PROCEDIMIENTOS:

Teniendo ya los medios de cultivo ya listas, debidamente preparadas por profesionales

de laboratorio: caldo nutritivo y agar sabouraud en tubos, ambas debidamente rotuladas.

El muestreo se realizará de forma cuidadosa y rápida con ayuda de un hisopo estéril

aplicando la técnica de hisopado.

 Pasar el hisopo estéril sobre las superficies dentales específicas, para luego

llevar al tubo de caldo nutritivo y agitar el hisopo en ella.

 Nuevamente pasar las superficies dentales indicadas con el hisopo estéril,

luego llevar al tubo de agar sabouraud pasar en sicsag, retirar el hisopo y rotular

bien el tubo

 finalmente llevar al tubo de caldo nutritivo dejarlo, luego rotular con todo el

hisopo dentro. Seguir el mismo procedimiento para cada muestra necesaria.

Rotular bien los tubos para evitar la contaminación, enseguida llevar al

laboratorio para la incubación.

 Para la inoculación de la muestra al medio de cultivo se realizará en laboratorio

“VAROS.
SE PROCEDERA DE LA SIGUIENTE MANERA:

1. Se localizará las diferentes unidades dentales donde se va a realizar la toma de

muestra.

2. Se tomarán las muestras respectivas de las diferentes superficies de las

unidades dentales con la técnica ya mencionada anteriormente.

Superficie
escupidera
 Superficie
Lámpara

Superficie Superficie
Bandeja de Jeringa
trabajo triple
3. Posterior a eso se llevará al laboratorio “VAROS” para la incubación de

microorganismos.

 La incubación de muestras en agar sabouraud será por 15 días a

temperatura de 25 C°, evaluará cada 4 días si hay crecimiento o no, este

medio nos sirve para descartar presencia de hongos.

 La incubación de muestras en caldo nutritivo será de 24 horas a

temperatura de 37C°. Este medio de cultivo nos sirve para evaluar el

crecimiento bacteriano por turbiedad, para luego subcultivar en medios

sólidos para la realización de identificación bioquímica.

CALDO NUTRITIVO AGAR SABOURAUD

4. Con la ayuda de los profesionales se procederá la preparación de los diferentes

tipos de medios para la realización de subcultivos, siguiendo las indicaciones

correspondientes:

a. Se empezará primeramente a esterilizar las placas petri y tubos

necesarios para el procedimiento a calor seco 180 c° por 1 hora.

a) Se seleccionará distintos tipos de agar.

Agar
Agar base manitol Agar Mac
salado Conkey

b) Luego se procedió a pesar agar, medir agua destilada respetando su

dosificación e indicación para luego homogenizar las sustancias

enseguida autoclavar.
AGAR BASE

Se requirió 16gm de agar base y

180ml de agua destilada, divididos

entre 2 matraces iguales

cantidades, homogenizar bien para

luego autoclavar.

AGAR SANGRE

Agregar a la preparación de agar

base 10ml de sangre a cada matraz,

homogenizar para luego plaquear.

Nos sirve para el crecimiento de

numerosos microorganismos.

AGAR MANITOL SALADO

Se requirió 33.3mg de agar y

300ml de agua destilada divididos

entre 2 matraz. Se homogenizó

para luego autoclavarlos.

Se utiliza para diferenciar cocos

gram positivos.
 AGAR MAC CONKEY

Se requerirá 15gm de agar y 300ml

de agua destilada, homogenizar

bien. Este medio nos servirá para

ver crecimiento de bacilos gram

negativos.

c) Después se realizará el autoclavado durante 30 min. hasta llegar a una

temperatura 121C°.
d) Proceso de plaqueado, dosificación y codificación.

e) Proceso de siembra. Después de evaluar la turbiedad positiva en el caldo

nutritivo se volverá a subcultivar en diferentes agar de acuerdo al tipo de

microorganismos.

 Incubación de agar sangre será a 37c° por 48 horas, utilizado para

el crecimiento de numerosos microorganismos.

 Incubación de agar manitol salado será a 37c° por 24 horas,

utilizado para aislamiento y diferenciación de cocos gram

positivos,estafilococos a partir de diversas muestras específicas.

 Incubación de agar MacConkey será a 37c° por 48 horas,

utilizado como medio diferencial y selectivo para el aislamiento

de bacilos Gram negativos, fermentadores o no de lactosa, de la

familia de las Enterobacteriaceas.

f) Diferenciación bioquímica.

Una vez que salieron positivas las incubaciones, se realizara la

diferenciación bioquímica. Se empezará autoclavar los agars citrato, Tsi,

Lia, Sim y Urea por 30 min a 121c° para luego distribuir en los tubos de

ensayo de acuerdo a su dosificación indicada. Luego se subcultivará

por 24 horas, además se realizará la prueba de coagulasa para diferenciar

el tipo de stafilococus.
g) Después se recogerán estas placas y se llevara el conteo mediante el

contador de colonias.

h) Colocación gram

Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las

bacterias gram positivas y al término de protocolo, las gram negativas y

hongos. Se utilizara las

i) Observación en el microscopio.