UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER

Facultad de Ciencias -Escuela de Biología

Laboratorio de Biomoléculas (25367)
Semestre II-2018

Práctica No.4. Carácter anfótero y punto isoeléctrico.

Hernan Felipe Suarez Afanador – 2180975
Angelica Serrano – 2162349

Fecha de la elaboración de la práctica: 2018-09-26.

Fecha de presentación del informe: 2018-10-03

 Objetivos específicos
 Reconocer por medio de la construcción de un esquema el comportamiento anfóterico de
los aminoácidos, donde se evidencie la tendencia de estado de los grupos ionizables.
 Haciendo uso del esquema que permite evidenciar el comportamiento del pH respecto al
volumen de NaOh adicionado a razón de milicuotas, determinar los Pks respecto a las
curvas en los diferentes resultados dependiendo del aminoácido que se utilizó.
 Realizar un análisis de cargas, que permita identificar los puntos para el cálculo del punto
isoeléctrico.

 Resultados y discusión
RESUMEN
Se realizó un análisis del carácter anfótero que presentan los aminoácidos y se calculó su
determinado punto isoeléctrico, por medio del análisis de las curvas de titulación. Donde son
identificables los puntos de liberación de hidronios (Pks) en el comportamiento en forma de buffer
que presenta la solución amortiguadora que contiene el aminoácido.

Keyword: Carácter anfótero, curvas de titulación, puntos de liberación de hidronios, punto

isoeléctrico.

INTRODUCCION

Los aminoácidos resultan ser la única fuente Ácido-básicas: Comportamiento del

que posee el ser humano para el
aprovechamiento del nitrógeno. Otra de sus
funciones es el de su indispensable papel en
la síntesis de proteínas así como en la
creación de compuestos nitrogenados. Los
aminoácidos son conocidos como moléculas
orgánicas, las cuales forman parte de las
proteínas.
Los aminoácidos poseen tres propiedades
esenciales, las cuales son:
aminoácido cuando se ioniza, es decir,
cuando el aminoácido adquiere cualquiera de
las siguientes dos características,
comportamiento como base o como ácido,
además presenta una carga neta cero.
Ópticas: Los aminoácidos logran desviar el
plano de polarización, en el cual interviene un
rayo de luz que atraviesa la luz polarizada.
Químicas: La descarboxilación afecta al
grupo carboxilo, la desaminación afecta al
grupo amino y también se afecta al grupo R.

ANÁLISIS DE RESULTADOS
GLICINA
Es el aminoácido más pequeño y el único no
quiral de los 20 aminoácidos presentes en la
célula. Su fórmula química es
NH2CH2COOH y su masa es 75,07. La
glicina es un aminoácido no esencial. Otro
nombre (antiguo) de la glicina es glicocola.
Curva de titulación de la glicina
Como podemos observar en la curva los Pk
ALANINA
La alanina es un aminoácido no esencial para
el ser humano pero es de gran importancia.
Existe en dos distintos enantiómeros L-
alanina y D-alanina. La L-alanina es uno de
los 20 aminoácidos más ampliamente usados
en biosíntesis de proteína, detrás de la
leucina, encontrándose en un 7,8 % de las
estructuras primarias, en una muestra de
1.150 proteínas. La D-alanina está en las
paredes celulares bacteriales y en algunos
péptidos antibióticos. Se encuentra tanto en el
interior como en el exterior de las proteínas
globulares.
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de los grupos ionizables presentes en este
aminoácido son:
 α-COOH: 2.4
 α-NH3: 10
Los datos bibliográficos de Pka a 25°C para
la glicina son:
 α-COOH: 2.4
 α-NH3: 9.8
La discordancia en el valor de Pk del teórico
respecto al experimental puede deberse a
temperaturas ambiente.
El carácter anfótero de este aminoácido es
evidenciable en el comportamiento de los
grupos ionizables respecto a la adición de un
volumen determinado de NaOH.
El punto isoeléctrico de la glicina es de 6.2
se encuentra entre los Pks de los dos grupos
ionizables donde se encuentra el zwitterion y
se calcula de la siguiente manera.
6.2
Curva de titulación de la Alanina
Como podemos observar en la curva los Pk
de los grupos ionizables presentes en este
aminoácido son:
 α-COOH: 2.3
 α-NH3: 10
Los datos bibliográficos de Pka a 25°C para
la glicina son:
 α-COOH: 2.3
 α-NH3: 9.9
La discordancia en el valor de Pk del teórico
respecto al experimental puede deberse a

temperaturas ambiente.
El carácter anfótero de este aminoácido es
evidenciable en el comportamiento de los
grupos ionizables respecto a la adición de un
volumen determinado de NaOH.
El punto isoeléctrico de la alanina es de 6.15
HISTIDINA
La histidina (abreviado como His o H) es un
aminoácido esencial en animales (no puede
ser fabricado por su propio organismo y debe
ser ingerido en la dieta), mientras que
bacterias, hongos y plantas pueden
sintetizarlo internamente. Es uno de los 20
aminoácidos que forman parte de las
proteínas codificadas genéticamente.
Curva de titulación de la Histidina
LISINA
La lisina (abreviada Lys o K) es un
aminoácido componente de las proteínas
sintetizadas por los seres vivos. Tiene
carácter hidrófilo, es uno de los 10
aminoácidos esenciales para los seres
humanos, y consecuentemente debe ser
aportado por la dieta. Dada la desigual
distribución de la lisina entre los distintos
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se encuentra entre los Pks de los dos grupos
ionizables donde se encuentra el zwitterion y
se calcula de la siguiente manera.
Como podemos observar en la curva los Pk
de los grupos ionizables presentes en este
aminoácido son:
 α-COOH: 2.0
 α-NH3: 9.4
 α-R: 6.0
Los datos bibliográficos de Pka a 25°C para
la glicina son:
 α-COOH: 1.8
 α-NH3: 9.2
 α-R: 6.0
La discordancia en el valor de Pk del teórico
respecto al experimental puede deberse a
temperaturas ambiente.
El carácter anfótero de este aminoácido es
evidenciable en el comportamiento de los
grupos ionizables respecto a la adición de un
volumen determinado de NaOH.
El punto isoeléctrico de la histidina es de 7.7
se encuentra entre los Pks de los dos grupos
ionizables donde se encuentra el zwitterion y
se calcula de la siguiente manera.
alimentos, algunas dietas, especialmente las
basadas en cereales, pueden ser deficientes en
ella.
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Como podemos observar en las curvas los Pk

de los grupos ionizables presentes en este
aminoácido son:
 α-COOH: 2.1
 α-NH3: 9.1
 α-R: 10.5
Los datos bibliográficos de Pka a 25°C para
la glicina son:
 α-COOH: 2.2
 α-NH3: 9.2
 α-R: 10.8
La discordancia en el valor de Pk del teórico
respecto al experimental puede deberse a
temperaturas ambiente y a errores en el
pHchimetro que generaron la disparidad en
las mediciones pares e impares.
El carácter anfótero de este aminoácido es
evidenciable en el comportamiento de los
grupos ionizables respecto a la adición de un
volumen determinado de NaOH.
El punto isoeléctrico de la lisina es de 9.8 se
encuentra entre los Pks de los dos grupos
ionizables donde se encuentra el zwitterion y
se calcula de la siguiente manera.

Curvas de titulación de la Lisina

Conclusiones

 Debido al comportamiento anfótero de los aminoácidos, estos son capaces de ionizarse,

dependiendo del pH, como un ácido (cuando el pH es básico), como una base (cuando el
pH es ácido) o como un ácido y una base a la vez (cuando el pH es neutro), esto es
evidenciable en el comportamiento del pH en las gráficas anteriormente presentadas.
 Los Pks como puntos límites que indican la liberación de hidronios son identificables
debido a la formación de un buffer por cada grupo ionizable que muestra la tendencia del
comportamiento de la solución amortiguadora a determinado pH.
 Para el cálculo del punto isoeléctrico de la molécula fue necesario identificar el zwitterion
en la curva de cada aminoácido.
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 Bibliografía
1. BIOQUIMICA, Antonio Peña Diaz – página. 66
2. BIOQUIMICA ESTRUCTURAL; conceptos y test 2ª. Ed. – Pagina. 53
3. BIOQUIMICA ; La Ciencia de la vida - Pagina 37
4. QUIMICA ORGANICA: Conceptos y aplicaciones – Pagina 502

 Anexo
Cuestionario de laboratorio
1. Consulte los valores para el pK de los grupos carboxilo y amino correspondientes al
aminoácido L-alanina y L-lisina; y compárelos con los determinados
experimentalmente.
Teórico G. COOH G. NH3 G. Radical G.COOH G. NH3 G. Radical
Experime
L-Alanina 2.3 10 X 2.3 9.9 X

L-Lisina 2.1 9.1 10.5 2.2 9.2 10.8

Esto se puede deber a efecto de condiciones del medio circundante que generan
pequeñas variaciones respecto al teórico, pero en general se comportaron de manera
semejante permitiendo un cálculo adecuado de los puntos isoeléctricos.

2. ¿Pueden comportarse los aminoácidos como un buffer intracelular? ¿Por qué? ¿En
qué rangos de pH? Argumente su respuesta. Tenga en cuenta el rango de valores del
pKa de los grupos carboxilo y amino de los 20 aminoácidos.
Rta.
Sí, porque poseen un ácido orgánico y un grupo amino lo que le da la característica
de comportarse como un buffer intracelular, reaccionando a las variaciones de pH
en la célula en datos anormales a 7.4.
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3. ¿Cómo separaría los aminoácidos R, H, D y E de una mezcla a pH 7?

Rta.
Polipéptido a ser analizados se hidrolizan, primero, por tratamiento con ácido fuerte
a 110° durante 24 horas. Este tratamiento rompe las uniones peptídicas y libera los
aminoácidos individuales.
Los aminoácidos individuales, obtenidos por hidrólisis ácida del polipéptido, se
separan por cromatografía de intercambio iónico. En este método, se siembra una
mezcla de aminoácidos sobre una columna que contiene un intercambiador iónico
insoluble. En las condiciones acidas empleadas, todos los aminoácidos poseen una
carga positiva y quedan unidos a la columna de intercambio que posee una carga
negativa. Cada aminoácido es liberado, secuencialmente, de la columna
cromatográfica mediante elución con soluciones de fuerza iónica y pH crecientes. A
medida que el pH aumenta, los aminoácidos pierden protones, primero de los
carboxilos y, luego, de las cadenas laterales y grupos amino. Al ir perdiendo los
protones, los aminoácidos se vuelven más negativos y se liberan de la resina. Cada
aminoácido eludirá de la columna a un pH y fuerza iónica específicos.