UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL

ALCIDES CARRION
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
EFP INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TEMA:
TINCIÓN SIMPLE

INTEGRANTE:
ROJAS BERMUDO, Enrique
CATEDRA:
Microbiologia General
CATEDRATICO:
Biologo Julio Ibañez

La Merced – Chanchamayo
02/05/2019
 I. INTRODUCCION
Los microorganismos son no sólo es muy pequeña, sino que también son transparentes.
Las manchas y colorantes se utilizan para dar color a las células bacterianas y aumentar
su contraste para que puedan ser vistos más fácilmente con un microscopio. Los
colorantes son compuestos orgánicos compuestos por un grupo cromóforo, que da el tinte
de su color, y un auxochrome, que se une a la bacteria. muchos tintes bacterianos están
cargados positivamente (catiónicos) y se combinación componentes celulares cargados
negativamente, tales como ácidos nucleicos ADN y ARN y polisacáridos ácidos. El azul
de metileno, cristal violeta, y safranina son colorantes catiónicos. Otros colorantes
bacteria nos están cargados negativamente (aniónicos) y se combinan con componentes
celulares cargados positivamente, tales como proteínas. osina y fucsina ácida son los
colorantes aniónicos.
La mayoría de los procedimientos de tinción se llevan a cabo en células fijadas. La
fijación o el calentamiento de las células secas en la diapositiva, mata las bacterias y hace
que se adhieren a la diapositiva.
1.1. Objetivo general
Identificar a las principales formas bacterianas y la importancia de las tinciones
simples en la caracterización morfológica de estos microrganismos.
1.2. Objetivos específicos
Observar la diferencia de las bacterias de coloración simples

II. MATERIALES Y METODOS

2.1. Materiales
 Violeta de genciana
 Algodón
 Agua destilada
 Alcohol
 Embudo
 Rejilla
 Laminilla
 Cubeta
 Alcohol acetona 80-20
 Ron de quemar
 Mechero
 Microscopio
 Porta objetos

2.2. Métodos
1. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos y etiquetarlos.
2. Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero.
3. Dejar enfriar la laminilla para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean
destruidos.
4. Acercar el mechero al tubo de ensayo quitarle el tapón y flamear rápidamente la boca
del mismo, introducir la laminilla y tomar cuidadosamente la muestra.
5. Los cultivos líquidos son colocados en el porta objetos, extenderla suavemente en un
área circular y esterilizar la laminilla nuevamente. Dejar enfriar el frotis.
6.Agregar colorante sobre la muestra violeta de genciana sobre la mucosa labial
7. Verter el colorante a la cubeta
8.Lavar a chorro con agua destilada
9.Secar a ambiente o con ayuda del mechero para mejor fijación de la muestra

III. RESULTADOS Y DISCUSION

3.1. Resultados
En el laboratorio de la UNDAC (Universidad Nacional Daniel Alcides Carrión) se
realizó la práctica de coloración o tinción simple, nos proporciona exclusivamente
información acerca de la forma(alargada, circular), tamaño y tipo de agrupación de los
microorganismos. Sin embargo, tiene la ventaja de ser un método muy sencillo y rápido.
Se observó que alrededor de ellos se ve el citoplasma, más claramente teñido, y la
membrana que las rodea en tono más oscuro.
3.2. Discusión
Según Zynnon(2013) La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los
componentes celulares. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en
su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina
diluida). La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que
se vean las formas y las estructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un
único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno
(compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las
bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se
utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el
colorante y quedarán teñidas del mismo color.

IV. CONCLUSIONES
Se logra determinar la eficacia de los tintes para determinar la morfología bacteriana de
una mejor manera. El azul de metileno el cual fue utilizado, permitió un mejor contraste
a la hora de analizar la muestra y esto se debe a que el azul de metileno Se trata de un
colorante catiónico que tiñe la célula un color azul. La presencia de moléculas de carga
negativa en la célula hace que el fenómeno de la tinción, como el colorante cargado
positivamente es atraído partículas cargadas negativamente, tales como polifosfatos como
el ADN y ARN, aunque en la muestra no coloreada tuvo la ventaja de que se pudo notar
la muestra bacteriana viva, por tanto, se notó la movilidad bacteriana de algunos
microorganismos

V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS (Según Normas APA)

Brock, (2016). Biología de los microorganismos (12 ed., vol., pp.1-28). Mexico,
Pearson education.
Técnicas de tinción. Recopilado de:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
VI. ANEXOS (Figuras y Cuadros)

Fig. 1 Fig. 2
Materiales Recolección de muestra

Fig. 3 Fig. 4
Desinfección de laminilla Coloración de muestra
 Fig. 5 Fig. 6
Lavado de muestra Dibujo de bacteria

CUESTIONARIO
1. ¿Qué tipos de morfología y agrupación aparecen en los frotis de los cultivos?
Las bacterias de la preparación de yogurt eran bacilos y cocos(diplococos y
estreptococos)
Recuperado de:
https://es.calameo.com/read/0055095909948caf827f1

2. ¿Qué fin tiene la fijación de muestras al realizar un frotis bacteriano?

El fin es que la Extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o
cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si
aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y
nítida. Posteriormente, el frotis debe ser fijado al vidrio del portaobjetos para
poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al
microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos
lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden
 inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y
bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber
Un claro ejemplo seria Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un
portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede
usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida
una mínima gota de agua, que resulta suficiente. Flamear el asa de siembra,
tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en
medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de
siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida
para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no
es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender
una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra,
directamente sobre el portaobjetos. Esperar hasta que el líquido se evapore o
acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso
hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las
células pueden deformarse o romperse.
Recuperado de :
https://es.calameo.com/read/0055095909948caf827f1

3. Señale las ventajas y desventajas de la tinción simple respecto del examen en

fresco.
Las tinciones tienen la finalidad de aumentar el contraste para que puedas
observar estructuras celulares en el microscopio. La ventaja principal es que nos
permite observar estructuras que en su forma natural carecen decoloración
suficiente para ser distinguidas por microscopio. Otra ventaja es que nos permite
distinguir entre diferentes tipos celulares, ya que distintas células responden de
manera diferente a las tinciones, además de que, mediante el uso de las llamadas
técnicas histoquímicas, podemos teñir un determinado tipo celular y hacer que
sólo estas células se tiñan, mientras que las otras no, así podemos seguir células
que tengan una enzima determinada o donde tenga una reacción particular que no
ocurra en otras, siempre que se usen colorantes adecuados. Por otro lado, la
principal desventaja es que, debido al tratamiento al que debe someterse un tejido
vivo para su tinción, las células acaban muriendo, con lo cual, no es posible
observar esas células activas en su estado natural, sino muertas. Recuperado de:
https://es.calameo.com/read/0055095909948caf827f1

4. ¿Por qué en una tinción neutra el colorante tiñe a toda la estructura celular
sin diferenciar?
Poseen una porción ácida y otra básica, ambas con capacidad para aportar color.
Por tanto un mismo colorante puede teñir tanto las partes básicas como las ácidas
de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno.

5. ¿Qué estructuras celulares son teñidos por colorantes ácido y básico?.

Menciónelos.
Tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc.
6. ¿Qué diferencias existe entre un preparado en fresco y en seco?
Una preparación fresca se realiza de una muestra recién extraída. Una preparación
en seco puede ser reciente así como puede tener algunos días, la diferencia es que
no aplicaras sobre esta ninguna tinción para observar al microscopio ni ningún
fijador.

7. ¿Qué diferencias existe entre una tinción doble y una neutra?

Tinción simple es un procedimiento de tinción rápido y sencillo en el cual se

emplea un solo colorante, por eso se denomina simple. Células de mejillas
humanas teñidas mediante tinción simple con azul de metileno. Recuperado de:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm