RECUENTO TOTAL DE

BACTERIAS AEROBIO MESOFILAS (RTBAM)

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Determinar la calidad higiénica del quesillo

OBJETIVO ESPECIFICO

 Determinar la calidad higiénica del quesillo por el método RTBAM.

 Practicar las regla para el conteo de colonias.
 Observar si la cantidad presente en el alimento está en el rango permitido y verificar su
rango.
FUNDAMENTO TEÓRICO
En el recuento de microorganismos aerobios mesofilos se estima la flora total, pero sin especificar el
tipo de germen.

Se puede determinar la calidad sanitaria de los productos analizados indicando, además de las
condiciones de higiénicas de la materia prima, la forma como fueron manipulados durante su
elaboración.

Un recuento bajo de aerobios mesófilos no implica o no asegura la ausencia de patógenos o

sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa presencia de flora
patógena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por fermentación, no son
recomendables recuentos elevados.

Su significado es diverso:
 Materia prima excesivamente contaminado.
 Deficientes métodos de manipulación durante la elaboración de los productos.
 Alto recuento suele ser signo de inmediata alteración del producto.
 Tasa superior de 106 -107 gérmenes por gramo suelen ser ya inicio de descomposición.
MATERIALES EQUIPOS

- 3 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 3 cajas petri - autoclave
- 5 pipetas de 2ml REACTIVOS
 - 1 pipeta de 10ml
- Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar PCA
- 1 bolsa de Stomacher - muestra ( quesillo)
- 1 mechero
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%
METODOLOGIA

 Preparar el agar PCA 100 ml

 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica en el
autoclave por 15 min. a 121°C
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3, -4, -5
respectivamente
 Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa de
Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar enfriar
a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar reposar
 Rotulamos -1, -3 y -5 en las placas respectivamente
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1) agregamos 1
ml a la placa -1 y 1ml al tubo -2 y desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -2 y pipeteamos 1ml al tubo -3, desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -3 y pipeteamos 2ml de esta, 1ml a la placa -3 y 1ml al tubo
-4,desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -4 y pipeteamos 1ml al tubo -5, desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -5 y pipeteamos 1ml a la placa -5
 Esperamos que el agar enfríe a 50-60°C aproximadamente
  Vertimos el agar PCA aproximadamente 25ml a cada placa y homogenizamos en
forma circula a ambos sentidos, esperamos que gelifique para después incubar
 Una vez gelificado llevamos las placas invertidas a incubar por 24-48hrs a 37°C
 Lavamos todos los materiales usados y desinfectamos el mesón
 Pasada las 24 y 48hrs realizamos el recuento total de bacterias para hacer cálculos y
hallar resultados

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Parámetro: RTBAM Rango: 25-250 colonias

Medio: PCA Muestra: apanado de carne

Primer conteo:24 horas

--2 -3 -4

Incontable Incontable 720

Segundo conteo: 48 horas

 --2 -3 -4

Incontable Incontable 810

Cálculos.- primer conteo

RTBAM = Nº de colonias*dilución
3
RTBAM = 720*10

RTBAM = 7.2*105 UFC/g

Cálculos.- segundo conteo

RTBAM = Nº de colonias*dilución

3
RTBAM = 810*10

RTBAM = 8,1*105 UFC/g

Resultados.-

PARAMETRO RESULTADO REFERENCIA

RTBAM 8,1*105 UFC/g 1,*104 UFC/g

 Pasado las 24 horas se pudo observar en nuestras placas Petri estaba bien
homogenizado el agar en la placa -2 era incontable en la placa -23era incontable
y en la placa -3 se podía contar las colonias.

 Según el rango de colonias establecida para este parámetro se observó q en la

placa -2 es incontable y sobrepasa el rango, la placa-3 es incontable sobrepasa el
rango y por ultimo nuestra placa -3 se podía contar pero no entraba al rango
permitido según las colonias.
 El error que se cometió es que teníamos que hacer diluciones hasta -5 donde si
entraba al rango de las colonias

CONCLUSIONES
 Pudimos determinar correctamente la calidad higiénica de nuestra muestra
(de quesillo).
  Comparando con el análisis microbiológico nuestro quesillo no está en estado
de putrefacción rango de nuestro RTBAM es aceptable según la norma española
.

COLIFORMES TOTALES

Y FECALES
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Evaluar la calidad del quesillo mediante la búsqueda de microorganismos coniformes

totales y coniformes fecales.
OBJETIVO ESPECÍFICA

 Por medio de la técnica recuento en placas determinar la cantidad de coniformes

hallado en el quesillo observando los medios de cultivo.
 Utilizar adecuadamente los materiales y equipos para analizar los microorganismos.
 Realizar de manera correcta el recuento de bacterias típicas en las placas de
crecimiento
 Detectar si la muestra traída es apta para el consumo humano.
FUNDAMENTO TEÓRICO
Los coniformes fecales son subgrupos de los coniformes totales, capaces de fermentar la lactosa a
44.5 grados en vez de 37 grados como lo hacen los coniformes totales.

Aproximadamente el 95%de los grupos de los coniformes presentes en heces están formados por
escherichia coli y ciertas especies de de klebsiella .ya que los coliformes fecales se encuentran casi
exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se consideran que reflejan mejor la
presencia de contaminación fecal. Estos últimos se denominan termo tolerantes por su capacidad de
soportar temperaturas más elevadas. Esta es las características que diferencia a coliformes totales y
fecales.

Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no sólo sobreviven, sino que se multiplican, por lo que
en los alimentos el grupo coliforme adquiere un significado distinto al que recibe en el agua. En
productos alimenticios que han recibido un tratamiento térmico (pasteurización, horneado, cocción,
etc.), se utilizan como indicadores de malas prácticas sanitarias.

El grupo de bacterias coliformes totales comprende todos los bacilos Gramnegativos aerobios o
anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con producción de gas en un lapso
máximo de 48 h. a 35°C ± 1ºC.

El grupo de coliformes fecales, está constituido por bacterias Gram-negativas capaces de fermentar
la lactosa con producción de gas a las 48 h. de incubación a 44.5 ± 0.1°C. Este grupo no incluye una
especie determinada, sin embargo la más prominente es Escherichia coli.
Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar
presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan de organismos
productores de enfermedades.

MATERIALES EQUIPOS

- 6 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 4cajas petri - autoclave
- 6 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar VRBL
- 1 bolsa de Stomacher - muestra (carne apanado )
- 1 mechero - caldos CVBB y EC
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%
METODOLOGIA

 Preparar el agar VRBL 100 ml

 Preparar 40 ml de caldo CVBB y EC
 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica en el
autoclave por 15 min. a 121°C
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3, -4, -5
respectivamente
 Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa de
Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar enfriar
a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar reposar
  Rotulamos -1, -3 y -5 en las placas respectivamente
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1) agregamos 1
ml a la placa -1 y 1ml al tubo -2 y desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -2 y pipeteamos 1ml al tubo -3, desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -3 y pipeteamos 2ml de esta, 1ml a la placa -3 y 1ml al tubo
-4,desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -4 y pipeteamos 1ml al tubo -5, desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -5 y pipeteamos 1ml a la placa -5
 Esperamos que el agar enfríe a 50-60°C aproximadamente
 Vertimos el agar VRBL aproximadamente 20ml a cada placa y homogenizamos en
forma circula a ambos sentidos, esperamos que gelifique para después incubar
 Una vez solidificado verter un poco mas de agar para que cubra toda la placa y los
microorganismos crezcan en medio anaeróbico
 Una vez gelificado llevamos las placas invertidas a incubar por 24 hrs a 35 ± 2 °C
 Lavamos todos los materiales usados y desinfectamos el mesón
 Pasada las 24 hrs realizamos el recuento total de bacterias típicas (color rojo purpura
con un halo de precipitado)
 Elegir tres colonias típicas para sembrar en los caldos
 Tomar un poco de la colonia elegida con un asa previamente esterilizada en el
mechero al rojo vivo, sembrar primero en el caldo EC y después volver a tomar la
muestra para sembrar sin quemar en el caldo CVBB, repetir el mismo procedimiento
para las tres colonias elegidas
 Incubar el caldo CVBB A 35 ± 2 °C y el caldo EC a 44.5 °C durante 24 – 48°C
 Pasado el tiempo de incubación realizar los cálculos y resultados

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Datos.-

Parámetro: COLIFORMES Y FECALES Rango: 15 – 150 colonias

Medio: VRBL Muestra: quesillo

--1 -2 -3

Incontable Incontable 22

Caldo EC 24 CF Positivo Positivo positivo

Caldo VBB 24 CF Positivo Positivo Positivo

INVESTIGACION DE ESCHERICHIA COLI

 Se preparó el agar EMB 100 ml.

 De los caldos EC positivo se tomó de cada caldo y se sembró en las tres placas que
tenían agar EMB.
 Donde se llevó a encubar por 24 horas a 37 de temperatura.
 Donde se formaron colonias de verde metálico con precipitado.
 Después se preparó la triptona donde de las colonias típicas que teníamos se sembró
en la triptona y se lo llevo a encubar por 24 horas.
 Después se hiso la prueba de indol para saber si hay presencia de eco lis.
Cálculos.-
𝑡𝑢𝑣𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠
CF O CT = N de colonias × × dilucion
𝑡𝑢𝑣𝑜𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
3
CF =22× × 103
3

CF=2.2× 104 UFC/g

3
CT =22× × 103
3
CT=2.2× 104 UFC/g
𝑡𝑢𝑣𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠 𝑖𝑛𝑑𝑜𝑙 ±
EC= N de colonias × × × 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛
𝑡𝑢𝑣𝑜𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 𝑔𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜
3 1
EC =68× × × 102 EC =2.27× 103 UFC/g
3 3

Resultados.-

PARAMETRO RESULTADO REFERENCIA

COLIFORMES 2,2*104 UFC/g 5,*102UFC/g

ESCHERICHIA COLI 3 UFC/g

OBSERVACIONES
 Pasado las 24 horas se pudo observar que en la placa -1 era incontable en la placa -2
se podía apreciar mejor las colonias típicas que son rojo purpuras con un precipitado
donde si entraba al rango y por último en la placa -3 también entraba al rango de las
colonias.
 Después se tomó de la PLACA -3 tres colonias típicas donde se sembró a los caldos
calco ECOLI y CALDO VBB donde pasado las 24 horas solo reaccionaron dos tubos
con presencia de gas los cual se esperó otras 24 horas para ver si reaccionara el
ultimo tuvo.
Par la determinación de EC. se tomó los tubos que tenían presencia de gas de los caldos
ecolis donde se sembró en las placas que tenían agar EMB Pasado las 24 horas se pudo
observar que en la placa -1 no estaban distribuidos tan bien en placa -2 se podía apreciar
mejor las colonias típicas que son verde metálicos des pues se sembró en agua de
triptona en tres tubos en lo cual solo dio en un tubo indol positivodonde se pudo apresiar en
la parte superior una cinta de color rojo.

CONCLUSIONES
Comparando con el rango de aceptabilidad según la norma BOLIVIANA nuestro resultado
sobrepasa el rango establecido asi que el alimento analizado no está dentro de la norma
sanitaria establecida y no es recomendable el consumo

MOHOS Y LEVADURAS
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Realizar adecuadamente mediante el método de conteo de placas, el número de mohos y

levaduras presentes en el quesillo destinado al consumo humano.
 Identificar las características macroscópicas de mohos y levaduras.

OBJETIVO ESPECIFICO

 Determinar la calidad higiénica del quesillo.

 Comprender el fundamento de todas las etapas del método de detección y
cuantificación de mohos y levaduras en alimentos.
 Realizar de manera correcta el recuento de mohos y levaduras en las placas de crecimiento.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Se considera como moho determinado tipo de hongo multicelular filamentoso, dotado de micelios
verdaderos y microscópicos, mientras que las levaduras son aquellos hongos con células
independientes que cresen formando agregados y que pueden presentar diferentes aspectos
celulares, desde globosas hasta cilíndricas, pasando por formas alargadas u ovoides. Las levaduras
en medio solido generan colonias semejantes a las que se aprecian en las bacterias. Otra diferencia
entre ambos grupos resiste en su identificación. Las levaduras al igual que las bacterias, pueden ser
sometidas a diferentes pruebas bioquímicas que permita su identificación. Sin embargo los mohos
raramente pueden ser clasificados de acuerdo a este criterio, siendo más habitual su clasificación de
acuerdo a caracteres morfológicos observados por microscopia.

Los hongos y las levaduras se encuentran ampliamente distribuidos en el ambiente, pueden

encontrarse como flora normal de un alimento o como contaminante en equipos mal
sanitizados.ciertas especies de hongos y levaduras son útiles en la elaboración de algunos alimentos,
sin embargo también pueden ser causantes de la descomposición de los alimentos.

ESTRUCTURA Y APARIENCIA;

Las levaduras son organismos que están formados por una célula, que en general es redonda u
ovalada, mientras que los mohos tienen una estructura completamente multicelular que, visto a
simple vista es completamente diferente al de las levaduras. Los mohos tienden a ser mucho más
colorido y pueden tener una textura lanosa o velluda mientras que una colonia de levaduras es
incolora y generalmente lisa.

Los hongos y levaduras pueden utilizar ciertos sustratos como pectinas, carbohidratos como
polisacáridos, ácidos orgánicos, proteínas y lípidos. También pueden causar problemas a
través de: (a) síntesis de metabolitos tóxicos (micotoxinas), (b) resistencia al calor,
congelamiento, antibióticos o irradiación y (c) habilidad para alterar sustratos no favorables
permitiendo el crecimiento de bacterias patógenas. Pueden también causar malos olores y
sabores y la decoloración de las superficies de alimentos

MATERIALES EQUIPOS

- 2 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 4 cajas petri - autoclave
- 4 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar PDA
- 1 bolsa para Stomacher - muestra (apanado de carne )
- 1 mechero - Acido tartárico
- Cucharilla, encendedor - Oxitetraciclina
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%
METODOLOGIA

 Preparar el agar VRBL 100 ml

 Preparar 40 ml de caldo CVBB y EC
 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica en el
autoclave por 15 min. a 121°C
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3, -4, -5
respectivamente
  Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa de
Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar enfriar
a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar reposar
 Rotulamos -1, -3 y -5 en las placas respectivamente
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1) agregamos 1
ml a la placa -1 y 1ml al tubo -2 y desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -2 y pipeteamos 1ml al tubo -3, desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -3 y pipeteamos 2ml de esta, 1ml a la placa -3 y 1ml al tubo
-4,desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -4 y pipeteamos 1ml al tubo -5, desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -5 y pipeteamos 1ml a la placa -5
 Esperamos que el agar enfríe a 50-60°C aproximadamente
 Vertimos el agar VRBL aproximadamente 20ml a cada placa y homogenizamos en
forma circula a ambos sentidos, esperamos que gelifique para después incubar
 Una vez solidificado verter un poco mas de agar para que cubra toda la placa y los
microorganismos crezcan en medio anaeróbico
 Una vez gelificado llevamos las placas invertidas a incubar por 24 hrs a 35 ± 2 °C
 Lavamos todos los materiales usados y desinfectamos el mesón
 Pasada las 24 hrs realizamos el recuento total de bacterias típicas (color rojo purpura
con un halo de precipitado)
 Elegir tres colonias típicas para sembrar en los caldos
 Tomar un poco de la colonia elegida con un asa previamente esterilizada en el
mechero al rojo vivo, sembrar primero en el caldo EC y después volver a tomar la
muestra para sembrar sin quemar en el caldo CVBB, repetir el mismo procedimiento
para las tres colonias elegidas
 Incubar el caldo CVBB A 35 ± 2 °C y el caldo EC a 44.5 °C durante 24 – 48°C
 Pasado el tiempo de incubación realizar los cálculos y resultados

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Parámetro: MOHOS Y LEVADURAS Rango: 10 – 150 colonias

Medio: PDA Muestra: QUESILLO

3 DIA 𝟏𝟎_𝟏 𝟏𝟎_𝟑 𝟏𝟎_𝟒

MOHOS 236 75 8

LEVADURAS 60 12 1

5 DIA 𝟏𝟎_𝟏 𝟏𝟎_𝟑 𝟏𝟎_𝟒

 MOHOS 245 75 8

LEVADURAS 64 14 2

CALCULOS Y RESULTADOS .-

MOHOS O LEVADURAS= Nº de colonias*dilución

5 DIA:

MOHOS =75× 102 MOHOS =7.5× 103 UFC/g

LEVADURAS =67× 101 LEVADURAS =6.7× 102 UFC/g

Resultados.-

PARAMETRO RESULTADO REFERENCIA

COLIFORMES 2,2*104 UFC/g 5,*102UFC/g

ESCHERICHIA COLI 3 UFC/g

OBSERVACIONES
 Se observó un gran crecimiento de mohos y levaduras hasta los 7 días era un poco
más difícil el conteo de los mohos y de las levaduras por que crecieron mucho más .
 Las hifas y los micelios de los mohos eran de color blanco o marfil y las levaduras
eran cremosas
CONCLUSIONES
- La muestra no es apta para el consumo ya que tiene demasiada cantidad de mohos
y levaduras.

INVESTIGACION DE SALMONELLA
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Determinar la presencia o ausencia de salmonella en el quesillo.

OBJETIVO ESPECIFICO

 Determinar la calidad higiénica del quesillo

 Sembrar correctamente en la serie bioquímica

FUNDAMENTO TEÓRICO
Salmonella es un género de bacteria, pertenecientes a la familia enterobacteriae, integrado por
células en forma de bacilos, no esporuladas y ha bitualmente móviles mediante flagelos
peritricos.son bacterias Gram - negativas de metabolismos anaerobio facultativo, que reducen los
nitratos a nitritos y que fermentan la glucosa produciendo ácido y gas. Raramente fermentan la
lactosa o la sacarosa.

La identificación y /o confirmación de las colonias presuntivas de salmonella se realiza mediante

pruebas bioquímicas que utilizan medios diferentes como el agar entérico hektoen y el agar xilosa
lisina desoxicolato(XLD ). Las colonias típicas de este microorganismo son rosadas, pueden presentar
o no un centro negro debido a la producción de ácido sulfhídrico en agar XLD y verdosa o verde
azulado con o sin centros negros en el agar hektoen.en algunos casos son completamente negras.

Simultáneamente, se puede llevar a cabo en medio de agar triple hierro (TSI) y el agar lisina de
hierro (LIA). Prueba como urea, de producción de indol, crecimiento de caldo KCN fermentación de
dulcitol o la utilización de malo nato de sodio también sirve como pruebas bioquímicas
complementarias.

MATERIALES EQUIPOS

- 5 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 2 cajas petri - autoclave
 - 1 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar XLD
- 1 bolsa de Stomacher - muestra (Rabadilla de pollo)
- 1 mechero - Serie bioquímica
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%
METODOLOGIA

 Preparar el agar XLD 70 ml, la serie bioquímica y el caldo de tetrationato

 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, sol. Fisiológica en el autoclave
por 15 min. a 121°C
 Preparar el agar y el caldo porque no se autoclavan
 Veritr el agar en las placas para que gelifique y guardar en la conservadora hasta
usarla
PREENRIQUECIMIENTO

 Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa de

Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar enfriar
a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre, dejar reposar
 incubar por 24hrs a 35 ± 2 °C para revivificar las bacterias
ENRIQUECIMIENTO

 Pipetear 1 ml de la solución madre a caldo de tetrationato ya preparado(10ml de

caldo de tetrationato añadir 0.1ml de verde brillante y 0.2 ml de yodo)
 Dejar incubando el caldo de tetrationato a 42.5 °C por 24 hrs
AISLAMIENTO

 Estriar en las placas de XLD con un asa de punta redonda del caldo de
tetrationato(antes agitar)
 Incubar las placas de XLD en la incubadora a 35±2 °C por 24 a 48 hrs si es que no
presenta crecimiento de colonias negras
 Elegir una colonia aislada de la placa de XLD para sembrar en las serie bioquímica
CONFIRMACION

 Primero sembrar en TSI (estría, picadura) y luego en LIA ( picadura, estría) sin
quemar ni tomar otra vez la colonia
 Tomar un poquito de colonia sembrar en MIO (picadura) después en CS (estría)
tomando otra vez la colonia
 Dejar incubar toda la serie bioquímica a 35±2°C por 24 hrs
 Observar los cambios de color, presencia de gas y sulfatación para ver la presencia
de salmonella
DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

TERATIONATO
Datos.-

Parámetro: SALMONELLA MUESTRA : quesillo

Serie bioquímica
  Para determinar la salmonela en la serie bioquímica lo que determina la presencia de
salmonela es kia y lia.
 KIA glucosa positivo
 Lactosa negativa
 Gas positivo
 Sulfuro positivo
 LIA Sulfuro positivo
 Descarboxilacion dela lisina positiva

Resultados.-

SAL = PRECENSIA/25gr
PARAMETRO RESULTADO REFERENCIA

COLIFORMES 2,2*104 UFC/g 5,*102UFC/g

OBSERVACIONES
  El estriado en la placa de XLD no estuvo perfectamente realizado
 Se sobrecargo el asa para sembrar en kia y el medio cambio todo a negro
CONCLUSIONES
 Se determinó correctamente la práctica y el resultado obtenido fue
Presencia/25 gr de muestra, esto demuestra el mal estado del alimento analizado y
representa un peligro para la sociedad ya que puede causar enfermedades.

INVESTIGACION Y RECUENTO DE CLOSTRIDIUM

SULFITO – REDUCTORES

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Analizar los resultados obtenidos por la muestra analizada conforme a la

normatividad
OBJETIVO ESPECIFICO

 Determinar la calidad higiénica de mi quesillo

 Realizar de manera correcta el recuento de bacterias en los tubos de crecimiento
 Comparar los resultados obtenidos con la norma y verificar su rango
FUND AMENTO TEÓRICO
El grupo bacteriano de los sulfitos –reductores está integrado por gérmenes pertenecientes genero
clostridium, que tiene en común reducir el sulfito a sulfuro.

Se suele usar usar para apreciar la calidad higiénica del agua y productos animales o de origen
animal. Su número es escaso en productos frescos. La capacidad de esporular de los
microorganismos pertenece a este grupo les confirme una gran resistencia.

Algunas de las especies del género Clostridium tienen la propiedad de reducir el ion sulfito a
sulfuro que en presencia de citrato férrico o cualquier otra sal (metales
pesados) forman colonias de color negro. El recuento de esporas es considerado
como el indicador más importante de las bacterias anaerobias capaces de formar
esporas. Estas estructuras de supervivencia suelen presentarse en alimentos enlatados
que no han sido producidos bajo condiciones de calidad en cada proceso y malas
condiciones de almacenamiento

MATERIALES EQUIPOS

- 9 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 6 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar SPS
- 1 bolsa de Stomacher - muestra (quesillo)
- 1 mechero
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%
- parafina
METODOLOGIA

 Preparar el agar SPS 60 ml

 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica y parafina
en el autoclave por 15 min. a 121°C
 Verter 10ml de agar SPS a cada tubo
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3, -4, -5
respectivamente
  Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa de
Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar enfriar
a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar reposar
 Rotulamos -1, -2, -3 y -4 en los tubos con agar respectivamente
 Dejar enfriar el agar a 50 – 60 °C
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1) agregamos
1ml al tubo -2, el otro verter al tubo con agar desde el fondo del tubo hacia arriba ir
soltando los 1ml poco a poco uniformemente y desechamos la pipeta
 Realizar el mismo procedimiento hasta el tubo -4
 Después verter la parafina a cada tubo con agar cerca de 1 cm de altura sin agitar
mucho
 Incubar en un recipiente donde no exista la presencia de aire a 35 ± 2°C por 48 hrs
(ayudarnos con una vela)
 Abrir el recipiente, realizar el recuento de colonias y hacer los resultados
DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Datos.-

Parámetro: CLOSTRIDIUM Rango: 15 – 150 colonias

Medio: SPS Muestra: miel de abeja

--1 -2 -3

O 0 o

Resultados.-
 PARAMETRO RESULTADO REFERENCIA

CLOSTRIDIUM 2,2*104 UFC/g 5,*102UFC/g

OBSERVACIONES
 No hubo ningún cambio en el agar dentro las condiciones establecidas

CONCLUSIONES
 El alimento analizado no presenta clostridium, por tanto, es apto para el consumo
humano