I.

Metodología
1. Comparación del crecimiento microbiano aerobio y anaerobio.

Preparamos dos sistemas de ensayo (matraces de 250 mL con 100 mL de Caldo

Nutritivo) y rotular Sistema 1 y 2 respectivamente.
A ambos sistemas, inoculamos 1 mL de una suspensión de E. coli equivalente al
tubo n°1 del nefelómetro de Mcfarland.
Homogeneizamos con movimientos rotatorios por 1 min y extraer 2 mL de
suspensión y colocarlo en tubos de ensayo de 13x100 mm.
Hicimos una lectura de la absorbancia de la suspensión bacteriana a 620 nm en el
espectrofotómetro. Registramos valor 1.
Al sistema 1, aplicamos aire estéril mediante la conexión de manguera (sistema de
venoclisis estéril) y al sistema 2 agregamos una capa de parafina líquida.
Incubamos, ambos sistemas, a 37°C por 8 h, y medimos la absorbancia a 620 nm
en el espectrofotómetro de ambas suspensiones. Registramos el valor 2.

2. Demostración de la fermentación alcohólica

En un matraz estéril de 50 mL, colocamos 17 mL de Caldo Sabouraud (glucosa

10%).
Inoculamos 3 mL de una suspensión de Saccharomyces cerevisiae equivalente al
tubo n° 3 del nefelómetro de Mcfarland.
Homogeneizamos por un minuto y lo colocamos en una hipodérmica de 20 mL
Conectmos una manguera de salida de gas a partir del extremo de la hipodérmica y
sumergimos en otra hipodérmica de 20 mL de capacidad que se encuentra lleno con
una solución saturada de cloruro de sodio 23% y gotas de azul de metileno.
Incubamos a 30 °C por 8 h.
Observamos y registramos el volumen de gas acumulado en la otra hipodérmica.

3. Observación del efecto citopático del virus

Enfocamos la lámina coloreada al microscopio con el objetivo 100X y
observamos las células citomegálicas (células de gran tamaño, 35 a 50 mm) que
evidencian la presencia de Citomegalovirus.
Observamos al microscopio el efecto citopático del virus en un cultivo celular
(línea Vero).
 Aislamiento de bacteriófagos: Observación de placas líticas.
Elaboraramos el esquema de trabajo para lograr el aislamiento de bacteriófagos a
partir de una muestra de agua de albañal teniendo como referencia el
procedimiento ejecutado en el laboratorio y con la orientación del docente
responsable.
Observamos e interpretamos la formación de las placas líticas en el medio de
cultivo que se presentan como resultado de la presencia de bacteriófagos en la
muestra procesada.

4. Observación microscópica y macroscópica de Mycobacterium tuberculosis.

Describimos las características microscópicas y macroscópicas del crecimiento de
Mycobacterium tuberculosis.

II. Resultados
1. Comparación del crecimiento microbiano aerobio y anaerobio

Biorreator 1 (aereado) Biorreactor 2 (sin aereación)

Hora: 10 a.m. Hora: 10 a.m.

Absorbancia: 0,004 Absorbancia: 0,004

Hora: 6p.pm. Hora: 6 p.m.

Absorbancia: 0,751 Absorbancia: 0,255

Temperatura: 37°C
 0,8

0,7

0,6

0,5

Absorbancia
0,4

0.3

0,2

0,1

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tiempo (horas)

Biorreactor 1 (areado)

Biorreactor 2 (sin aereación)

2. Demostración de la fermentación alcohólica

Volumen de gas acumulado:

0,5 ml
 3. Observación del efecto citopático del virus

 Observación: Células de
gran tamaño por
presencia de
Citomegalovirus.
 Colorante: Eosina
 Objetivo: 100x
 Aumento:1000
Aislamiento de bacteriófagos: Observación de placas líticas

Observación: Placas líticas en

cultivo de E.coli por la
presencia de bacteriófagos.

4. Observación microscópica y macroscópica de Mycobacterium tuberculosis

 Observación: bacilos azules

(Mycobacterium tuberculosis)
 Coloración: de Zhielneelsen
 Objetivo: 100x
 Aumento:1000
Obervación: Mycobacterium tuberculosis

- Colonias amarillentas
- Anaerobio