MESA

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
N° 5

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N° 7

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA

MUESTRA POR EL MÉTODO DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN

Integrantes:

1. Anampa García, Estrella Mayté (20151425)

2. Arias Ospina, Jenny Isabel (20151427)

3. Castillo Arispe, Meybi Ani (20151435)

4. Mollyk Montes, Anwar Rael (20151447)

Grupo: A* (martes/11am a 1pm)

Fecha de la práctica: 23 de abril del 2017

Fecha de entrega de informe: 30 de mayo del 2017

2017-I
 INTRODUCCIÓN

La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se

obtiene fundamentalmente a través de la alimentación, para determinar la concentración
de glucosa en sangre existe la técnica de espectrofotometría la cual consiste en una
determinación de las concentraciones de un compuesto en solución.

Muchos compuestos absorben luz en las regiones visibles o ultravioleta del

espectro y esta propiedad puede utilizarse para determinar su concentración. La
capacidad de absorción (absorbencia) de la luz dependerá tanto de tipo de compuesto
como de su concentración y de la longitud de onda de la luz empleada. Por eso se utiliza
luz monocromática, es decir luz con una longitud de onda definida que puede aislarse a
partir de luz blanca por medio de un monocromador. La luz monocromática de
intensidad o pasa a través de un recipiente cuadrangular de vidrio o de cuarzo (cubeta,
celda de medición) que contienen una solución del material absorbente. La intensidad
de luz que sale, atenuada, se mide en un detector. La absorción de una solución (llamada
también extinción) se define como logaritmo negativo del cociente, de acuerdo con la
ley de Lambert-Beer, la A es proporcional a la concentración del material absorbente y
al espesor de la solución. El coeficiente de absorción, depende del tiempo de sustancia y
de la longitud de onda, (Gonzales & Castellanos, 2003).

RESULTADOS

TUBO
S
REACTIVO Blanco T1 T2 T3 T4 Muestra
Estandar de glucos (mL) 0 0,4 0,6 0,8 1 0
Agua destilada (mL) 1 0.6 0,4 0,2 0 0
Muestra (mL) 0 0 0 0 0 1
Reactivo de Somogy (mL) 1 1 1 1 1 1
Colocar en baño maría hirviendo por 10 minutos -
enfriar
Reactivo de Nelson (mL) 1 1 1 1 1 1
Agua destilada c.s.p (mL) 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5
Homogenizar y leer a 540
nm

TUBO Blanco 1 2 3 4 M.P

A 0 0,151 0,213 0,314 0,369 0,022
Concentración (mg
%) 0 3,2 x 10-3 4,8 x 10-3 6,4 x 10-3 8 x 10-3

Para hallar la concentración de cada tubo que contenían diferentes cantidades de

glucosa, fue necesario realizar las siguientes operaciones:

1% = un gramo en 100 ml

Sol stock

1gr → 100 ml

0,01 gr ← 1 ml

Respecto a la solución estándar:

0,01 gr → 100 ml

4 x 10-5 gr ← O,4 ml

Concentración de TUBO 1

4x10-5 gr → 12,5 ml

3,2x10-6 ← 1 ml LUEGO → 3,2 x 10-3 mg/ml

TUBO 2

Sol stock

1gr → 100 ml

0,01 gr ← 1 ml

Respecto a la solución estándar:

0,01 gr → 100 ml

6 x 10-5 gr ← 0,6 ml

Concentración de TUBO 1

6x10-5 gr → 12,5 ml

4,8x10-6 ← 1 ml LUEGO → 4,8 x 10-3 mg/ml

TUBO 3
Sol stock

1gr → 100 ml

0,01 gr ← 1 ml

Respecto a la solución estándar:

0,01 gr → 100 ml

8 x 10-5 gr ← 0,8 ml

Concentración de TUBO 1

8x10-5 gr → 12,5 ml

6,4 x10-6 ← 1 ml LUEGO → 6,4 x 10-3 mg/ml

TUBO 4

Sol stock

1gr → 100 ml

0,01 gr ← 1 ml

Respecto a la solución estándar:

0,01 gr → 100 ml

1 x 10-4 gr ← 1 ml

Concentración de TUBO 1

1x10-4 gr → 12,5 ml

8 x10-6 gr← 1 ml Luego → 8 x 10-3 mg/ml

RESPECTO A LA MUESTRA:
 Con la ecuación de la gráfica mostrada, se calcula que la concentración de la
muestra diluida fue de 4,964 x 10-4 mg/mL

Entonces:

4,964 x 10-4 mg ----------- 1 mL

6,205 x 10-3 mg ----------- 12,5 mL
6,205 x 10-3 mg ----------- 1 mL
0,31025 mg ----------- 50 mL
0,31025 mg ----------- 5mL
3,1025 mg ---------- 50 mL
3,1025 mg ---------- 5 mL
31,025 mg ---------- 50 mL
31,025 mg ---------- 1 mL
7,446 g ---------- 240 mL
3,1025 g ---------- 100 mL
→ 3,1025% de azúcares reductores en la muestra

DISCUSIONES

Según la información nutricional del envase de Cifrut, su contenido en azúcares

totales es de 17 g en 240 mL, lo cual sería un 7,0833%. Esto quiere decir que el 43,8%
de los azúcares del jugo comercial está compuesto por azúcares reductores. Podemos
deducir que el 56,2% restante es sacarosa (azúcar comercial).

La etiqueta nos indica que contiene una mezcla de jugo natural de maracuyá,
piña y granadilla proveniente de concentrado. Según algunos autores, el maracuyá
contiene un 7,1% de azúcares reductores y 2,85% de sacarosa aproximadamente
(García, 2002); la piña, 5% de azúcares reductores y 3,1% de sacarosa (Douillard, 2013)
y la granadilla, 2,42% de azúcares reductores y 1,83% de sacarosa (Picho, 2008).

Como podemos observar, existe un aporte de sacarosa por parte de las frutas, y
podríamos sacar un cálculo (aproximado, pero no exacto) de cuánto de la sacarosa en la
muestra pertenece al azúcar comercial. Suponiendo que la mezcla de jugos naturales de
frutas se halla con igual proporción de cada fruta en el concentrado, entonces diríamos
que si mezclamos 100 ml de cada fruta obtendremos 14,52 g de azúcares reductores. De
este total podemos sacar el aporte porcentual de azúcares reductores por cada fruta. Esto
sería 48,9% proveniente del maracuyá; 34,4% de la piña y 16,7% de la granadilla.

Sabemos que en la muestra hay 3,1025 g de azúcares reductores por cada 100
mL, entonces habría 1,51 g provenientes del maracuyá, 1,07 g de la piña y 0,52 g de la
granadilla. Teniendo en cuenta el porcentaje de sacarosa de cada fruta, podemos deducir
cuánto aportó cada fruta por cada 100 ml.

Aporte del maracuyá:

Aporte de la piña:

Aporte de la granadilla:

Esto nos da un total de 1.66 g por 100 mL, lo cual en 240 mL sería 3,984 g. El
56.2% de los 17 g de azúcar total no eran azúcares reductores (9,554 g). Si restamos la
cantidad de sacarosa del jugo con el aporte de las frutas, llegaríamos a la conclusión de
que el 32.76% de los azúcares totales son sacarosa proveniente del azúcar comercial.
 CONCLUSIONES

➢ Se determinó la concentración de azúcares reductores en la muestra empleando

el Método de Nelson-Somogyi
➢ Se procedió a construir la curva de calibración para poder hallar la concentración
de azúcares reductores en la muestra
➢ Se calculó y usó el factor de calibración promedio para cálculos de
concentraciones en espectrofotometría.
➢ A mayor cantidad de glucosa agregado, se evidencia la mayor cantidad de
absorbancia. Esto significa que existe una relación directamente proporcional
entre la glucosa y la absorbancia.
➢ La cantidad de veces que es enrasada una fiola debe realizarse siguiendo las
pautas, de lo contrario los resultados quedarán alterados, evitando hallar la
correcta absorbancia.

BIBLIOGRAFÍA

● Chiofalo, S. (octubre de 2007). Valoración de azúcares reductores. Obtenido de

http://materialpractico.blogspot.pe/
● Douillard, J. 2013. Can Fruit Make You Fat? Consultado 29 may 2017.
Disponible en https://www.elephantjournal.com/2013/04/can-fruit-make-you-fat/
(Elephant Journal).
● García, MA. 2002. Cultivo de Maracuyá Amarillo. 2002: 30.
● Gónzales, G., & Castellanos, O. (2003). Alternativas de modificación del
método de Somogyi-Nelson para la determinación de azúcares reductores a
partir de sus posibilidades químicas. Revista de Ingeniería de Investigación., 5-
17.
● Picho, BL. 2008. Estudio de las Condiciones Óptimas de Operación para la
Obtención de Jugo Clarificado de Granadilla (Passiflora ligularis) a través de la
Microfiltración Tangencial. Quito, Ecuador, Escuela Politécnica Nacional, 3.
● Remington. (2006). The Science and Practice of Pharmacy
● Vives, J., & Aguilar, J. (2006). Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. Barcelona: Masson.

CUESTIONARIO

1.- ¿En qué momento se realiza la precipitación de las proteínas y por qué?
 Según (Remington, 2006), cualquier factor que modifique la interacción de la
proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la
precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa, la
neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de
hidrógeno facilitará la agregación intermolecular y provocará la precipitación. La
precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado desnaturalización y se dice
entonces que la proteína se encuentra desnaturalizada.

2.- ¿Cuál es el papel del oxalato de amonio?

Empleado según (Vives & Aguilar, 2006) durante mucho tiempo para la
realización del hemograma, es un anticoagulante (sustituido en la actualidad por el
EDTA). Actúa por precipitación del calcio con lo que este último deja de actuar en el
proceso de la coagulación sanguínea.

3.- ¿Cuál es el fundamento del método de Somogy – Nelson? Explique si se produce

una reacción de oxidación o reducción

MÉTODO DE SOMOGY

Cuando se valoran los glúcidos hay una serie de métodos que se basan en la
reducción de un ion metálico, como el método de Nelson-Somogy, resultado apto para
la valoración de azucares reductores. El método se basa en un medio alcalino, los
glúcidos reductores reducen el ion cúprico a cuproso. El agregado de un medio alcalino
en el reactivo favorece la reducción de las sales cúpricas a cuprosas, por la acción
reductoras de los glúcidos.

La parte alcalina del reactivo de Somogy está formada por una serie de sales:
Carbonato de sodio, Bicarbonato de Sodio, Tartrato de Sodio y Potasio, Sulfato de
Sodio anhidro y agua destilada. El agregado de sulfato de sodio tiene por objeto impedir
la re-oxidación de las sales cuprosas formadas por la acción de los glúcidos y también el
medio alcalino favorece la reducción de las sales cúpricas a cuprosas. En el método de
Somogy, la solución contiene cobre (cu+2) que al reaccionar con una mezcla que
contiene glucosa, habrá ocurrido una reacción de oxidación para el cobre, y se formará
un precipitado color marrón rojizo, al ser llevado a baño maría. (Chiofalo, 2007)
 MÉTODO DE NELSON

Está compuesto por Molibdato de Amonio, Arsénico di sódico 7 H2O, ácido

Sulfúrico y agua destilada. Los iones cuprosos, formados por la acción reductora de los
glúcidos, al reaccionar con el reactivo Arsenomolibdato, el Molibdeno hexavalente se
reduce y toma un intenso color azul que es proporcional a la concentración inicial de
azúcar reductor y que se compara en fotocolorímetro con el color que produce un patrón
del mismo azúcar en iguales condiciones de trabajo. (Chiofalo, 2007)

4.- En el método de Folin para la determinación de azúcar en sangre, se

añade a 0,1 mL de sangre, 10 mL de ácido túngstico a fin de eliminar las proteínas.
Una alícuota de 2 mL de filtrado exento de proteínas se coloca en tubos para
producir reacción de color, cuyo volumen final es 25 mL. La intensidad de color se
compara con la que produce 4 mL de estándar de glucosa de concentración 1 mg
%. Al ser procesado con los mismos reactivos, éste estándar produce un color 1,05
veces más intenso que el producido por la sangre filtrada. ¿Cuál es la
concentración de azúcar en ésta muestra de sangre?

M St

Dilución 2 mL -

Sol. Estándar (mL) - 2 mL

Rvo. De color (mL) 23 mL 23 mL

A 1 2,05

Se halla el volumen total de solución diluida

Sol. Azucarada: 0,1 mL

Ác. Tungstico: 10,0 mL

Vol. Total: 10,1 mL

Se halla la concentración del tubo estándar en mg/tubo ó mg/mL.

4 mg → 1 ml
 X mg ← 2 ml x= 8 mg

● cantidad de 8 mg de azúcar está presente en el volumen final del tubo:

2 mg → 25 ml
0.08 mg ← 1 ml

Se halla la concentración del tubo estándar en mg/tubo ó mg/mL

Cm Cst
=
Am Ast

0.08
CM= x1
2,05

CM= 0.04mg/mL

Se halla la concentración de solución no diluida.

0,04 mg → 1 ml
X mg ← 25 ml x= 1 mg

La cantidad de 1 mg de azúcar proviene del 0,1 de 2mL de la solución diluida.

1 mg → 2 ml
Y mg ← 10.1 ml y = 5.05 mg

La cantidad de 5,05 mg de azúcar proviene de 0,3 mL de la solución no diluida.

5,05 mg → 0,1 ml
Z mg ← 1 ml z= 50.5 mg

Hay 50.5 mg/mL de azúcar que todavía queda en la sangre.

1. El coeficiente de extinción molar de una sustancia es de 3257 cm -1mol-1 en una

celda de 1cm y con una longitud de onda de 280nm. ¿Cuál será la concentración
en mg o en g si se obtuvo una absorbancia de 0,215, sabiendo que el peso
molecular es 328?
A= axbxc

● b=1cm
 ● a= 3257 cm-1mol-1
● λ= 280nm
● A= 0,215
0,215= 3257x1xc

c= 6,601x10-5M

Pasándolo a gramos:

6,601 x 10−5 moles 328 gramos g

x = 0,02
1L 1mol L

5. El coeficiente de extinción molar de una sustancia es de 3257 cm -1.mol-1 en una

celda de 1 cm y en una longitud de onda de 280 nm ¿Cuál será la concentración en
mg o en g si se obtuvo una absorbancia de 0.215, sabiendo que el peso molecular es
328?

Solución:

Aplicamos la ley de fotometría para hallar la absorbancia (A)

A = a x b x c.

0.215 = 3257 x 1 cm x c

c = 6.6 x 10-5 mol

Aplicando la ley fotométrica para hallar absorbancia, tenemos:

1 mol --- 328 g

6.6 x 10-5 mol --- x

x = 0.02165 g

x = 21.648 mg