Manual para operar en

laboratorio
EQUIPOS DE CROMATOGRAFIA

|CROMATOGRAFIA| 2019
INTRODUCCION

La Química es la ciencia que estudia la estructura, propiedades y transformaciones de

la materia, incluyendo en esta definición a los seres humanos y su entorno. Sus
aplicaciones son muy diversas ya que la química se puede encontrar en cualquier
campo o sector tanto en las industrias alimentaria, cosmética, farmacéutica, bien
desarrollando nuevos fármacos o métodos de diagnóstico, en el desarrollo de nuevos
materiales o en la búsqueda de alternativas a los combustibles fósiles.

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas

complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de técnicas
basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos
componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos
componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos da como
resultado una retención diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación efectiva
en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.

La separación de compuestos se hace con el propósito de identificar, cuantificar o

purificar es uno de los aspectos desafiantes de la química analítica. En este trabajo se
consideran algunos tipos de cromatografía, los cuales se encuentran entre los más
poderosos métodos de separación.

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El laboratorio de análisis cromatógraficos tiene como función dar
respuesta a las investigaciones que se llevan a cabo en los diferentes
sectores de la industria, proporcionando información sobre productos
de transformación de la misma, además de seguimientos que brindan
información con respecto a las transformaciones que pueden ocurrir
durante el proceso.

Descripciones e indicaciones para tener en cuenta

TIPOS DE RIESGOS
En este Manual se han considerado los riesgos asociados al contacto y la
manipulación de agentes químicos (riesgo químico), Físicos (riesgo Físico) y
biológicos (riesgo biológico).

RIESGOS QUÍMICOS
Por la manipulación inadecuada de agentes químicos se está expuesto a: ingestión,
inhalación y/o contacto con la piel, tejidos, mucosas u ojos, de sustancias tóxicas,
irritantes, corrosivas y/o nocivas. Algunos agentes químicos son fundamentalmente
volátiles, por lo tanto, aumentan el riesgo de exposición a ellos.

RIESGOS FÍSICOS
Por la manipulación o ingestión de gases o partículas radioactivas; exposición a
radiaciones ionizantes y/o no ionizantes; exposición a ruidos y vibraciones o una
carga calórica sobre la superficie corporal y quemaduras, especialmente aquellas que
están sin protección.

RIESGOS BIOLÓGICOS
Riesgos por microorganismos
La infección por microorganismos se puede adquirir por distintas vías: inhalación,
ingestión o contacto directo a través de la piel erosionada o mucosas
Riesgos por animales de laboratorios
El riesgo de transmisión de agentes biológicos desde animales de laboratorio
pueden producir por: inhalación de polvo contaminado con el desecho de los animales
o pelos, mordeduras, rasguños o auto inoculación durante la manipulación de ellos

NORMAS DE SEGURIDAD PARA LABORATORIOS

EQUIPOS ELÉCTRICOS O ELECTRÓNICOS

Leer cuidadosamente las instrucciones y las normas operativas antes de usar

cualquier equipo o instrumento de laboratorio y asegurarse de que funciona
correctamente.

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 No poner en funcionamiento un equipo eléctrico cuyas conexiones se encuentren
en mal estado o que no esté puesto a tierra.
Usar calzado protector con suela aislada cuando se van a usar equipos eléctricos o
electrónicos.
Asegurarse de que las manos estén secas.
Siempre que se usen equipos eléctricos productores de altas temperaturas (chispas,
resistencias, arcos voltaicos, etc.), asegurarse de que no haya productos inflamables
en las cercanías.
Al trabajar con equipos de absorción atómica, se deben tener en cuenta las normas
que rigen el manejo de gases y el encendido de llamas. También tener en cuenta que
los desechos del nebulizador son ácidos.

ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL

Se utilizarán de acuerdo a la naturaleza del trabajo y riesgos específicos.

Para el cuerpo:
Delantal, pantalones, gorro, etc.
Guantes
Pechera

Para las vías respiratorias:

Mascarillas:
Contra polvo: en caso de trabajar en ambientes con partículas de polvo.
Contra aerosoles: necesarias para trabajar con centrífugas o agitadores de tubos.
Contra productos químicos específicos: en caso de no existir buena ventilación o
extracción (Verificar que el filtro sea el adecuado).

Para la vista:
Lentes de Policarbonato
Careta facial en caso de realizar trasvasijes fuera de las campanas de extracción

Para los oídos:

En caso de ruidos producidos por equipos y/o campanas de extracción, que
sobrepasen los 85 decibeles, se deberá utilizar protectores auditivos tipo fono

SEÑALIZACIÓN

 De acuerdo a las disposiciones legales vigentes (D.S N° 594) todo laboratorio

debe presentar señal etica de seguridad y emergencia
La señaletica debe estar ubicada en lugares de fácil visualización.
La dimensiones y colores de cada señaletica debe cumplir con lo estipulado en las
Normas Chilenas (NCH Of. 2114)

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 PROTECCIÓN CONTRA INCENDIO

 Todos los laboratorios deberán contar con extintores contra incendio y

detectores de humo
Los laboratorios deberán contar con un sistema de alarma
Los encargados de cada laboratorio serán responsables de verificar el estado de los
extintores. En caso de requerir extintores nuevos ó recargar extintores despresurizados
deberá avisar al Depto. De Prevención de Riesgos PUC.

ELEMENTOS DE SEGURIDAD GENERAL QUE DEBEN EXISTIR EN UN

LABORATORIO EN CASO DE EMERGENCIA.

 Extintor portátil de acuerdo a los riesgos específicos.

Ducha de emergencia.
Lavador de ojos.
Campana con tiraje forzado (en caso de emergencias químicas). Cuando se trabaje
con productos químicos, especialmente si son corrosivos, o se confeccione material de
vidrio.

Descripciones de las técnicas cromatograficas utilizadas en el

laboratorio

CROMATOGRAFIA IONICA

La cromatografía iónica es uno de los métodos más importantes para el análisis de

trazas de aniones y cationes. Es una técnica absolutamente imprescindible en el análisis
de aguas y medio ambiente.

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Se basa en el uso de resinas de intercambio
iónico que se encuentran dentro de columnas.
Cuando una muestra iónica atraviesa estas
columnas, los iones presentes se separan
debido a las diferentes retenciones que sufren
al interactuar con la fase fija de las columnas
analíticas. Una vez separada, la muestra pasa
a través de un detector (conductimétrico,
amperométrico, UV) donde se registra la
señal obtenida respecto al tiempo de
retención. El resultado son unos
cromatogramas donde la posición de los
máximos nos indica el ión presente (carácter
cualitativo) y su área nos indica la cantidad
existente de dicho ión (carácter cuantitativo)

 -Gamma de cromatógrafos iónicos flexibles y a su vez compactos.

 -Desarrollado para los análisis de rutina muy exigentes en las gamas de los
µg/L - mg/L - g/L.
 -La automatización de ser requerida puede combinarse con técnicas de
preparación de muestras inline como la ultrafiltración, dilución o la diálisis.
Además de la preparación de eluyente y diferentes modos de gradientes.
 -En la configuración STREAM, se utiliza el eluyente suprimido para lavar la
unidad de supresión regenerada, reduciendo consumo de reactivos.
 -MagIC Net el software que controla nuestros cromatógrafos, registra todos
los datos generados, en español.

− Cuando las separaciones exigen condiciones químicas fuertes se emplean

intercambiadores iónicos inorgánicos.

− Este tipo de cromatografía ha de realizarse en medios líquidos.

− Las separaciones por intercambio iónicos, se llevan a cabo con materiales

insolubles y de textura porosa.

ASPECTOS DE SEGURIDAD
Utilice los elementos de protección personal, para operar el equipo, gafas, guantes de
nitrilo.

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Cromatografía de fluidos supercríticos

La cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) es una modalidad híbrida entre la

cromatografía de gases y de líquidos que combina algunas características de cada una
de ellas. Esta técnica es una de los tres tipos importantes de cromatografía en columna,
ésta permite la separación y determinación de compuestos que no son manipulados ni
por la cromatografía de gases ni por la de líquidos: compuestos no volátiles o
térmicamente lábiles para los que la cromatografía de gases es inaplicable y los
Introducción a los métodos de separación compuestos que tienen grupos funcionales
que no son detectables por las técnicas espectroscópicas o electroquímicas empleadas
en cromatografía de líquidos

Instrumentación
La instrumentación empleada en la cromatografía de fluidos supercríticos es similar a
la de cromatografía de líquidos, aunque debe incorporar un horno
termostato (similar al de cromatografía de gases, para controlar con precisión la
temperatura de la fase móvil) y un restrictor o un sistema de contrapresión (que
sirve para mantener la presión de la columna en el nivel deseado y para convertir el
eluato a gas y arrastrarlo al detector):

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Un restrictor típico consiste en un capilar de 2 a 10 cm de longitud y de 5 a 10 μm de
diámetro unido al extremo final de la columna. Son intercambiables, para ajustarse a distintas
presiones y tasas de flujo.

Planta de fluidos supercríticos

Especificaciones
El horno termostato tiene como misión el mantener la columna termostatizada a una
temperatura fijada con gran precisión, por otro lado es necesario que el control de
termostatizacion del horno para permitir incrementar la temperatura de este a una velocidad
prefija y constante (para trabajar con técnicas de temperatura programada). Evidentemente el

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 primer requisito es fácil de cumplir, pero cuando se requiere trabajar con temperatura
programada, el horno debe cumplir una serie de requisitos tales como tener escacia inercia
térmica particularmente si es necesario realizar rampas de temperatura muy rápidas y poseer
un sistema de control de temperatura muy sofisticado que incluya la posibilidad de programar
las posibles variaciones de temperatura del horno así como los tiempos que se han de
realizarse.

Suele trabajar a temperaturas elevadas, a veces cíclicamente, pudiendo producir

contaminación ambiental cuando se trabaja con detectores no destructivos

Riesgos:

 Disconfort térmico por el calor desprendido por el aparato

 Quemaduras térmicas por contacto con el detector, la columna del inyector
 Contaminación ambiental
 Pinchazos por la manipulación de jeringas
 Fugas de gases inflamables (sobretodo H2)
 Contactos eléctricos indirectos (sobre todo en aparatos antiguos)

Control del riesgo:

 Ventilación adecuada para disipar el calor producido por los aparatos

 Utilizar guantes resistentes al calor para manipular zonas calientes
 Conectar la salida del divisor de flujo del inyector de capilares y de los
detectores no destructivos al exterior
 Mantenimiento preventivo adecuado La mayoría de estas instrucciones son
extensivas a los ESPECTRÓMETROS DE MASAS, tanto si utilizan
Cromatógrafo de gases como fase previa o no

Columnas cromatograficas en SFC

Debido a la baja viscosidad de los fluidos supercríticos, las columnas deben ser mucho más
largas que las empleadas en cromatografía de líquidos. En cromatografía de fluidos
supercríticos se emplean tanto las columnas capilares como las columnas de relleno:

 Columnas capilares o tubulares abiertas: son de sílice fundida con recubrimientos

internos (de un espesor de 0’05 a 1 μm) de varios tipos de siloxanos enlazados o
entrecruzados, similares a las empleadas en cromatografía de gases, con longitudes que van
desde los 10 a los 20 m y diámetros internos que oscilan entre 50 y 100 μm.

 Columnas de relleno: son de acero inoxidable de 10 a 25 cm de largo, diámetros que

varían entre 0’5 y 5 mm y cuyas partículas tienen un diámetro que oscila entre 3 y 10 μm.
Son semejantes a las empleadas en cromatografía de reparto y proporcionan más platos
teóricos (más de 100.000) y manejan volúmenes más grandes de muestra que las
columnas capilares.

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 columnas de extracción con fluidos supercríticos

Detectores en SFC
La principal ventaja de la cromatografía con fluidos supercríticos frente a la HPLC es que se
pueden utilizar detectores de ionización de llama, como en la cromatografía de gases.

Este detector es de respuesta universal para compuestos orgánicos, de elevada

sensibilidad y exento de problemas.
También pueden emplearse, como en la cromatografía de gases, detectores de absorción en
el ultravioleta y en el infrarrojo, de emisión de fluorescencia, termoiónica y fotométrica
de llama.
Los espectrómetros de masas también se pueden adaptar como detectores, más fácilmente
que para HPLC.

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Recomendaciones generales
ESPECTROFOTÓMETRO UV-VISIBLE E INFRARROJO, FLUORÍMETRO, BALANZAS,
PHMETRO, POLARÓGRAFOS Y OTROS APARATOS DE ELECTROANÁLISIS,
AUTOANALIZADORES, MICROSCOPIOS, AGITADORES, ETC

Principales Riesgos de estos Equipos:

 Contacto eléctrico
 Quemaduras térmicas si hay zonas calientes
 Formación de ozono cuando se utilizan lámparas
 Radiaciones

Procedimientos para Reducir el riesgo:

 Instalación adecuada
 Mantenimiento preventivo eficaz
 Instrucciones de uso y procedimientos normalizados de trabajo con
instrucciones de seguridad para cada técnica En la electrogénesis a alto voltaje
atención al riesgo eléctrico

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