UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD-MEDICINA HUMANA

LABORATORIO N°04:
TÉCNICAS DE SIEMBRA Y MEDIOS DE
CULTIVO

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“AÑO DEL DIÁLOGO Y RECONCILIACIÓN NACIONAL"

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL: MEDICINA HUMANA

LABORATORIO N°04

“TÉCNICAS DE SIEMBRA Y MEDIOS DE CULTIVO”

 ALUMNA:
PAZ VILLANUEVA ERLINDA NOEMI

 CURSO:
MECANISMO DE AGRENSIÓN Y DEFENSA I

 DOCENTES:
BLGO°-MCBLGO°: CÉSAR TORRES DÍAZ M. SC

BLGO°- MCBLGO°: CARLOS HOLGUÍN MAURICCI M. SC

TEC. LABORATORIO. SRTA. NANCY RUIZ MARCELO

 DOCENTE DE PRÁCTICA:
BLGO°-MCBLGO: JORGE BERMEJO BENITES

 CICLO:
IV CICLO

PIURA – 2018

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ÍNDICE

ÍNDICE ........................................................................................................................................ 3
INTRODUCCIÓN...................................................................................................................... 4
OBJETIVOS ................................................................................................................................ 5
MARCO TEÓRICO ................................................................................................................... 6
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA..................................................................................... 11
CONCLUSIONES ..................................................................................................................... 19
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................................... 19

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INTRODUCCIÓN

Como todo organismo vivo, los microorganismos requieren ciertos

nutrientes básicos y factores físicos para el mantenimiento de su vida,
estas necesidades varían según el tipo de microorganismo y es necesario
conocerlas para cultivarlos en el laboratorio.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento

y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica de los
microorganismos es muy amplia; por ello, la variedad de medios de
cultivo es también muy grande, no existiendo un medio de cultivo
universal adecuado para todos ellos.

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OBJETIVOS

 Reconocer los diferentes medios de cultivo y los componentes que

posee.

 Aplicar técnicas de siembra existente para el crecimiento de

microrganismos.

 Identificar los conceptos básicos de nutrición y preparación de los

mismos que se utilizan en los diferentes medios de cultivo.

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MARCO TEÓRICO

SIEMBRA

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra

en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para
su desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se
incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

 Que se efectúen asépticamente

 Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén
esterilizados Que se realicen solo los manipuleos indispensables
 Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible
utilizando un mechero o bien Flujo laminar.

Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los

requerimientos del microorganismo a estudiar:

1. Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de

Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente
fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios.
2. Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por
inmersión. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra
de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml.
aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios
facultativos y microaerofílicos.
3. Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de
cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el
inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo
hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra
se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

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4. Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo

fundido y se deja solidificar. Existen distintas técnicas para la siembra
en estrías, el objeto es obtener colonias aisladas.

• Técnica A: Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías

paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el ansa,
se enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el
área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por
último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.

• Técnica B: Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa,

se hacen 3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa
y se repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.

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MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que

permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de
laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de
cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer
y multiplicarse para dar colonias.

Clasificación de los medios de cultivo

Según su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de

origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composición química no se conoce exactamente.

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b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química

definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.

c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de

crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.

Según su consistencia

a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución

acuosa.

b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a

razón de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárido (hidrato
de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida
por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto
convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en
tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar
bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio líquido".

c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para

determinar la motilidad de las especies en estudio. Actualmente se
encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.

Según su composición: A causa de los requerimientos químicos del

mundo microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes
químicos del medio.

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a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor

parte de los microorganismos poco existentes. Es el medio más
frecuentemente utilizado para mantener colonias

microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.

b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del

crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como
suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc.
Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias
nutricionales.

c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue

alterando las condiciones físicas del medio o añadiendo o suprimiendo
componentes químicos específicos con el fin de inhibir el crecimiento de
especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo
permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el
de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microrganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo, Agar salado-manitol o Chapman
(permite el crecimiento de ciertos estafilococos).

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DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

 BIOSEGURIDAD

Para una correcta técnica de siembra de muestras se deben seguir los

parámetros de bioseguridad para reducir riesgos en el laboratorio.
Por ello se debe trabajar en un espacio y con materiales totalmente
estériles, asimismo la persona encargada de dicha toma debe utilizar
mandil, guantes y mascarilla.

I. MATERIALES:
 Placas Petri

 Alcohol liquido

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 Algodón
 Incubadora.

 Cultivos bacterianos.(gram + y gram -)

 Tubos de ensayo con: agar nutritivo líquido, semisólido,

solido.

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 Agar McConkey y Agar Nutritivo (en placa Petri)

 Asa Bacteriológica

 Mechero.

 Mascarilla
 Gorro
 Guantes
 Mandil
 Plumón indeleble

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II. ´PROCEDIMIENTO

1. Primero desinfectamos el área de trabajo.

2. Se encendió el mechero.

3. Se nos asignó un frasco, cada uno contenía bacterias de un cierto

tipo, en mi caso bacilos.

4. Se tomó el frasco de las bacterias cocos y con el asa

bacteriológica ya esterilizada previamente con el mechero se
procedió a tomar las bacterias del frasco.

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5. Luego se tomó un tubo de ensayo o una placa de Petri que

contenía agar, y se empezó la técnica de sembrado, en este caso
como fue en un medio sólido, se realizó una estría en el lado
inclinado con cuidado de dañar el agar.

6. Se vuelve a desinfectar el asa, se tapa la muestra de bacterias y

se coloca algodón en la abertura del tubo de ensayo.

7. Luego de hacer este proceso se volvió a esterilizar el asa con el

mechero y se llevó a la incubadora.

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III. RESULTADOS
Mi resultado:
 Al día siguiente regresamos al laboratorio a ver el resultado y
noté crecimiento de bacterias en mi tubo de ensayo en medio
sólido.
 Se observaba un pequeño grupo de bacterias, en mi caso
bacilos.

Resultados de mis compañeros:

En la siguiente placa Petri no se observa

Formación de colonias de cocos.

se observa la formación de una colonia

de Gram- abundante.

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En el tubo de ensayo se puede observar que hay

ausencia de colonias en el medio líquido.

Se observa la formación de una pequeña colonia,

en medio semisólido de una placa Petri.

Se observa una turbidez en el centro de cultivo en

Medio semi-sólido.

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No hay presencia de colonias en la siguiente siembra

de la placa Petri, además se observa que se hizo
mucha fuerza, provocando un daño en el agar.

Presencia de colonias en la placa Petri al realizar un

sembrado con estrías.

Se observa una turbidez en el centro del

Tubo, en un medio semisólido.

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CONCLUSIONES

 El uso adecuado de la técnica de siembra nos permite obtener un buen

resultado, es decir observar la presencia de microorganismos en el
cultivo.
 Cada microorganismo requiere de medios de cultivo que contienen
nutrientes esenciales para su crecimiento óptimo, así como se debe
mantener la muestra dentro de la zona estéril para evitar la formación
de otros microorganismos diferentes a los que necesitamos.
 Las medidas de bioseguridad son muy importantes al momento de
realizar esta práctica de siembra de bacterias, debido a que se está
trabajando con microorganismos y al no tener el equipo de protección
adecuado, podremos sufrir riesgo de contagio.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

• https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio
/biotecnologia/practicoIII.pdf
• file:///C:/Users/ERLINDA/Downloads/Dialnet-
PracticasDeMicrobiologia-100835.pdf
• https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/152380/m
od_resource/content/1/2018%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf

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