ESPECTROFOTOMETRIA VISIBLE: ANALISIS

INSTRUMENTAL EN LA DETERMINACIÓN DE LA
CONCENTRACION DE UNA MUESTRA
PROBLEMA
Sandra Marina Sáenz T*, Erika Julieth Echeverry U*, Sergio Andrés Acevedo C*.
Fundación Universitaria de San Gil-Unisangil Yopal
Sandrisaenz28@hotmail.com, julietherika1609@gmail.com, andres-
4599@hotmail.com

RESUMEN

La práctica de laboratorio consistió en la calibración del equipo, para poder realizar

un barrido espectral y en base a este medir la absorbancia en distintas longitudes.
Seguidamente, se selecciono la longitud de onda máxima para poder medir la
absorbancia en las diferentes diluciones preparadas. Finalmente, se mide la
absorbancia de la muestra problema y en base a los datos dados versus los
obtenidos (concentración de diluciones y absorbancia), realizar una gráfica
determinando la ecuación y su correlación.

PALABRAS CLAVES: Espectrofotometría, curva de calibración, absorbancia.

SUMMARY

The laboratory practice consisted in the calibration of the equipment, in order to

perform a spectral sweep and based on this measure the absorbance in different
lengths. Then, the maximum wavelength was selected in order to measure the
absorbance in the different dilutions prepared. Finally, the absorbance of the test
sample is measured and, based on the given data versus those obtained
(concentration of dilutions and absorbance), make a graph determining the equation
and its correlation.

KEYWORDS: Spectrophotometry, calibration curve, absorbance.

*Estudiantes de Ingeniería Ambiental UNISANGIL

MARCO TEORICO múltiples (dobles o triples) separados
por un enlace sencillo se dice que
Las transiciones electrónicas que se están conjugados.
efectúan en las regiones visible y 3. Absorción por compuestos
ultravioleta del espectro se deben a la aromáticos: Sistemas que contienen
absorción de radiación por tipos grupos fenilo o benceno.
específicos de grupos, enlaces y 4. Absorción por compuestos
grupos funcionales en la molécula. La orgánicos: Sistemas que contienen
longitud de onda de absorción, y su alcanos, y diferentes grupos
intensidad, depende de esos tipos. La funcionales.
longitud de onda de absorción es una
medida de la energía que se requiere 5. Absorción por especies inorgánicas
en la transición. Su intensidad
6. Absorción por transferencias de
depende de la probabilidad de que
suceda la transición cuando el sistema cargas
electrónico y la radiación LEY DE BEER: RELACIÓN ENTRE LA
interaccionan, y de la polaridad del CANTIDAD DE RADIACIÓN
estado excitado (Christian, 2009).
ABSORBIDA Y LA
Especies absorbentes
CONCENTRACIÓN
La absorción de radiación ultravioleta y
visible (UV-VIS) por parte de las La fracción de radiación que absorbe
moléculas ocurre en una o más bandas una solución de un analito se puede
de absorción electrónicas, cada una de relacionar cuantitativamente con su
la cuales se compone de muchas concentración. La cantidad de
líneas muy juntas pero discretas. Cada
radiación monocromática que absorbe
línea surge de la transmisión de un
electrón del estado fundamental a uno una muestra obedece a la ley de Beer-
de los muchos estados de energía Bouguer-Lambert, que comúnmente
vibratoria y rotatoria relacionados con se conoce como ley de Beer (Christian,
cada estado de energía electrónica 2009).
excitado. Puesto que existen muchos
de estos estados vibratorios y
rotatorios, y además su energía difiere
muy poco, el número de líneas
contenidas en la banda característica
es bastante grande y su
desplazamiento entre sí es muy
pequeño (Christian, 2009) (Skoog,
2004). Existen varias especies o
grupos que absorben la radiación:
1. Absorción por cromóforos aislados:
Los grupos que absorben radiación en
una molécula se les llama cromóforos.
2. Absorción por cromóforos 𝐓= 𝐏/𝐏𝐎 ⟹ 𝐀= −𝐥𝐨𝐠𝐓=𝐋𝐨𝐠 𝐏/𝐏𝐎
conjugados: Cuando hay enlaces 𝑨𝝀=𝜺𝝀𝒃 𝒄

*Estudiantes de Ingeniería Ambiental UNISANGIL

T = transmitancia, fracción de la luz REACTIVOS REQUERIDOS
incidente (𝐏𝐎) que es transmitida por la
disolución (𝐏). CANTIDAD DESCRIPCION
200 ml Solución patrón de Azul de
Porcentaje de transmitancia se define
metileno de 50 ppm
como: 50 ml Disolución problema de
%𝐓=𝐏𝐏𝐎 ×𝟏𝟎𝟎 azul de metileno

𝐀=𝟐.𝟎𝟎−𝐥𝐨𝐠%𝐓
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
%𝐓=𝐚𝐧𝐭𝐢𝐥𝐨𝐠 (𝟐.𝟎𝟎−𝐀)
- PROCEDIMIENTO 1:
PREPARACIÓN DE
DILUCIONES A PARTIR DE
SOLUCIÓN PATRÓN
MATERIALES Y REACTIVOS
Realizar previamente los cálculos
EQUIPOS A UTILIZAR EN LA
PRACTICA necesarios para preparar disoluciones
con volumen de 10 o 25 mlde
CANTIDAD DESCRIPCIÓN concentraciones de 2, 5, 10, 15, 20, y
1 Balanza analítica 30 ppm de azul de metileno, a partir
de la solución patrón dada.
1 Espectrofotómetro UV-
visible con cubetas de - PROCEDIMIENTO 2:
cuarzo DETERMINACIÓN MÁXIMO
DE ABSORCIÓN

MATERIALES A UTILIZAR EN LA
PRACTICA
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Vaso de precipitado de 50
ml
2 Vasos de precipitado 100
ml
5 Balón aforado de 10 a 25
ml
1 Pipeta graduada de 5 ml
1 Pipeta graduada de 10 ml
1 Frasco lavador
1 Propipeta

*Estudiantes de Ingeniería Ambiental UNISANGIL

 - PROCEDIMIENTO 3: CURVA Procedimiento 2
DE CALIBRACIÓN

LONGITUDES DE
ONDA (nm) ABSORBANCIA
600 0,017
620 0,021
640 0,024
650 0,029
655 0,030
660 0,032
665 0,032
670 0,031
675 0,028
680 0,023
700 0,009
Tabla 2. Longitud máxima de absorción solución 30 ppm
azul de metileno.

RESULTADOS

Procedimiento 1
Procedimiento 3
a. Cálculos para preparar disoluciones
b. Tabla de datos obtenidos
con volumen de (17,15,13,10,9,7 ppm)
a partir de la solución patrón 250 ppm. CONCENTRACIÓN
DILUCIONES ABSORBANCIA
C1 V1= C2 V2 (PPM)
7 ppm 0,036
(250ppm) (V1) = (17ppm) (10ml) 9 ppm 0,041
10 ppm 0,049
13 ppm 0,063
17ppm x 10ml
V1= = 0.68 ml 15 ppm 0,035
250ppm
17 ppm 0,049
Muestra problema 0,093
Esta misma fórmula se repite con las 5 Tabla 3. Curva de calibración longitud de onda máxima.
con 3 muestra problema
concentraciones faltantes.

CONCENTRACIÓN VOLUMEN Como obtuvimos 3 muestras

problemas, se utiliza la ecuación de la
17 ppm 0.68 recta y=mx+b para hallar los 3 valores
15 ppm 0.6 correspondientes.
13 ppm 0.52
10 ppm 0.4
9 ppm 0.36 y=mx+b
7 ppm 0.28
Tabla 1. Preparaciones de disolución con volumen. 𝑦−𝑏
x= 𝑚

*Estudiantes de Ingeniería Ambiental UNISANGIL

 0.035 − 0.025 7.640=0.049+(X-10) (0.0046)
𝑥= = 1.123
0.0089
7.640=0.049+0.0046X-0.0466
CONCENTRACIÓN
DILUCIONES ABSORBANCIA 7.640-0.049+0.0466=0.0046X
(PPM)
7 ppm 0,036
9 ppm 0,041 7.637=0.0046X
10 ppm 0,049
13 ppm 0,063 7.637
15 ppm 1.123 𝑋=
0.0046
17 ppm 2.696
Muestra problema 7.640
X=1660,35 ppm
Tabla 4. Curva de calibración longitud de onda máxima.

d. Grafica absorbancia vrs ANALISIS

concentración.
En el experimento de lectura del
espectro de absorción para una
muestra problemas, se obtuvieron
datos que corresponden debidamente
a cada rango de longitud optima de la
muestra.

Para el primer procedimiento tuvimos

unas concentraciones mediante la
formula C1 V1= C2 V2 siendo la
Grafica 1. Absorbancia vrs Concentración determinando solucion patron 250ppm, hallamos los
ecuación y r2 volumes a cada concentracion.
(Referencia table 1).
e. Concentración de la muestra
problema interpolando el dato obtenido En el procediento numero 2
de la absorbancia en los datos de la determinamos la absorcion empleando
curva de calibración. longitudes de onda con la herramienta
Espectrofotómetro UV-visible con
Absorbancia = 7.640 cubetas de cuarzo; la longitud de onda
que se determinó mayor absorbancia
(xb, yb) = (13,0.063) (0.032) fue en 665 nm.

(xa, ya) = (10.0.049) En el procedimiento número 3

obtuvimos tres muestras problema
0.063−0.049
7.640= 0.049+(x-10) ( ) como lo representa la tabla número 3.
13−10
(En el manual solo era una muestra,
0.014 pudo pasar por error del estudiante o
7.640=0.049+(x-10) ( ) en la herramienta) así que utilizamos
3

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la siguiente ecuación para determinar elementos lantánidos y actínidos
los valores correspondientes, y=mx+b, absorben en las regiones ultravioleta y
despejamos x ya que es el valor a visible, Los iones y complejos de los 18
𝑦−𝑏 elementos de la primera de las dos
conocer x= 𝑚 , determinando así la
series de transición tienen a absorber
muestra problema como lo referencia
radiación visible en uno, si no en todos,
la tabla número 4; empleamos una
sus estados de oxidación
gráfica de absorbancia vs
concentración obteniendo el grafico
número 1. Y finalmente calculamos la  Realice en análisis de datos
Concentración de la muestra problema obtenidos, respondiendo ¿por qué es
interpolando el dato obtenido de la probable que una curva de calibración
absorbancia en los datos de la curva sea lineal dentro de los límites más
de calibración. amplios de concentraciones a la
longitud de onda de absorción máxima
en comparación con una longitud de
PREGUNTAS
onda en un hombro de la curva de
absorción?
 ¿Qué tipos de electrones en una
molécula intervienen en general en la
R/=La curva de calibración
absorción de la radiación UV o visible?
determinación de una sustancia
(analito) en una muestra desconocida,
R/=La espectroscopia UV-visible se
sobre todo en disoluciones. El método
utiliza para identificar algunos grupos
se basa en la relación proporcional
funcionales de moléculas, y además,
entre la concentración y una
para determinar el contenido y fuerza
determinada señal analítica
de una sustancia. Se utiliza de manera
(propiedad). Conociendo esta relación,
general en la determinación
será posible conocer la concentración
cuantitativa de los componentes de
en una muestra dada mediante la
soluciones de iones de metales de
medida de esa señal. La relación
transición y compuestos orgánicos
concentración señal se suele
altamente conjugados. La absorción
representar en una gráfica a la que se
de radiación ultravioleta o visible por
le conoce como curva de calibración o
una especie atómica o molecular M se
curva de calibrado. Es imprescindible
puede considerar como un proceso de
que la señal analítica utilizada
dos etapas, la primera de ellas
mantenga una relación proporcional
consiste en una excitación electrónica
con la concentración. Las señales más
M + hν → M*.. Los espectros
utilizadas son aquellas cuya relación
ultravioleta de los hidrocarburos
con la concentración es lineal, al
aromáticos se caracterizan por tres
menos en el rango de trabajo. Por
grupos de bandas cuyo origen son las
ejemplo, una de las propiedades más
transiciones π→π*, Algunos aniones
utilizadas es la absorbancia (que suele
inorgánicos presentan picos de
mantener una relación lineal con la
absorción ultravioleta que son
concentración de solutos en
consecuencia de las transiciones
disoluciones. Al ser una relación de
n→π*, Los iones de la mayoría de los

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tipo específico de curva de calibración 𝑇 = 10−1
se conozca también como recta de
calibración. T= 0.1 →%T=10%

 Algunos espectrofotómetros
tienen escalas que indican
absorbencia o porcentaje de
transmitancia. ¿Cuál sería la lectura de
absorbencia para 20% T? ¿Y para CONCLUSIONES
80% T? ¿Cuál sería la lectura de
transmitancia para 0,25 de  La cantidad de radiación
absorbancia? ¿Y para 1,00 de electromagnética absorbida por un
absorbancia? analito se puede relacionar
cuantitativamente con la concentración
R/= La espectrofotómetros tienen de dichas sustancias en solución. La
escalas que indican absorbancia o transmitancia (T) se define como la
porcentaje de transmitancia para una fracción de radiación incidente
absorbancia de 20% T la lectura es de trasmitida por la disolución. Si la
A= 0.7 (a), para un 80% T es de A=0.1 potencia radiante que incide sobre la
(b), para un 0,25 es de %T= 56.23(c), disolución es Po y P la potencia
y por último la lectura de absorbancia radiante que sale.
para un 1,00 es de %T=10%(d).  El conocer el adecuado uso del
espectrofotómetro permitió obtener en
a) %T=20% →A el laboratorio resultados con alta
b) %T=80% →A calidad analítica en las mediciones que
c) A=0.25→T son emitidas por éste.
d) A=1→T  Se determinó la longitud de
onda óptima de las soluciones
a) A= -Long 0.2 coloreadas teniendo como resultados,
concluyendo que los datos obtenidos
A= 0.7 experimentalmente, se encuentran
dentro de los datos teóricos.
b) A= -Long 0.8  La probabilidad de absorción en
una longitud de onda está
A= 0.1 caracterizada por el coeficiente de
absorción molar a esa longitud de
c) A= 0.25=-LongT→𝑇 = 10−0.25 onda. Si la luz de intensidad I0 pasa a
través de una sustancia de espesor d
T=0.562 (en cm) y concentración molar c, la
intensidad de la luz transmitida
%T= 56.23 obedece la Ley de Lambert-Beer:

d) 1= -Long T

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 REFERENCIAS

1. Martínez, L. (2018). Manual

practica de laboratorio química
orgánica. Casanare, Yopal, 37-
41.
2. Vargas, L., Camargo, J. (2012).
Manual prácticas de laboratorio
químico. Universidad industrial
de Santander. 11-13.

*Estudiantes de Ingeniería Ambiental UNISANGIL