DETERMINACIÓN DE ETANOL EN BEBIDAS ALCOHÓLICAS POR EL

MÉTODO DEL ESTÁNDAR INTERNO

INTRODUCCIÓN

Cuando en cromatografía de gases se utilizan métodos de cuantificación

absolutos, es necesario INYECTAR CANTIDADES EXACTAS de la mezcla
estándar y de la muestra. Además, la exactitud de los resultados también va a
depender de la limpieza del detector, de la estabilidad del flujo del gas portador
y de la estabilidad de las temperaturas del inyector, la columna y el detector.

Para evitar estos problemas operacionales se utiliza el método del Estándar

Interno en el cual LA MUESTRA Y EL ESTÁNDAR DE REFERENCIA SE
COMBINAN EN UNA SOLA INYECCIÓN.

En este método se prepara una mezcla estándar que contenga solamente los
compuestos que interesa cuantificar en la muestra más un compuesto
adicionado que no está originalmente presente en la muestra. Este
compuesto adicionado (en los estándares y en la muestra) se llama ESTÁNDAR
INTERNO y sirve como REFERENCIA para trabajar en forma relativa.

El compuesto utilizado como ESTÁNDAR INTERNO debe cumplir las siguientes

condiciones:

 No estar originalmente presente en la muestra.

 No reaccionar con ninguno de los compuestos de la muestra.

 Ser soluble en la muestra a la cual se va a adicionar.

 Que la columna sea capaz de separarlo de los demás componentes de la

muestra.

 Dar señal en el detector.

 Ser preferiblemente de la misma familia química de los componentes de

la muestra, aunque esta condición no es indispensable.
El empleo del estándar interno permite comparar el área del pico del analito con el
área del pico del estándar interno (adicionado). Esto tiene la ventaja de eliminar
en gran parte los efectos causados en el detector por pequeñas variaciones en las
condiciones de operación, tales como la velocidad de flujo del gas portador y la
temperatura de la columna. Se espera que cualquier pequeña variación afectará el
área de ambos picos de igual manera y este efecto se eliminará al emplear la
relación de áreas en la curva de calibración.

DETERMINACIÓN DE ETANOL EN UNA BEBIDA ALCOHÓLICA, UTILIZANDO

2-BUTANOL COMO ESTÁNDAR INTERNO. CG-MS/MS

PROCEDIMIENTO

1- Verifique que las siguientes condiciones instrumentales sean las adecuadas

para el análisis de los compuestos que se van a separar:

 Afinidad entre la fase estacionaria y los compuestos a separar

 Temperatura del inyector

 Temperatura de la columna

 Tipo de detector

 Temperatura del detector

Las condiciones cromatográficas del Cromatógrafo de gases TRACE GC ULTRA

acoplado a un espectrómetro de masas, son las siguientes:

Condiciones cromatográficas
Columna TG-5SILMS
Horno (Columna) 30°C (4 min)
100°C/min – 120°C
(1 min)
Post-run 250°C (2 min)
Modo de inyección Split
Flujo de Split 200 mL/min
Volumen de Inyección 0,1 uL
Temperatura Inyector 130°C
Modo GC Flujo constante
Flujo 2 mL/min
Modo MS SIM
Temperatura línea de 150°C
transferencia
Tiempo corrida 7,9 minutos
 Cromatograma esperado:
RT: 0.00 - 5.93
100 NL:
Etanol 9.03E8
95 TIC MS
Etanol25
90

85

80
Butanol
75
Agua
70

65

60
Relative Abundance

55

50

45

40

35

30

25

20

15

10

0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5
Time (min)

2- PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES ESTÁNDAR

a- Prepare las siguientes soluciones en matraces de 25 mL, aforando con

agua:

ESTÁNDAR ETANOL 2-BUTANOL

(estándar interno)
1 0.5 mL 0.5 mL
2 1.0 mL 0.5 mL
3 1.5 mL 0.5 mL
4 2.0 mL 0.5 mL
5 2.5 mL 0.5 mL

b- Inyecte al cromatógrafo 0.1 μL de cada una de las soluciones estándar.

c- Mida las áreas de los picos correspondientes al ETANOL y al 2-BUTANOL.

3- PREPARACIÓN DE LA SOLUCION DE LA MUESTRA

a- Tome alícuotas adecuadas de las muestras que usted va a analizar,

adiciónele a cada una 0.5 mL de 2-BUTANOL (estándar interno) y afórelas con
agua hasta 25 mL.

b- Inyecte al cromatógrafo 0.1 μL de cada solución de las muestras.

c- Mida las áreas de los picos correspondientes al ETANOL y al 2-BUTANOL.

CÁLCULOS

Construya la CURVA DE CALIBRACIÓN graficando:

VS %V/V de Etanol

Calcule la cantidad de ETANOL presente en las muestras analizadas.

PREGUNTA

En el método de ADICIÓN DE ESTÁNDARES, explicar detalladamente cada

uno de los siguientes puntos:

1. El fundamento teórico

2. La preparación de las soluciones estándar

3. La preparación de la muestra

4. ¿Qué variables se grafican en la Curva de Calibración?