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PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA
DEPARTAMENTO DE BIOMEDICINA Y
BIOTECNOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA I
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PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA
DEPARTAMENTO DE BIOMEDICINA I
MICROBIOLOGÍA I
Procedimiento a seguir:
Se toma el asa de siembra y se esteriliza a la llama del mechero, hasta que se
pone al rojo.
Se destapa el tubo que contiene el microorganismo, tomando el tapón con el
dedo meñique de la mano derecha. Se esteriliza la boca del tubo pasándolo ligeramente
por la llama del mechero. Se introduce el asa, se roza suavemente la superficie del
cultivo, y se saca el asa con cuidado para no tocar las paredes del tubo. Se esteriliza la
boca del tubo y se cierra.
Se abre el tubo que contiene el medio nuevo y se esteriliza la boca en la llama
del mechero. Se introduce el asa de siembra (que contiene una muestra del
microorganismo) hasta el fondo del tubo. Al sacar de nuevo el asa se avanza en zig-zag
sobre la superficie del medio sólido. Se flamea la boca del tubo antes de cerrarlo de
nuevo y el asa de siembra se esteriliza a la llama del mechero.
Los tubos inoculados se incuban en una estufa a 371C durante 24 horas,
escribiendo el nombre del microorganismo resembrado en el tubo nuevo.
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microorganismos frente a otros. Los medios diferenciales permiten diferenciar o
distinguir a algunos microorganismos según el crecimiento que tengan en estos medios.
En esta práctica vamos a observar el crecimiento de microorganismos en varios
medios selectivos y diferenciales. Los microorganismos usados son: Escherichia coli y
Staphylococcus aureus. Los medios son agar Levine y manitol salado. Se dispone de
una placa Petri de cada uno de estos medios. Se inoculará Escherichia en agar Levine y
Staphylococcus en Manitol Salado.
Manitol salado
Fundamento: Este medio contiene una elevada concentración de cloruro sódico,
lo que permite el crecimiento sólo de microorganismos tolerantes a ella, entre los que
se encuentran los pertenecientes al género Staphylococcus. Además, el medio contiene
como fuente de carbono manitol, que es utilizado por los microorganismos
produciendo ácido que ocasiona un viraje del colorante rojo de fenol que contiene el
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medio, que cambia a amarillo.
Crecimiento de microorganismos: En manitol salado tienen que crecer sólo
estafilococos, formando colonias pequeñas amarillas rodeadas de un halo amarillo.
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Procedimiento:
- Con el asa de siembra estéril se toma una muestra del cultivo bacteriano,
rozando suavemente el extremo del asa en la superficie del cultivo.
- Se coloca una gota de agua en un portaobjetos y sobre ella se deposita el
microorganismo, extendiendo la suspensión de bacterias sobre la superficie del porta.
- Fijar la preparación calentando el porta muy ligeramente sobre la llama del
mechero hasta que esté seco (un exceso de calor podría destruir las bacterias).
- Cubrir la preparación con el colorante cristal violeta (colorante primario)
durante 2 minutos. Lavar con agua.
- Escurrir el exceso de colorante y aplicar una solución de lugol durante 1
minuto.
- Decolorar con alcohol de 961 hasta que no salga mas colorante. Lavar con
agua.
- Aplicar safranina (colorante de contraste) durante 1 minuto.
- Lavar con agua, secar al aire y observar la preparación con el objetivo de
inmersión del microscopio óptico.
Las bacterias Gram positivas aparecen coloreadas en violeta y las Gram
negativas presentan una coloración rojiza.