UFPS Ocaña Asignatura: BIOQUIMICA

Ing. Ambiental Semestre: Segundo

Profesor: Ramón José Lobo Jácome

Extracción de fosfolípidos y colesterol

Introducción:

Los fosfolípidos hacen parte de los compuestos heteronucleares de alto peso molecular y no
se pueden clasificar fácilmente, los fosfolípidos son lípidos que constituyen membranas
conformados por unas moléculas de glicerol o esfingosinas que se unen a ácidos grasos y a
un grupo fosfato. Con funciones diversas como componentes estructurales de las
membranas celulares, activación de enzimas, componentes surfantantes de los pulmones,
función detergentes y síntesis de sustancias de señalización celular del tipo prostaglandinas.

Para diferenciar la gran cantidad de lípidos que pueden encontrarse en alimentos y

productos biológicos es necesario efectuar varios análisis físicos y químicos.

Justificación:

La extracción de los lípidos, igual que la de cualquier otro nutriente, sigue un proceso muy
análogo al proceso digestivo, sin embargo, dada la insolubilidad de las sustancias grasas en
el agua y su inmiscibilidad con agua implica el uso de disolventes orgánicos: cloroformo,
éter, alcohol entre otros.

Los lípidos pueden extraerse de los medios biológicos por homogenización con mezcla de
cloroformo-metanol-ácido clorhídrico luego filtración y separación de componentes.

El índice de yodo, sirve para determinar el grado de insaturación de un ácido graso o aceite,
debido a que el yodo es absorbido únicamente en los dobles, se determina únicamente en
forma cualitativa, para determinar si el compuesto tiene enlaces dobles o más de unos doble
enlaces. Para la identificación del colesterol, se fundamenta en la formación de derivados
coloreados de los esteroides, cuando se trata con ácidos. El color y su intensidad varían
según el esteroide, el tipo de ácido y la concentración de éste.

El proceso de extracción de lípidos y su posterior purificación tiene sus dificultades, los

lípidos son insolubles en agua y solubles en solventes orgánicos. Aunque los lípidos
complejos se presentan en todos los tejidos en cantidades más bien pequeñas, ya sea como
lipoproteínas, solubles en agua o como parte de las membranas y allí insoluble en agua;
mientras del tipo triglicérido se presentan en depósitos de tipo tejido adiposo y es así como
los complejos deben romperse con un solvente polar adecuado como metanol, para
poderlos aislar, las diferencias en solubilidades permiten al menos el fraccionamiento burdo
de las mezclas. Los lípidos neutros como trialcilglicéridos, esteroles y esteres de esteroles
son por lo general solubles en acetona, mientras que los fosfolípidos son insolubles.
Objetivos:
Extraer los fosfolípidos cefalina y lecitina y el esteroide colesterol.
Determinar el índice de yodo de una muestra lipídica
Identificar cualitativamente el colesterol

Materiales:

Tubo de ensayo, gradilla, pipeta, pinzas, mechero, erlermeyer, filtro

Metodología y procedimiento:

Índice de Yodo. Coloque en un tubo de ensayo 2 ml de muestra lipídica, agregue 4 gotas

de lugol, agite. La mezcla es rojiza. Caliente a la llama (flamear) y observe el color.
Cuando el color inicial ha desaparecido totalmente, deje enfriar y agregue 10 gotas de
disolución de almidón. Se observará que no hay formación de color azul, indicando que no
hay yodo libre en la mezcla. Si se agrega lugol nuevamente, el exceso aparece el color azul
al agregar el almidón, por haber sido incompleta la absorción. Si se logra repetir hasta
alcanzar

Extracción de los lípidos de la yema del huevo. Descarte la clara y conserve la yema de
huevo, pésela, agregue 50 ml de etanol y 25 ml de eter. Agite por 10 minutos
continuamente y filtre por papel filtro. Lave el precipitado con 10 ml de etanol y 10 ml de
eter en mezcla. Pese y deseche el precipitado (cefalina). Evapore el filtrado en baño de
maría o en plancha de calentamiento. Disuelva el residuo en 10 ml de eter. Vierta el
extracto etéreo sobre acetona en una proporción de 1 a 3 ml . Agite y filtre después de
reposar. El precipitado es lecitina. Evapore el filtrado hasta una pasta en plancha de
calentamiento o baño de maría. Enfrié, agregue 5 ml de KOH alcohólico, mezcle bien,
Caliente en baño de maría media hora más. Enfríe en hielo. Adicione 50 ml de éter. Filtre.
El precipitado contiene sales de potasio-acido grasos. Evapore el filtrado a seco en el baño
de maría. Caliente el residuo con 5 ml de etanol del 95 %. Filtre, al filtrado agregue unas 10
a 12 gotas de agua destilada. El precipitado logrado es colesterol.

Identificación de colesterol.. En un tubo de ensayo perfectamente seco ponga un poco del

colesterol logrado y agregue 3 ml de cloroformo para disolverlo. Vierta 1 ml de ácido
sulfúrico concentrado por las paredes del tubo, deslizándolo, SIN AGITAR. Observe el
tubo de ensayo contra un fondo semioscuro, para apreciar la fluorescencia. Se produce un
color rojo y una fluorescencia verde.

Datos y Resultados:

Determínese el índice de yodo, logre los cristales de urea y complete la experiencia con la
extracción de los fosfolípidos y colesterol
Cuestionario:

Cuál es la estructura de la cefalina, lecitina y del colesterol?

En el proceso de la extracción de lípidos en la yema del huevo, donde se produce la
molécula de glicerina?
Que aplicación práctica tiene el índice de acidez de una grasa?
Que es el índice de refracción de una grasa?
Escriba la formula estructurales de los productos de la hidrólisis total de la dioleilfosfatidil
colina?

Bibliografía.

Thorpe, Bray y James. Bioquimica

White et al Bioquimica
Harper et al Manual de Quimica fisiológica
Conn y Stumpf Bioquimica fundamental
Macarulla y Goñi Biomoléculas
Ramsey y Bronk Biología Química