Introdução:

Para esta experiência laboratorial, foi-nos solicitado pela professora a execução

de uma atividade. A atividade pretende permitir aos alunos conhecer o processo
de fermentação que as células podem realizar, assim como as substâncias que se
libertam nesses mesmos processos, através de duas experiencias:

1ºCondições de fermentação nos diferentes meios de temperatura, na formação

da massa de pão, com\sem presença de leveduras;

2ºComposto produzidos durante o processo de fermentação , com\sem a presença

de leveduras ;

Introdução Teóri

A biossíntese de ATP é fundamental para a sobrevivência de qualquer célula, seja

uma simples bactéria ou um complexo neurónio do cérebro humano. A
transferência para as moléculas de ADP da energia potencial de hidratos de
carbono como a glicose ocorre em duas vias metabólicas principais: a fermentação
e a respiração celular.

Com a respiração celular aeróbia, as células catabolizam a glicose de uma forma

mais eficaz, produzindo um elevado número de moléculas de ATP e, como
resíduos, água e dióxido de carbono; neste processo, basicamente uma longa
sucessão de oxidações e reduções, o oxigénio molecular desempenha o papel
crucial de aceitador final de eletrões.

Na ausência de oxigénio, os organismos podem "fermentar" a glicose, uma via

metabólica mais simples e de menor rendimento energético. Mas este facto não
diminui a importância da fermentação: é provável que tenha sido o primeiro
metabolismo energético na história da Vida na Terra; é nela que assenta a
sobrevivência de inúmeros microrganismos que decompõem e reciclam a matéria
orgânica; é a fermentação que assegura um pouco mais de energia aos músculos
cansados durante uma maratona, e está na base de alguns dos alimentos mais
consumidos no mundo.

Vamos esclarecer alguns conceitos essenciais para esta atividade:

Conjunto de reacções químicas, realizadas pelas células de todos os seres
vivos, que envolvem transferências de energia
. Nas células de todos os seres vivos do planeta ocorrem reações químicas a partir
de substâncias que a elas chegam, envolvendo transferências de energia. A este
conjunto de reações dá-se o nome de metabolismo celular. Existem dois processos
essenciais:

. Anabolismo: são reações endenergéticas em que ocorre formação de moléculas

mais complexas a partir de moléculas simples, ocorrendo consumo de energia;

. Catabolismo: reações exo energéticas, em que os compostos orgânicos são

degradados em moléculas mais simples, ocorrendo libertação de energia.

· Existem ainda vários processos catabólicos, entre os quais existe dois em

especial ,a anaerobiose: processo que ocorre na ausência de oxigénio, no caso da
fermentação, que iremos observar nesta experiencia (foco principal) ; e a
aerobiose: ocorre na presença de oxigénio, no caso de respiração aeróbia.

. Glicose: conhecida como açúcar, é um monossacarídeo que possui seis

carbonos- hexoses), utilizada principalmente como fonte de energia pelos
organismos. A glicose é um produto final da fotossíntese, e é a molécula que dá
origem a processos de metabolismo celular como a fermentação e a respiração
aeróbia. Dá-se o nome de glicólise à fase em que a glicose, com seis carbonos
incorporados, é desdobrada em duas moléculas de ácido pirúvico, com três
carbonos, por reações de oxirredução.

. Fermentação Alcoólica: neste processo catabólico as leveduras e algumas

bactérias fermentam os açúcares (glicose) para obtenção de energia. Ocorre a
quebra da molécula de glicose (com seis carbonos) em ácido pirúvico (com três
carbonos), reação de oxirredução, libertando dióxido de carbono- CO2, por
reações de descarboxilação, produzindo assim o álcool etílico, por reações de
redução.

A equação da fermentação alcoólica é a seguinte:

C6H12O6 + 2ADP + P 2etanol + 2Co2 + 2ATP. Este é um processo de oxidação

incompleta, e tem por salto energético final duas moléculas de ATP. É exemplo
deste processo, o fabrico de bebidas alcoólicas.
 C6H12O6 + 2ADP + P -> 2etanol + 2Co2 + 2ATP

. Respiração <1<Aeróbia: neste processo existem quatro etapas: Glicólise,

formação de Acetil-CoA, Ciclo de Krebs e Fosforilação oxidativa, encontra-se
esquematizado todo o processo de respiração aeróbia nos anexos (anexo 5). A
equação da respiração aeróbia é a seguinte:

C6H12O6 + 6O2 -> 6CO2 + H2O + 36 ou 38 ATP.

Como na fermentação, a glicose irá dar origem ao ácido pirúvico por oxirredução,
depois essa molécula por descarboxilação formará duas moléculas de acetil-CoA,
posteriormente esta mesma molécula dará início ao ciclo de Krebs que por
oxidações vão resultar moléculas de NADH, FADH2, CO2 e ATP. A molécula de
NADH transporta eletrões para a cadeia transportadora de eletrões, ao longo
destas vão ocorrendo reações de oxirredução. O oxigénio é o acetor final dos
eletrões, e o CO2 e o H2O são os produtos finais deste processo. A respiração
aeróbia é mais complexa que a fermentação.

. Banho-maria: este método é utilizado em laboratórios para aquecer

substâncias líquidas e sólidas, lenta e regularmente, amostras não possam ser
expostas diretamente ao fogo. Um processo que se pode regular a temperatura
que se pretende para obter melhores resultados.

. Leveduras: elas necessitam de energia para a sua multiplicação, essa energia

provém da degradação da glicose (produto final da fotossíntese e moléculas que
originam a fermentação e a respiração aeróbia).

As leveduras são seres facultativos, pois podem mobilizar energia de compostos

orgânicos em condições de anaerobiose (fermentação) e de aerobiose (respiração
aeróbia). Mas existem outros seres que mobilizam a energia a partir da
degradação de compostos orgânicos e essa situação acontece por fermentação
em meios desprovidos de oxigénio, estes seres têm o nome de - seres anaeróbios
obrigatórios.

Objetivos da experiência:
Esta atividade experimental tem como finalidade compreender a fermentação e a
respiração aeróbia como processos celulares, em que substâncias são libertadas,
para o próprio metabolismo da célula.

A experiência tem como objetivo ainda conhecer quais as condições necessárias

para que ocorra os dois processos em questão, bem como as condições favoráveis
da concentração do substrato.

Teremos igualmente que concluir em que erlenmeyer se realizou a fermentação

alcoólica e a respiração aeróbia, durante a atividade

Protocolo Experimental:
Materiais:
. Balança;

. Fermento de padeiro;

. Vidro de relógio;

. Espátula;

. Proveta;

. Vareta;

. Balões de Erlenmeyer;

. Balões;

. Pipeta;

. Banho-maria;

Reagentes:

. Água destilada;

. Glicose (açúcar);

Procedimento Experimental:

1º - Pesou-se 5g de glicose e adicionou-se 100ml de água destilada (preparação

de uma solução de glicose a 5%);

2º - Pesou-se 30g de glicose e adicionou-se 100ml de água destilada (preparação

de uma solução de glicose a 30%);

3º - Repetiu-se o passo dois mais uma vez;

4º - Pesou-se 20g de fermento de padeiro e adicionou-se 100ml de água destilada
(preparação de uma suspensão de leveduras a 20%);

5º - Agitou-se a suspensão de leveduras com uma vareta;

6º - Marcou-se 4 Erlenmeyers com as letras: A, B, C e D;

7º - Colocou-se 100ml de água destilada no Erlenmeyer A; 100ml de solução de

glicose a 5% no B e, 100 ml de solução de glicose a 30% no C e D;

8º - Adicionou-se 10 ml da suspensão de leveduras a cada Erlenmeyer;

9º - Adaptou-se um balão de borracha no topo de cada Erlenmeyer, exceto no

Erlenmeyer D;

10º - Colocou-se os 4 Erlenmeyers- A, B, C e D no banho-maria durante 40

minutos;

11º - Registou-se os resultados obtidos (volume dos balões e cheiro a álcool ou

não).

12º - Procedeu-se à arrumação e limpeza do material utilizado.

Interpretação de Resultados:

Tabela 1: Sintetização dos resultados obtidos.

Erlenmeyers

A B C D

Volume Meio Não tinha

Vazio Cheio
do Balão Cheio balão

Forte a
Não
Cheiro Fermento Álcool Fermento/Nada
tinha
a Álcool

Respiração Fermentação
Conclusão _______ ____
Aeróbia Alcoólica

Discussão:
Após a realização desta atividade, vamos discutir em seguida alguns aspetos
relevantes:

· Foram utilizadas soluções de glicose, pois é este composto que dá inicio a

processos como a fermentação e a respiração aeróbia, pela fase denominada
glicólise, como explicada na introdução teórica.

· Observou-se que o balão colocado no erlenmeyer A ficou no mesmo modo quanto

ao seu volume, desde o início da atividade até ao fim da mesma. Esta situação
deve-se ao facto de não ter ocorrido nenhum processo que libertasse algum tipo
de gás como ocorreu nos outros erlenmeyers. Este erlenmeyer, contendo apenas
100ml de água destilada, serviu também para mostrar que sem haver leveduras
e glicose, não ocorrem os processos de fermentação e respiração aeróbia.

. Quanto às variações obtidas pelos vários balões dos três erlenmeyers:

. Em A o balão manteve-se na mesma durante todo o processo de banho-maria,

pela razão de que não foi realizado nenhum processo que libertasse gás, por
possuir apenas água destilada e não glicose ou leveduras. Ver nos anexos volume
do balão obtido (anexo 16);

. Em B, o volume do balão aumentou ligeiramente, devido à produção de gás,

realizou-se a respiração aeróbia, o odor libertado do erlenmeyer era a fermento.
Ver nos anexos volume do balão obtido (anexo 17);

. Em C notou-se que durante o processo o balão variou o seu tamanho,

aumentando intensamente de volume, o que se deve ao facto de o erlenmeyer C
possuir uma solução de 30% de glicose, sendo que se deu o processo de
fermentação alcoólica e foi libertado gás, tinha um cheiro intenso a álcool. Ver nos
anexos volume do balão obtido (anexo 18);

. Analisou-se a variação do volume dos balões, e conclui-se que era devido à taxa
de produção de CO2. Assim como em A não se libertou dióxido de carbono, pelo
motivo de a solução não possuir leveduras e glicose, que libertaria CO2, o balão
manteve-se então inalterável. Nos balões dos erlenmeyers B e C, verificou-se que
o balão em C possuía mais volume do que em B, devendo-se ao facto de que a
taxa de produção de CO2 em C foi mais elevada do que a taxa de produção em B,
pois em C havia maior quantidade de glicose do que em B;

. Relativamente ao cheiro que cada uma apresentava:

Em A não havia qualquer tipo cheiro, pois este erlenmeyer possuía apenas água
destilada;

Em B tinha um leve odor a fermento, sendo que a solução contida no erlenmeyer

possuía leveduras e 5% de glicose;
Em C havia um cheiro a álcool, devido à solução possuir leveduras e 30% de
glicose;

Em D tinha um odor forte a fermento, sendo que não tinha balão o CO2
possivelmente libertado pelo processo, foi para a atmosfera.

Conclusão:

Na realização desta atividade deparamo-nos com um problema na montagem da

preparação da solução que foi colocada no erlenmeyer D, mas mesmo assim,
pensamos que conseguimos alcançar todos os objetivos definidos de início.

Com o fim da atividade prática tirámos as seguintes conclusões:

. Para que haja a ocorrência de processos de fermentação e respiração aeróbia,

entre outros a eles associados, é necessário que existam leveduras e glicose.

. Quanto maior for a concentração de substrato, ou seja, maior quantidade de

glicose para dar início à fase que desencadeia o processo de fermentação e
respiração aeróbia, mais energia será libertada, e haverá maior produção de CO2
e etanol, para a fermentação alcoólica, e maior produção de CO2 e H2O, no caso
da respiração aeróbia.

. No erlenmeyer B conclui-se que ocorreu a respiração aeróbia, pois quando se

retirou o balão não havia qualquer cheiro a álcool, e foi libertado um gás,
observou-se isso porque o balão possuía um certo volume.

. No erlenmeyer C ocorreu a fermentação alcoólica, conseguimos perceber isso

pelo cheiro intenso a álcool que foi libertado aquando da retirada do balão, que
possuía um grande volume de gás.

. Nos restantes erlenmeyers: em A não ocorreu respiração aeróbia ou fermentação

pois não havia glicose na solução preparada; em D, apesar de a solução possuir
glicose, não podemos concluir acerca do processo que terá ocorrido pois não
tínhamos balão no erlenmeyer para podermos chegar a uma conclusão.