ANEXOS PRACTICA 1

Distintos tipos de medios de cultivo.

MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un
determinado tipo de microorganismos posee.
MEDIOS GENERALES. Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u determinado tipo
de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás.

Los tipos básicos de medios de cultivo atendiendo a su estado físico:

Medios Líquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano de células

estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los medios sólidos, por ejemplo
en la síntesis de exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada, Caldo común,
Caldo Cerebro Corazón, Caldo Saboureaud, etc.
Medios Sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de colonias sobre la
superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de las colonias, lo que no permiten
los medios líquidos. Se diferencian porque tienen una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar.
- Ejemplo: Agar Común, Agar SS, Agar Cerebro Corazón, Agar Saboureaud, etc.
Medios Semisólidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor
porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura ambiente.
Los medios sólidos tienen generalmente agar–agar como agente solidificante, espesante o
gelificante. El agar-agar es una sustancia hidrofílica de carácter coloidal procedente de diversas
especies de algas marinas, especialmente del género Gelidium, que tiene la propiedad de formar un
gel. Químicamente el agar-agar es un polisacárido de cadena larga, dependiendo de su tamaño el
poder gelificante.
Preparación y esterilización de medios de cultivo.
En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados; normalmente
bajo la forma de liofilizados a los que es preciso rehidratar. En estos casos la preparación del medio
de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua
destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles, se esterilizan por
filtración y se añaden al resto de los componentes después de que estos hayan sido previamente
esterilizados en la autoclave y enfriados a temperatura ambiente ó a 40-50ºC si se trata de medios
con agar.
Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos,
matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha de distribuir en tubos ó en matraces será necesario
fundir el agar en baño Maria u horno microondas, una vez fundido y homogenizado, se distribuye
en caliente a los tubos ó matraces (no en placas Petri) se tapa y se esteriliza en el autoclave.
Una vez finalizada la esterilización los medios se dejaran enfriar a temperatura ambiente y en el
caso de medios sólidos contenidos en tubos deberán, en su caso, inclinarse para que al solidificarse
adopten la forma de agar inclinado ó pico de flauta(slant) si tal es su finalidad.
Métodos de esterilización
Agentes físicos
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye
a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los
microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el
método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas
temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño. La radiación, o emisión y propagación de la energía a
través de un medio, puede ser utilizada como agente para la eliminación de microorganismos. Así
tenemos que las radiaciones ionizantes se pueden utilizar para la esterilización de materiales
termolábiles, como por ejemplo materiales plásticos, y las radiaciones no ionizantes, como la luz
ultravioleta, puede ser empleada en el control de áreas cerradas.
Agentes mecánicos
La filtración permite la remoción de todos los microorganismos presentes en un líquido o un gas
reteniéndolos sobre la superficie de un material.
Agentes químicos
Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la
capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los componentes celulares
de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.)

ANEXOS PRACTICA 2.

¿Qué es el agar y de donde se obtiene?

El agar es un polisacárido, solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo.

Proveniente de algas marinas del género Gelidium. Se disuelve completamente en 100ºC.

¿Por qué el agar nutritivo es un medio general para el cultivo de bacterias?

Este medio es ideal para el cultivo de microorganismos que no presentan exigencias particulares. Es
muy útil porque permanece sólido incluso a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias
pequeñas. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es
atacado por aquellas que crecen en él.

¿Cuáles son las ventajas de un cultivo puro?

Los cultivos puros son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener
estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola célula. Se debe evitar
la entrada de otros microorganismos que contaminen. Todos los microbiólogos saben que han de
trabajar con cultivos axénicos (puros) para que sus experimentos sean significativos.
¿Por qué razón no debes compartir el mechero de Bunsen?

El mechero es un método de asepsia y esterilización de los implementos el cual debe permanecer

fijo en un solo lugar del laboratorio para prevenir cualquier incidente o que se contaminen las
muestras con agentes extraños, con este el cual pueda interferir con el desarrollo de la práctica
como el rompimiento de este por descuido o el derrame de alcohol sobre otra persona.
¿Cuál es la razón para flamear los tubos antes y después de cada transferencia?
Para evitar que al momento de destapar y cerrar el tubo entre microorganismos que contaminen la
muestra.
Explica por qué debes evitar que el asa llena de inóculo toque la boca del tubo fuente o del tubo
a ser inoculado.

Se evita ya que al tocar el asa la boca del tubo podría contaminarlo de microorganismos lo que
probablemente acabara afectando los datos y no se obtendrán los resultados esperados al terminar
los procedimientos de la práctica.
Cuando tomas un inóculo de una caja de Petri. ¿Por qué es necesario tocar una parte estéril del
agar con el asa antes de tocar el crecimiento bacteriano?

Para minimizar un poco la temperatura ya que si se pone directamente con las bacterias puede
romper el agar y matarlas, lo que dañaría la muestra.
¿Por qué el asa debe ser flameada antes y después de todos los procedimientos de siembra?

Con el fin de esterilizarla porque en el transcurso de moverla de un lado a otro puede atrapar
microorganismos que contaminarían la muestra
¿Por qué las cajas de agar deben mantenerse invertidas durante la incubación?

La caja de Petri, debe estar invertida durante la incubación para evitar que se extiendan las colonias
con el agua de condensación, que de otra manera puede caer sobre ellas. Si la placa no es invertida
durante la incubación, la bacteria no podrá colonizar el agar apropiadamente, lo que evitará que
crezca y forme colonias adecuadamente, o estimulará el crecimiento de otros microorganismos.
Cualquiera de estas dos consecuencias invalidará el experimento.

ANEXOS PRACTICA 3
¿Por qué los colorantes básicos son más efectivos para las tinciones bacterianas que los tintes
ácidos?

Es debido a que los colorantes básicos, están cargados positivamente y las células bacterianas en su
pared celular poseen componentes con carga negativa, lo que genera reacciones entre ellos. Los
más utilizados son el Cristal Violeta, el Azul de Metileno y la Safranina. Mientras que los colorantes
ácidos están cargados negativamente.

¿Una tinción simple puede ser usada para identificar algo más que las características morfológicas
de un microorganismo? Explique

No, La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo solo para que se vean las formas y
las estructuras celulares básicas, es decir, su morfología externa.
Si se te olvidara fijar la muestra durante la aplicación del procedimiento de tinción simple, ¿Qué
diferencias crees que encontrarías al mirar tu muestra en comparación con una correctamente
fijada?

La fijación coagula el protoplasma de la célula bacteriana y una vez se agregue el colorante evita
que haya modificaciones en este, además se encoge de tamaño por lo cual si el proceso de fijación
no se realiza también se podrían observar bacterias un poco más grandes y en algunos casos en
movimiento.
Si durante una charla de amigos uno de ellos derrama café sobre tu camiseta y luego de varias
lavadas no puedes recuperar su color original; ¿podemos decir que el café es un verdadero tinte
biológico o es solo una sustancia capaz de impartir color? Explica tu razonamiento.

En el caso planteado sería una sustancia que de imparte color, ya que un tinte se constituye de un
cromógeno, pero estos no tienen la propiedad de ionizarse para unirse a las fibras de los tejidos y
no está presente el tercer componente de todo tinte que es el auxocromo.

ANEXOS PRACTICA 4.
¿Cuál es la ventaja de la técnica de tinción diferencial frente a la de tinción simple?

En la tinción simple se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen
con la misma tonalidad en cambio en la tinción diferencial se utilizan varios colorantes combinados.
Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo
con su propia constitución química.
Diga cuál es la función de Cada uno de los siguientes reactivos en una tinción diferencial: tinte
primario, contratinte, agente decolorante, mordiente

Tinte primario: tiñe a la bacteria de color rosa

Contratinte: tiñe de rojo la bacteria.
Agente decolorante: sirve como solvente de lípidos y agente deshidratante de proteínas. Remueve
el cristal violeta.
Mordiente: forma un complejo insoluble con CV. Ayuda a adherir el tinte a la célula. Ayuda a resistir
la decoloración.
¿Por qué es esencial que el colorante primario y el contra tengan colores contrastantes?

Para poder diferenciar las bacterias que adhieren el primario, de las de adhieren el secundario a la
membrana y de esta manera poder distinguir los grupos.
¿Cuál cree usted que es el paso más crucial en la coloración de Gram? explique.

La decoloración con alcohol-cetona, ya que este paso es el que permite diferenciar directamente las
bacterias Gram positivas de las Gram negativas al eliminar el colorante primario en el caso de las
negativas.
Suponga que el laboratorio de hoy fue aplazado y se realiza la próxima semana con el cultivo de
B. cereus que tiene 9 días de antigüedad. Al realizar la tinción de Gram usted observa celular
teñidas de violeta intenso y otras de color rosa. Proponga una explicación a este resultado
B. cereus es un bacilo Gram positivo, se puede suponer que el cultivo se contamino, ya que
posiblemente no fue dejada en las mejores condiciones como de probablemente no estar
incubada a la temperatura adecuada, contaminándose con otra bacteria en el lapso que se quedó
en el laboratorio y por tanto, observo una placa mixta.