Métodos de estudio de la

Célula II

Objetivo:
Describir las técnicas más comunes utilizadas
para estudiar las células.

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 Disgregación de tejidos - homogenización

Método Físico:
Ultrasonido

Método Químico:
Detergentes

Método Mecánico:
Vástagos de vidrio o teflón

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1.- Cultivos Celulares: células ex vivo

Desinfección

Aislación del tejido

Incubación y Crecimiento

Las células se pueden cultivar en el laboratorio (in vitro)

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 Se puede utilizar en:
ü  Industria farmacéutica y biotecnológica.
ü  Producción de anticuerpos y proteínas que
los microorganismos son incapaces de
sintetizar .
ü  toxicity screening.

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2.- Aislamiento de los componentes
celulares.

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 a.- Centrifugación Diferencial
Fraccionamiento Celular

Fundamento

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 Fraccionamiento Celular

Centrifugación

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 b.- Cromatografías en columna
Moléculas fraccionadas, eluídas
y recogidas en distintos tubos

Principio

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1.- Cromatografía de intercambio iónico

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2.- Cromatografía de filtración en gel

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3.- Cromatografía de afinidad

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c.- Estudio de las Proteínas

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Desnaturalización y renaturalización de una
proteína:
Enlace fuerte: Covalente

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 Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida
(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
SDS-PAGE)

Fundamento

Dodesil sulfato sódico (SDS): Rompe fuerzas no

covalentes en las proteínas, desnaturalizándolas,
provocando que estas moléculas proteicas pierdan
su conformación nativa.
Mercaptoetanol: Agente reductor rompe los
enlaces disúlfuro.

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Electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS

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Electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS

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 Bibliografía
Capítulo 1 y 4

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 Organización Química
de la Célula

Objetivo:
Describir los principales componentes químicos de la célula.

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Porcentaje relativo de algunos átomos de la Tierra
Porcentaje relativo de algunos átomos esenciales para los
seres vivos

Macroelementos
Microelementos
Trazas
Porcentaje relativo de moléculas en una célula procarionte

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 Niveles de Organización
Átomos
Moléculas
Macromoléculas
Organizaciones supramoleculares

Organelos
Célula Eucarionte
Tejido
Órgano
Sistemas

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 Átomo

Los electrones se
encuentran en
orbitales
electrónicos

El átomo está formado por un núcleo rodeado por una nube de electrones
Enlaces Químicos y Fuerzas Atractivas

Enlace Covalente
Enlaces
Enlace Iónico

Puente de Hidrógeno
Fuerzas
Interacciones Hidrofóbicas débiles o
atractivas
Fuerzas de van der Waals

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1.- Enlace Covalente

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a) Enlace Covalente: No polar

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b) Enlace Covalente: Polar

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2.- Enlace Iónico

Las fuerzas electrostáticas (iónicas) resultan de la atracción electrostática entre dos

grupos ionizados con carga opuesta, como un grupo carboxilo (-COO- ) y un grupo amino
(-NH3+). En el agua, estas fuerzas son muy débiles.

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 Catión Anión

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3.- Puente de Hidrógeno

Los puentes de hidrógeno resultan de la atracción

electrostática entre un átomo electronegativo (O o N) y un
átomo de hidrógeno que se encuentra unido
covalentemente a un segundo átomo electronegativo.
4.- Interacciones Hidrofóbicas

Las atracciones hidrofóbicas provocan que grupos no polares, como cadenas

hidrocarbonadas, se asocien unas con otras en un medio acuoso.
5.- Fuerzas de Van der Waals

Las fuerzas de van Der Waals son fuerzas atractivas de corto alcance entre grupos
químicos que se encuentran muy cercanos. Tienen su origen en pequeños
desplazamientos de carga.

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Dos macromoléculas con superficies complementarias se pueden unir fuertemente por
medio de interacciones no covalentes (débiles)

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 Fuerzas de los enlaces y atracciones débiles

+ fuerte

+ débil
 Niveles de Organización
Átomos
Moléculas
Macromoléculas
Organizaciones supramoleculares

Organelos
Célula Eucarionte
Tejido
Órgano
Sistemas

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 Agua

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 Los puentes de hidrógeno confieren al agua sus
propiedades extraordinarias

•  Solvente Universal
•  Tensión superficial
•  Elevado valor de calor específico
•  Alta t° evaporación
La tensión superficial del agua

Depende la capacidad de
adhesión de las moléculas
de agua y de la cohesión de
las moléculas de agua entre
si.

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 Elevado Calor Específico y de Vaporización

Almacena y
absorbe gran
cantidad de calor
que tarda en
perderse

Permite al citosol servir

de protección frente a
cambios bruscos de
temperatura. Amortigua
y regula los cambios
térmicos ambientales.

Elevado Calor Específico (1 cal/g x °C) (calor necesario para elevar la temperatura de 1 g de agua en 1
°C concretamente desde 15 a 16 °C)

Elevado Calor de Vaporización: (calor necesario para vaporizar 1 g de agua: 536 cal/g). Permite
eliminar el exceso de calor, evaporando cantidades relativamente pequeñas de agua.
 El agua como solvente

Solubilidad

Molécula hidrofílica (polar)

Debido a su elevada constante dieléctrica, es el mejor disolvente para todas

aquellas moléculas polares no iónicas.
 Hidrofílicas (Polar)

Sustancias iónicas: NaCl Sustancias polares: urea

(puentes de hidrógenos)

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 Hidrofóbicas (No polar)
Los compuestos apolares fuerzan cambios energéticamente desfavorables en
la estructura del agua

Micela
Zona apolar

Anfipática

En un ambiente acuoso, las moléculas no polares o partes no polares de moléculas más grandes están bajo
el efecto hidrofóbico, reduciendo la extensión de sus contactos directos con las moléculas de agua

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Ejemplos: moléculas polar, no-polar y anfipática

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 Algunas moléculas polares forman ácidos y bases en agua

a) Ácidos

Célula > ácidos débiles (-COOH grupo carboxilo)

ion hidrógeno

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b) Bases

Reduce indirectamente los iones de hidrógenos

Célula parcialmente disociadas: Bases débiles.

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 La escala de pH representa las concentraciones
de H+ y OH-

Se define el pH de una disolución como el

logaritmo negativo de la concentración de
iones de hidrógeno.

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 Carbono

HC

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Estructuras ramificadas cadenas

Anillos

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Monómeros

Oligómeros
Dímeros Tetrámeros

Trímeros Pentámeros
Polímeros

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Grupos Funcionales

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Las células poseen 4 grupos de moléculas
pequeñas:

Azúcar Aminoácidos

Nucleótidos Ácidos grasos

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Unidades de Construcción

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Formación de las Macromoléculas

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Formación de las Macromoléculas

Enlace covalente

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Resumen…
Macromoléculas

Biomoléculas

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 Niveles de Organización
Átomos
Moléculas
Macromoléculas (biomoléculas)
Organizaciones supramoleculares

Organelos
Célula Eucarionte
Tejido
Órgano
Sistemas

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Azúcares
(CH2O)n

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 Clasificación:
n° de átomos de carbono y grupo funcional

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a)  Monosacáridos
b)  Disacáridos
c) Oligosacáridos
d) Polisacáridos

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a) Monosacáridos

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b) Disacáridos

α  (1→4) enlace glucosídico

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Maltosa Sacarosa

Lactosa
c) Oligosacáridos

Glicoproteínas Glicolípidos
c) Polisacáridos
Amilopectina (almidón)

α (1→6)
ramificaciones

Glicógeno

α (1→4)
Uniones
lineales

Celulosa

β (1→4)
Uniones lineales
Aminoácidos
CHON(S)

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Clasificación de los Aminoácidos

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 Enlace peptídico

Condensación

Monómero + Monómero

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 Polipéptido

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Estructura Proteica

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1.- Estructura Primaria
2.- Estructuras secundarias

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α-helix
β-strands
Puentes de Hidrógenos

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3.- Estructuras Terciarias
• La estructura 3D y función de una
proteína depende de la secuencia de
amino ácidos.

• La estructura 3D se estabiliza mediante

enlaces disulfuro y fuerzas no covalentes.

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Estructura Terciaria: Enlaces de disúlfuro
4.- Estructura cuaternaria

La estructura cuaternaria se forma mediante la unión de enlaces débiles de varias

cadenas polipeptídicas con estructura terciaria (protómero) para formar un complejo
proteico.

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 Funciones de las Proteínas

Transporte : Hemoglobina, Lipoproteína

Movimiento : Dineína, Actina, Miosina
Defensa : Anticuerpos, Trombina
Estructura : Queratina, Colágeno
Reserva : Ovoalbúmina
Hormonas : Insulina, Hormona de Crecimiento
Enzimas : Hexoquinasa

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Funciones de las proteínas

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Lípidos
(Biomoléculas)

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 Ácidos grasos (Construcción y Energía)

CABEZA DE ÁCIDO CARBOHIDROXILICO HIDROFILICA

Insaturados
Saturados (Doble enlace)

COLAS HIDROCARBONADA HIDROFOBICA

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 Condensación de ácidos grasos + glicerol ] Triacilglicerol
neutras e hidrofóbicas

H 2C OH

HC OH

H 2C OH

glicerol

Esterificación de tres ácidos grasos con los tres hidroxilos del glicerol
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 Almacenamiento (ADIPOCITO)

Los triacilgliceroles (grasas) contienen tres ácidos grasos unidos a un glicerol.

Pueden ser liguales o diferentes ácidos grasos.

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 Esteroles

•  Precursor de Vitamina D (sintetizada a partir

del 7-deshidrocolesterol)

•  Precursor de hormonas sexuales y corticoídeas

• Testosterona y Estradiol
• Cortisol, Prednisona
• Aldosterona

•  Precursor de sales biliares

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Posicionamiento del colesterol en las membranas plasmáticas

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 Rol biológico de los lípidos

1. Moléculas de almacenamiento de energía 2. Cumplen funciones estructurales

2° mensajeros

Carotenoide retinal

3. Cubiertas impermeables 4. Funciones especiales.

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 Nucleótidos
CHONP

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Estructura de los nucleótidos

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1.- Bases Nitrogenadas

Purinas

Pirimidinas

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Complementariedad

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2.- Pentosa

Ribosa (RNA)
Desoxirribosa (DNA)
 Nucleótidos
Un nucleótido está formado por una base nitrogenada, un azúcar de cinco carbonos
y uno o más grupos fosfato

Nucleósidos

Es la unión Base-Azúcar

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Funciones de los nucleótidos

Ø  Energía química (ATP)

Ø  Forman co-enzimas (Co-A)

Ø  Transducción de señales (AMPc)

Ø  Mónomero de los ácidos nucleicos

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Funciones de los ácidos nucleicos

Ø  Codificación de la información
genética (ADN, ARN)

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 Bibliografía

1.- Capitulo 2 y 4, Alberts et al, 1994

2.- Capitulo 2, Cooper G., 2002
3.- Capitulo 2 y 4 , Alberts et al, 2004
4.- Capitulo 2, Lodish et al, 2002

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