Cromatografía en capa fina

Nicosia, Salvador1; Madrid Katherine2

7-711-5261; 4-780-8792
Curso de Química Analitica (QM-228), Escuela de Química, Facultad de Ciencias Naturales
y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí. E-mail: toto07nico07@gmail.com 1;
katherinemadrid55@gmail.com 2.

Resumen
En esta experiencia se aplicó la técnica cromatográfica en capa fina para la
separación e identificación de aminoácidos sobre la silica gel. Esto se llevó acabo
preparando en primera instancia soluciones de aminoácidos como: cisteína, prolina,
triptófano y glicina a una concentración de 0.2; luego se inyectaron cada una de
estas sustancias en placas y llevadas a cámaras cromatográficas donde estas
eluyeron a distintas velocidades dependiendo de la fase móvil en la que se
encontraban. Obteniendo un Rf de 0.542 para cisteína, 0.578 para prolina, 0.690
para triptófano y 0.508 para glicina en una fase móvil de n-propanol/NH4OH 10:30,
teniendo esta un tiempo de retención de 1:30h para las otras fases móviles, el
tiempo de retención fue, para etanol/agua70/30, de 1:25h y para el
butanol/HAc/agua de 1:51h, los Rf para estas dos últimas mezclas se pueden
apreciar en el cuadro 4. Con este estudio de la cromatografía en capa fina se pudo
determinar que las sustancias pueden estar unidas en un factor que mediante la
cromatografía de las reacciones pueden separarse.
Palabras clave sencilla, muy utilizada en un
laboratorio de Química Orgánica.
Gel de sílice, polaridad, aminoácidos, Entre otras cosas permite:
placas, ninhidrina. ‐ Determinar el grado de pureza de un
Objetivos compuesto. Se puede determinar así,
por ejemplo, la efectividad de una
- Aplicar la técnica de etapa de purificación. ‐ Comparar
cromatografía en capa fina para muestras. Si dos muestras corren
la separación e identificación igual en placa podrían ser idénticas.
de aminoácidos sobre silica gel. Si, por el contrario, corren distinto
- Revelado de los aminoácidos entonces no son la misma sustancia.
mediante la reacción coloreada ‐ Realizar el seguimiento de una
reacción. Es posible estudiar cómo
con la ninhidrina.
desaparecen los reactivos y
- Cálculo del valor de Rf para cómo aparecen los productos finales
cada uno de los aminoácidos. o, lo que es lo mismo, saber cuándo la
Marco teórico reacción ha acabado (Cases, et-al,
1988).
La cromatografía en capa fina (en
inglés thin layer chromatography o
TLC) es una técnica analítica rápida y
Materiales Resultados
Material Capacidad Cantidad Cuadro1. Recorrido de la placa #1 con
Vaso químico 6 100- N-propanol/NH4OH.
250ml
Columna 3 ---- Aminoácido Recorrido(cm)
cromatográfica
Placas de capa 3 ----
Cisteína 5.5
fina Cisteína 5.4
Probetas 6 50–100 Prolina 5.8
ml Prolina 5.8
Cámara 3 ----
Triptófano 7.0
cromatográfica
Reactivos Triptófano 7.0
Glicina 5.3
Reactivo Cantidad Concentración Glicina 5.3
Glicina 100ml Mezcla 5.0 5.4 5.8 6.9
Prolina 100ml
Mezcla 4.8 5.4 5.7 6.9
Cisteína 100ml
Triptófano 100ml
Ninhidrina ----ml 0.2%
Etanol 100ml 96% Cuadro 2. Recorrido de la placa #2
n-propanol 100ml con Etanol/Agua.
Butanol 100ml
NH4OH 100ml Aminoácido Recorrido(cm)
Ácido acético 100ml Cisteína 0.7
Procedimiento Cisteína 0.6
Prolina 6.7
Preparar los Prolina 6.7
aminoacidos a 0.2 y Triptófano 8.5
Inyectar en la placa
hacvcer una mezcla Triptófano 8.5
de estos
Cisteína 0.6
Glicina 4.0
Mezcla 0.7 3.9 6.7 8.7
Llevar las placas a la Mezcla 0.6 4.1 6.8 8.6
Esperar a que camaras con
recoran los 10 cm diferentes mezlas de
fase molvil. Cuadro 3. Recorrido de la placa #3
con Butanol/Agua.
Aminoácido Recorrido(cm)
Con la ninhidrina Cisteína 0.9
Esperar a que revelar las machas y
sequen las plachas con un lapiz Cisteína 0.8
señalarlas Prolina 3.6
Prolina 3.5
Triptófano 7.0
Triptófano 6.9
Glicina 3.1
Clacular el Rf Glicina 3.1
Mezcla 0.7 3.1 3.6 6.9
 Mezcla 0.7 3.1 3.6 6.9 llevados a través de la fase
Mezcla 0.7 3.1 3.6 6.9 estacionaria por la fase móvil, y la
separación se basa sobre las
diferencias de las velocidades de
Cuadro 4. Rf obtenido para cada fase
migración entre los componentes de la
móvil.
fase móvil. (Skoog, D. et al. 2008).
Amino N- Etanol/ Butanol/H
ácido propanol/ Agua Ac/Agua Para esta experiencia de laboratorio
NH4OH se observó el recorrido de algunos
Cisteín 0.542 0.064 0.076 aminoácidos, los cuales fueron:
a
Prolina cisteína, prolina, triptófano y glicina, a
0.578 0.672 0.358
Triptóf través de una placa de sílica gel. Estos
0.690 0.858 0.692
ano aminoácidos fueron inyectados en las
Glicina 0.508 0.400 0.310 placas y llevados a diferentes cámaras
Cálculos: cromatográficas en donde cada
cámara tenía diferentes mezclas de
Ɛ 𝑅𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑅𝑓 = fase móvil, obteniendo que para la
𝑅𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
cámara donde se encontraba la
5.5 + 5.4 + 5.4 + 5.4/4 mezcla de etano/agua fue la que se
=
10 obtuvo un menor tiempo en el
recorrido, el cual fue de 1:25h; le sigue
𝑅𝑓 = 0.542
la mezcla de n-propanol/NH4OH con
*Estos mismos cálculos se aplican un tiempo de 1:30h y por último la de
para todos los aminoácidos en butanol/HAc/agua con 1:51h.
estudio. *
Cuanto más polar sea el compuesto,
Cuadro 5. Tiempo de recorrido. más retenido estará en el absorbente,
y por tanto irá más lento y el Rf será
Mezcla Tiempo de también menor. Por otra parte, los
recorrido compuestos poco polares, se
N- 1:30 consiguen desplazar a más distancia
propanol/NH4OH
Etanol/Agua desde el origen. La polaridad del
1:25
Butanol/HAc/Agua disolvente influye en el valor del Rf,
1:51
por lo que deberemos tenerlo en
cuenta. Así, para un mismo tipo de
Discusión compuesto, un aumento de la
polaridad del disolvente hará
El término cromatografía es difícil de aumentar su desplazamiento en la
definir de manera rigurosa debido a placa y por lo tanto también aumentará
que el nombre ha sido aplicado a su Rf. (Méndez, A. 2011)
varios sistemas y técnicas. No Según lo citado anteriormente se
obstante, todos estos métodos tienen explica el porqué de las velocidades
en común el uso de una fase de recorrido para cada placa en donde
estacionaria y el de una fase móvil. se encontraban las muestras.
Los componentes de una mezcla son Observando que la cámara con el
etanol/agua es mucho más polar que Recuperado de:
las otra dos, por ende, esta fue la que https://quimica.laguia2000.com
eluyo con más rapidez. Con respecto /general/cromatografia-en-
a los Rf que se obtuvieron los capa-fina
podemos apreciar en el cuadro 4 y  Skoog, D. et al. 2008.
según Méndez, A. 2011 el Rf aumenta Cromatografía en capa fina.
al aumentar la polaridad y en el cuadro
4 se puede observar que para la
mezcla de etanol agua se obtienen
valores elevados de Rf.
Conclusiones
 Con este estudio de la
cromatografía en capa fina se
pudo determinar que las
sustancias pueden estar unidas
en un factor que mediante la
cromatografía de las
reacciones pueden separarse.
 Por medio de polaridad del
solvente utilizado para la
cromatografía se puede
determinan si la solución tendrá
recorrido rápido o lento y nos
muestra resultados de sus
diferentes compuestos.
 En capa fina el valor del
constante Rf se ve afectado por
la calidad del solvente o mezcla
de estos, pureza del disolvente,
influencia de la temperatura, el
tamaño de las partículas del
soporte, entre otros.

Bibliografía
 Cases, M. V., & Hens, A. G.
(1988). Técnicas analíticas de
separación. Madrid, España:
Reverté.
 Mendez, A (2011)
Cromatografia de Capa Fina.