PONTIFICIA UNIVERSIDIDAD CATOLICA DEL ECUADOR

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO

FACULTAD DE MEDICINA

NOMBRES Y APELLIDOS ASIGNATURA FECHA ELABORACION DE PRACTICA NOTA

Lunes 18 de marzo del 2019
Microbiología Martes 19 de marzo del 2019
Guzmán Tutillo
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME
Joseth Dayana
PARALELO Lunes 25 de marzo del 2019
HORA
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4-5/5-5
NOMBRE DE LA PRACTICA:
N.º DE LA PRACTICA: 4
Tinciones simples y compuestas para bacterias

OBJETIVOS:

 Identificar la metodología cada uno de los tipos de tinciones realizadas

en el laboratorio
 Reconocer la funcionalidad de cada una de las tinciones realizadas en
el laboratorio

MATERIALES:

Asa bacteriológica Lugol de Gram

Bandeja de tinción Alcohol-Cetona
Mechero de Bunsen o de alcohol Safranina
Microscopio binocular compuesto Verde de malaquita
Portaobjetos Fucsina
Pipeta Pasteur Cultivos
Azul de metileno Pinza metálica
Cristal violeta Aceite de inmersión

PREGUNTAS DE APRENDIZAJE:

Resumen de la película interestelar

La película se basa en la vida de Cúper un ingeniero que trabajo de piloto en l

NASA, su esposa muerta a causa de un tumor, su familia conformada por el
suegro, el hijo y la hija que viven en una granja, dicho lugar tenía un problema
de plaga que se alimenta de CO2, eliminando el oxígeno y generando un
exceso de polvo.

En la habitación de la hija de Cúper existía una fuerza extraña que mandaba

mensajes mediante códigos binarios uno de ellos fue las coordenadas de un

1
centro de investigación (base secreta de la NASA) entonces Cúper fue con su
hija.

En el centro de investigación le proponen a Cúper que vaya en una misión en

busca de otro planeta habitable debido a que el planeta tierra muy pronto no
sería optimo para mantener la vida humana.

Encontraron un agujero de gusano cerca de saturno el cual conduce a otra

galaxia con varios planetas el plan era ir a verificar si unos de los tres planetas
investigados en los años anteriores eran habitables. El plan A se basa en llevar a
las personas de la tierra a dicho planeta habitable pero el problema es la
gravedad y el plan B era llevar una muestra de embriones para que sobrevivan
ahí.

Los astronautas dentro de la nave ya en el espacio debían tomar varias

decisiones y cambiar los planes, pasan por el agujero de gusano y llegan a un
planeta habitable en donde la mayoría de ese planeta era agua con oleajes
altos deducen que no es óptimo para la vida humana. Para ellos pasaba una
hora en dicho planeta y en la tierra pasaban 7 años.

Mientras tanto en la tierra, la hija de Cúper se enteró que el plan de las personas
a cargo era dejar los embriones en un planeta similar a la tierra y eliminara toda
la humanidad.

Van al segundo planeta en donde la temperatura es muy baja pero el

astronauta que se encontraba estudiando ese planeta, sabia toda la verdad
entonces debía matar a los dos viajeros que sobrevivieron hasta ese momento.
Al final Cúper abandona en cohete con una especie de nave pequeña para
que la hija del encargado de la NASA sobreviva, Cúper llega a una especie de
quinta dimensión, se da cuenta que ésta se encuentra en el cuarto de la hija,
así que se deduce que esa dimensión era la misma por donde se comunicaban
con su hija, entonces era Cúper quien se comunicaba para que su hija salve el
planeta tierra.

Resumen de la historia de la virología

La viruela apareció en India hace 3000 años. Dicha enfermedad se expandió

por Asia, África y Europa debido a los comerciantes llegó hasta América
causando la muerte de la mayor parte de la población mientras tanto en
Europa causo la muerte de 60 millones de personas y en todo el mundo dicha
enfermedad acabo con 300 millones de personas. (Casanova del Vas, 2016)

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RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Tipos de colorante: simples y compuestos

Básico (cationes) los cuales se usan más en bacteriología pues la pared celular
bacteriana tiene carga negativa dando una fuerza de atracción con el
colorante entonces se da una mejor coloración por otro lado tenemos los
colorantes ácidos (aniónicos) guiados por su carga eléctrica. Casi todos los
colorantes son derivados del benceno.

Tinción de gram
Tinción diferencial para bacterias gran positivas y gram negativas, lo más
importante es respetar los tiempos durante la tinción.

1. Primero se coloca la cantidad que sea necesaria de Cristal violeta

(colorante primario) para cubrir la muestra por 1 min.
2. Lavar con agua del grifo, desechar el exceso de agua
3. Lugol (mordiente) da intensidad al colorante primario colocar por 1
min.
4. Alcohol cetona (decolorante) cuando hay bacterias gramnegativas
todas se desvanecen colocar por 30 segundos
5. Safranina (colorante de contraste) colocar por 45 segundos
6. Observar al microscopio de preferencia en el objetivo de 100x (fuente
de luz en baja intensidad y el condensador pegado a la platina)

Tinción de Ziehl Neelsen

1. Carbol - Fuscina manteniendo al calor con ayuda de las pinzas se

flamea hasta obtener vapores sin que llegue a ebullición realizarlo por
10 minutos.
2. Colocar en las celdas de tinción usar agua destilada quitando el
exceso de colorante y después desechando el exceso de agua
3. Alcohol ácido (1% de H2SO4) limpiar la placa con esta sustancia por
15 segundos
4. Azul de metileno se coloca por 1 minuto
5. Observar al microscopio de preferencia en el objetivo de 100x (fuente
de luz en baja intensidad y el condensador pegado a la platina)

Tinción de esporas de Shaeffer-Fulton

1. Preparar el frotis y fijarlo al calor
2. Unas gotas de verde de malaquita (colorante primario) manteniendo
al calor con ayuda de las pinzas se flamea hasta obtener vapores sin
que llegue a ebullición colocar por 5 minutos.
3. Lavar el exceso con agua destilada
4. Colorear con safranina al 5 % por 1 minuto
5. Lavar el exceso con agua destilada

3
 6. Dejar secar
7. Observar al microscopio de preferencia en el objetivo de 100x (fuente
de luz en baja intensidad y el condensador pegado a la platina)

Cultivo de Escherichia Coli (Bacilo) – cultivo secundario

Este tipo de frotis se usa con la tinción de gram, medios de transporte para
muestras es de Stuard.

Cultivo de hongos – cultivo secundario

Los hongos hacen una estructura muy frondosa que contiene esporas
tomaremos la parte de crecimiento con un asa micológica.
Para este tipo de muestra se usa la tinción de esporas de Shaeffer-Fulton, se
recomienda el uso correcto de los elementos de bioseguridad ya que existe
cierto nivel de contaminación con la muestra y cerca del mechero para
mantener esterilizado el espacio de trabajo.

En una placa portaobjetos se realiza el frotis con el asa de cultivo normalmente

como la habíamos estudiado en las practicas anteriores, tomando de la muestra
la parte blanca del hongo se colorea con tinción de esporas de Shaeffer-Fulton
explicadas en la página anterior

Frotis de esputo (tuberculosis) – muestra primaria

Se puede encontrar muestras de esputo con características físicas diferentes,
este tipo de frotis se los realiza en una placa portaobjetos con un rectángulo 2 x
1 cm graficado con lápiz demográfico, este nos sirve para un conteo
cuantitativo de la cantidad de bacilos en la muestra, el extendido de la muestra
en la placa se realiza con hisopos, tanto la tapa como el hisopo no deben tocar
la mesa de trabajo y siempre se debe trabajar al lado del mechero.

Por último, se realiza la fijación con calor flameando lentamente tres veces sobre
la zona oxidante de la llama.

Secreción de heridas de la tibia izquierda (gram)

Al igual que el anterior tipo de muestra se realiza el frotis o extendido

directamente en la placa de portaobjetos y al final la fijación a la llama; cabe
recalcar que aquí no se necesita el rectángulo dibujado en la placa
portaobjetos. La coloración se realiza en base a la tinción de gram redactada
en la página anterior.

Dibujo 1: extendido con

coloración Gram (secreción de
herida)

Descripción: se observó cocos

gram negativos

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RECOMENDACIONES

Primero se debe tomar encuenta realizar correctamente el frotis y la fijación de

la muestra a analizar.

Mantener los tiempos recomendados en la tinción debido a que una falla en

esto puede provocar una alteración de los resultados deseados.

El transporte de las muestras analizadas se las realizo en almacenamiento de

Stand

Al usar el microscopio con el objetivo de 100x la fuente de luz debe estar en baja
intensidad y el condensador pegado a la platina.

CONCLUSIONES
En la tinción Gram tenemos dos tipos de resultados las células gram positivas y
las gram negativas en el caso de las gram positivas hay una pared celular gruesa
(peptidoglicanos) que al final nos dará una coloración morada y por otro lado
están las gram negativas con una coloración rosa.

En la tinción Ziehl – Neelsen las bacterias alcohol ácido resistentes retienen el

color y no lo pierden aun por la acción energética de los ácidos estos se tiñen
de color rojo por la Carbol – Fucsina y los demás microrganismos de color azul
por el colorante de contraste.

Por otro lado, en la tinción de esporas de Schaefer – Fulton se pueden

diferencias las endosporas de una célula vegetativa.

BIBLIOGRAFÍA
 Salle, A. (1960). Bacteriologia. Editorial Gustavo Gili. Barcelona.
 Seeley, H. (1973). Microbilogía en Acción. Editorial Blume.

 Volk, W. (1996). Microbiología Básica. Editorial Harlon.

 Benniton, M.D. (1991). Diccionario Enciclopédico de Laboratorio Clínico.

Editorial Medica Panamericana. Argentina.

 Casanova del Vas, C. (4 de enero de 2016). La Viruela. Obtenido de

http://index-f.com/gomeres/?p=1319

 Henry, B. (2010). Laboratorio en el Diagnóstico Clínico. Editorial Marbán.

España

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