Evaluación de selectividad y productividad del agar manitol salino

para Staphylococcus aureus por medio del método ecométrico

Selectivity evaluation of saline mannitol agar for Staphylococcus aureus by

means of the ecomometric method
31/05/2019
Cristian Eduardo Naranjo Alvarez
Universidad de Santander - UDES
Microbiología Industrial
Bucaramanga

RESUMEN

La finalidad de este trabajo fue evaluar la selectividad del agar manitol salino para el aislamiento de
una cepa de Staphylococcus aureus, usando como cepa interferente la bacteria Escherichia coli, estas
bacterias se sembraron en agar salino manitol usando el agar nutritivo como medio de control, los
microorganismos fueron inoculados con el método ecométrico para de esta forma determinar su
productividad haciendo un recuento de las colonias resultantes y así hallar el ICR (índice de
crecimiento relativo) y posteriormente el ICA (índice de crecimiento absoluto) y de esta forma
verificar que tan selectivo es el agar manitol salino.

Palabras claves: Staphylococcus aureus, selectividad, método ecométrico, medio de cultivo,

interferente.

ABSTRACT

The purpose of this work was to evaluate the selectivity of saline mannitol agar for the isolation of a
strain of Staphylococcus aureus, using the bacterium Escherichia coli as an interfering strain, these
bacteria were seeded in mannitol saline agar using nutritive agar as control medium,
microorganisms were inoculated with the ecométrico method in order to determine their
productivity by counting the resulting colonies and thus find the ICR (relative growth index) and
subsequently the ICA (absolute growth rate) and thus verify how selective it's saline mannitol agar.

Keywords: Staphylococcus Aureus, selectivity, ecométrico method, culture medium, interfering.

INTRODUCCIÓN Staphylococcus aureus pertenece a la

Un medio de cultivo es un sustrato o una
solución de nutrientes que permite el
crecimiento y desarrollo de
microorganismos in vitro [1]. Este provee
la fuente de carbono, oxigeno, nitrógeno,
pH y factores necesarios para propiciar un
medio ideal y satisfacer metabólicamente
al microorganismo de interés.
familia Staphylococcaceae. Es Gram
positivo, aunque las cepas viejas o los
microorganismos fagocitados se tiñen
como Gram negativo. Tiene forma de
coco y puede aparecer en parejas, en
cadenas o en racimos. Su tamaño oscila
entre 0,8 a 1,5 micras de diámetro, es
inmóvil y algunas cepas producen una
cápsula externa mucoide que aumenta su
capacidad para producir infección. En
 relación con su metabolismo, es
anaerobio facultativo, coagulasa
positivo, catalasa positiva y oxidasa
negativa. [2]
Una característica muy importante de este
germen es que sus toxinas pueden ser
causa de intoxicación cuando se ingiere
con los alimentos.
Escherichia coli pertenece a las
Enterobacteriaceae y se caracterizan por
fermentan la lactosa, son bacilos
gramnegativos, anaerobios facultativos,
no esporulados y se encuentran
generalmente en el intestino del hombre y
de los animales [3]
Chapman formuló el agar manitol salado
para aislar Staphylococcus inhibiendo el
crecimiento de la mayoría de las otras
bacterias con una alta concentración de
sal. Champan añadió cloruro de sodio al
7.5% al agar rojo de fenol-manitol, y
observó que las cepas patógenas de
estafilococos (Staphylococcus positivos a
coagulasa) crecieron exuberantemente y
produjeron colonias amarillas con zonas
amarillas. Los Staphylococcus s no
patógenos produjeron pequeñas colonias
rojas sin cambio de color en el medio
circundante.
El agar manitol salado es altamente
selectivo, y las muestras de fuentes muy
contaminadas pueden ser estriadas sobre
este medio sin peligro de crecimiento
excesivo. [4]
Existen métodos cuantitativos
(MilesMisra), semicuantitativos (prueba
ecométrica) y cualitativos (siembra por
agotamiento) para determinar la
promoción del crecimeinto de un
microorganismo dado en un medio de
cultivo particular.
Los métodos cuantitativos o
semicuantitativos, permiten calcular la
productividad de un medio de cultivo, es
decir, evaluar la capacidad de este de
favorecer o permitir el desarrollo
del microorganismo elegido
comparado a un medio de cultivo control
que se sabe permitirá un crecimiento y así
determinar su ICA.
El método ecométrico de Mossel es semi-
cuantitativo y se realiza tomando un
medio de cultivo sólido y se divide en
cuatro cuadrantes. Se realizan cinco
estrías en cada cuadrante y una en el
centro de los cuadrantes (Ver figura1).
Fig. 1. Método ecométrico de Mossel para determinar
mediante una forma semi-cuantitativa la capacidad de
un medio de recuperar (promover el crecimiento) de una
cepa u organismo de interés.
A cada estría de cada cuadrante se le da
un valor de 0,2. A la estría central se le da
un valor de uno. Se realizará la suma de
los datos obtenidos y se obtendrá un
valor. Para que el medio sea productivo
o promueva el crecimiento debe
presentarse ICA (Índice de Crecimiento
Absoluto) por encima de 3,5 puntos.
El objetivo de este proyecto de aula
consistió en realizar y analizar la
productividad por el método ecométrico
de Mossel de en agar manitol salino para
el aislamiento de Staphylococcus aureus
y así determinar el índice de crecimiento
absoluto. [5]
Materiales y métodos
 Cepas usadas
Staphylococcus aureus (prueba) y
Escherichia coli (interferente)
 Medios de cultivos empleados
Agar manitol salino y agar nutritivo
como control
 Siembra
Se pasa inoculo a un tubo MH
(Müller- Hilton) y se compara con 0.2
en la escala de mcfarland.
Se marca el agar como se muestra a
continuación
Imagen 2. ejemplo de método ecométrico
Posteriormente con un asa se toma una
muestra del microorganismo de interés
desde el tubo y sin tomar más muestra o
flamear se siembra de la siguiente forma:
A1, B1, C1, D1, A2, B2… hasta D5 y se
incuba por 24 horas.
 Recuento
En la prueba se considera válida
cualquier estría que crezca más del
25% de la línea; cada estría tiene un
valor de 0,2 y la estría central un valor
de 1, es decir, que el crecimiento
máximo que se puede presentar es de
5 (0,2*20 + 1) = 5
El valor de ICA obtenidos se expresa-
ron como índice de crecimiento
relativo(ICR), para comparar el medio
prueba común medio de referencia, en
este caso con el agar nutritivo. Éste se
obtuvo con la fórmula; ICR = ICA
prueba/ ICA control. Interpretando el
ICR>1 como resultado altamente
favorable para el medio de prueba.
La interpretación de este índice se
fundamenta en la siguiente
clasificación: ICA menor a
2,5(bajamente productivo), ICA entre
2,5-4,0(medianamente productivo) e
ICA mayor a 4,0 (altamente
productivo). Medios con ICA menor a
2,5 no deben utilizarse, ni salir al
mercado.
Tabla 1. Valores para determinar la productividad de
un medio
Resultados y análisis
El agar manitol salino es un
medio selectivo y diferencial para el aislamiento
e identificación de Staphylococcus aureus. NaCl
al
7,5% le proporciona lo selectivo ya que sólo
estos microorganismos osmotolerantes u
osmófilos pueden multiplicarse en él. Manitol es
el único azúcar fermentado por las cepas
patógenas de este género bacteriano.
La producción de ácidos proveniente de la
fermentación del manitol es detectada por el
viraje del indicador de pH presente en el medio
(rojo fenol) a amarillo.
 Conclusiones
El agar manitol salino es un medio
altamente productivo ya que presentó un
ICA de 5 para Staphylococcus aureus, por lo que
se deduce que un medio optimo para recuperar y
aislar Staphylococcus aureus.
En cuanto a Escherichia coli no tuvo crecimiento
alguno en el agar manitol salino por lo que se
deduce que el medio en estudio es altamente
selectivo (ICA de 0 en Escherichia coli).
En el agar nutritivo (control) Escherichia coli
creció satisfactoriamente comprobando
finalmente que al agar manito salino inhibió por
completo a la cepa de Escherichia coli
Staphylococcus aureus es considerado un
patógeno con gran potencial para causar
múltiples infecciones en el humano y en los
animales. S. aureus es la especie tipo del
grupo, considerada la más virulenta,
responsable de un amplio espectro de
enfermedades, que van desde infecciones de la
piel y tejidos blandos hasta infecciones graves
que amenazan con la vida.
En cuanto a su forma de obtener energía es
tanto a través de la fermentación como de la
respiración. En cuanto a los requerimientos de
cultivo, son no exigentes desde el punto de
vista nutricional, creciendo en medios pobres
y simples. Fermenta glucosa, lactosa y
maltosa. En su relación con el oxígeno son
aerobios-anaerobios facultativos.
Staphylococcus aureus se puede localizar en
cualquier alimento y produce una intoxicación
muy aguda. Ésta aparece entre las 2 y 12 horas
después de la ingestión de la toxina que genera
el patógeno y provoca vómitos intensos e
incontrolados, aunque no fiebre. Es una
intoxicación leve y desaparece en 24 horas. El
responsable del problema es una toxina de
carácter termoestable, lo que permite que en
alimentos cocinados se mantenga la toxina,
aun cuando no esté presente el
microorganismo.
 Se logró aislar un microorganismo por
medio de métodos de identificación
microbiana.
 Enterobacter cloacae no solo habita en
el tracto intestinal humano también en
el suelo ya que es una rizobacteria la
cual reduce la biosíntesis del etileno al
influir en el metabolismo de la planta
y mejorar su nutrición
Bibliografía
 (1)Mezzatesta ML, Gona F, Stefani S.
Enterobacter cloacae complex:
clinical impact and emerging
antibiotic resistance. Future Microbiol
2012; 7: 887-902.
 (2)https://www.ecured.cu/Enterobact
er_cloacae
 (3)Davison J (1988) Plant beneficial
bacteria. Nature Biotech. 6:282-286.
 (4)Grichko V P, B R Glick (2001a)
Ethylene and flooding stress in plants.
Plant Physiol. Biochem. 39:1-9.
Grichko V P, B R Glick (2001b)
Amelioration of flooding stress by
ACC deaminase-containing plant
growth-promoting bacteria. Plant
Physiol. Biochem. 39:11-17
 (5) Robison M M, S Shah, B Tamot,
K P Pauls, B A Moffatt, B R Glick
(2001) Reduced symptoms of
Verticillum wilt in transgenic tomato
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deaminase. Mol. Plant Pathol. 2:135-
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