UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERÍA

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

INFORME FINAL DEL EXPERIMENTO

TÍTULO:

INGENIERÍA DEL CULTIVO CELULAR POR LOTES EMPLEANDO UNA

CEPA DE Pichia stipitis NRRL Y-7124 PARA LA PRODUCCIÓN DE ETANOL
USANDO XILOSA COMO FUENTE DE CARBONO

ALUMNOS:
Arroyo Lozano, Junior Yorkei

Huincho Aquiño, Sonia Marisol

Luera Dominguez, Royder Santos

Urrutia Vega, Elizabeth Nataly

Vásquez Villacorta, Nelly Sofía

GRUPO: C-1

CURSO: Laboratorio de Ingeniería de Bioprocesos

DOCENTE: Ing. Augusto Castillo Calderón

NUEVO CHIMBOTE – PERÚ

2017
ÍNDICE
 INGENIERÍA DEL CULTIVO CELULAR POR LOTES
EMPLEANDO UNA CEPA DE Pichia stipitis NRRL Y-7124
PARA LA PRODUCCIÓN DE ETANOL USANDO XILOSA
COMO FUENTE DE CARBONO

RESUMEN

Se estudió el cultivo celular por lotes en matraces, empleándose una cepa de Pichia
stipitis NRRL Y-7124, donde se evaluó el efecto de la xilosa como fuente de carbono y
la velocidad de agitación en la cinética de crecimiento microbiano y en la producción de
etanol. Se inició diseñando y preparando los medios de activación y fermentación, en el
cual se tuvo todos los nutrientes que la cepa requería para su óptimo crecimiento. Luego
de obtener la cinética de crecimiento de Pichia stipitis NRRL Y-7124 (matraz de 500 ml
con 40% de medio y 12 h en el Shaker con toma de muestras a cada hora) se observó la
disminución del sustrato (xilosa) en las primeras “X” horas ya que la concentración de
sustrato inicial fue 4.65 g/L y a la hora “X” la concentración fue “Y”. Esto fue posible de
determinarse haciéndose curvas de calibrado para los métodos de Densidad Óptica
(mediante lecturas de absorbancia a 640 nm en el Espectrofotómetro) para el caso de
determinación de biomasa y método del DNS (lecturas de absorbancia a 540 nm) para el
caso de determinación de sustrato. Finalmente se usó el G. C. para la determinación de
etanol en las muestras medio de fermentación.
INTRODUCCIÓN

La bioconversión de la xilosa es un paso importante en el uso de materiales

lignocelulósicos para la producción de etanol. Pichia stipitis es una cepa de levadura
prometedora para aplicaciones industriales en la producción de etanol debido a su
capacidad para convertir rápidamente xilosa en etanol, con alto rendimiento [3-5].
La importancia de P. stipitis a nivel industrial proviene de su capacidad para fermentar
xilosa y obtener buenos rendimientos de producción de etanol.
Como es bien sabido, la eficacia de un proceso de fermentación se ve afectada por la
composición del medio de cultivo y las condiciones operativas utilizadas. Diferentes
cepas de levadura requieren diferentes fuentes y cantidades de nutrientes para convertir
eficientemente los azúcares en el producto de interés. Es posible que se requieran
nutrientes específicos como nitrógeno, oligoelementos o vitaminas para obtener una
fermentación rápida y altos niveles de etanol, lo que es conveniente para minimizar los
costos de capital y la energía de destilación [7].
1. Pichia stipitis:
En este trabajo se ha utilizado el microorganismo Pichia stipitis, también llamado
Scheffersomyces stipitis, debido a que, según la bibliografía revisada, puede
fermentar glucosa y xilosa con buenos rendimientos de etanol lo que supone una
mejora en la eficiencia del proceso de fermentación al aprovechar todos los
azúcares presentes en los hidrolizados de biomasa lignocelulósica. La figura 1
muestra la ruta metabólica de obtención de etanol característica de la levadura P.
stipitis a partir de glucosa y xilosa.

Figura 1. Ruta metabólica de la levadura Pichia stipitis a partir de glucosa y xilosa

(Fuente: Winkelhausen et al., 1998.)

El hongo P. stipitis es una levadura del género Schefferomyces. Al igual que la

mayoría de los miembros del orden de los Saccharomycetales, P. stipitis tiene un
tamaño de 3 a 5 µm de diámetro. Su forma habitual es esférica o elipsoidal, aunque
puede haber desviaciones y formar pseudomicelios. Un hábitat adecuado para P.
stipitis incluye áreas húmedas ricas en biomasa orgánica, así, bosques de madera
dura o zonas con alto contenido en residuos agrícolas son ambientes comunes.
 El crecimiento de esta levadura se produce en un rango de temperatura entre 25ºC
y 37ºC y pH entre 5‐6, siendo su temperatura óptima alrededor de 30ºC.
Temperaturas superiores a 40ºC no permiten desarrollar su crecimiento (Jeffries
et al., 2007).
P. stipitis es una levadura facultativa, crece rápidamente en condiciones aerobias
y puede fermentar glucosa y xilosa tanto en presencia como en ausencia de
oxígeno. Sin embargo, para estimular la producción de etanol a partir de xilosa es
necesario establecer condiciones limitantes de oxígeno (Fiaux et al., 2003,
Klinner et al., 2005). La cantidad de oxígeno presente en el medio es un factor
crucial en el proceso de fermentación alcohólica mediante P. stipitis, debido a que
es la clave que determina el balance entre crecimiento y formación de productos
(Du Preez, 1994). La cantidad de oxígeno presente determina el mantenimiento
de la viabilidad celular y el balance NADH (Agbogbo et al., 2007).

2. Xilosa.
3. .
4. .
5. .

𝑂
3C5 H10 O5 + 𝑃𝑖𝑐ℎ𝑖𝑎 𝑠𝑡𝑖𝑝𝑖𝑡𝑖𝑠 → 5C2 H5 OH + 5CO2
Etanol
MATERIALES Y MÉTODOS
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ANEXOS