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UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS


ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

Código: SPT-01 Versión: 2018 Pagina 1 de 1

CUANTIFICACIÓN DE ANTOCIANINAS TOTALES POR EL METODO DEL pH


DIFERENCIAL

(Aplicable para la determinación en frutas, verduras y derivados)

PRINCIPIO
El metodo espectrofotométrico diferencial es de amplio uso en la determinación de antocianinas totales,
hace uso del coeficiente de extinción de la cianidina 3-glucosido y efectúa lecturas de absorbancia a 510
nm a pH 1,0 y 4,5, este ultimo para corregir la formación de productos de degradación.

MATERIALES Y MÉTODOS

Equipos e instrumentos: Espectrofotómetro c. Cuantificación de antocianinas totales.


Uv – Vis, balanza analítica, centrífuga, agitador Tomar una alícuota del sobrenadante (200 µL)
magnético, vasos de precipitados, matraces y diluir hasta 2.5 mL con el buffer pH=1.0;
aforados, tubos de ensayo, micropipetas, tips hacer lo mismo con una segunda alícuota (200
(1000 y 200 µL), gradilla, papel filtro, embudo, µL) y el buffer pH=4.5; registrar la absorbancia
delas soluciones a 510 nm. La concentración de
cubetas de poliestireno para espectrofotómetro
antocianinas será calculada mediante la
(1.5 mL).
siguiente ecuación:
89989999999999999999
Reactivos: KCl, HCL, CH3COONa, metanol, 𝟏𝟎𝟎𝟎
ácido acético. 𝑪(𝒎𝒈/𝑳) = (𝑨𝒑𝑯𝟏.𝟎 − 𝑨𝒑𝑯𝟒.𝟓 ) ∗ 𝟒𝟖𝟒. 𝟖𝟐 ( ) ∗ 𝑫𝑭
𝟐𝟒𝟖𝟐𝟓

Metodología
donde el término entre paréntesis es la
a. Preparación de soluciones
diferencia de absorbancia a 510 nm entre las
1. Buffer pH = 1,0: 125 mL de 0,2 M KCl y
soluciones de pH 1 y pH 4.5, 484.82 es la masa
375 mL de 0,2 M HCl.
molecular del cloruro de cianidina-3-glucósido,
2. Buffer pH = 4,5: 400 mL de 1 M
24 825 es su absortividad molar (𝜖) a 510 nm en
CH3COONa, 240 mL de 1 M HCl y 360 mL
la solución pH 1, y FD es el factor de dilución.
H2O
Nota: verificar el pH de los buffers.

Solución A: Metanol: ácido acético: agua REFERENCIA:


(25:1:24) 1. Rapisarda, P; Fanella, F, Macarone, E. 2000.
Reliability of Analytical Methods for
b. Preparación de los extractos. 5 g de muestra determinig Anthocyanins in Blood Orange
Juice. J. Agric. Food Chem. 48: 2249 - 2252.
será extraído en agitación con 38 mL de
2. Zabetakis, I; Leclerc, D; Kajda, P. 2000. The
solución A, durante 5 minutos a temperatura
effect of High Hydrostatic Pressure on the
ambiente. El extracto será filtrado y
Strawberry Anthocyanins. J. Agric. Food
centrifugado por 10 min a 10000 rpm.
Chem. 48: 2749 - 2754.

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