→117.14 mg (tubo con muestra) − 109.15mg (tubo sin muestra) = 7.99mg/3 = 2, 66mg

H ígado→117.14mg (tubo con muestra) − 108.44mg (tubo sin muestra) = 8.7mg/3 = 2.9mg
Porcentaje de rendimiento:

● Hidrólisis Básica:

M úsculo→974 mg (tubo con muestra) − 970 mg (tubo sin muestra) = 4 mg/3 = 1.33mg

H ígado→989 mg (tubo con muestra) − 972mg (tubo sin muestra) = 17mg/3 = 5.66 mg

Porcentaje de rendimiento

● Porcentaje de error:
- Hidrólisis ácida:

- Hidrólisis básica:
ANÁLISIS DE RESULTADOS
De acuerdo a la práctica en la primera
parte referente a la extracción de
glucógeno, se tiene que este es un punto de
partida fundamental para la comprobación
cuantitativa en la segunda parte de la
práctica, esto puesto que específicamente
para la cuantificación de glucógeno por
hidrólisis ácida para tejidos de músculo e
hígado, existió un porcentaje de error
bastante alto; por lo cual se debe tener en
cuenta que en la extracción, por diferentes
razones no se realizó el almacenamiento
de la muestra respectiva en tubos estériles,
por lo cual se puede tomar como una
posible hipótesis que la pérdida excesiva
de glucógeno en estos tejidos puede
haberse debido a la presencia de agentes
bacterianos, que, en presencia de humedad
pueden degradar el glucógeno presente en
la muestra.
Además de esto, en rasgos generales
también es importante tener en cuenta que
el porcentaje de glucógeno teórico en
músculo e hígado va directamente
relacionado con las condiciones
metabólicas del animal y las características
de este, puesto que existen enfermedades
referentes al almacenamiento de
glucógeno, la cual corresponde a una
deficiencia de glucógeno sintasa hepática,
la cual evidentemente afecta el porcentaje
de glucógeno en el hígado.
Una vez que el tejido ha sido sometido a
digestión con KOH y precipitación con
etanol, el glucógeno es determinado
espectrofotométricamente mediante la
reacción con antrona. La antrona es un
derivado fenólico que forma complejo
coloreado con todos los carbohidratos,
excepto alditoles y aminoazúcares. La
reacción de los glúcidos con antrona es
muy sensible y tiene como fundamento la
conversión en medio ácido de los
carbohidratos en derivados furfúricos, los
cuales reaccionan con la antrona
produciendo un color azul verdoso. [2]
Imagen 2. Formación de
5-hidroximetilfurfural a partir de glucosa
en medio ácido y su reacción con la
antrona.
La determinación de glucógeno no solo se
puede realizar por un método sino también
por diferentes método, bien sea
colorimétricos, entre otros que permiten la
identificación del mismo.
CONCLUSIONES
El glucógeno se puede identificar en
mayor parte en la solución básica que en la
solución ácida debido a que al ser menor la
cantidad esto permite que se reduzca el
error.
El rendimiento en las prueba básica del
hígado con un dato de 12,04 % la cual fue
en la que se obtuvo mayor rendimiento
debido a que hubo una mayor cantidad de
precipitado en el tubo.
Bibliografías:
Hernández, Marta y col. Manual de
Prácticas de Laboratorio. Cuba, 1988.