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UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADA
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA

Unidad 1

INTRODUCCIÓN A LA
MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

Prof. Dr. Luis Guillermo Ramírez Mérida.

luisguillermolgrm@gmail.com
Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez2Mérida

1680 Antonie van Leeuwenhoek

1836 – 1837. Levadura “Cosa

Cagniard-Latour, Viva” Berzelius,
Schwann y Kutzing Wholer y von
Liebig
Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez3Mérida

1856 – 1857 Louis Pasteur

 Azúcar CO2 + Etanol
 D-Tartrato
amónico D y L-tartrato
Anaerobiosis
 Organismos
Ac. butírico
cilíndricos
 Formación de ácido acético

 Fermentación aerobia y anaerobia

 Microorganismos dañan vino y la cerveza.

Pasteurización
 Études sur le vin (1866) y Études sur la
bière (1876)
 Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez4Mérida

Técnica de cultivo puro

1883. Emil Christian Hansen

Levadura Carlsberg (S.carlsbergensis)  (S. cerevisiae)

Primera parte del siglo 20

 Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez Mérida 5

(1913 – 1915) Weizmann. Fermentación acetona-butanol

(Clostridium acetobutylicum)
(1920) Ácido cítrico (Aspergillus niger)

(1940) Penicilina

Anticuerpos monoclonales
Polipéptidos
Enzimas

Ventajas:

Fácil masificación
Economía
Crecimiento rápido
Uso de sustrato económico
Diversidad de productos
 Introducción a la microbiología industrial 6
Prof. Luis G. Ramírez Mérida

1. Microorganismos Productores

Upstream processing  Cepas con buena productividad y

Materia cruda rendimiento
(sustrato) Microorganismos
 Mantenimiento de cepas puras
 Preparación del inóculo
Fermentación
 Desarrollo continuo de cepas (más
Downstream processing eficientes)
Purificación del producto
Metabolismos primarios (trofofase)
a.a., ac orgánicos, vitaminas,
solventes industriales
Desechos Producto
(efluentes) Metabolismos secundarios (ideofase)
Alcaloides y antibióticos
 Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez7Mérida

Upstream processing
Materia cruda
(sustrato) Microorganismos

Fermentación

Downstream processing

Purificación del producto

Desechos Producto
(efluentes)

2. Medio de Fermentación 3. La fermentación

Fuente de energía Costo efecto  Controles físicos y químicos

 Fermentador
 Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez8Mérida

Downstream processing

Productos de la fermentación
 Materia prima 1. Altos volúmenes
 Utilidad
2. Bajos volúmenes
 Mantenimiento
 Gastos de elaboración

Alimentos, bebidas, aditivos alimenticios y suplementos

 Ácido acético
 Ácido cítrico
 Aminoácidos Diversidad microbiana
 Vitaminas
 SCP
 Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez9Mérida

Hongos filamentosos
Productos para
Antibióticos
la salud
Bacterias (Actinomycetos)

Grupo Antibiótico Organismo

Β-lactamas Penicilina P. chrysogenum
Cefalosporina Cephalosporium acremonium
Clavams S. clavuligerus
Carbapenenos S. cattleya
Aminoglucósidos Estrectomicinas Streptomyces
Neomicinas
Kanamicinas
Macrólidos Eritromicina Streptomyces
Leucomicina
Spiramicina
Tilosina
Tetraciclinas Clortetraciclina Nocardia
Varios Cloranfenicol Streptomyces spp
Griseofulvina P. griseofulvum
 Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez10
Mérida

Productos para la salud

Alcaloides Insulina
Esteroides Interferon
Vacunas Hormona de crecimiento
 Enzimas microbianas 11

ENZIMA (ORIGEN) APLICACIÓN

-Amilasa Licuefacción del almidón para obtener
(Bacillus licheniformes, hidrolizados. Hidrólisis de almidón residual de
B.subtilis, almidón en jugo de caña. Aditivo en cervecería.
B.amyloliquefaciens)
-Amilasa Obtención de hidrolizados de almidón de alto
(Aspergillus oryzae, A.sojae, contenido de maltosa. Aditivo en panadería.
A.effusus)
- Amilasa Obtención de hidrolizados de almidón de alto
(Bacillus Polymyxa contenido de maltosa
circulans, B.cereus)
Pululanasa Hidrólisis de los enlaces 1 6 en almidón.
(Aerobacter aerogenes, Enzima de desramificación
B.cereus)
Amiloglucosidasa Obtención de glucosa a partir de hidrolizados de
(Aspergillus níger, A. Oryzae, almidón con amilasa. Aditivo en la elaboración de
Rhizopus delemar) la cerveza ligera.
Enzimas microbianas 12

Glucosa isomerasa Obtención de fructosa a partir de

(Streptomyces jarabes de glucosa
actinoplanis,
S.missouriensis,
S.ribeginosus, S.olivaceus,
Bacillus coagulans)
Ciclodextrina glucosil Producción de alfa, beta, y gama
transferasa (CGTasa) ciclodextrinas, a partir de hidrolizados
(Bacillus macerans, B. de almidón con amilasa.
megaterium, B. circulans)
Dextranasa Eliminación de dextranos en jugo de
(Penicillum funiculosum, caña de azúcar
P.lilacilum, C. Gracilae)
-Galactosidasa Hidrólisis de rafinosa en jugo de azúcar
(Mortierella vinacea) de remolacha.
 Enzimas microbianas 13

ENZIMA (ORIGEN) APLICACIÓN

Proteasa Obtención de Hidrolizados proteicos, hidrólisis y
(Bacillus licheniformis : decoloración de hemoglobina. Obtención de gelatina.
alcalasa,B.subtilis : Modificación de propiedades funcionales de proteínas.
neutrasa)
Pronasa (Streptomyces Hidrólisis total de proteínas.
griseus)
- Glucanasas Aditivos en cervecería
(Penicillum emersonii,
Aspergillus niger, Bacillus
subtilis)
Papaína Ablandamiento de las carnes de res. Eliminación de la
(papaya) turbidez en frio de la cerveza. Medicamento auxiliar
digestivo.
Lipoxigenasa (soya) Aditivo en panadería.
Pectinasas (Aspergillus Extracción y clarificación de jugos de frutas
niger)
 Enzimas microbianas 14

Narigininasa (Aspergillus Eliminación del sabor amargo en el jugo de toronja

niger)
Tanasa (Aspergillus oryzae, Aditivo en la preparación de té instantáneo
A. Níger)
Renina (ternera, Mucor Producción de queso.
mihei, M.pusillus, Endotia
parasitica)
Lactasa (Aspergillus níger, Hidrólisis de la lactosa en leche y en suero de leche
A. oryzae, Kluyveromyces
fragilis)
Lisozima Aditivo en leches maternizadas, aditivo como agente
(Clara de huevo, latéx de antibacteriano.
papaya)
Glucosa oxidasa En combinación con catalasa en la eliminación de
(Aspergillus níger) glucosa en clara de huevo. Estabilizante por
eliminación de oxígeno (mayonesa, bebidas)
5´Fosfodiesterasa Producción de mononucleótidos potenciadores del
(Penicillum citrium) sabor a partir de ARN
 Introducción a la microbiología industrial Prof. Luis G. Ramírez15
Mérida

Químicos industriales y energía

 Ácidos orgánicos
 Alcoholes
 Polisacáridos
 Solventes
 lípidos

 Metano
 Etanol
 Hidrógeno ENERGÍA
 Propano
 Butanol
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Mérida

Acción en medio ambiente

17
Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez18
Mérida

< 5µm

70 S 80 S

Thiomargarita namibiensis
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez19
Mérida

Archaea

 Características similares a eucariotas en la síntesis de

proteína
 Muchas habitan en medios ambientes extremos
 Halófilos, metanógenos, termófilos, barófilos
 Genoma pequeño
 Puedes ser gram por el grosor
 Metonocondroitina y pseudomureina

3 reinos:
Euryarchaeota: (metanógenos) Methanobacterium, Methanosarcina,
(halófilos extremos) Halobacterium, Halococcus

Crenarchaeota: (barófilos y termófilos extremos) Pyrodictium, Pyrolobus,

Sulfolobus and Thermoproteus

Korarchaeota: (hipertermófilos)
20
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez21
Mérida

Eubacterias
 Proteobacterias
12 grupos:
 Gram positivas

1. Proteobacterias: gram negativas, 5 grupos (α,β,γ,δ,ε), bacterias

fotosintéticas purpuras bacterias no fotosintéticas, Enterobacteriaceae,
Hyphomicrobium, Nitrobacter, Pseudomonas, Thiobacillus, Vibrio

2. Gram positivas:

a. Grupo bajo en G + C: Bacillus, Clostridium, Lactobacillus,

Leuconostoc, Staphylococcus, Streptococcus, Mycoplasma

b. Grupo alto en G + C: actinomycetes (Streptomyces),

Corynebacterium, Mycobacterium and Micrococcus
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez22
Mérida

Eubacterias

3. Cyanobacterias: Anabaena, Nostoc, Spirulina

4. Chlamydia
5. Planctomyces y Pirella,

6. Bacteroides y Flavobacteria

7. Bacterias verdes del azufre: Chlorobium

8. Espiroquetas
9. Deinococos: Deinococcus radiodurans,Thermus aquaticus

10. Bacterias verdes no del azufre

11. Thermotoga y Thermosulfobacteria,

12. Aquiflex
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez23
Mérida

Escherichia coli bacteria gram negativa

 1885 Theodor Escherich

 Intestino

 ETA

 O157:H7

 Rápido crecimiento

 Gram negativa, anaerobio facultativo, oxidasa (-)

 Lactato, acetato, succinato, formato, H2 , CO2

 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez24
Mérida

Bacillus subtilis bacteria gram positiva

 Aerobio estricto

 Aerobios facultativos o microaerófilos

 Catalasa positiva

 Endospora

 Enzimas, antibióticos (bacitracina, gramicidina, polimixina)

 Insecticida

 Suelo

 Inocua  B. anthracis
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez25
Mérida

Células Gram negativas

Células Gram positivas

Lípidos, proteínas y
ácido teicoico,
asociado a
 Funciones de las estructuras procarióticas 26
Membrana plasmática Barrera selectivamente permeable, frontera mecánico de
células, transporte de nutrientes y desechos, ubicación de
muchos procesos metabólicos (respiración, fotosíntesis),
detección de señales ambientales para la quimiotaxi

Vacuola de gas Hincha la célula para flotar en un medio acuático

Ribosomas Síntesis de proteínas
Cuerpos de inclusión Almacenamiento de carbono, fosfato y otras sustancias
Nucleoide Localización del material genético (DNA)

Espacio periplásmico Contiene enzimas hidrolíticas y proteínas de unión para la

captura y transporte de nutrientes
Pared celular Confiere una forma rígida y las protege frente a la lisis en
soluciones diluidas
Cápsulas y slime Resistencia frente a la fagocitosis, adherencia a superficies
Fimbriae y pili Adherencia a superficies, conjugación bacteriana
Flagelos Movimiento
Endosporas Supervivencia en condiciones ambientales adversas
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez27
Mérida

Hongos

 Quimiheterotrófico
 Saprofítico
 Algunos son parásitos
 Simbiosis y mutualismo

Distribución
90000 especies
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez28
Mérida

Phycomycetes

 Mastigomycotina y Zygomycotina

Mohos acuáticos (Saprolegnia), y patógenos de plantas

(Pythium y Phytophthora)

 Celulosa, glucanos o quitina

 Zygomycotina: Mucor, Rhizomucor, Rhizopus

 Fermentación de alimentos, bioconversión enzimática

 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez29
Mérida

Ascomycetes o Ascomycotina

Morchella esculenta Sarcoscypha coccinea Tuber Brumale

Claviceps purpurea

Cornezuelo del centeno  ergotismo

 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez30
Mérida

Basidiomycetes o Basidiomycotina

 Basidio (célula característica)

 Basidiocarpo (cuerpo de fructificación)
 Saprófitos

Agaricus campestris Amanita phalloides

Alcaloides (veneno o alucinógeno)

 Cryptococcus neoformans
 Tizones o royas (patógenos de plantas)
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez31
Mérida

Deuteromycetes o Deuteromycotina

25000 especies
Si caece de fase sexual (etapa perfecta)
Hongos imperfectos
Patógenos: pie de atleta, histoplasmósis
Industrial: Aspergillus, Cephalosporium,
Fusarium, Penicillium y Trichoderma.
 Estructura y función microbiana Prof. Luis G. Ramírez32
Mérida

Levaduras

S. cerevisiae
Heterotrófica
Ubicuas
Anaeobios facultativos
Requerimientos nutricionales simples
Multiple uso industrial, modelo en biología
molecular
Candida
33
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez34
Mérida

Clasificación nutricional de microorganismos

TIPO DE MICROORGANISMOS Fuentes de

Energía Electrones Carbón

Quimiotrófos Química

Fototrofo Luz

Organotrofo Compuestos
orgánicos
Litotrofo Moléculas
inorgánicas
Autotrofo CO2

Heterotrofo Compuestos
orgánicos
Quimiorganotrofo (animales, Compuestos Compuestos Compuestos
hongos, protozoarios, muchas orgánicos orgánicos orgánicos
bacterias)
Quimiolitotrofos (algunas bacterias) Moléculas Moléculas CO2
inorgánicas inorgánicas
Fotolitotrofos (plantas, algas, Luz Moléculas CO2
algunas bacterias) inorgánicas
Fotoorganotrofos (algas, algunas Luz Compuestos Compuestos
bacterias) orgánicos orgánicos
 Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez35
Mérida

Carbón, H, O2 , N + sulfuros y fosforo = ácidos nucleicos,

lípidos, proteínas y
polisacáridos

Agua 70 – 80%
Proteínas 15 – 18%
Polisacáridos 1 – 3%
Lípidos 1 – 2%
Ácidos nucleicos 3 – 7%
Sales inorgánicas 1 – 2%

Principal composición elemental C4H7O2N

 Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez36
Mérida

Macronutrientes

A escala industrial: crecimiento heterotrófico

 Azúcar (glucosa) 10 – 20 g/L
 Agua y compuestos orgánicos,
 Oxígeno molecular
 Sales de amonio, urea, extracto de levadura 1 – 2 g/L
 Nitrógeno molecular  Azotobacter, Rhizobium

Micronutrientes
 Fosforo (100mg/L)  Sulfuro  < 10 – 20 mg/L
(20 – 30 mg/L)
• Síntesis ácidos nucleicos
• • Calcio
• Metabolismo Cisteína
• • Hierro
• ATP Cistina
• • Potasio
• NADP Metionina
• Vitaminas • Magnesio
 Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez37
Mérida

Elementos traza

 < 0,1 – 1 mg/L

• Cobalto, cobre, manganeso, molibdeno, níquel,

selenio, zinc

a. Medio mínimo  prototrofos

b. Medio suplementado  axotrofos
 Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez38
Mérida

Captación celular de nutrientes

Específica Membrana semipermeable

Difusión facilitada, transporte activo

Difusión facilitada
 Glicerol  difusión pasiva

 Permeasas  difusión facilitada

Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 39

Cinética del crecimiento microbiano

Crecimiento microbiano:
incremento ordenado de los
componentes celulares, que
resulta en el agrandamiento de las
células y finalmente conduce a la
división celular
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 40

Ejemplo de crecimiento exponencial

Tiempo de generación o de duplicación

Incremento exponencial = 2 n

Crecimiento asincrónico
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 41

En medio líquido

 Discontinuo (Batch)
 Semicontinuo (Fed-Batch)
 Continuo

Crecimiento
discontinuo
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 42

EXPRESIÓN MATEMÁTICA
DEL CRECIMIENTO
Cultivo discontinuo

El número total de células (N1) en una población

celular después de n generaciones es igual a:

N1= N0 2n

N1= número final de células

N0= número inicial de células
n = número de generaciones
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 43

EXPRESIÓN MATEMÁTICA
DEL CRECIMIENTO
Cultivo discontinuo

La velocidad de crecimiento en un cultivo se puede

expresar como la constante de velocidad del
crecimiento (K o µ) el cual es equivalente al
número de generaciones por unidad de tiempo (h)

ln N1 - ln N0
K= n =
t t1 – t0
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 44

EXPRESIÓN MATEMÁTICA
DEL CRECIMIENTO
Cultivo discontinuo

El tiempo de generación (tg)

La tasa de crecimiento máxima se determinó a partir de la

correlación representada gráficamente en ln (X/X0) = f (t).

La regresión lineal para la fase logarítmica del crecimiento

se describe mediante la ecuación:
ln Xt = µmax· t + ln X0

donde μmax, d–1 representa la pendiente

Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 45

Monod

s
μ = μmax
Ks + s
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 46

(Zijffers et al., 2010)

(Andrews, 1968)

(Martínez Sancho et al., 1997)

(Martínez et a., 1999)

(Droop, 1968)

(Flynn, 2002)
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 47

Aplicación de fermentación discontinua

 Concentración de productos y nutrientes cambia

 Cargar el fermentador con medio fresco

 Esterilización del fermentador

 Inoculación del fermentador

 Producción de productos microbianos

 Aprovechamiento de la biomasa, separación

 Limpieza del vaso

Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 48

Aplicación de fermentación discontinua

Rendimiento (Y)
En relación a la biomasa

X = YX/S (S – Sr)
X: concentración de biomasa (g/L)
YX/S : coeficiente de rendimiento (g biomasa/g sustrato utilizado)
S: concentración inicial de sustrato (g/L)
Sr : concentración residual de sustrato (g/L)

Si ↑Y  ↑% S convertido en biomasa

En a producto metabólico (p):

Yp/S
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 49

Cinética del crecimiento continuo

Quimiostato

D =f / V

La tasa de intercambio de nutrientes se

expresa como la tasa de dilución (D), la
tasa a la que el medio fluye a través del
recipiente de cultivo en relación con el
volumen del vaso, donde f es la tasa de
flujo (mLh-1) y V es el volumen del vaso
(mL)
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 50

Cinética del crecimiento continuo

dx = μx – Dx
dt

Condiciones estables

dx = 0 μx = Dx μ=D
dt
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 51

CULTIVO CONTINUO
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 52

Cinética del crecimiento continuo

Turbidostato

 Posee una fotocélula

Velocidad de flujo se regula de forma automática

 La velocidad de dilución (D) es variable no es constante

 No posee factor limitante

Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 53

https://www.easybiologyclass.com/industrial-fermentation-process-batch-fed-
batch-and-continuous-fermentation/

Un empresario quiere establecer un proceso productivo de células

altamente proteicas (biomasa celular). En base a esto, que tipo de
sistema de cultivo usted cree sería el más adecuado para alcanzar
mejores rendimientos en biomasa.
Mencione una estrategia que permita tener procesos más económicos
de producción

Literatura de apoyo:
• Ritala et al 2017 Single Cell Protein—State-of-the-Art, Industrial Landscape
and Patents 2001–2016
• Brock, TD, Madigan, MT, Martinho, JM, Parker J. ―Biology of
microorganisms‖ (9th edition) Ed. Prentice-Hall, Inc. 1999
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 54

Monitoreo de crecimiento microbiano en el cultivo

 Determinación del peso seco

 Conteo de células por microscopio
 Método de plaqueo
 Contador electrónico de células
 Turbidimetia
 Espectrofotometria
 Estimación de componentes celulares (proteína, DNA, RMA,
ATP)
 Monitoreo de producción de CO2
 Utilización de oxígeno
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 55

MEDICION DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO
Número de individuos
(Método directo)

Cell/mm3 = Nº de células contadas x

dilución x volumen

Ventajas: fácil, económica, rápida, da

información del tamaño y la
morfología de los microorganismos

Petroff-Hausser Desventajas: población microbiana

(bacterias) grande, a veces es difícil distinguir
Contador coulter entre vivas y muertas
(eucariotas)
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 56

MEDICION DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO
Número de individuos
(Método indirecto)

Ventajas: sólo células

viables, sencillo, sensible

Desventajas: dispersar bien

los microorganismos, hay
que esperar de 24 a 48 h
para tener resultados
Características: se expresa como
unidades formadoras de colonias
(UFC/mL). Se deben producir
entre 25 y 250 colonias.
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 57

MEDICION DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO
Medición de masa celular (método directo)
- Peso seco:

Desventaja : lleva mucho tiempo, es muy

engorroso, se requiere mucho medio de cultivo,
poco sensible, bastantes errores.

Ventaja : medición de hongos

Se usa para organismos que crecen en forma de

filamentos, o para aquellos que forman grumos
no dispersables
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 58

MEDICION DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO
Medición de masa celular
(Método indirecto)
- Espectrofotometría:
Ventaja: es rápido
Desventaja: no diferencia células vivas de muertas,
la concentración celular no debe ser mayor
de107cell/mL ni muy diluido

La cantidad total de constituyente celular está

directamente relacionado con la masa celular
Crecimiento y nutrición microbiana Prof. Luis G. Ramírez Mérida 59

Referencias

• Lee E., Jalalizadeh M., Zhang Q. Growth kinetic models for microalgae
cultivation: A review. Algal Research 12: 497–512, 2015.
• Zijffers J.W., Schippers K.J., Zheng K., Janssen M., Tramper J., Wijffels R.H.
Maximum Photosynthetic Yield of Green Microalgae in Photobioreactors. Mar
Biotechnol 12:708–718, 2010.
• Andrews J.F. A mathematical model for the continuous culture of
microorganisms utilizing inhibitory substrates, Biotechnol. Bioeng. 10 (6):707–
723, 1968.
• Droop M. Vitamin B12 and marine ecology. IV. The kinetics of uptake, growth
and inhibition in Monochrysis lutheri, J. Mar. Biol. Assoc. UK 48 (3): 689–733,
1968.
• Martínez M., Jimenez J., El Yousfi F. Influence of phosphorus concentration
and temperature on growth and phosphorus uptake by the microalga
Scenedesmus obliquus, Bioresour. Technol. 67 (3):233–240, 1999.
• Martínez Sancho M., Jimenez Castillo J., El Yousfi F. Influence of phosphorus
concentration on the growth kinetics and stoichiometry of the microalga
Scenedesmus obliquus, Process Biochem. 32 (8):657–664, 1997.
• Flynn K.J. How critical is the critical N:P ratio? J. Phycol. 38 (5):961–970,
2002.