PAPA IN VITRO

MICROPROPAGACION DE PAPA.
Título y diseño de contenido con lista
• La papa (Solanum tuberosum L.) es un cultivo alimenticio de
mucha importancia mundial. En la producción mundial de
alimentos, la papa (315 millones de t) es solo superada por
el maíz (872.39 millones de t), arroz (680 millones de t) y
trigo (663 millones de t). Las papas son consumidas por más
de mil millones de personas en todo el mundo. Los modos de
propagación varían en función de los intereses de los
productores, siendo la micro propagación una de las técnicas
más empleadas con estos fines.
•
PRODUCCIÓN DE PLANTAS DE PAPA LIBRES
DE VIRUS
• La micro propagación es un método de
cultivo de tejidos (in vitro) usado para
una rápida multiplicación de plantas en
medios nutritivos artificiales bajo
ambiente controlado. El ambiente
controlado y aséptico del laboratorio de
cultivo de tejidos proporciona las
condiciones óptimas para la
multiplicación de plantas
VENTAJAS MAS SOBRESALIENTES
• a.) un gran números de plantas libres de
patógenos causantes de enfermedades pueden
ser obtenidas de una sola planta en un
período corto
• b.) la propagación puede llevarse a cabo en
todo el año
• c.) y el material de propagación puede ser
acomodado en un espacio pequeño.
LIMITACIONES
El éxito en el cultivo de meristemo es juzgado por el porcentaje
de regeneración, tamaños pequeños (0.1-0.2mm) crecen
lentamente disminuyendo la eficiencia del método.
 La resistencia de algunos genotipos al cultivo in vitro limita
su extensión a diferentes variedades y especies.

En la actualidad el cultivo de meristemos apicales constituye

una alternativa en la erradicación de patógenos, aunque no
siempre se logran los niveles de efectividad deseados; por esta
razón es frecuentemente combinado con otros métodos de
saneamiento que aumenten su eficiencia y generalización
CULTIVO DE MERISTEMOS
consiste en aislar asépticamente la región meristemática con 1-
3 de los primordios foliares más jóvenes e implantarla en un
medio de cultivo estéril, con el propósito de inducir la
diferenciación de células y tejidos en plantas completas

Los meristemos son delicados y dormantes, por ello necesitan

almacenarse durante 3-4 meses a 5-6 °C antes de plantarse.
Durante el almacenamiento pueden ocurrir fuertes pérdidas
debido al encogimiento, pudriciones y brotación excesiva. Para
evitar estas pérdidas, es necesario enverdecer los
microtubérculos durante 10-15 días en luz difusa o artificial
antes de la cosechas

El cultivo de meristemos es un procedimiento en el cual las

puntas de crecimiento axilar o apical (0.1-0.3 mm) se disectan y
se desarrollan en plántulas en medios nutritivos artificiales
bajo condiciones controladas. El cultivo de meristemos para la
eliminación del virus se basa:
En general, a medida que es más grande el tamaño de
meristemo, mejor es su supervivencia in vitro, mientras que, a
medida que es más pequeño el tamaño del meristemo, mejor
la oportunidad de estar libre de virus

La presencia de primordio foliar también parece determinar la

habilidad de un meristemo para desarrollarse en una plántula.
Por ello, se ha sugerido que los meristemos cortados deban
incluir uno o dos primordios foliares.

Por consiguiente, se prefieren a menudo los meristemos

axilares sobre los meristemos apicales para propósitos de
eliminación de virus. La excisión de meristemos muy pequeño
requiere un alto grado de especialización y el desarrollo de
plantas de estos meristemos pequeños toma tanto tiempo
como cuatro a ocho meses
Como resultado, el cultivo de meristemos es principalmente
combinado con termoterapia (tratamiento de temperatura
alto) o quimioterapia (tratamiento con compuestos antivirales)
para incrementar la probabilidad de obtener plantas libres de
virus.

La replicación de muchos virus de plantas se reduce

significativamente cuando la planta hospedante se desarrolla
en temperaturas elevadas

Los mayores problemas del cultivo de meristemos son la

dificultad para la disección de meristemos pequeños, baja
supervivencia y tiempo largo para que se desarrollen. Para
salvar estos problemas, la termoterapia de las plantas madre
(stock) seguido de cortes nodales (0.1 a 0.5 mm) en medio
nutritivo que contenga ribavirina se ha usado para obtener
plantas libres de virus
ETAPAS
VARIEDADES DE PAPA MAS USADAS
EN LA PROPAGACION IN VITRO
•Papa Cachán.
•Papa Blanca.
•Papa Amarilla.
•Papa Huayro.
•Papa Huamantanga.
•Papa Negra.
•Papa Peruanita.
•Papa Tarmeña.
•Papa Perricholi
MÉTODO DE SANEAMIENTO
La técnica de cultivo in vitro de meristemos, como método de
saneamiento, se fundamenta en la distribución no uniforme de
los microorganismos (virus, bacterias, micoplasmas) en los
tejidos de las plantas infectadas, y su disminución progresiva
hacia el ápice del tallo.

Por tanto, son mayores las posibilidades que

las células del meristemo apical se encuentren libres
de microorganismos , a diferencia de los tejidos más
organizados de las plantas.

Algunos estudios han demostrado la presencia de partículas

virales en las células del meristemo ápical; sin embargo plantas
obtenidas a partir del cultivo de meristemos resultaron libres
de virus.
Para explicar la sanidad o limpieza del meristemo se han
formulado varias hipótesis, una de ellas plantea, que debido a
la ausencia de tejido vascular en la proximidad del meristemo
apical y que las conexiones plasmodermáticas en las células de
este tejido son muy pequeñas, por tanto los microorganismos
se desplazan muy lentamente hacia esta zona. Esta
característica morfológica, unida a la activa multiplicación
celular que allí ocurre, puede explicar la baja concentración o la
ausencia de patógenos en este tejido.
 TAMAÑO DE LOS MERISTEMOS

El tamaño óptimo del meristemo es entre 0.2-1mm, pero

realmente el utilizado está en dependencia de los objetivos que
se persigan con propagación comercial. Si el objetivo es la
obtención de plantas libres de enfermedades sistémicas es
necesario, la utilización de meristemos, pero si por el contrario
solamente se requiere de la multiplicación y no hay peligro de
diseminación de enfermedades o se parte de plantas sanas, se
pueden utilizar ápices de mayor tamaño con un mayor
porcentaje de regeneración.
AISLAMIENTO Y SIEMBRA DE LOS MERISTEMOS
Existen meristemos muy fáciles de localizar, como son los
expuestos, tal es el caso de la papa; en otros cultivos pueden
estar más internamente protegidos y se necesita separar mayor
cantidad de pequeñas hojas, para encontrar la zona
meristemática. Este es el caso de bulbos, ya sean de ajo Allium
sativum L.), cebolla (Allium cepa L.) o en el caso de tubérculos o
cormelos de (Xanthosoma sp.).

La disección aséptica del meristemo es un proceso delicado y

requiere de muchas horas de práctica; se realiza con el apoyo
de un microscopio esterioscópico, desprendiendo los foliolos
que rodean el punto de crecimiento, hasta que solo queda el
ápice con algunos primordios foliares, para su posterior
transferencia a medios de cultivo de establecimiento
INFLUENCIA DEL MEDIO DE CULTIVO
Es importante señalar que aunque el balance hormonal
utilizado está en dependencia del genotipo que se trabaje, para
el éxito del empleo del cultivo de meristemos como método de
saneamiento este factor debe tenerse muy en cuenta.
En el cultivo de meristemos no existe ningún medio de cultivo
universal, sin embargo, los medios basales propuestos por
Murashige & Skoog (1962), con algunas modificaciones en sus
componentes, han sido los que con más frecuencia se han
utilizado. Un balance adecuado entre auxina y citoquinina en el
medio de cultivo es necesario para la formación de plantas a
partir de meristemos.
PRODUCCIÓN DE PLANTAS
El agar es el agente gelificante más frecuentemente usado para
cultivos semisólidos; sin embargo, algunos laboratorios usan
0.24% de Gelrita, un polisacárido sintético, como un sustituto
del agar. Las temperaturas en el rango de 22-25 °C y la
intensidad luminosa relativamente alta (50-60 E/m2/s= 3000
luxes) en fotoperiodos de 16 horas son benéficos para el
desarrollo de retoños axilares en la papa. Las micro plantas
anteriores se usan para la producción de semilla de papa por
medios diversos.

El procedimiento más simple es aclimatarlas y trasplantarlas en

casa sombras (casa de malla) con malla a prueba de áfidos en
camas de vivero Las plantas in vitro pueden también usarse
para la producción de micro tubérculos en laboratorio (Wang y
Hu 1982). Para lograr la producción a escala comercial, los mini
tubérculos se producen y son plantas micro propagadas libres
de enfermedades bajo casas de malla especiales.
 Multiplicación de mericlones en hidroponia Producción de Mini
tubérculos El mini tubérculo es una fase intermedio de
producción de semilla de papa entre la micropropagation de
laboratorio y la multiplicación de campo. La producción
convencional de mini tubérculos es en sustrato esterilizado en
invernadero, pero recientemente, se han desarrollado sistemas
hidropónicos y aerológicos para la producción de mini
tubérculos a partir de plantas in vitro
Además de reducir el costo de producción, estos sistemas
permiten la producción durante todo el año y la adopción de
normas fitosanitarias. La técnica de aeroponia es una
herramienta ideal para obtener semilla pre-básica de papa. Las
semillas de papa obtenidas son de excelente calidad, tamaño y
peso apropiados para la siembra, además de producir
tubérculos libres de virus, hongos, bacterias y nematodos. Esta
técnica se inicia con vitroplantas.

Los micro tubérculos cosechados son lavados, tratados con

fungicida, secados bajo oscuridad, empacados en bolsas de
polietileno perforado y almacenados bajo oscuridad a 5-6 °C
hasta la liberación de la dormancia.
Metodología
Desinfección: Preparar soluciones de cloro respectivamente de
10 ml de agua en vasos precipitados durante 1 minuto cada
frasco seguidamente. Desinfectar los tubérculos (papas).
Introduciendo al vaso precipitado.
Preparación del cultivo: Prepara el agar en estado líquido y
agregar los macro nutrientes y micronutrientes y las hormonas
de crecimiento.
 Después de que se haya solidificado se toma un brote del
tubérculo y con la ayuda de una pinza se coloca el brote en el
tubo de ensayo a la mitad del medio de cultivo. Se hace lo
mismo en los demás tubos de ensayos.
 Se lleva a la luz solar.
 Después de una semana se verán los resultados
 Resultados de formación de órganos/ plántula completas

Elección de Planta: Desinfección de vegetal (generalmente con

hipoclorito de sodio) y su posterior adaptación al medio
artificial para inducir el brote, se requiere desinfectar
superficialmente el material escogido para evitar en el medio
de cultivo crezcan microorganismos, principalmente bacterias y
hongos.
Multiplicación: consiste en generar una cantidad de masa
vegetal suficiente para la regeneración del número de plantas.
El Raizamiento: Es el proceso de inducción de la formación de
raíces con el fin de convertir a los brotes o embriones
somáticos en plántulas completas. En el primer caso se
transfieren los brotes obtenidos en la etapa anterior a un
medio libre de reguladores de crecimiento o que solo
contengan auxinas.
Rusticación o climatización: Es el paso de a climatización de las
plántulas obtenidas in vitro a las condiciones del ambiente
usuales fuera del tubo o frasco, es decir al suelo o algún
sustrato inerte.
CONCLUSIONES
 Para realizar un buen cultivo in vitro se debe tener en
cuenta las siguientes consideraciones, la especie a
propagar, el problema a eliminar y el tipo método a realizar.
 El explante del meristemo más adecuado, que permite un
normal y rápido desarrollo por estar en un gran porcentaje
libre de virus.
 El cultivo de meristemos es el más comercial, gracias a ello
se obtienen micro plantas y micro tubérculos que están
garantizadas ya que están libres de patógenos.
Discusión
Las plantas producidas por medio de cultivo de meristemos, libre de patógenos,
pueden mantenerse indefinidamente por cultivo de tejidos, las cuales garantizan
un constante flujo de plantas libres de enfermedades. Sin embargo, para la
confirmación y mantenimiento de la identidad, tal stock in vitro necesita,
regularmente, estar sujeto a pruebas, por lo menos una vez por un año.
Los mayores problemas del cultivo de meristemos son la dificultad para la
disección de meristemos pequeños, baja supervivencia y tiempo largo para que se
desarrollen. Para salvar estos problemas, la termoterapia de las plantas madre
(stock) seguido de cortes nodales (0.1 a 0.5 mm) en medio nutritivo que contenga
ribavirina se ha usado para obtener plantas libres de virus.
GRACIAS