Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Ecología microbiana

Practica 3: Análisis de la calidad del agua Il.

Determinación microbiológica.

Objetivos
 Determinar el NMP de microorganismos coliformes totales, coliformes
fecales y Escherichia coli, en la prueba presuntiva.
 Determinar el NMP de Escherichia coli en la prueba confirmativa.

Resultados
Tabla 1.- Resultado de la prueba confirmativa para la cuantificación de microorganismos
coliformes totales.
Equipo Estación Tubos positivos por alícuota Número NMP/100
característico mL.
10 mL. 1 mL. 0.1 mL.
1 1 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
2 1 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
3 3 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
4 3 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
5 5 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
6 6 2 1 1 2-1-1 20
7 7 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
8 6 3 3 2 3-3-2 1100

Tabla 2.- Resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación de microorganismos

coliformes fecales (termotolerantes).
Equipo Estación Tubos positivos por alícuota Número NMP/100
característico mL.
 10 mL. 1 mL. 0.1 mL.
1 1 1 1 3 1-1-3 190
2 1 3 2 2 3-2-2 210
3 3 3 3 3 3-3-3 ≥2400
4 3 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
5 5 3 3 2 3-3-2 1100
6 6 1 1 1 1-1-1 11
7 7 3 3 2 3-3-2 1100
8 6 3 3 3 3-3-2 ≥ 2400

Tabla 3.- Resultados de la prueba confirmativa para la cuantificación de Escherichia coli presuntiva.
Equipo Estación Tubos positivos por alícuota Número NMP/100
característico mL.
10 mL. 1 mL. 0.1 mL.
1 1 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
2 1 2 2 3 2-2-3 Inaceptable
3 3 3 3 2 3-3-2 1100
4 3 2 1 0 2-1-0 15
5 5 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
6 6 1 2 1 1-2-1 11
7 7 3 3 3 3-3-3 ≥ 2400
8 6 3 3 2 3-3-2 1100

Tabla 4.-Resultados de la prueba completa para la cuantificación de Escherichia coli.

Equipo Estación Número NMP/1100
característico
1 1 0-2-2 12*
2 1 0-3-3 19*
3 3 0-2-2 12*
4 3 0-3-0 9.4*
5 5 0-0-2 6*
6 6 1-0-0 4
7 7 1-2-1 15*
8 6 3-3-3 >2400
(Los números con un * indican que el NMP ha sido seleccionado de la tabla
general de NMP)
 2000

1500
Microorganismos coliformes
NMP/mL

totales

1000 Microorganismos coliformes

fecales

Escherichia coli
500

0
1 2 3 4 5 6 7 8
Equipo

Figura 1. Prueba presuntiva para el NMP

100
90
NMP Escherirchia coli /100 mL

80
70
60
50
40
30
20
10
0
1 2 3 4 5 6 7 8
Equipo

Figura 2. Prueba completa para el NMP de Escherichia coli

Discusión
Un gran número de enfermedades son transmitidas por vía fecal-oral utilizando
como vehículo los alimentos y el agua, es por ello que es necesario contar con
microorganismos que funcionen como indicador de contaminación fecal. Estos
deben de ser constantes, abundantes y exclusivos de la materia fecal.
El grupo coliforme es constante, abundante y casi exclusivo de la materia fecal,
por lo que es utilizado como indicador de contaminación fecal en agua; conforme
mayor sea el número de coliformes en agua, mayor será la probabilidad de estar
frente a una contaminación reciente.
Con los resultados obtenidos en la tabla 1 y lo observado en la figura 1, se tiene
que los microorganismos coliformes totales, en casi todas las estaciones fueron
cantidades de 1100 o ≥ 2400 como NMP/mL, lo que significa que la cantidad de
microorganismos que no son de origen fecal es alta, pero que evidentemente son
microorganismos que se encuentran en forma natural en el agua, ya que al
comparar con las tablas 2 y 3 se obtienen cantidades menores de coliformes de
origen fecal en muchos de los casos.
En la tabla 1, se obtiene una discrepancia entre el equipo 6 y 8, ya que al ser de la
misma estación , obtiene valores muy distintos, esto se puede deber a que la toma
de muestras del equipo 6 fue en un lugar donde la carga microbiana no era
uniforme o era un lugar alejado de la zona con mayores concentraciones de estos
microorganismos o también se puede deber a errores de conteo de colonias para
la determinación de NMP o de la alícuota que se haya colocado o si se omitió
alguna.
Con base en los resultados obtenidos de la tabla 2 y en la figura 1 como apoyo se
tiene que los microorganismos fecales (termotolerantes) en los equipos 3,4,5,7 y 8
se encuentran en valores de 1100 o ≥ 2400, lo que significa que en estas zonas
existe la presencia de microorganismos que indican la existencia de
contaminación fecal, ya sea de origen humano o animal, ya que las heces
contienen coliformes termotolerantes que están presentes en la microbiota
intestinal, estas cantidades se pueden deber a que en estas zonas de las
estaciones puede que desemboquen drenajes o personas o animales de la
población defequen en esas zonas y a través de la corriente se dispersen a las
demás estaciones, ya que en comparación con la estación 1 , los números de
microorganismos son mucho menores, aquí nuevamente se tiene una
discrepancia con el equipo 6 y 8, ya que al obtener muestras de la misma estación
la determinación del NMP en el equipo 6 es muchísimo menor que en el equipo 8,
esto se mantiene a las condiciones antes mencionadas como posibles errores o
causas de la discrepancia, aunque al ser un conteo bajo de forma constante,
puede ser que bien la muestra no fue tomada correctamente, se mantuvo una baja
cantidad de oxígeno en la botella y por ende la sobrevivencia de los
microorganismos fue escasa o bien, realmente la zona donde tomaron la muestra
no tenía grandes cantidades de estos, a pesar de que en el resto de las zonas de
muestreo había una alta cantidad.
Para realizar la prueba completa para la identificación de Eschericihia coli se usó
el medio Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) el cual es utilizado para el
aislamiento de Enterobacterias. El uso de Eosina y Azul de Metileno permite la
diferenciación entre organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa, por
lo cual, Escherichia coli tiene colonias de color negro azulado con brillo verde
metálico.
La prueba se vuelve positiva con la presencia de una colonia con brillo verde
metálico en el medio. En base a la identificación de Eschericihia coli se obtuvieron
los resultados de la tabla 4, dependiendo del numero de diluciones positivas se
obtuvo el número característico para saber el NMP de la bacteria en cuestión.
Con los resultados obtenidos se observó que en las estaciones 1, 3, 5 y 7 hay una
cantidad mínima de la bacteria por 1 mL de muestra (Reportados en la tabla
general de NMP), lo cual nos muestra que de las bacterias coliformes que
fermentaron la lactosa en el caldo Bilis Lactosa Verde Brillante (BLVB) una
cantidad menor al 20% son Escherichia coli. Nuevamente se mostró una
discrepancia en la estación 6, donde el equipo 6 reporta 4 NMP/1100 y el equipo 8
>2400 NMP/1100, esto debido a que la zona de muestreo fue diferente para la
muestra de agua para microorganismos, y no se puede descartar las condiciones
ya mencionadas.
Conclusiones
 La forma de tomar la muestra influye en los resultados
 Las zonas de muestreo en general presentan contaminación fecal
 La presencia de E. coli fue abundante sólo en ciertas zonas

Cuestionario
1.- Mencionar qué inhibidor selectivo contiene el medio BLVB
La bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
bacterias Gram + y Gram – a excepción de coliformes.
2.- ¿Qué entiende, en general, por microorganismo indicador?
Son aquellos que tienen un comportamiento similar a los patógenos en cuanto a
concentración en las aguas y reacción frente a factores ambientales, pH,
temperatura, presencia de nutrientes y tiempo de retención hídrica.
Una vez que se ha demostrado la presencia de estos grupos indicadores, se
puede inferir qué microorganismos patógenos se encuentran presentes
3.- ¿En qué casos se utiliza Clostridium perfringens como microorganismo
indicador de contaminación fecal?
Cuando Escherichia coli y los enterococos tienen diversas limitaciones como es su
escasa supervivencia en cuerpos de agua y fuentes no fecales, su habilidad para
multiplicarse después de su liberación en una columna de agua y debilidad frente
a los procesos de desinfección. También se pueden usar bacterias anaerobias
fecales (Bacteroides spp., Bifidobacterum spp.) y virus (colifagos, fago B. fragilis)
 Bibliografías
 Adina J., Badia R.,Murrell L.,Pérez H.”Bacterias indicadoras de
contaminacion fecal en la evaluación de la calidad de las aguas: revisión de
la literatura”.Vol.44,No.3,Revista CENIC Ciencias Biológicas,pp.24-26
(2013).

 Del Pilar M, Ávila S, Mónica S, Gómez AC. “Indicadores microbiológicos de

contaminación de las fuentes de agua”. Nova - Publicación Científica. 2005