ESTERILIZACIÓN

LAURA SOFIA RAMÍREZ WILCHES

¿Que es la esterilización?

 Proceso por el cual se obtiene un producto libre de microorganismos

viables. El proceso de esterilización debe ser diseñado, validado y
llevado a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga
microbiana del producto o un microorganismo más resistente.
Diferencias entre:
 Desinfección: No implica reducción total de microorganismos
 Antisepsia: redución de la presencia de microorganismos
potencialmente patógenos sobre piel y/o mucosas
 Sanitización: disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es
seguro para la salud de la población. Sólo es aplicable sobre objetos
inanimados.
Mecanismos de muerte

 Calentamiento: Puede ser por

calentamiento húmedo o seco

 Radiación: Luz UV (longitud de de onda

250-280 nm), rayos x y rayos Gamma

 Agentes químicos: Oxidante o alquilantes

(oxido de etileno)
Factores que influyen en la
esterilización
 El número de microorganismos: A mayor número de microorganismos que se tengan
al inicio, mayor tiempo para eliminar la población entera.

 Influencias ambientales: La presencia de materia orgánica regularmente inhibe la

acción de antimicrobianos químicos. Microorganismos localizados en biopelículas, son
difíciles de matar por biocidas, porque la actividad de éste es dependiente de la
temperatura de la reacción química; los desinfectantes funcionan un poco mejor bajo
temperaturas altas.

 Tiempo de exposición: Los químicos antimicrobianos suelen requerir un mayor tiempo

de exposición para microorganismos más resistentes o endoesporas, esto con el fin de
que sea efectivo.

 Características microbianas: Dependiendo las características del microorganismo se

van a tener que usar diferentes métodos para poder eliminarlo.
Métodos de esterilización
Calor Húmedo
El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de
proteínas. Estos efectos se debe principalmente a dos razones:
 El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras
biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua.
 El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor
mucho más elevado que el aire.

VENTAJAS
Rápido calentamiento y
penetración
Destrucción de bacterias y
esporas en corto tiempo
No deja residuos tóxicos
Hay un bajo deterioro del material
expuesto
Económico
DESVENTAJAS
No permite esterilizar soluciones
que formen emulsiones con el
agua
Es corrosivo sobre ciertos
instrumentos metálicos
Autoclave
 Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más usado es
el de Chamberland.
 Esteriliza a 120º a una atmósfera de presión (estas condiciones pueden variar)y se
deja el material durante 20 a 30 minutos.
Equipo:
 Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metálica,
que en la parte inferior recibe calor por combustión de gas o por una resistencia
eléctrica, esta se cierra en la parte superior por una tapa de bronce. Esta tapa
posee tres orificios, uno para el manómetro, otro para el escape de vapor en
forma de robinete y el tercero, para una válvula de seguridad que funciona por
contrapeso o a resorte.
Funcionamiento:
 Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos
que se disponen sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin
ajustar los bulones y se da calor, dejando abierta la válvula de escape hasta que
todo el aire se desaloje y comience la salidÔ9de vapor en forma de chorro
continuo y abundante.
Influencia de la descarga incompleta de aire
en la temperatura del autoclave

Temperatura
[°C]
Presión
[atm]
Descarga Descarga de 2/3 Descarga de 1/2 Sin descarga del
completa del aire del aire del aire aire

1/3 109 100 90 72

2/3 115 109 100 90

1 121 115 109 100

4/3 126 121 115 109

5/3 130 126 121 115

2 133 130 126 121

Tyndalización

 Esterilización por acción discontinua del vapor de agua, se basa en el

principio de TyndalÑ Las bacterias que resisten una sesión de calefacción,
hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la
misma operación se repite con intervalos separados y en varias sesiones.
 Se efectúa por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la
válvula de escape, o sea funcionando a la presión normal. Puede también
realizarse a temperaturas más bajas, 56º u 80º ocúpara evitar la
descomposición de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.
Calor Seco
 El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxicos por niveles elevados de
electrolitos, fusión de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor
desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos.
 La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura
cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja.

VENTAJAS
No es corrosivo para metales e
instrumentos.
Permite la esterilización de
sustancias en polvo y no acuosas,
y de sustancias viscosas no
volátiles.
DESVENTAJAS
Requiere mayor tiempo de
esterilización, respecto al calor
húmedo, debido a la baja
penetración del calor.
Estufas
 Este sistema elimina microorganismos por
coagulación de las proteínas de éstos. Su
efectividad depende de la difusión del calor, la
cantidad de calor disponible, y los niveles de
pérdida de calor. La buena acción microbicida del
calor seco depende de que los elementos a
esterilizar estén limpios, en presencia de materia
orgánica, por ejemplo: aceite o grasa, el
microorganismo es protegido de la acción del
calor.
 La estufa de esterilización es el artefacto utilizado
en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se
requiere mayor temperatura y tiempo de
exposición que el autoclave. La temperatura varía
entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos tiempos
de exposición. A 140°C se necesitan por lo menos 5
horas de exposición, mientras que a 160°C se
requieren al menos 2 horas de exposición
Radiaciones UV

 Afectan a las moléculas de DNA de los

microorganismos debido a que forman dímeros
de pirimidinas adyacentes que inducen errores
en la duplicación y por lo tanto la pérdida de la
viabilidad de las células.
 Son escasamente penetrantes y se utilizan para
superficies.
 Los sistemas UV deben diseñarse con una dosis
de radiación UV suficiente como para
garantizar que el daño celular no pueda ser
reparado.
Ventajas y desventajas de la radiación UV

VENTAJAS DESVENTAJAS

Se trata de un proceso libre de sustancias

químicas que no añade nada al agua, excepto
luz UV
La luz UV no requiere transporte,
almacenamiento ni manipulación de sustancias
químicas tóxicas o corrosivas, lo que representa
un beneficio para la seguridad de los operarios
de las plantas y la población circundante
Los costes operativos de la desinfección por UV
vienen dados por la sustitución anual de las
lámparas y el consumo eléctrico
Las radiaciones son peligrosas para la salud de los
trabajadores.

El tratamiento por UV no genera subproductos

carcinógenos de la desinfección que puedan
afectar negativamente a la calidad del agua

La desinfección por UV es muy eficaz en la

inactivación de una gran diversidad de
microorganismos, incluidos patógenos resistentes
al cloro como Cryptosporidium y Giardia
Radiación Gamma

 Genera iones al liberar electrones de los átomos estos electrones

se desprenden con tanta violencia que chocan con átomos
adyacentes y se unen a ellos
 La energía liberada se transforma en energía térmica o química,
esta energía causa la muerte de los microorganismos al romper la
molécula de DNA, e impide la división celular y la prolongación de
la vida.
 La fuente principal de radiación ionizante son las partículas beta y
los rayos gamma.
 La mayoría de los equipos disponibles pre envasados por el
fabricante son esterilizados por radiación ionizante, (cobalto 60):
este proceso esta limitado al uso comercial debido a sus altos
costos.
Ventajas y desventajas de la radiación Gamma

VENTAJAS DESVENTAJAS

La radiación ionizante penetra en la La esterilización con rayos gamma o

mayor parte de los materiales para beta se limita al uso comercial e
esterilizarlos con confiabilidad industrial
Es el método de esterilización más Las propiedades físicas de algunos
eficaz materiales se alteran por la exposición
Los rayos producen un efecto de a radiación ionizante y por lo tanto su
temperatura muy reducido en los uso se limita
materiales y el proceso en seco, por lo
que la radiación puede utilizase para
esterilizar la mayor parte de los
equipos sensibles al calor y a la
humedad
No genera radiación residua
Agentes químicos

Alcoholes
Iodo
Agentes catiónicos, aniónicos y
Antisépticos anfóteros
Organo Mercuriales
Colorantes
Cloro y Compuestos clorados
Aldehídos
Desinfectantes y/o Oxido de Etileno
Esterilizantes
Compuestos Fenólicos
Acidos y Alcalis
Alcoholes

 Lesionan la membrana celular de los

microorganismos y desnaturalizan proteínas
celulares. Desorganizan la estructura
fosfolipídica.
 No destruyen esporas y tienen una acción
germicida lenta. Los alcoholes de cadena
corta tienen un efecto nocivo mayor que los
de cadena larga.
 Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%.
Los más utilizados son el etanol e isopropílico.
 Desinfección y antisepsia (2 minutos de
contacto mata casi el 90% de los
microorganismos cutáneos )
Yodo
 Es un agente oxidante que modifica
grupos funcionales de proteínas y
ácidos nucleicos. Inactiva proteínas y
enzimas por oxidación de los grupos -
SH a S-S, pudiendo atacar también
grupos amino, indoles, etc.
 Se utiliza como desinfectante de la piel
(tintura de yodo: yodo molecular 2% y
yoduro de sodio 2% en alcohol),
aunque es irritante.
 Es efectivo contra esporas en una
concentración de 1600 ppm de iodo
libre.
Agentes iónicos y anfóteros
Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la
disposición de las proteínas y de los fosfolípidos, por lo que se liberan
metabolitos desde la célula, se interfiere con el metabolismo energético y el
transporte activo.

No son esporicidas ni tubercolicidas aún en altas concentraciones. Sus

principales ventajas se hallan en que son inodoros, no tiñen, no son corrosivos
de metales, estables, no tóxicos y baratos.

 Catiónicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor actividad a pH

alcalino y los Gram + son más susceptibles.
 Aniónicos: Jabones y ácidos grasos. Tienen mayor actividad a pH ácido y
son eficaces contra Gram +.
 Anfóteros: Actúan como catiónicos o aniónicos según el pH.
Organo Mercuriales

 Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las

proteínas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgánicos
se encuentran el metafen y el mertiolate
Peróxido de Hidrógeno

 Es un antiséptico débil, con

capacidad oxidante y formadora
de radicales libres.
 Actualmente, el peróxido de
hidrógeno gaseoso se está
utilizando como desinfectante de
superficies o descontaminante de
gabinetes biológicos debido a que
no posee las propiedades tóxicas y
cancerigenas del óxido de etileno
y formaldehído.
Colorantes

 Interfieren en la síntesis de ácidos R = HSO4- Verde Brillante

R = Cl- Verde de Malaquita
nucleicos y proteínas (acridina) o
interfieren en la síntesis de la pared
celular (derivados del trifenilmetano).
 La acridina se inserta entre dos bases
sucesivas del DNA separándolas
físicamente. Esto provoca errores en la
duplicación del DNA.
 Los derivados del trifenilmetano (violeta
de genciana, verde de malaquita y
verde brillante) bloquean la conversión
del ácido UDP-acetilmurámico en UDP-
acetilmuramil-péptido. Violeta de Genciana
Cloro
 El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actúan sobre proteínas y
ácidos nucleicos de los microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos,
indoles y al hidroxifenol de la tirosina.
 El producto clorado más utilizado en desinfección es el hipoclorito de sodio (agua
lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y además es
efectivo en un amplio rango de temperaturas.
 La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al ácido hipocloroso (HClO) y al
Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ion
hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede penetrar fácilmente en
la célula a través de la membrana citoplamática. En cambio, el ácido hipocloroso es
neutro y penetra fácilmente en la célula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.
 El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro
activo), a pH alcalino y en envases oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo
como desinfectante. A causa de ésto, es que deben utilizarse soluciones diluidas en agua
corriente (que tiene un pH ligeramente ácido), con el objeto de obtener ácido
hipocloroso. Generalmente, se utilizan soluciones con una concentración del 0.1-0.5% de
Cloro activo.
Aldehídos
 Son agentes alquilantes que actúan sobre
proteínas, lo que provoca modificación
irreversible de enzimas e inhibición de la
actividad enzimática (Adición nucleofílica de
grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como
desinfectantes y esterilizantes. Destruyen
esporas.
 El glutaraldehído es el único esterilizante
efectivo en frío. El formaldehído como gas se
utiliza para descontaminar edificios, ambientes,
etc. El formaldehído gaseoso se obtiene por
calentamiento del paraformaldehído (OH
(CH2O)n-H), lo que produce las
despolimerización de este compuesto y la
liberación de formaldehído.
 El formaldehído tiene la desventaja de ser muy
irritante y perder actividad en ambientes
refrigerados.
Compuestos Fenólicos

 Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmática

porque desordenan la disposición de las proteínas y fosfolípidos. Esto causa
filtración de compuestos celulares, inactivación de enzimas y lisis.
 El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable,
por ser muy irritante y por el residuo que queda luego de tratar las superficies.
 Los derivados del fenol más utilizados son el hexaclorofeno (compuesto
difenílico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos son muy efectivos a bajas
concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos
contra esporas.
Oxido de Etileno

 Es un agente alquilante que se une a

compuestos con hidrógenos lábiles como los
que tienen grupos carboxilos, amino,
sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
 Es utilizado en la esterilización gaseosa,
generalmente en la industria farmacéutica.
Sirve para esterilizar material termosensibles
como el descartable y plástico, equipos
electrónicos, bombas cardiorrespiratorias,
etc. Es muy peligroso por ser altamente
inflamable y explosivo, y además
cancerigeno.
Filtración
Se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. El tamaño del poro
dependerá del uso al que se va a someter la muestra. Hay que tener en cuenta que los filtros
que se utilizan generalmente en los laboratorios no retienen virus ni micoplasmas, estos últimos
están en el límite de separación según el diámetro de poro que se utilice.
Existen tres tipos básicos de filtros:

 Filtros profundos o Filtros de profundidad: consisten de un material fibroso o granular

prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de
filtros la retención de las partículas se produce por una combinación de absorción y de
retención mecánica en la matriz.

 Membranas filtrantes: tienen una estructura continua, y la retención se debe

principalmente al tamaño de la partícula. Partículas más pequeñas al tamaño del poro
quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efectos electrostáticos.

 ·Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo): son películas muy delgadas de

policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiación y sustancias
químicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente.
Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partícula con un tamaño mayor al del
poro.
Controles en esterilización

Controles fisico-químicos

Controles de Esterilización Monitorean el proceso

de esterilización

Controles biológicos

Transferencia a medios de
cultivo
Test de promoción del
crecimiento
Controles de Monitorean el material
Esterilidad Test de bacteriostásis esterilizado

Filtración por membranas

Cinética de muerte

 La muerte microbiana sigue un comportamiento de tipo

exponencial, por lo que se hace asintótico y nunca se llega a un
número de microorganismos igual a cero.
N = N0 . e - Kt

 Donde N es el número de microorganismos viables, N0 es el número

de microorganismos viables iniciales, k es la tasa de muerte (min-1)
y t es el tiempo
 k es función de las condiciones de esterilización (temperatura, tenor
de humedad, concentración del agente químico) y de la resistencia
del microorganismo al proceso de esterilización.o de exposición al
agente
 Si esta ecuación se transforma a base 10 resulta:

N = N0 . 10 ( - t / D)

En donde D (min) se denomina Tiempo de reducción

decimal, esto es el tiempo requerido para reducir la
población microbiana un 90% o un orden de
magnitud. El valor de D se deduce cuando t=D y por
lo tanto N=0.1 N0. Comparando las ecuaciones
anteriores se llega a que:

D = ln 10 / K = 2.303 / K
 Esto significa que D está inversamente
relacionado con k. Entonces, menores valores de
D significan una mayor tasa de muerte o una
muerte más rápida.
 El tiempo de termodestrucción (D) varía para cada temperatura (de
ahí el subíndice t) de forma que a mayores temperaturas el valor de D
es menor, es diferente para distintos microorganismos, distintos entornos
y diferentes condiciones fisiológicas.
 el valor z indica el incremento en la temperatura (medida en número
de grados) necesario para que el valor D se reduzca a la décima parte
del inicial.

z = ∆T / [log (Dt1 / Dt2)]

De esta definición
se deduce:

Los valores D y z varían para cada microorganismo y

para cada condición
Índice de reducción
 intensidad letal (L)

 Factor F (Tiempo de muerte térmica)

El factor de muerte se usa para medir la intensidad del método de

esterilización, tiene unidades de tiempo: es el tiempo que debe pasar un
alimento a una temperatura de tratamiento dada para conseguir un
determinado índice de reducción.
Ejemplos
 ¿Qué índice de
reducción en la
población de salmonella
sp. Se consigue en leche
condensada con la
pasteurización sugerida
en la tabla? ¿Qué tiempo
de pasteurización es
necesarios a 70°C para
esa misma
pasteurización?

La esterilización de la leche se basa

en conseguir 12 reducciones de
clostridium boutilum a 121 °C
 Calcular el valor dela termorresistencia del microrganismo
descrito en la siguiente tabla, y la ecuación de D para
cualquier temperatura.
Se pretende conseguir la destrucción térmica de las esporas de
Clostridium botulinumen una conserva. Conocemos que para este
microorganismo se consiguen 12 reducciones decimales cuando:
 se aplica una temperatura de 105ºC durante 103 minutos
 o cuando se aplican 117ºC durante 6,5 minutos.
Calcular:
1. Los tiempos de tratamiento para obtener 12 reducciones
decimales a las temperaturas de100ºC y de 120ºC.2.
2. La duración de la reducción decimal a 121,1ºC
3. Si la conserva contiene una población inicial de 10Exp (12)
esporas, cuantos supervivientes quedarán después de :
a) La aplicación de un tratamiento a 100ºC durante 1 hora.
b) La aplicación de un tratamiento a 120ºC durante 20 minutos