Bioprocesos

Introducción a los Bioprocesos

• ¿Que es un bioproceso?
D Es todo proceso industrial que involucra la manipulaci6n

de organismos vivos o sus componentes celulares para

proveer bienes o servicios
• Bienes: (antibioticos, hormonas, fermentos, vacunas,
acidos organicos, amino acidos, biocombustibles,
biomasa, etc.)
• Servicios (biorremediaci6n, biolixiviaci6n, tratamiento
de efluentes)
Bioprocesos
 Biotransformaciones
Moléculas sencillas

Son los procesos mediante los cuales determinados SUSTRATOS

BIOPROCESO (nutrientes) son transformados por acci6n biologica (microorganismos,
celulas, tejidos) en BIOMASA y diversos PRODUCTOS

Biocatalizador

Glucosa + amonio + sales + oxigeno BIOMASA + PRODUCTOS + calor

Moléculas sencillas Moléculas complejas
Fuentes de carbono y energia, fuente de Antibi6ticos, drogas, vacunas, efluente
Nitr6geno y sales tratado, vitaminas, acidos organicos,
aminoacidos, proteinas, hormonas,
BIOTRANSFORMACIÓN Son los procesos en los que sustratos naturales o sinteticos
son MODIFICADOS por medio de una Actividad Enzimática

Enzimas,
células
inmovilizadas

Sustrato + agua Sustrato modificado

Moléculas complejas Moléculas sencillas

Almidon Glucosa Fructosa

 Caracteristica
Uso de un catalizador biológico:
Enzima, microorganismos, celulas vegetales, celulas
animales, celulas insecto, hongos filamentosos, algas,
plantas y animales
Uso de un Biorreactor: La reacción ocurre en forma
controlada
Artificial

• Generación de un Producto o Servicio

Aspectos básicos: Proceso Biotecnológico

Upstream Processing Process Downstream Processing

Eleccion del reactor. Recuperacion del

Eleccion del
Eleccion del sistema de producto por medio
microorganismo
operacion: Bacth; de operaciones
.(Formulacion).
Alimentado; Sistema unitarias
Continuo; etc. (fisicas/quimicas)
Preparaci6n de medio
Estequeometria y cinetica.
Esterilizacion. Acondicionamiento y
estabilizaci6n del
Preparaci6n del inoculo.
Instrumentacion y control. producto
Formulaci6n del producto
EL MICROORGANISMO PRODUCTOR

Tenemos varias posibilidades

Partir del microorganismo productor wild type

Microorganismos modificados geneticamente

para tal fin.

Recurrir a sistemas de expresion heterologa

MICROORGANISMOS PRODUCTORES WILD TYPE

Ventajas
Generalmente suele ser el mejor productor.
(seleccionado por la naturaleza)
La manipulaci6n genetica es minima o nula, esto
nos ahora tiempo y dinero.
Posibles desventajas
Puede que no cumpla con las normas GRAS
(Generally recognized as safe)
Su utilizaci6n pueden presentar dificultades al
momento del escalado y etapas danwstream. Ej
hongos filamentosos.
MICROORGANISMOS PRODUCTORES WILD TYPE

Ac. orgánicos Alcoholes

MICROORGANISMOS PRODUCTORES WILD TYPE

Antibióticos Enzimas
SISTEMAS DE EXPRESIÓN HETERÓLOGA

Son utilizados para la produccion de proteinas

recombinantes
Ventajas
Sistemas preparados para una finalidad determinada
Amplia variedad de hospedadores
Gran variedad de herramientas moleculares disponibles
(vectores, marcadores de seleccion, etc.)
Desventajas
No siempre el producto final posee las mismas
caracteristicas que el deseado.

Es por eso que debemos poner enfasis en elegir el mejor

sistema de expresi6n para nuestro fin
 SISTEMAS DE EXPRESIÓN HETERÓLOGA

Elección del sistema de expresión:

Productividad (es difícil determinar a priori pero se un buen tip es comenzar

con una búsqueda de bibliografía)
Complejidad estructural
Modificaciones postraduccionales

Bioactividad de la proteina de interes

Manipulaci6n del sistema de expresion
Bioseguridad del sistema de expresion
SISTEMAS DE EXPRESIÓN HETERÓLOGA
 SISTEMAS DE EXPRESIÓN HETERÓLOGA
ESCHERICHIA COLI
• Ventajas
Alta tasa de crecimiento
Amplio conocimiento de su genetica y fisiologia
 Facil manipulacion genetica: gran variedad de vectores y cepas
disponibles, alta eficiencia de transformacion, etc)
 Facil de cultivar
 Bajo costo de cultivo
 Alta acumulaci6n de proteinas recombinantes (30% del total
•
celular).
 Recuperacion relativamente sencilla
Desventajas
 No es GRAS
 Contaminacion con endotoxinas

 Proteinas intracelular con formacion de

cuerpos de inclusion
 No posee modificaciones postranducionales
 SISTEMAS DE EXPRESIÓN HETERÓLOGA

ESCHERICHIA COLI

Desventajas

No todos los genes se expresan eficientemente debido a:

 Caracteristicas de la secuencia nucleotidica del gen endogeno.
 Estabilidad y eficiencia traduccion del RNAm
 Diferencias de uso de determinados codones de
Deficiencia en el folding proteico, capacidad limitada de formacion de
puentes S-S.
Toxicidad de la proteina recombinante
No es GRAS
Contaminacion con endotoxinas
Proteinas intracelular con formacion de cuerpos de inclusion
Generalmente se requiere un refolding de la proteina
No posee modificaciones post-traduccionales
 SISTEMAS DE EXPRESIÓN HETERÓLOGA

Levaduras: (S. cerevisiae,K Lactis y P. Pastoris)

• Ventajas
D Unicelular eucariota, facil crecimiento y manipulacion
D Capacidad para realizar modificaciones postraduccionales
(glicosilacion, acetilacion, fosforilacion, eliminacion del Met-
1, procesamiento proteoli tico de precursores)
D Facilmente escalable
D Bajo o nulo nivel de endo toxinas
D Proteinas extracelulares e intracelulares
• Desventajas
D Baja eficiencia de transformacion
D Hiperglicosilaci6n (S. cerevisiae principalmente)
 CRECIMIENTO MICROBIANO

• En un medio de cultivo apropiado los microorganismos se dividen hasta que

algún nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante)

• Tambien puede detenerse el crecimiento por acumulaci6n de alguna

substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos.
• Hay dos aspectos claramente diferenciables que nos permiten interpretar al
crecimiento microbiano ya sea en un erlenmeyer como en un reactor:

Estequiométrico:
Nos permite conocer la concentraci6n final de microorganismos a
obtener a partir de datos de la composici6n del medio de cultivo,
saber si hay formaci6n de algún producto, etc.

Cinético:
Nos dice con que velocidad se lleva a cabo el proceso.
 CRECIMIENTO MICROBIANO (ESTEQUIOMETRÍA)

Rendimientos
Dada la ecuacion de crecimiento microbiano

S FCE + N FN + B O2 X Biomasa + P Producto + W H2O + C CO2

Para• poder conocer la Estequiometría del proceso es necesario conocer los coeficientes
(S, N, B, X, P, W y C) para ello introduciremos el concepto de:

Rendimiento:

Se define como la cantidad en gramos de producto formado (biomasa, EtOH, CO2,H2O

etc) o reactivos consumidos (FN, Oxigeno), sobre gramos de fuente de carbono y
energía consumida FCE (glucosa, glicerol, etc)

Como seria el rendimiento para el nitrogeno

 CRECIMIENTO MICROBIANO (ESTEQUIOMETRÍA)

El carbono mol (C-mol)

Si deseamos efectuar calculos estequiometricos debemos conocer el rendimiento
en Moles.

Peso de células (o biomasa) corresponde para "un mol":

Experimentalmente se observa la composición elemental promedio de un
microorganismo es en (% p/p): C = 46.5; H = 6.49; 0 = 31.0; N = 10.85
De la cual podemos definir una "formula minima": CH (1.79) O (0.5) N (0.2)
(en la que esta representado el 95% p/p de la biomasa el otro 5% son sales)
Entonces definimos un C-mol de biomasa como la cantidad de biomasa que
contiene un atomo gramo de Carbono.

12 + 1.79 + (16 (0.5 + (14 (0.2

1 𝐶 − 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 = = 25.8
0.95
 CRECIMIENTO MICROBIANO (ESTEQUIOMETRÍA)

El carbono mol (C-mol)

Podemos definir 1 C-mol de FCE: Ej 1C-mol de glucosa (C6H12O6)

esta representado por CH20 y pesara 30 g
En general para obtener los gramos de 1C-moles de un compuesto
dado es:

Cn Hf Oq Nm C Hf/n Oq/n Nm/n 12+ f/n + 16.q/n + 14.m/n

x Donde: X tiene unidades de (cmol/g) de X

YX / S  YX / S
s S tiene unidades de (cmol/g) de S
 CRECIMIENTO MICROBIANO (ESTEQUIOMETRÍA)

Ecuación de crecimiento y balances de materia

• Balance de Carbono: Puesto que los rendimientos estan referidos

a 1 C-mol de fuente de Carbono y energia, resulta
YX / S  Yp / s  YCO2 / s  1
Balance de materia para el Nitrogeno
Tarea plantear los
balances para el resto de
los componentes
Hidrogeno y Oxigeno

De que factores de pende el rendimiento celular: Ayuda. formula minima

de la biomasa: CH1.79O0.5N0.2
• Yx/s es f (FCE, FN) y de cómo son estos son metabolizados
• De la naturaleza microorganismo y como este aprovecha dichas fuentes
 BALANCE DE ENERGIA

Energía y transferencia

Son consideradas tres tipos de energía: Cinética Ec, potencial Ep y la energía interna U.

H  U  pV
En los procesos bioquímicos , la Ec, Ep suelen ser muy pequeños que las otras condiciones,
por lo que no son considerados.
La energía se transfiere en forma de calor o en forma de trabajo

Calor: (Q), se transfiere de una masa a otra, lo que son mostrados dos condiciones:
Calor sensible:
Q  mc p T

Calor latente:
Q m
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
Forma de utilización el balance de energía.

𝑑𝐸
−𝑤𝛥𝐻 + 𝑊𝑆 − 𝑄 =
𝑑𝑡
Donde:
= Flujo másico
ΔH= Cambio de entalpia por unidad de masa
w = Trabajo realizado
Q= Variación de calorías
dE/dt=0, El cambio de variación de acumulación se encuentra en estado estacionario.

En estado estacionario: Si hay un cambio de estado con mezcla completa, la acumulación

seria:
dE dT
 M total .c p .
dt dt
Cp= Calor especifico promedio por unidad de masa que en medios de fermentación toma
valores cerca del agua.
Si hay cambios de estado, se puede acumular energía debido al calor latente, agregándose la
masa, que se evapora; por lo que se debe sumarse en el segundo termino en signo negativo
correspondiente a -mvλ
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
Si hay acumulación de energía y además no hay trabajo:
Q  H w
Si se presenta una reacción exotérmica ΔH será (-),, luego la ecuación será:

w . H  Q
Donde: Q [+], donde se establece que sale calor hacia fuera del sistema.

A.- DETERMINACION DE ALGUNO TERMINOS DE BALANCE:

Cambios de temperatura: dQ  d (mc pT )
Q  m c p T T  T2  T1
Si el valor especifico másico cambia con la temperatura, se debe introducir la función de
dependencia:

 b c 
C p  a  bT  cT 2
Q  m a( T )  ( T )  ( T )3 
2

 2 3 
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA

B.- CAMBIO DE FASE

Determinado para las condiciones: dQ  d (m. )

El calor latente o de cambio de fases (J/kg) es aproximadamente constante con la
temperatura, por lo que aproximamos:

Q  m
C.- CAMBIO POR REACCION

Los valores de entalpia de formación ΔHf de los compuestos suelen estar estandarizados a 25°C.
asi podemos calcular el cambio de entalpia a esas condiciones:
25C
Areactivos   Bproductos

H r  H fprod  H react
f   ( wp .H f . p )   ( wr .H f .r )
Problema 01.
El aprovechamiento de glicerina residual por transformación biológica en 1-3-propanodiol
C3H8O2, (monómero de la industria de plástico) puede realizarse biológicamente mediante
diversos microorganismos (klebsiella, Clotridium, Citrobacter), dando diversa eficacia y
concentraciones de subproductos (acetato, butirato, lactato, siccinato, etanol,…). En un biorreactor
de 80 m3 (con agitación P/V=0.6 kW/m3 ) con Clostridium butyricum se trata una alimentación
diaria de 2.5 m3/h (60% glicerina, 22%amoniaco, 18%agua) obteniéndose a la salida una corriente
liquida (47% 1,3-propanodiol, 11% acido butírico, 4.5%acido acético, 4% biomasa, 33.5% agua)
habiéndose evaporado 60 kg/h de agua y recuperado 500 kg CO2/h. Considerar estado
estacionario, la misma entalpia de reacción que a 25°C y densidad del liquido como la del agua.
Calcular la cantidad de calor que se debe extraer debido a la biorreaccion (a) y la total incluyendo
la agitación y evaporación de agua (b).
a) CALOR DE REACCION
a.1.- Para el balance de materia, se toma como base 1 h, establecemos el balance global de la
materia TABLA, Hay una corriente liquida de entrada al bioreactor y dos corrientes de salida: una
en fase liquida y la otra en gas (CO2 y agua)= Lentr=Lsal+ GCO2+agua. Datos de entrada 2500 kg/h y la
salida en fase gas de CO2 y agua, se obtiene una salida en fase liqida de 1940 kg/h. Con los flujos
globales y las composiciones del enunciado se calculan todas las corrientes de entrada (Columna
4) y de salida (5).
kJ(x10-7)/h kJ(x10-7)/h
Compuesto Pm, AHcomb, w, entra w, salida
(g/mol) kJ/kg(x10-4) kg/h kg/h
Glicerina 92 -1800 1.5 -2700
Amoniaco 17 -2500 550 -1375
Agua 18 0 450 649900 0 0
1,3 Propanodiol 76 -3370 911800 -3073
Ac.Butirico 88 -2470 213400 -527
Ac. Acetico 60 -1450 87300 -127
Biomasa -2120 77600 -165
Total fase liquida 2.5 1.94 -4075 -3892
Agua evaporada 18 243 60
CO2 recuperado 44 0 500
a.2.- Balance de energía.- En la tabla se incluye el calor de combustión de cada compuesto por kg
(se indica también el peso molecular). El balance de energía de la transformación en términos de
calores de combustión se obtendrá:

H r   w .H
react
i i
comb
  wi H icomb
prod

En las dos ultimas columnas de la tabla se calculan los sumandos correspondientes a los reactivos
en la fase liquida, como el producto de las columnas 3 y 4. y de los productos en la fase liquida,
como producto de las columnas 3 y 5, respectivamente. A partir de estos totales se obtiene el
calor de la biorreaccion.

H r  (4,075x107 )  (3,892 x107 )  0,183x107 kJ / h.

La biotransformacion es exotérmica. El calor que se debe eliminar será:

Q  1,83x106 kJ / h

1h
( ) Q  508,3 kW , o kJ / s
3600s
 B.- CALOR TOTAL QUE SE DEBE ELIMINAR

Tomando en cuenta la energía introducida por agitación Ws y la que se elimina por evaporación
wevap
Q  H r  Ws  wvv

El valor del trabajo de agitación:

P kW
Ws  ( ).V  (0.6 3 ).80m3 48 kW  48 kJ / s
V m
kJ  3600s 
Para 1 hora: Ws  48    17,3x10 kJ / h
4

s  1h 
Para el termino de evaporación:
kg  2431 kJ 
wv  60 .   14,6 x104 kJ / h
h  1 kg 
Q  H r  Ws  wv

Q     1,83x106   17,3x104  14,6 x104   1,86 x106 kJ / h

Q  1,86 x106 kJ / h  . 1h / 3600s   515,8 kW

Problema 02.
En una reacción biológica, se consumen 0.4 gr O2/s por m3 de reactor, con una agitación de 2 kW
y se evapora 1 kg/h, de agua. Si se debe enfriar (retirar calor) haciendo circular agua fría a 10°C y
caudal 1 m3/h, Calcular la temperatura de salida del agua de refrigeración. Discutir la posibilidad
de reciclar esta agua parcialmente para volver a refrigerar.

Datos para el problema: Generación de calor 460 KJ/mol.g O2 consumido,

λvap, = 2430 KJ/kg agua, Cp (agua)=4184 KJ/m3 °C.
El calor a eliminar (Q) será: REACCION + AGITACION - EVAPORACION

3
g O2 1molO2 J kg agua 1h 2430 x10 J
0.4 . .460 x103
 2000W  1 . .
s.m3 32 g O2 molO2 h 3600s kg agua

5750  2000  675  7075W

Q  L. c p (Tw  Two )

J m3 1h 4184 x103 J
7075  1 . . 3
(Tw  10C ) T  16,1C (Tw )
s h 3600s m
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
ANALISIS DE UNA TRANSFORMACION BIOLOGICA AEROBICA

Consideramos una transformación biológica aeróbica , donde S es el sustrato a partir del cual se
forman células X, (sin producto) pudiendo calcular: Δ Hr

H r
S  O2   CO2  H 2O  X
Podemos indicar que el calculo es difícil, pero podemos imaginar un ciclo que nos permita
realizar el calculo.
Calculamos el la entalpia de formación bioquímica, y por otro lado estimamos la entalpia al
quemar las células, convirtiéndola en: CO2  H 2O

H r
S  O2   (CO2  H 2O)  X

H cS H cX
CO2  H 2O
𝑆 𝑋
Los calores de combustión del sustrato 𝐻𝑐 en KJ/kg de S, y de las células 𝐻𝑐 en KJ/kg de X,
pueden determinarse mediante una bomba calorimétrica. (Un proceso biológico, parte de la
energía se transforma en células, parte en producto, parte en energía (que es H )
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
Si podemos no considerar productos podemos calcular la entalpia de la reacción por gramo de
sustrato que se transforma:

H r  H cS  H cX .YX / S

Para 1 gr. de sustrato se forman Y X/S gramos de células X (coeficiente estequiometrico Y X/S ). Si
se refiere por gramo de células generadas. X. podemos encontrar:

H cS
H r   H cX
YX / S

Ejemplo:
El valor de H c del sustrato (dato termodinámico) viene indicado en tablas (para la glucosa
15.570 kJ/kg; para el etanol 29.668 kJ/kg). El termino H r es la entalpia de combustión de 1 kg
de células, aproximadamente 23,1 ± 0.5 (x103) kJ/kg para bacterias y 21,2 ±0.5 (x103) kJ/kg
para levaduras. Con esta ecuación se puede calcular H cX si se conoce la YX / S (g de células
producidas / g de sustrato consumido).
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
COEFICIENTE ESTEQUIOMETRICO
Tenemos diferentes tipos de coeficientes estequiometricos:
X
YX / S 
S
Se definen como los cocientes entre términos de
cambio de materiales en una transformación.
Conocidos los coeficientes entre el cambio de
nutrientes y de células.

YP / S = gramos de producto formado/gramos de

sustrato
P P  Po
YP / S   
S So  S
Donde el [-] indica que uno se forma y otro desaparece, o bien para relaciones internas entre
sustratos. S
YS /O2 
O2
El signo positivo es porque ambos están en el mismo lado de la reacción
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
BALANCE NO ESTACIONARIOS

Mezcla completa
Situación ideal sencilla, también de aproximación,

Operación discontinua:
Se denomina biorreactor discontinuo perfectamente mezclado DBPM (bath). El balance
global expresado en masa simplemente dice que permanece constante.
El balance a un componente A se usa frecuentemente expresar en moles.
Se puede considerar una serie de transformaciones, j.
d (VCA )
  ( rA ) j dV
dt j
Si se considera que o hay variación de volumen (cambios no muy grandes de T, P, y de
composiciones), con mezcla completa y considerando solo una reacción:
dC A
Si se conoce rA permite por integración calcular  rA
la evolución de CA con el tiempo. dt
Si se conoce esa evolución, se puede estimar
un valor de rA
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
SISTEMA DE FLUJO CONTINUO
Se denomina biorecator continuo perfectamente mezclado BCPM (continuous stirred tank
reactor, CSTR).
Balance global.
Si hacemos el el balance global con unidades de masa, no nos importan las reacciones porque al no
haber reacciones nucleares, se conserva la masa.
Lo que entra – lo que sale = lo que se acumula

Si tenemos las condiciones de ingreso y salida como la masa del sistema:

L1.1 , L2 .2 , V  d (V . )
 L11  L2  2
dt
En fase liquida, se puede tomar en cuenta que las densidades tiene igual valor:
dV
 L1  L2
dt
dV
1.- Si los ingresos y las salida están siendo iguales corresponde: 0
dt
dV
Si son diferentes los caudales de ingreso y de salida tendremos: 0
dt
Si los caudales se mantienen
constantes. V  Vo  ( L1  L2 )
Vo para (t=0), para otros= f(t)
 TIPO DE REACTORES – TIPO DE FERMENTACION - BALANCE DE
ENERGIA
BALANCE A UN COMPONENTE:
Si tenemos transformación bioquímica, cambiara la cantidad el componente A, tanto en moles
como en masa. ENTRA –SALE= ACUMULA-FORMACON EN EL PROCESO

Velocidad de reacción: rA () molA / m3s

Para el caso de una reacción: Cinética de primer orden rA  k1cA
Para una cantidad que se acumula será la derivada respecto al tiempo A(VcA )
Sabiendo que: c A2  c A
d (V .cA )
 L1cA1  L2c A2  V .rA
dt
Para el caso de entra es igual a lo que sale : L1  L2
Si se considera para rA descomposición con cinética de primer orden, términos de caudales y
3
volúmenes: L( ) m
V ( )m 3
h dc
L1  L2  V . A
 L(cA1  cA )  Vk1c A
dt
Sistema para L1  L2 d (V .cA ) dc dV
Cambio de volumen (sistema fed-batch) del balance:  V A  cA
dt dt dt
dcA dV
V  cA  L1cA1  L2c A  V .rA
t dt
dcA
Balance global: dV
 L1  L2 L1  L2  L * V  L1cA1  ( L2  L*)cA  V . rA
dt t