Facultad de Ciencias de la salud

Escuela de Enfermería

Materia: Microbiología y Parasitología

1 semestre “D”

Trabajo: Consulta # 1

Tema: Identificación, clasificación y Tipificación bacteriana.

Cultivos puros - PCR

Grupo 1

Integrantes

Carlos Elicio Castro Baque

Delgado Esmeralda Genissis Jael

Vargas Montero Lisbeth Akira

Vera Vera Emily Geraldine

Docente: Dra. Soraya Reyes Mena

Periodo: Noviembre 2016 – Febrero 2017

 IDENTIFICACIÓN, CLASIFICACIÓN Y
TIPIFICACIÓN BACTERIANA. CULTIVOS
PUROS - PCR

Docente: Dra. Soraya Reyes Mena| “D” | 25 de enero de 2017

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 IDENTIFICACIÓN, CLASIFICACIÓN Y LIPIFICACIÓN BACTERIANA

IDENTIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS

Es el ejercicio práctico en el que se ejercen las pruebas de identificación bacteriana. En la

medicina general es común que llegue un paciente con síntomas de alguna infección
bacteriana, el determinar un diagnóstico y poder interpretar qué bacteria causó la
molestia al paciente es aventurado, pues hay muchas bacterias que causan las mismas
enfermedades, por eso es conveniente realizar pruebas de identificación, que son
sumamente importantes para un buen diagnóstico de cualquier patología.

Cada género, inclusive especie, tiene diferentes reacciones cuando se les enfrentan
diferentes reactivos, esto se hace a partir de un cultivo puro, ya la bacteria aislada, con
estas pruebas podremos decir casi con exactitud de que género y qué especies es la
bacteria. A estas pruebas se les ha llamado como primarias, secundarias y
complementarias.

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PRUEBAS PRIMARIAS

Para realizar la identificación de las bacterias en el laboratorio es importante conocer sus

características morfológicas, la reacción a la tinción de Gram, agrupación, propiedades,
morfología, reacciones metabólicas como producción de enzimas y reacciones de óxido –
fermentación.

La identificación bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos:

TINCIÓN DE GRAM- Esta nos permite observar la forma de la bacteria,

agrupación y el grupo taxonómico al que pertenece Gram positivo o Gram
negativo

TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN- Esta se la utiliza para identificar las bacterias

que son un poco más difíciles de teñir ya que poseen una pared de estructura
atípica y esto hace difícil que el colorante se adhiera a la bacteria, como por
ejemplo las bacterias Alcohol – Ácido resistentes.

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  Tinción de esporas: Este es un mecanismo de defensa generalmente de los
géneros Bacillus y Clostridium.
 Prueba de catalasa: Esta es una enzima que descompone al peróxido de
hidrógeno en oxígeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la
hemoglobina. Bale mencionar que la mayoría de las bacterias aerobias y
anaerobias facultativas tienen catalasa.
 Lo que se quiere demostrar con esta prueba es la presencia de la enzima
catalasa, colocando 2 o 3 gotas de solución de peróxido al cultivo, el
resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia.
 Prueba de oxidasa: Básicamente es la detección de la enzima oxidasa, muy
útil en la identificación de las bacterias Gram (-), la reacción de la oxidasa
se debe a la presencia del sistema de citocromo – oxidasa, la cual activa
citocromos reducidos por oxígeno molecular.

Ácido de la glucosa: La mayoría de las bacterias de interés médico usan la

glucosa como fuente de carbono, como parte importante de su metabolismo,
ayuda a determinar si la bacteria usa la glucosa produciendo ácido y/o gas a partir
de dicho carbohidrato.

 Prueba de O/F: Para poder llevar acabo esta prueba se usa el medio básico
de Hugh y Leisfon con un pH de 7.1. Es un medio semisólido de color
verde que se inocula por picadura, contiene carbohidratos como: glucosa,
lactosa, sacarosa o maltosa al 10%. Como indicador de pH tiene Azul de
bromotimol. Se usa en dos tubos, uno sin aceite y otro con aceite o
vaselina sellándolo. Se inoculan los dos tubos con la bacteria por picadura
y se mantiene a 37°C por 24 horas, obteniéndose lo siguiente:

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 TUBO ABIERTO TUBO SELLADO INTERPRETACIÓN
Amarillo Verde Oxidación ( aerobio)
Amarillo ( anaerobio Amarillo Fermentación
facultativo)
Verde ( anaerobio Amarillo Fermentación
estricto)
Verde Verde Negativo (NH3)

 Prueba de motalidad: Llamado también la gota suspendida, la base de esta

prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil. Con una asa de
inoculación se le coloca a un cubreobjetos un poco de muestra y se le
agrega una gota de agua destilada. Se le coloca sobre un portaobjetos y se
observa en el microscopio. Podremos observar si las bacterias tienen
movimientos rectilíneos o curvos y en todas direcciones.

PRUEBAS SECUNDARIAS
Esta se fundamenta en la comparación del microorganismo que se desea
identificar con los microorganismos de identidad conocida.
Estas pruebas se clasifican en las siguientes:

 Simples: Citrato, Malonato, MR – VP, nitrato y leche tornasol.

 Múltiples: TSI, LIA y SIM.
 Especiales: Coagulasa, Hialuronidasa y Acriflavina.

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 CLASIFICACIÓN BACTERIANA

Por composición de
Por la pared celular
Por ordenamiento Representación
forma que reacciona a la
tinción de Gram
Coco Coco único o micrococo
(esférico) Cuando los cocos se dividen en
Gram negativas no
un solo plano vertical,
retienen el cristal
se separan y conservan su
violeta conservan el
individualidad.
colorante rojo por
ejemplo safranina
Diplococo cuando las células
son susceptibles a
hijas se presentan en parejas
las cefalosporinas
Diplococo en
Estreptococo en cadena parejas
Cuando las células hijas forman
cadenas
Gram positivas
absorben y
Estafilococo conservan el
las células permanecen unidas colorante cristal
pero después de una división violeta son
celular en dos o más planos y los susceptibles a la
cocos forman grupos irregulares penicilina y
en ocasiones de gran volumen estreptomicina
similares a racimos de uvas.

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 Sarcina grupo de ocho cocos
La división celular se produce
formando paquetes de ocho
células
Tetracoco
La división celular se produce en
dos o tres planos perpendiculares
formando grupos de cuatro
células.

Espirilos En forma de espiral

En forma de bastón
Bacilos

TIPIFICACIÓN BACTERIANA

La tipificación de las bacterias se basa en el estudio de sus características mediante

técnicas que oscilan entre las más sencillas tinciones y los más complejos estudios
moleculares. Una técnica útil y de bajo costo consiste en la tinción de Gram y posterior
observación de la muestra mediante el microscopio de luz para estudiar las bacterias, su
forma, tipo de agrupación y color: Gram positivas o gramnegativos. La mayor parte de
las bacterias puede ser ubicada en uno de estos dos grupos o en un tercero, de acuerdo a
la ácido-alcohol resistencia que presenten (Ziehl-Neelsen).

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Algunas propiedades genéticas y fisiológicas constituyen herramientas utilizadas para
definir algunas características de las cepas, como los serotipos y biotipos, determinación
de especies en algunos grupos de bacterias, producción de toxinas. Los métodos más
sensibles se basan en el análisis del material genético. Cabe mencionar que éstos han
diversificado sus objetivos; se emplean en la identificación de subgrupos de genes
esenciales para el crecimiento, colonización, adhesión e invasión bacterianos (un ejemplo
es el IVET - siglas de "in vivo expression technology"), desarrollada para seleccionar los
genes activos únicamente durante la infección).

Tipificación de cepas bacterianas

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 CULTIVOS PUROS

En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como

poblaciones mixtas, pero si se los quiere estudiar, caracterizarlos e identificarlos, se
necesita tenerlos como cultivos puros. Un cultivo puro es aquel en el que todos los
microorganismos provienen de una sola célula. La obtención de un cultivo puro, a partir
de una población mixta, se lleva a cabo en dos etapas:

1. La muestra debe diseminarse de manera tal que los diferentes microorganismos

queden lo suficientemente separados sobre la superficie de un medio de cultivo
sólido, de manera que luego de la incubación ellos formen colonias visibles
aisladas. Este proceso se conoce como aislamiento. En esta placa tendremos
diferentes tipos de colonias correspondientes a los diferentes microorganismos
presentes en la población original.
2. Luego de tener las colonias aisladas, éstas deben transferirse con el filamento a un
tubo que contenga agar nutritivo estéril para cultivar esa colonia aislada; este
procedimiento se conoce como transplante.

Para garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo de
colonia aislada, repetir el proceso de aislamiento antes descrito. Se considerará que se ha
obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este proceso, todas las colonias obtenidas
presenten las mismas características. El medio de cultivo utilizado en el proceso de
aislamiento dependerá, entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los
microorganismos que se espera aislar y de la presencia de microorganismos que, por sus
características y/o por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la
obtención del microorganismo objeto del aislamiento. En este último caso, se deben
utilizar medios de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de
gérmenes contaminantes. La temperatura y otras condiciones de incubación, variarán
según los microorganismos, usualmente la temperatura óptima de los microorganismos
patógenos para el hombre oscila entre 30 y 40ºC. Cuando el microorganismo que se
intenta aislar es anaeróbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin de eliminar
la presencia de oxígeno en el ambiente donde se desarrollará el mismo. Basándose en el

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origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles microorganismos que se
encuentran presentes en la misma, y ese conocimiento ayudará en la selección del medio
y las condiciones de cultivo adecuadas. Para iguales fines, es de gran utilidad el
conocimiento de los síntomas de la enfermedad que padece la persona de quien se obtuvo
la muestra analizada.

PCR

La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés
(polymerase chain reaction), es una técnica de biología molecular desarrollada
en 1986 por Kary Mullis.1 Su objetivo es obtener un gran número de copias de un
fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única
copia de ese fragmento original, o molde.

Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la
amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta
probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas
(cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos
derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida,
sobre todo en el ámbito de la investigación forense, con el consiguiente abaratamiento del
equipo necesario para llevar a cabo dicha técnica.

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 BIBLIOGRAFIAS
http://es.m.wikipedia.org/wiki/Identificación_bacteriana
http://es.slideshare.net/mobile/anny4jun/clasificacin-de-las-bacterias
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/generali
dades.html
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro
/10_Obtenci%C3%B3n_de_cultivos_puros.pdf
https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_en_cadena_de_la_polimer
asa

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