Barrido de onda

5 Barridos espectrales
Como mencionamos en la introducción, la espectrofotometría tiene
importantes aplicaciones en el campo profesional. En los siguientes
capítulos las analizaremos en detalle.
Mediante espectrofotometría se pueden estudiar sustancias
coloreadas, que absorben a longitudes de onda del espectro visible.
Dependiendo de las características del espectrofotómetro que se
disponga, pueden estudiarse sustancias que absorban en el UV o IR.
Durante este recorrido vamos a focalizarnos en el estudio de
sustancias que absorben en el rango visible.
En Talleres anteriores vimos que la interacción entre una sustancia y
la radiación electromagnética depende no sólo de las características
estructurales de dicha sustancia sino también de las características de
la radiación electromagnética en cuestión. Los espectros de absorción
y emisión obtenidos con un espectroscopio reflejan cómo interactúa
una sustancia con una determinada región del espectro
electromagnético. Dichos espectros actúan como huellas digitales de
la sustancia y pueden usarse para identificarla. De forma análoga al
espectroscopio, un espectrofotómetro también permite evaluar cómo
interactúa una sustancia con radiación electromagnética, en este caso
mediante la medición de la absorbancia. La gráfica del conjunto de
valores de absorbancia de una sustancia vs diferentes longitudes de
onda constituye una curva característica conocida como barrido
espectral. Un barrido espectral se obtiene trabajando con una misma
solución coloreada (de concentración constante) y midiendo los
valores de absorbancias correspondientes a distintas longitudes de
onda seleccionadas dentro de un determinado rango de trabajo.
El perfil de los barridos espectrales representa cómo interactúa la
sustancia a radiación electromagnética de las longitudes de onda
evaluadas, siendo este perfil propio de cada sustancia. Una zona de
pico en el barrido espectral representa un rango de radiaciones de
determinadas longitudes de onda que la sustancia absorbe, mientras
que un valle representa un rango de radiaciones de longitudes de
onda para las cuales hay nula absorción. Retomando conceptos del
capítulo anterior, podemos profundizar aún más el análisis. Vimos
previamente que la absorbancia de una sustancia depende de la
concentración de la sustancia, del paso óptico por el cual pasa la
radiación electromagnética y de la absortividad de la sustancia.
Cuando realizamos un barrido espectral, los dos primeros parámetros
se mantienen constantes, pues usamos la misma muestra y la misma
cubeta de medición. ¿A qué se debe entonces la variación de la
absorbancia? Pues a la variación de la absortividad que, como
analizamos anteriormente, depende de la longitud de onda. Es la
variación de la absortividad de acuerdo a la longitud de onda la que
determina el perfil del barrido espectral.
Ahora bien, ¿qué información nos brindan los barridos espectrales?
En primer lugar, como los barridos espectrales son propios de cada
sustancia, pueden emplearse para identificar sustancias
incógnitas. Por lo general, cuando se busca identificar una sustancia
coloreada se realiza un barrido espectral a lo largo de todo el rango
visible (400 a 700 nm). Debe disponerse de antemano de un espectro
de la “supuesta” sustancia, con el cual comparar el barrido espectral
de la sustancia en estudio.
Por otro lado, en tanto los barridos espectrales nos permite visualizar
la variación de la absorbancia con la longitud de onda de la radiación
electromagnética, mediante el análisis de los barridos podemos elegir
una longitud de onda óptima de trabajo cuando busquemos cuantificar
una sustancia o bien evaluar si cumple con la Ley de Lambert-Beer en
determinadas condiciones. Este tema lo desarrollaremos en los
capítulos siguientes.
Otra aplicación supone usar el barrido espectral de una sustancia
conocida para evaluar el comportamiento del espectrofotómetro
mediante el control de centro de banda, como analizamos en el
capítulo de Controles Espectrofotométricos. En este caso se emplea
una sustancia patrón, con espectro conocido que tenga picos de
máxima absorbancia bien definidos. A diferencia de los casos
anteriores, es el equipo el que está bajo estudio, no la sustancia.
http://virtual.ffyb.uba.ar/mod/book/view.php?id=88081&chapterid=1886 consultado el
16/02/2019

Título
Barrido de longitudes de onda

Objetivo
Realizar un barrido de longitudes de onda sobre una muestra problema.

Fundamento
Cuando se pretende determinar espectrofotométricamente la concentración de una sustancia
problema en un medio líquido, es imprescindible conocer las longitudes de onda a las que esta
sustancia es capaz de absorber energía de una forma considerable.

Esto se debe a que si se hace incidir, sobre la solución de la sustancia problema, un haz
luminoso de una longitud de onda a la que esta sustancia casi no absorbe energía, los
resultados de absorbancia medidos por el espectrofotómetro serán siempre muy bajos. Por
tanto serán inútiles para el cálculo de la concentración de la sustancia.
Para descubrir la capacidad de absorción de energía de una sustancia a distintas longitudes de
onda es preciso hacer un barrido de longitudes de onda. Esto consiste en elegir una única
solución de la sustancia problema a una determinada concentración. Después se mide su
absorbancia en el espectrofotómetro a distintas longitudes de onda.

Cada sustancia tiene una capacidad diferente de absorción de energía a las distintas
longitudes de onda que constituyen el espectro lumínico.

Por lo tanto, si se hace una representación gráfica de los resultados obtenidos en el barrido de
longitudes de onda, se obtiene una imagen característica que hará posible distinguir la
sustancia porblema de otras sustancias. También permitirá descubrir la sustancia problema en
una solución que contenga, en principio, la sustancia problema desconocida.

Barrido de longitudes de onda manual

El barrido de longitudes de onda puede hacerse de forma manual o de forma automática.

El método manual suele utilizarse haciendo uso de un espectrofotómetro de haz simple. Se

lleva a cabo situando la solución de la sustancia investigada, previamente vertida en el interior
de una cubeta de espectrofotómetro, en la celda de medida del aparato. A continuación se
seleccionan las longitudes de onda que se van a utilizar y finalmente se realizan las medidas.

Material y reactivos
 Agua destilada o desionizada
 Muestra de permanganato potásico (Farmaquímica Sur S.L. de 98.25% de riqueza, lote
626014023) a una concentración de 0.1 g/l
 Matraz aforado de 100 ml de capacidad
 Pipetas pasteur de plástico
 Dos cubetas de espectrofotómetro
 Espectrofotómetro
 Bolígrafo
 Hoja de papel milimetrado
 Balanza Jadever Sky-300
Técnica
1. Preparar la muestra de KMnO4.
2. Verter un blanco, compuesto por agua destilada o agua desionizada, en una cubeta de
espectrofotómetro.
3. Depositar la muestra de permanganato potásico en otra cubeta de espectrofotómetro.
4. Ajustar el espectrofotómetro, para que haga incidir sobre su celda de medida un haz de
luz de 500 nm de longitud de onda.
5. Situar la cubeta que contiene el blanco en el espectrofotómetro y efectuar la puesta a
cero de la absorbancia.
6. Retirar la cubeta del blanco del espectrofotómetro.
7. Ubicar la cubeta que contiene la muestra en la celda de medida del espectrofómetro.
8. Dar al espectrofotómetro las instrucciones pertinentes para que mida la absorbancia
generada por la muestra.
9. Anotar el resultado obtenido.
10. Repetir los pasos anteriores, pero tras un ajuste previo y sucesivo del haz de luz del
espectrofotómetro a las longitudes de onda de 505, 510, 515, 520, 525, 530, 535, 540,
545 y 550.
11. Representar gráficamente los resultados obtenidos, consiguiendo de esta manera el
barrido de longitudes de onda de la sustancia problema.
Cálculos
De cara al paso 1 de la técnica tenemos que calcular los gramos de permanganato que
necesitamos para diluir la muestra.
Son 0.0102 gramos de KMnO4 comercial los que tomaremos del frasco y los que diluiremos en
100 ml de agua destilada o desionizada.
Resultados
Representamos los resultados obtenidos en una tabla. En ella relacionamos los valores de
absorbancia obtenidos en cada medición, con su longitud de onda correspondiente.

Una vez obtenida la tabla, extrapolamos los datos a una hoja de papel milimétrico. Si no
tenemos una hoja de papel milimétrico siempre podemos hacer uso de alguna herramienta
informática. En cualquier caso, el resultado de la gráfica sería el siguiente:

Interpretación de los resultados

Una vez representados todos los valores en una hoja de papel milimetrado (ver gráfica en la
sección anterior de resultados) comprobamos que el pico de absorbancia está establecido en
550 nm.
Consultado el dia 16/02/2019 https://www.franrzmn.com/barrido-de-longitudes-de-onda/

4. Control de centro de banda

Este control tiene como finalidad verificar la concordancia entre la
longitud de onda fijada con el selector del instrumento (la leída en el
display) y la real que es la que llega efectivamente a la muestra, en
aparatos de rango continuo.
Para realizar este control debe hacerse un barrido espectral con una
sustancia conocida tomada como referencia y de espectro conocido.
Estas sustancias deben presentar en su espectro uno o más picos de
absorción que deben ser estrechos y estar bien definidos. Esto implica
que deben conocerse las longitudes de onda máxima, que son las
longitudes de onda correspondientes al valor de máxima absorción de
cada uno de los picos, con un alto grado de confianza. Además, los
picos deben estar distribuidos dentro de todo el intervalo espectral del
instrumento (recordar que abarcan las zonas del visible y parte del UV
e IR). Así son ideales los filtros de cristales de holmio que presentan
varios picos característicos a: 333, 418, 453, 536 y 636 nm. También
los filtros de didimio y las soluciones de dicromato de potasio cumplen
con estos requisitos. Sin embargo, muchas veces por una cuestión
económica o de complejidad en la preparación, no se dispone de
sustancias de referencia que abarquen todo el rango espectral,
entonces puede recurrirse a sustancias que abarquen un rango más
estrecho y que serán útiles para un determinado rango de trabajo.
Supongamos que se realiza el barrido espectral con una sustancia de
referencia que presenta un solo pico en el visible y del cual se conoce
su correspondiente longitud de onda máxima. Si luego de haber
realizado la medición el valor de la longitud de onda correspondiente
al valor de máxima absorbancia leído, coincide con el valor de longitud
de onda de referencia de dicho pico, podremos asegurar que en esa
zona el aparato trabaja a las longitudes de onda indicadas por el
selector pudiendo trabajar con confianza en ese intervalo. Ahora bien,
esto no asegura que en otros rangos de longitud de onda exista igual
correlación, por ello se utilizan otras sustancias con máximos en otras
zonas para poder complementar el control.
Otro método de control de centro de banda es el método del punto
isosbéstico. El punto isosbéstico se define como la longitud de onda a
la cual las formas ácida y básica de una misma sustancia,
en concentraciones equivalentes, tienen igual absorbancia. Las
sustancias que cumplen esta condición son algunos indicadores
colorimétricos de pH como el rojo congo, rojo fenol, azul de
bromofenol, entre otros. La importancia del método radica en que el
punto isosbéstico es independiente de la concentración de la
sustancia y de la temperatura entre 4º y 45º C. Se deben realizar los
espectros de absorción de alguna de las sustancias mencionadas en
sus formas ácida y alcalina en igual concentración, y a partir de ellos
determinar gráficamente el punto isosbéstico. Obsérvese que también
es un control zonal.

Espectros de un colorante en sus formas ácida y básica para determinar el punto

isosbéstico

Luego de realizado el control, el resultado puede indicar que la λ real y

la leída coincidan o bien puede haber una diferencia entre ambas. Esa
diferencia se la conoce comodesplazamiento o corrimiento de la
longitud de onda y se mide en nm. Si esta es pequeña y entra dentro del
rango de aceptabilidad estipulado se la pude considerar como error sistemático
y corregir. En caso contrario de debe realizar un ajuste de la escala de
longitudes de onda por parte del servicio técnico.
El control de centro de banda debe realizarse al instalar o reinstalar el
aparato, al cambiarlo de ubicación, al cambiar la lámpara y por lo
menos semestralmente.
A lo largo de este recorrido retomaremos la importancia de este
control a la hora de elegir la longitud óptima de trabajo para medir una
muestra en estudio.
http://virtual.ffyb.uba.ar/mod/book/tool/print/index.php?id=88081

https://www.uv.mx/personal/aherrera/files/2014/05/L.-Ley-de-Bouguer-Lambert-Beer-0.pdf