Enzimas Microbianas, Herramientas para Procesos Biotecnologicos - En.es

biomoléculas 2014, 4, 117-139; doi: 10.
3390 / biom4010117
ACCESO ABIERTO
biomoléculas
ISSN 2218-273X
www.mdpi.com/journal/biomolecules/
revisión
Las enzimas microbianas: Herramientas para procesos biotecnológicos
José L. Adrio 1 y Arnold L. Demain 2, *
1 Neol Biosoluciones SA, BIC Granada, Granada 18016, España; E-Mail: jladrio@neolbio.com (JLA)
2 Los científicos del Instituto de Investigación de Eméritos (RISE), la Universidad de Drew, Madison, NJ 07940, EE.UU.
* Autor a quien debe dirigirse la correspondencia; E-Mail: ademain@drew.edu; Tel .: +

1-973-408-3937; Fax: + 1-973-408-3504.
Recibido: 5 de Noviembre de 2013; en forma revisada: 2 Enero 2.014 / Aceptado: 2 Enero 2.014 / Publicado: 16 Enero
2.014
Resumen: enzimas microbianas son de gran importancia en el desarrollo de bioprocesos industriales. Las aplicaciones actuales
se centran en muchos mercados diferentes, incluyendo la pulpa y el papel, cuero, textiles y detergentes, productos
farmacéuticos, productos químicos, alimentos y bebidas, biocombustibles, alimentación y cuidado personal, entre otros. Hoy en
día hay una necesidad de enzimas nuevas, mejoradas o / y más versátiles para el desarrollo de procesos de producción más
novedosa, sostenibles y económicamente competitivos. la diversidad microbiana y las modernas técnicas moleculares, tales
como la metagenómica y la genómica, están siendo utilizados para descubrir nuevas enzimas microbianas cuyas catalítica
propiedades pueden mejorarse / modificada por diferentes estrategias basadas en la evolución racional, semi-racional y al azar
dirigida. La mayoría de las enzimas industriales son formas recombinantes producidas en bacterias y hongos.
palabras clave: biocatálisis; enzimas industriales; huéspedes microbianos; ingeniería de proteínas
1. Introducción
enzimas microbianas se sabe que juegan un papel crucial como catalizadores metabólicos, lo que lleva a su uso en diversas industrias y
aplicaciones. El mercado de uso final para las enzimas industriales es muy amplia, se extendió con numerosas aplicaciones comerciales
industriales [1]. Más de 500 productos industriales se están haciendo uso de enzimas [2,3]. La demanda de enzimas industriales está en una
subida continua impulsado por una creciente necesidad de soluciones sostenibles. Los microbios han servido y seguirá sirviendo como una
de las fuentes más grandes y útiles de muchas enzimas [4]. Muchos procesos industriales, incluyendo la síntesis química para la producción
de productos químicos y farmacéuticos, tienen varias desventajas: bajo catalítica

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la eficiencia, la falta de especificidad enantiomérica para la síntesis quiral, la necesidad de alta temperatura, bajo pH y alta presión. También, el uso de
disolventes orgánicos conduce a residuos orgánicos y los contaminantes. Las enzimas son más útiles para estas aplicaciones a medida que trabajan
en condiciones de reacción suaves (por ejemplo, temperatura, pH, condiciones atmosféricas), no necesitan protección de los grupos funcionales del
sustrato, tienen una larga vida media, una alta estéreo-selectividad produciendo estereo- y regio-químicamente definidos por productos de reacción a
una aceleración de 10 5 a 10 8- doblez, y, además, que trabajan sobre sustratos no naturales [5]. Además, las enzimas se pueden seleccionar
genéticamente y químicamente modificados para mejorar sus propiedades clave: estabilidad, especificidad de sustrato y la actividad específica. Hay
desventajas, sin embargo, para el uso de enzimas, por ejemplo, ciertas enzimas requieren cofactores. Sin embargo, diversos enfoques, como el
reciclaje cofactor y el uso de células enteras pueden resolver este problema. Alrededor de 150 procesos industriales utilizan enzimas o catalizadores
de células microbianas enteras.
El mercado mundial de enzimas industriales es muy competitivo con Novozymes ser el jugador más grande en la industria, seguido por
DSM, y DuPont (después de que adquirió una participación mayoritaria en su división de Danisco y Genencor), entre otros. Las empresas
compiten principalmente sobre la base de la calidad del producto, rendimiento, uso de derechos de propiedad intelectual, y la capacidad de
innovar, entre otros factores. América del Norte y Europa son los mayores consumidores de enzimas industriales aunque la región de Asia
Pacífico se someterá a un rápido aumento de la demanda de la enzima en China, Japón e India, lo que refleja el tamaño y la fuerza de las
economías de estos países.
2. El descubrimiento de enzimas
La naturaleza proporciona una gran cantidad de recursos de enzimas microbianas. Nuestra capacidad de aprovechar tan inmensa biodiversidad
depende de las herramientas disponibles para ampliar la búsqueda de nuevas enzimas mediante (i) la detección de metagenome [6-10]); (Ii) extracción del
genoma en más de 2.000 genomas microbianos secuenciados [11-14]; y (iii) el estudio de la diversidad de los extremófilos [15,16]).
2.1. Proyección metagenomic
Aunque numerosos microbios habitan la biosfera, menos del 1% puede ser cultivada a través de técnicas estándar de laboratorio. Metagenomics ha
aparecido como una estrategia alternativa para la detección de microbios convencional mediante la preparación de una biblioteca genómica a partir de
ADN ambiental y sistemáticamente el cribado de una biblioteca de este tipo para los marcos de lectura abiertos que codifican potencialmente putativas
nuevas enzimas [10,17].
cribado Metagenomic se basa principalmente en cualquiera de las funciones o secuencia se acerca [8,10]. cribado basado en la función es
una forma sencilla de aislar los genes que muestran la función deseada por detección directa fenotípica, la complementación heteróloga, y la
expresión génica inducida por [18]. Por otro lado, la detección basada en la secuencia se lleva a cabo utilizando ya sea la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) o procedimientos de hibridación. Por lo general, el procedimiento común es usar un conjunto de cebadores
degenerados que han sido diseñados sobre la base de secuencias de aminoácidos de consenso.
Estudios de diferentes hábitats tales como respiraderos volcánicos, tundra ártica, rumen de la vaca [19], los ambientes marinos
[20], y las tripas de termitas [21] han producido enzimas microbianas con potencial para aplicaciones biocatalıticas, tales como la
lipasa [22,23], oxidorreductasa [24], amidasa [25], amilasa [26], nitrilasa [27], beta-glucosidasa [28,29]), descarboxilasa [30], y el
epóxido hidrolasa [31].

cribado basado en la función de las bibliotecas de metagenómica de alguna manera es problemático debido principalmente a la insuficiente
expresión, sesgado de genes extraños en Escherichia coli como esta bacteria se utiliza generalmente como anfitrión surogate [8]. Para superar
estos obstáculos, los sistemas de acogida y de expresión bacterianos alternativas se están estudiando actualmente incluidos Streptomyces
lividans, Pseudomonas putida y
leguminosarum Rhizobium, entre otros [32,33].

tasa de éxito (probabilidad de identificar un gen determinado) también depende de otros factores tales como el tamaño del gen diana y el método
de ensayo. Las actividades enzimáticas son por lo general se ensayaron en placas de agar suplementadas con diferentes sustratos de sensibilidad de
cribado basado en placa de agar se puede mejorar mediante el uso de lisados de células [34], la detección de genes que dan resistencia a compuestos
tóxicos [35,36], o que unen la actividad de destino a la expresión de un gen informador tal como la proteína verde fluorescente (GFP) [37] o
β-galactosidasa [38]. pantallas también, el desarrollo de flujo basado en citometría como SIGEX están liderando el camino, ya que permiten la
detección más rápida de grandes bibliotecas de metagenómica [39]. Los genes obtenidos mediante el cribado basado en la secuencia están limitados a
los que tiene homología con las secuencias utilizadas como sondas.
2.2. genomas microbianos
Reciente éxito de los programas de secuenciación del genoma ha dado lugar a una explosión de la información disponible en las bases de datos
de secuencias, creando así la oportunidad de explorar la posibilidad de encontrar nuevos productos naturales (incluyendo enzimas) por la minería de
bases de datos [40]. Las plataformas de secuenciación de nueva generación (454 de Roche, Solexa de Illumina o sólido a partir ABI), son
prometedores para reducir el tiempo y el coste de la secuenciación del genoma. El uso de estas plataformas, así como el corte de bordes enfoques
tales como resecuenciación, ayuda a completar varios genomas enteros en menos de dos semanas. Hasta el momento, más de
2.000 secuencias del genoma y los proyectos de conjuntos están disponibles en la base de datos NCBI [41]. Dos enfoques se están siguiendo para
descubrir nuevas enzimas [42]. Por un lado, la caza genoma se basa en la búsqueda de marcos de lectura abierta en el genoma de un
determinado microorganismo. Las secuencias que son anotados como enzimas putativos se someten a clonación posterior, la sobre expresión y el
cribado de actividad. Otro enfoque, llamado minería de datos, se basa en el alineamiento de homología entre todas las secuencias depositadas en
bases de datos. El uso de diferentes herramientas bioinformáticas (por ejemplo, BLAST), una búsqueda de regiones conservadas entre las
secuencias produce secuencias de proteínas homólogas que son identificadas como posibles candidatos para una caracterización adicional.
2.3. extremófilos
Más de 30 artículos sobre los extremófilos se han publicado en un número especial [43]. Debido a su capacidad para sobrevivir
en entornos de condiciones extremas, tanto físicas como la temperatura (-2 a 12 ° C, 60-110 ° C), presión o radiación, y
geoquímica tales como la salinidad (2-5 NaCl) y el pH (< 2,> 9), extremófilos son una fuente muy interesante de enzimas con una
estabilidad extrema en condiciones considerarse incompatibles con materiales biológicos. Estudios recientes muestran que la
diversidad de organismos en estos ambientes extremos podría ser aún mayor de lo que se pensaba inicialmente [16,44]. Sin
embargo, debido a que la mayoría de estos microorganismos aún no han sido aislados en cultivo puro, caracterización útil de sus
enzimas sigue siendo bastante difícil.
proteasas, lipasas termófilas así como celulasas y amilasas se utilizan en muchas aplicaciones industriales diferentes [16,45].
termófilos extremos (crecimiento a 60-80 ° C) se encuentran ampliamente distribuidas

entre varios géneros bacterianos tales como Clostridium, Thermus, Thermotoga, y Bacilo, mientras que la mayor parte de
hyperthermophiles pertenecer a Archaea como Pyrococcus, Thermococcus o Methanopyrus,
entre otros. La polimerasa de ADN Taq, aislada de la termófila Thermus aquaticus, 2009 tuvo ventas valor de $ 500 millones de personas [46].
Además, las enzimas de psicrófilos se han vuelto muy interesante para muchas aplicaciones industriales, en parte debido a los
esfuerzos en curso para reducir el consumo de energía. Por lo tanto, enzimas como proteasas, amilasas o lipasas tienen un gran
potencial comercial para el desarrollo de detergentes para reducir el desgaste y desgarro de fibras textiles. actividades de
polímero-degradantes (por ejemplo, celulasas, xilanasas,) son muy interesantes para la industria de pulpa y papel, así como para la
sacarificación de la biomasa lignocelulósica pretratada para la producción de biocombustibles de segunda generación [47]. Estas
enzimas-activo frías también tienen potencial para muchas otras aplicaciones [16,48], como la extracción y la clarificación de zumos de
fruta, la mejora de productos de panadería, pulido y lavado a la piedra de textiles, y biorremediación de aguas contaminadas con aceites o
hidrocarburos [ 49].
Las enzimas de halophites tienen que hacer frente con muy altas concentraciones de sales (por ejemplo, de sodio o cloruro de
potasio). Tales proteínas se han adaptado a estos ambientes mediante la adquisición de un gran número de residuos de aminoácidos
cargados negativamente de sus superficies para evitar la precipitación. Tal propiedad se ha aprovechado por el uso de medios no
acuosos [50]. Xilanasas, amilasas, proteasas y lipasas de halobacterium, Halobacillus y Halothermothrix se han producido y su potencial
ha sido revisado [51,52]).
Los microorganismos que pueden sobrevivir bajo los valores de pH extremos podrían ser buenas fuentes de enzimas
thermoalkaliphilic, como proteasas y lipasas, particularmente útil para aplicaciones como aditivos en lavandería y detergentes
lavavajillas [16,53].
3. Estrategias para mejorar las propiedades de las enzimas microbianas
La aplicación continua expansión de las enzimas es la creación de una demanda creciente de biocatalizadores que
exhiben mejorado o nuevas propiedades [46]. Aunque las enzimas tienen números de rotación favorables, no es
necesario cumplir con todos los requisitos del proceso y la necesidad de un ajuste más preciso para lograr una
producción a escala industrial. Entre esos obstáculos son: inhibición de sustrato / producto, la estabilidad, la estrecha
especificidad de sustrato o enantioselectividad [54]. La modificación genética es muy importante y técnicas de ADN
recombinante han aumentado la producción por 100 veces [55]. Desarrollo de nuevos / mejorada biocatalizadores es
una tarea difícil y complejo (Figura 1). Hay dos formas principales en las que las enzimas pueden ser modificados para
adaptar sus funciones a los extremos aplicados:
Figura 1. Descubrimiento y desarrollo de biocatalizadores.
3.1. Diseño racional
Este enfoque incluye la mutagénesis dirigida al sitio para apuntar a sustituciones de aminoácidos, por lo que requiere el conocimiento de la
información detallada sobre la estructura 3-dimensional y mecanismo químico de la reacción enzimática, algunos de los cuales pueden no estar
disponibles. Sin embargo, el aumento del crecimiento de las bases de datos que contienen las estructuras de proteínas y secuencias está ayudando a
superar esta falta de información. Comparación de la secuencia de un nuevo biocatalizador identificado en un programa de cribado con los miles
depositadas en las bases de datos puede identificar proteínas relacionadas cuyas funciones y / o estructuras ya son conocidos. Debido a nuevas
enzimas han evolucionado en la naturaleza mediante una modificación relativamente menor de las estructuras del sitio activo, los objetivos de los
experimentos de homología impulsada incluyen la ingeniería sitios de unión para adaptarse a diferentes sustratos, así como construcción de nuevos
residuos catalíticos para modificar funciones y mecanismos [56]. Un pequeño número de variantes se producen que luego se tamiza. Aunque en
muchos casos, los resultados son pobres en comparación con las enzimas naturales, se han producido éxitos [57,58].
el diseño de proteínas Computational comienza con las coordenadas de una cadena principal de proteína y utiliza un campo de fuerza para identificar
secuencias y geometrías de los aminoácidos que son óptimas para la estabilización de la columna vertebral geometría [59]. Debido a la increíble número
de posibles secuencias generadas, ahora se está aplicando la combinación de campos de fuerza predictivos y los algoritmos de búsqueda para el diseño
de proteínas funcionales [60].
3.2. Evolución dirigida
métodos combinatorios tales como evolución dirigida crean un gran número de variantes para la detección de
enantioselectividad, la eficiencia catalítica, velocidad catalítica, solubilidad, especificidad y estabilidad de la enzima, pero no
requieren un amplio conocimiento sobre la enzima. La evolución dirigida es una forma rápida y barata de encontrar variantes de
las enzimas existentes que funcionan mejor que las enzimas de origen natural en condiciones específicas [3,61-63]. La evolución
dirigida incluye toda una serie de técnicas de biología molecular que permiten el logro de la diversidad genética imitando
mecanismos de la evolución que ocurren en la naturaleza. Se trata de mutagénesis al azar del gen que codifica la proteína por
diferentes técnicas, incluyendo la reacción propenso a errores en cadena de polimerasa (PCR) [64], oligonucleótido repetidas
mutagénesis dirigida [65], o agentes químicos [66], entre otros.
introducción de mutaciones puntuales aleatorias en una población de enzimas. Tales técnicas de cría moleculares (barajado de
ADN, Molecular Breeding TM) permitir in vitro recombinación homóloga aleatoria, típicamente entre genes de padres con homología
superior al 70% [67]. Después de la clonación y de expresión, una gran colección de enzima variantes (10 4 -10 6) típicamente se
genera y se somete a cribado o selección.
Todos los enfoques mencionados anteriormente no son mutuamente excluyentes como los campos de rediseño racional, semirational y al azar de
las enzimas se están moviendo más cerca. Por lo tanto, las técnicas de evolución dirigida hacen uso, cuando sea posible,
de variante de la enzima menor librerías diseñadas por racional o

métodos semi-racionales para reducir el esfuerzo de selección, pero sin comprometer la probabilidad de encontrar mejores variantes
[61,63]. Una opción es apuntar los residuos del sitio activo

(alrededor de 10-15 aminoácidos) y los más cercanos a él (otros 20-30 aminoácidos) como mutaciones más cerca de estas regiones parecen
ser más beneficioso [68]. Otra estrategia, llamada de reparto, se basa en una prueba combinatoria sitio activo [69], en que las bibliotecas se
generan de grupos de dos o tres residuos hechos de los residuos del sitio activo. Resultados obtenidos a partir de estas bibliotecas iniciales
se combinan y nuevas bibliotecas se generan y se proyectan en una forma iterativa. Al cambiar los componentes de nucleótidos durante la
PCR, el alfabeto de aminoácidos puede ser reducido nuevas proteínas rendimiento compuestas por sólo 12 aminoácidos [70]. Proyección de
tales bibliotecas puede conducir a mejoras notables en la actividad mediante el uso de mutagénesis de saturación en las posiciones de
enzimas homólogas [71].
A medida que la aptitud de un gen se incrementará más rápidamente en una población de cría con alta variabilidad genética que se
encuentra bajo la influencia de la selección, el ADN de la familia Shuffling, una mejora en la técnica de cría basado en la recombinación de
varias secuencias homólogas, produjo una mejora en la actividad de alrededor de 30 a 80 veces mayor que cuando cada gen se barajan
independientemente [72]. Otras técnicas pueden crear exones de reproducción aleatoria o dominios [73], regiones de bucle [74],
truncamientos aleatorios [75] o inserciones y deleciones de codones [76].
técnicas de rediseño azar están siendo utilizados actualmente para generar enzimas con propiedades mejoradas, tales como: la
actividad y la estabilidad a diferentes valores de pH y temperaturas [77], el aumento o modificado enantioselectividad [78], alterado de
especificidad de sustrato [79], la estabilidad en disolventes orgánicos [ 80], novela especificidad de sustrato y la actividad [81] y el
aumento de la actividad biológica de los productos farmacéuticos de proteínas y moléculas biológicas [82,83]. La evolución dirigida
aumentó la actividad del glifosato-N-acetiltransferasa de 10.000 veces y, al mismo tiempo, su termoestabilidad aumentó 5 veces [84].
Las proteínas de trabajo de evolución dirigida ya estaban en el mercado en 2000 [85,86]. Estos fueron GFP de Clontech y LipoPrime de
Novo Nordisk ® lipasa.
4. La producción de proteínas recombinantes en huéspedes microbianos
En 2005, había 4.200 empresas de biotecnología en todo el mundo. Los ingresos totales ascendieron a $ 63 mil millones. la
tecnología del ADN recombinante ha sido notablemente avanzado por su desarrollo de sistemas de expresión eficientes y de escalado
para producir enzimas de microorganismos industrialmente desconocidos y otros organismos vivos utilizando organismos industriales,
tales como E. coli, Bacillus subtilis
y otras especies de Bacilo, eutropha Ralstonia, Pseudomonas fluorescens, Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, Hansenula
polymorpha, y especies de Aspergillus y Trichoderma [ 87]. Aproximadamente el 90% de las enzimas industriales son versiones
recombinantes.
E. coli se ha utilizado ampliamente como un huésped recombinante por muchas razones incluyendo (i) la facilidad de modificación de
forma rápida y precisa el genoma; (Ii) un rápido crecimiento a altas densidades de células; (Iii) la facilidad de cultivo en medios barata; y
(iv) la facilidad de reducción de la actividad de la proteasa. E. coli se puede acumular proteínas heterólogas hasta 50% de su peso de
células secas [88]. Sin embargo, tiene varios inconvenientes, tales como: incapacidad para las modificaciones post-traduccionales,
presencia de pirógenos de la pared celular tóxicos o, a veces, la formación de cuerpos de inclusión que contienen la proteína heteróloga
inactivo, agregada y insoluble. A pesar de esto, la producción y excreción de alto nivel se ha obtenido con las siguientes proteínas
heterólogas: fosfatasa alcalina (PhoA) en 5,2 g / L en el periplasma, y fructotransferase levan LFT a 4 g / L en el medio. En 1993, los
procesos recombinantes en E. coli fueron responsables de casi $ 5 mil millones en productos (87). R. eutropha producido
organophosphohydrolase a 10 g / L [89]. los
P. fluorescens cultura de la empresa Pfenex es capaz de producir 20 g / L de proteína [90].

S. cerevisiae ofrece ciertas ventajas sobre las bacterias como un huésped de clonación [91]. Esta levadura se puede cultivar rápidamente
en medios simples y a una alta densidad celular, puede secretar proteínas heterólogas en el caldo extracelular, y su genética son más
avanzadas que cualquier otra eucariota. La glucosa oxidasa de
Aspergillus niger ha sido producido a 9 g / L por esta levadura (87). A pesar de estas ventajas, S. cerevisiae
a veces se considera como una de menos de huésped óptima para producción a gran escala de proteínas de mamíferos a causa de inconvenientes
tales como hiperglicosilación, la presencia de α-1, residuos de manosa 3-ligados que podría causar una respuesta antigénica en los pacientes, y en
ausencia de fuerte y firmemente promotores -regulated.
P. pastoris se ha convertido en uno de los sistemas de expresión más ampliamente utilizados [87,92]. Más de 700 proteínas se han
producido por esta levadura [93]. Producción de proteínas recombinantes alcanzó 22 g / L para las proteínas intracelulares [94] y 14,8 g / L
para las proteínas secretadas [95]. Se ha argumentado que
P. pastoris puede producir hasta 30 g / L de proteínas recombinantes [96]. Entre las ventajas de esta levadura metilotrófica más de S.
cerevisiae son (i) un promotor de metanol eficiente y fuertemente regulado (AOX1) que produce alcohol oxidasa a 30% de la proteína soluble;
(Ii) menos extensa glicosilación, debido a la más cortas longitudes de cadena de oligosacáridos de alto contenido en manosa unidos a N, por
lo general hasta 20 residuos que carecen de los vínculos α-1,3-manosa terminales [97]; (Iii) la integración de multicopias de ADN extraño en
el ADN cromosómico que producen transformantes estables; (Iv) la capacidad para secretar altos niveles de proteínas extrañas; y (v) el
crecimiento de alta densidad y directo escala-up [98].
la expresión génica heteróloga en la levadura metilotrópica H. polymorpha es similar a la de

P. pastoris. El promotor del gen de la metanol oxidasa se utiliza para expresar genes extraños. Al igual que con AOX1 en P. pastoris, el gen MOX
en H. polymorpha es altamente expresado y estrechamente regulada, dando los niveles de enzimas hasta 37% de la proteína total de células [99].
Una diferencia importante es que la expresión del gen MOX se desreprime significativamente en la ausencia de glucosa o durante limitación de la
glucosa [100] y la regulación, por lo tanto apretado del promotor MOX se pierde en las condiciones de alta glucosa utilizados habitualmente para
las fermentaciones de alta de biomasa. H. polymorpha puede producir 1.4 g / L de glucoamilasa segregada y
13,5 g / l de fitasa.
El desarrollo de técnicas moleculares para la producción de proteínas heterólogas recombinantes en hongos filamentosos ha sido
laborioso y contrasta marcadamente con el éxito alcanzado en levaduras. La capacidad de introducir o eliminar genes sigue siendo difícil,
aunque se han descrito algunos avances en la transformación, por ejemplo, mediada por enzima de restricción integración [101] y tumefaciens-
Agrobacterium transformación mediada por el plásmido Ti [102]. Los niveles de producción de proteínas no micóticas han sido bajos en
comparación con las de las proteínas homólogas. Diferentes estrategias se han desarrollado para superar
estos problemas, incluyendo la construcción de cepas deficientes en proteasa [103], la introducción de un gran número de copias de
genes [104], el uso de promotores fuertes de hongos, señales de secreción eficientes [104,105], y fusiones de genes con un gen que
codifica parte de o toda una proteína bien secretada-[105]. Pocos estudios se han llevado a cabo en la glicosilación en moldes aunque
no parece que ocurra y se forman cadenas laterales bajo manosa hiper-glicosilación. Aspergillus awamori produce 4,6 g / L de
glucoamilasa de
A. niger. Aspergillus oryzae produce 3,3 g / L de Mucor renina. Acremonium chrysogenum produce 4 g / L de Fusarium proteasa
alcalina. Trichoderma reesei produce 35 g / L de reciente entrada recombinantproteins.A en el campo es lucknowense
Chrysosporium, que produce altos niveles de proteínas (50-80 g / L), y de la que se han obtenido de baja viscosidad y los
mutantes de baja proteasa [106107].
5. La biocatálisis enzimática
Biocatalizadores se han aplicado ampliamente en las industrias de elaboración de la cerveza y de los alimentos durante mucho tiempo, pero ar la
búsqueda de nuevas aplicaciones en muchos campos, incluyendo la química industrial [108]. Biocatálisis implica la aplicación de células completas,
extractos celulares microbianas, enzimas purificadas, células inmovilizadas, o enzimas inmovilizados como catalizadores para cualquiera de los procesos
anteriormente mencionados [109,110]. Como se ha mencionado en las secciones anteriores, su rápido desarrollo era debido a los recientes avances en la
secuenciación del genoma a gran escala, la evolución dirigida, de expresión de proteínas, de ingeniería metabólica, cribado de alto rendimiento, y de
biología estructural [111112].
5.1. Aplicaciones técnicas
Las enzimas son muy importantes para los procesos de industrial, farmacéutica y biotecnológica importancia [113]. El mercado total de
enzimas industriales alcanzó $ 3.3 mil millones en 2010 y se estima que alcanzará un valor de 4,4 mil millones en 2015 [114]. De estos,
enzimas técnicas se utilizan normalmente como enzimas a granel en las industrias de detergentes, textiles, pulpa y papel y en la industria de
los biocombustibles, entre otros. Uso para el cuero y el bioetanol es responsable de las cifras de ventas más altas. enzimas técnicas tenían
ingresos de casi $ 1.2 mil millones en 2011, que se espera que alcance $ 1.5 mil millones en 2015 y $ 1.7 mil millones en 2016. Se espera que
las ventas más altas que en el biocombustibles (bioetanol) de mercado [115]. Se espera que el uso de enzimas para alimentos y bebidas para
llegar a $ 1.3 mil millones para el año 2015.
El uso de enzimas como aditivos detergentes representa una aplicación importante de enzimas industriales. Proteasas, lipasas,
amilasas, oxidasas, peroxidasas y celulasas se añaden a los detergentes en los que catalizan la descomposición de los enlaces
químicos en la adición de agua. Para que sea adecuado, deben ser activa en condiciones termófilas (60 ° C) y alcalofılica (pH 9-11),
así como en presencia de los diversos componentes de los detergentes en polvo.
Las proteasas constituyen más del 60% del mercado mundial de enzimas. Se utilizan para producir productos farmacéuticos,
alimentos, detergentes, cuero, seda y productos agroquímicos. En agentes de lavado, que representan aproximadamente el 25% de
las ventas totales a nivel mundial de enzimas. El primer detergente que contiene una proteasa bacteriana (-Biotex‖) fue presentado por
Novo Industria A / S (ahora Novozymes) en 1956. Contenía un Alcalase producido por Bacillus licheniformis. En 1994, Novo Nordisk
introdujo Lipolase TM, la primera lipasa recombinante comercial para su uso en un detergente, por clonación del
lanuginosa de Humicola lipasa en el A. oryzae genoma. En 1995, Genencor International presentó dos lipasas
bacterianas, uno de mendocina Pseudomonas ( Lumafast TM), y otro de
Alcaligenes (Pseudomonas Lipomax® TM). Una enzima añadido recientemente a los detergentes es Mannaway TM, una
Bacilo mananasa que elimina las manchas de comida que contienen goma guar [116].
En la industria textil, las enzimas son también cada vez más utilizados para desarrollar procesos más limpios y reducir el uso de
materias primas y la producción de residuos. La aplicación de celulasas para el acabado de mezclilla y lacasas para la decoloración
de los efluentes textiles y el blanqueo de tejidos son los más recientes avances comerciales [117]. Un proceso enzimático alternativa
en la fabricación de algodón se ha desarrollado recientemente en base a una pectato liasa [118]. El proceso se realiza a temperaturas
mucho más bajas y utiliza menos agua que el método clásico.
Otra aplicación de enzimas con cada vez mayor importancia es el uso de lipasas, xilanasas y lacasas en la eliminación de tono
(componentes hidrófobos de la madera, principalmente triglicéridos y ceras) en la industria de la pulpa [119]. Una lipasa de Candida rugosa se
utiliza por Nippon Paper Industries para eliminar hasta un 90% de estos compuestos [120]. El uso de enzimas como alternativas a los
productos químicos en el tratamiento del cuero ha demostrado su eficacia en la mejora de la calidad del cuero y en la reducción de la
contaminación ambiental. lipasas alcalinas de Bacilo cepas, que crecen bajo condiciones altamente alcalinas, en combinación con otras
proteasas alcalinas o neutras, en la actualidad están siendo utilizados en esta industria. Las lacasas oxidan fenólicos y compuestos
relacionados con la lignina no fenólicos, así como los contaminantes ambientales [121]. Se utilizan para desintoxicar efluentes industriales de
la industria petroquímica papel y pulpa, textil, y, como una herramienta de diagnóstico médico, para la biorremediación de herbicidas,
pesticidas y explosivos en el suelo, como agente de limpieza para sistemas de purificación de agua, como un catalizador en la fabricación de
drogas y como ingredientes cosméticos.
Aunque celulasas han sido ampliamente utilizados en aplicaciones textiles durante muchos años, estas enzimas están ganando
consideración adicional en el mercado de enzimas debido a su capacidad en la degradación de materias primas lignocelulósicas. El costo
de celulasas es un tema clave en la consecución de una conversión de bajo precio de la biomasa lignocelulósica en biocombustibles y
otros productos [122-124]. Los hongos filamentosos pueden producir celulasas nativas niveles mayores que 100 g / L [87]. Enzimas
necesarias para hidrolizar celulosa incluyen (1) endoglucanasas, que se descomponen cadenas de celulosa de una manera aleatoria; (2)
celobiohidrolasas, que liberan dímeros de glucosa a partir de ambos extremos de las cadenas de celulosa; y (3) beta-glucosidasas, que
producen glucosa a partir de cadenas de oligómero. Hypocrea jecorina (Trichoderma reesei) es la principal fuente industrial de celulasas y
hemicelulasas utilizados para despolimerizar la biomasa vegetal en azúcares simples [125-127]. La acción global de T. reesei en la
biomasa celulósica está limitado por su bajo contenido de beta-glucosidasa. El resultado es la acumulación de celobiosa que limita aún
más avería. La expresión del gen de la beta-glucosidasa de pericona girar T. reesei resultado en un aumento del nivel de
beta-glucosidasa, aumentando así la actividad de celulasa en general y la acción sobre los residuos de biomasa [128]. Las celulasas se
forman de forma adaptativa, y varios componentes positivos (XYR1, ACE2, HAP2 / 3/5) y negativo (ACE1, CRE1) que participan en esta
regulación se conocen ahora [127]. Además, su secuencia completa del genoma se ha publicado [129], con lo que el organismo
susceptible a mejora el blanco de ingeniería metabólica. Recientemente se ha informado de que la bacteria termófila extrema
bescil Caldicelluloseruptor produce un sistema de celulasa / hemicelulasa dos veces tan activo como que a partir de
T. reesei [ 130].
5.2. Las enzimas en la industria de alimentos
El mercado mundial de enzimas para alimentación animal es un segmento prometedor en la industria de la enzima y se
espera que llegue a cerca de $ 730 millones en 2015 [131]. enzimas para alimentación animal pueden aumentar la digestibilidad
de los nutrientes, que conduce a una mayor eficiencia en la utilización del alimento. Además, pueden degradar componentes
inaceptables en la alimentación, que son de otra manera perjudicial o de poco o ningún valor [132]. Actualmente, las enzimas de
alimentación disponibles comercialmente son fitasas, proteasas, alfa-galactosidasas, glucanasas, xilanasas, a-amilasas, y
poligalacturonasas, utilizado principalmente para cerdos y aves de corral [133]. Desarrollos de enzimas estables al calor,
actividad específica mejorada, algunos de los nuevos enzimas de polisacáridos que degradan no amiláceos, y ensayos rápidos,
económicos y fiables para la medición de actividad de la enzima siempre han sido el foco y que se han intensificado
recientemente.
5.3. Las enzimas de procesamiento de comida
enzimas de alimentos y bebidas constituyen el mayor segmento de enzimas industriales con unos ingresos de casi $ 1.2 mil millones en 2011,
que se espera que crezca a $ 1.8 mil millones para el año 2016, a una tasa de crecimiento anual compuesta del 10,4% [115].
Las lipasas se utilizan comúnmente en la producción de una variedad de productos, que van desde los zumos de frutas, alimentos horneados y
fermentaciones vegetales para el enriquecimiento de los productos lácteos. Grasas, aceites y compuestos relacionados son los principales objetivos de
lipasas en la tecnología de los alimentos. Se requiere un control preciso de la concentración de lipasa, pH, temperatura y contenido de emulsión para
maximizar la producción de sabor y fragancia. La mediación lipasa de ésteres de hidratos de carbono de los ácidos grasos ofrece un mercado potencial
para su uso como emulsionantes en los alimentos, productos farmacéuticos y cosméticos. Hay tres lipasas fúngicas recombinantes que actualmente se
utilizan en la industria alimentaria, uno de miehi Rhizomucor, uno de Thermomyces lanuginosus y otro de
Fusarium oxysporum; todo se produce en A. oryzae [ 135 136].

La principal aplicación de las proteasas en la industria láctea es para la fabricación de queso. Calf renina había sido preferido en
la fabricación de queso debido a su alta especificidad, pero proteasas microbianas producidas por microorganismos GRAS como Mucor
miehei, Bacillus subtilis, Mucor pusillus Lindt y
Endothia parasitica están reemplazando gradualmente. La función principal de estas enzimas en la fabricación de queso es para
hidrolizar el enlace peptídico específico (Phe105-Met106) que genera para-k-caseína y macropéptidos [137]. La producción de renina
de ternero (quimosina) en recombinante A. niger var awamori
ascendió a aproximadamente 1 g / L después de la mutagénesis nitrosoguanidina y selección para la resistencia 2-desoxiglucosa [138]. Una
mejora adicional se realizó por recombinación parasexual que resulta en una cepa productora de 1,5 g / L de los padres que producen 1,2 g /
L [139]. Cuatro proteasas recombinantes han sido aprobados por la FDA para la producción de queso [140,141].
glucosa isomerasa bacteriana, fúngica α-amilasa y glucoamilasa se utilizan actualmente para producir
- syrup‖ alta fructosa a partir de almidón de maíz en un negocio de $ 1 mil millones. Otras enzimas útiles en la industria alimentaria
incluyen la invertasa de Kluyveromyces fragilis, Saccharomyces carlsbergensis y
S. cerevisiae para el caramelo y mermelada de fabricación, β-galactosidasa (lactasa) a partir de Kluyveromyces lactis,
K. fragilis o Candida pseudotropicalis para la hidrólisis de la lactosa de la leche o suero de leche, y galactosidasa
desde S. carlsbergensis para la cristalización del azúcar de remolacha. syrup‖ -Fructose, producido por isomerasa xxylose sobre la glucosa está en un
nivel de producción de 15 millones de toneladas por año [142].
En términos de la regulación del gobierno, las enzimas utilizadas en los alimentos se pueden dividir en aditivos alimentarios y coadyuvantes de
elaboración. La mayoría de las enzimas alimentarias se consideran como coadyuvantes de elaboración, con sólo unos pocos utilizado como aditivos,
tales como lisozima y invertasa [143]. Los adyuvantes de procesamiento se utilizan durante el proceso de fabricación de los productos alimenticios, y
no tienen una función tecnológica en el alimento final. Se espera que todos estos materiales para estar seguro, bajo la guía de buenas prácticas de
fabricación (GMP). La cuestión clave en la evaluación de seguridad de los preparados de enzimas es la evaluación de la seguridad de la cepa de
producción. Sólo unos nueve microorganismos recombinantes se consideran -Generalmente reconocido como Safe‖ (GRAS) basado en normas de la
FDA. Estos son de un relativamente pequeño número de especies bacterianas y fúngicas principalmente A. oryzae, A. niger, B. subtilis y B. licheniformis. Olempska-B
[144] ha revisado las cepas microbianas de ingeniería para la producción de enzima alimentaria desde un punto de vista de la seguridad.
5.4. Las enzimas en los procesos químicos y farmacéuticos
La aplicación exitosa de procesos enzimáticos en la industria química depende principalmente de la competitividad de costes con los métodos
químicos existentes y bien establecidas [145]. La menor demanda de energía, el aumento de título de producto, el aumento de la eficiencia del
catalizador, menos residuos de catalizador y subproductos, así como menores volúmenes de corrientes de aguas residuales, son las principales
ventajas de que los procesos biotecnológicos tienen en comparación con los procesos químicos bien establecidos. Se estima que sólo alrededor de
150 procesos de biocatálisis que se aplican actualmente en la industria [146]. Sin embargo, los nuevos avances científicos en genómica, así como
en la ingeniería de proteínas, facilitan la adaptación de propiedades de las enzimas para aumentar ese número significativamente [147148].
Una conversión enzimática fue ideado para producir el aminoácido L-tirosina [149]. El fenol, piruvato, fosfato de piridoxal
y cloruro de amonio se convierten a la L-tirosina usando un liasa tirosina fenol termoestable y chemostable obtenido a partir
de toebii Symbiobacterium. El título producido fue 130 g / L después de 30 h con alimentación continua de sustrato.
biocatálisis escala industrial se centra principalmente en hidrolasas, unos ketoreductases (KREDs), regeneración de cofactor y estabilidad
de la proteína en disolventes orgánicos. Las numerosas rutas biocatalıticos ampliadas de fabricación de productos farmacéuticos han sido
recientemente revisado por Bornscheuer et al. [ 112], que muestra la competitividad de las enzimas frente a los procesos químicos
tradicionales.
Las enzimas son útiles para preparar los antibióticos beta-lactámicos, tales como penicilinas y cefalosporinas [150] semi-sintéticos.
Beta-lactamas constituyen el 60% -65% del mercado total de antibióticos.
Preparación de medicamentos quirales, es decir, la síntesis de productos intermedios farmacéuticos quiral complejos de manera eficiente
y económicamente, es una de las aplicaciones más importantes de la biocatálisis. Esterasas, lipasas, proteasas y KREDs (ketoreductases)
se aplican ampliamente en la preparación de alcoholes quirales, ácidos carboxílicos, aminas o epóxidos, entre otros [116,151,152].
La ineficiencia inherente de resolución cinética (máximo 50% de rendimiento) se puede superar mediante novedosos reacciones
asimétricas catalizadas por la mejora de las enzimas microbianas que pueden proporcionar un rendimiento del 100% [153]. La reducción
asimétrica de tetrahidrotiofeno-3-ona con una reductasa de tipo salvaje dio el alcohol deseado ((R) -tetrahydrothiophene-3-ol), un componente
clave en sulopenem, un potente antibacteriano desarrollado por Pfizer, pero sólo en el 80% -90 % ee (exceso enantiomérico). Una
combinación de azar
mutagénesis, transposición de genes y el análisis PROSAR se utilizó para mejorar la selectividad enantiomérica de una cetorreductasa
hacia tetrahidrotiofeno-3-ona. La mejor variante aumentó selectividad enantiomérica de 63% ee a 99% ee [154].
Atorvastatina, el ingrediente activo de Lipitor, un fármaco reductor del colesterol que tuvo ventas globales de US $ 12 mil millones en 2010, se
puede producir enzimáticamente. El proceso se basa en tres actividades enzimáticas: una reductasa cetona, una glucosa deshidrogenasa y una
deshalogenasa halohydryn. Varias rondas iterativas de combinación aleatoria de ADN para estas tres enzimas, con la detección en presencia de
concentraciones iterativamente más altos de producto, condujeron a una reducción de 14 veces en el tiempo de reacción, un incremento de 7 veces
en la carga de sustrato, una reducción de 25 veces en la enzima uso, y una mejora del 50% en el rendimiento aislado [155].
resolución cinética de aminas racémicas es un método común utilizado en la síntesis de aminas quirales. La acilación de un resto de amina
primaria por una lipasa es utilizado por BASF para la resolución de aminas primarias quirales en una escala multi-mil toneladas [156].
Recientemente, la síntesis asimétrica a partir de las cetonas quirales correspondientes, utilizando las transaminasas, está ganando la atención
[152]. Algunas de las transaminasas (R) selectivos se han descubierto recientemente utilizando in silico estrategias para una predicción basada en la
secuencia de especificidad de sustrato y enantio-preferencia [157]. Ópticamente (S) aminas puras se obtuvieron usando un ω-transaminasa
recombinante con 99% ee y 97% de rendimiento [158]. Estas aminas enantiopuros pueden encontrar uso como inhibidores de la monoamina
oxidasa en el tratamiento de diversos trastornos neurológicos tales como enfermedades de Parkinson y de Alzheimer.
Un proceso enzimático eficaz utilizando la evolución de la enzima fue desarrollado por la compañía de biotecnología Codexis, en
cooperación con Pfizer, para producir pentanol 2-metilo, un producto intermedio importante para la fabricación de productos
farmacéuticos y cristales líquidos [159]. Muy recientemente, la ingeniería de proteínas amplió la gama de sustrato de transaminasas a
cetonas. En una impresionante pieza de trabajo desarrollado por Merck y Codexis, la fabricación química de sitagliptina, el ingrediente
activo en Januvia que es un fármaco principal para la diabetes tipo 2, fue sustituido por un nuevo proceso biocatalítico. Se aplicaron
varias rondas de evolución dirigida para crear una transaminasa amina ingeniería con un aumento de 40.000 veces en la actividad
[160]. Tal proceso no sólo reduce los residuos totales (por 19%), pero también aumentó rendimiento global (13%) y la productividad (en
un 53%). científicos Codexis también desarrollaron procesos enzimáticos para la producción de montelukast (Singulair) y silopenem
[161]. También desarrollaron una enzima LOVD mejorado (una aciltransferasa) para mejorar la conversión del reductor del colesterol
agente, lovastatina, simvastatina a [162].
Ópticamente ácidos carboxílicos activos han sido por lo general sintetizado a través de diferentes rutas enzimáticas catalizadas por lipasas,
nitrilases o liasas hidroxinitrilo. Los avances recientes han mejorado la eficiencia de tales procedimientos. La síntesis de ácidos
2-Arilpropanoico (por ejemplo, ketoprofeno, ibuprofeno y naproxeno) se consigue principalmente a través de la resolución cinética de sustratos
racémicos por lipasas de Candida antarctica
o Pseudomonas sp. Un procedimiento que utiliza un sustrato novela, (R, S) -N-profenylazoles, en lugar de sus ésteres correspondientes,
demostró ser más eficiente.
(R) - o- ácido cloromandélico es un intermedio clave para la fabricación de clopidogrel, un inhibidor de la agregación plaquetaria, con las
ventas mundiales de $ 10 mil millones por año. La reducción asimétrica de metil o-chlorobenzoylformate con un versátil reductasa de
carbonilo recombinante a partir de S. cerevisiae Expresado en E. coli obteniéndose la (R) - o- chloromandelate a una concentración de 178 g / L
y 99% ee [163].
La aplicación de enzimas en varios bioconversiones industriales se ha ampliado por el uso de disolventes orgánicos en
sustitución de agua [45,50], un importante desarrollo en ingeniería de enzimas. Muchos
productos químicos y polímeros son insolubles en agua y su presencia conduce a subproductos no deseados y la degradación de los
reactivos orgánicos comunes. Aunque el cambio de agua a un disolvente orgánico como medio de reacción podría sugerir que la
enzima se desnaturaliza, muchos cristalina o enzimas liofilizadas son en realidad estable y retienen sus actividades en tales
ambientes anhidras. lipasas de levadura se han utilizado para catalizar butanólisis en disolventes anhidros para obtener enantiopure
2-cloro- y ácidos que se utilizan para la síntesis de herbicidas y productos farmacéuticos [151] 2-bromo-propiónico. Otra lipasa se
utiliza en una etapa de estereoselectiva, llevado a cabo en acetonitrilo, para la acetilación de un diol simétrica durante la síntesis de
un agente antifúngico [164].
Desde una perspectiva biotecnológica, hay muchas ventajas de emplear enzimas en orgánica, en contraposición a acuosos, medios de
comunicación [165], incluyendo una mayor solubilidad del sustrato, inversión de reacciones hidrolíticas, y la especificidad enzima modificada, que
resultan en nuevas actividades enzimáticas. Por otro lado, las enzimas generalmente muestran más bajas actividades catalíticas en orgánica que en
solución acuosa.
6. Conclusión y perspectivas futuras
Los microorganismos proporcionan una cantidad impresionante de catalizadores con una amplia gama de aplicaciones a través de varias industrias
tales como cuidado del hogar, alimentos, piensos, industrias técnicas, productos de química fina y farmacéutica. Las propiedades únicas de enzimas tales
como una alta especificidad, la acción rápida y la biodegradabilidad permiten procesos enzimáticos asistida en la industria a circular en condiciones de
reacción más suaves, con rendimientos mejorados y reducir la generación de residuos.
Sin embargo, las enzimas presentes en la naturaleza a menudo no son adecuados para tales procesos biocatalíticos sin más sastrería o
rediseño de la propia enzima con el fin de afinar la actividad especificidad de sustrato o de otras propiedades catalíticas clave.
Los recientes avances en la genómica, metagenómica, proteómica, sistemas de expresión eficientes y emergentes técnicas de ADN
recombinante han facilitado el descubrimiento de nuevas enzimas microbianas de la naturaleza (a través de genoma y metagenoma) o
mediante la creación de (o evolución) enzimas con propiedades catalíticas mejoradas.
El progreso continuo e interés en las enzimas proporcionan un mayor éxito en las áreas de biocatálisis industrial. Los próximos años
deberían ver una gran cantidad de novedades interesantes en el área de biotransformaciones. Hay muchos factores que influyen en el
creciente interés en la biocatálisis, que incluyen la promiscuidad enzima, métodos computacionales robustos combinados con la evolución y de
cribado tecnologías dirigidas a mejorar las propiedades de la enzima para satisfacer las perspectivas de proceso, la aplicación de reacciones
de múltiples pasos en un único recipiente utilizando catalizadores multifuncionales y la de novo diseño y selección de proteínas catalíticas que
catalizan una reacción química deseada.
Muchas investigaciones futuras usarán combinaciones de ingeniería y de novo enzimas diseñados junto con la química para generar
más (y más probables nuevas) productos químicos y materiales de recursos más baratos (y renovables), que en consecuencia
contribuirán a establecer una economía de base biológica y lograr un crecimiento verde bajo en carbono.
Conflictos de interés
Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

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© 2014 por los autores; licenciatario MDPI, Basilea, Suiza. Este artículo es un artículo de acceso abierto distribuido bajo
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Enzimas Microbianas, Herramientas para Procesos Biotecnologicos - En.es

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biomoléculas 2014, 4, 117-139; doi: 10.

Las enzimas microbianas: Herramientas para procesos biotecnológicos

José L. Adrio 1 y Arnold L. Demain 2, *

* Autor a quien debe dirigirse la correspondencia; E-Mail: ademain@drew.edu; Tel .: +

palabras clave: biocatálisis; enzimas industriales; huéspedes microbianos; ingeniería de proteínas

de productos químicos y farmacéuticos, tienen varias desventajas: bajo catalítica

de células microbianas enteras.

economías de estos países.

2.1. Proyección metagenomic

nuevas enzimas [10,17].

epóxido hidrolasa [31].

lividans, Pseudomonas putida y

leguminosarum Rhizobium, entre otros [32,33].

2.2. genomas microbianos

termófilos extremos (crecimiento a 60-80 ° C) se encuentran ampliamente distribuidas

hyperthermophiles pertenecer a Archaea como Pyrococcus, Thermococcus o Methanopyrus,

ha sido revisado [51,52]).

3. Estrategias para mejorar las propiedades de las enzimas microbianas

Figura 1. Descubrimiento y desarrollo de biocatalizadores.

3.1. Diseño racional

de proteínas funcionales [60].

3.2. Evolución dirigida

de variante de la enzima menor librerías diseñadas por racional o

[61,63]. Una opción es apuntar los residuos del sitio activo

enzimas homólogas [71].

truncamientos aleatorios [75] o inserciones y deleciones de codones [76].

Novo Nordisk ® lipasa.

4. La producción de proteínas recombinantes en huéspedes microbianos

tales como E. coli, Bacillus subtilis

organophosphohydrolase a 10 g / L [89]. los

P. fluorescens cultura de la empresa Pfenex es capaz de producir 20 g / L de proteína [90].

avanzadas que cualquier otra eucariota. La glucosa oxidasa de

ausencia de fuerte y firmemente promotores -regulated.

para las proteínas secretadas [95]. Se ha argumentado que

crecimiento de alta densidad y directo escala-up [98].

la expresión génica heteróloga en la levadura metilotrópica H. polymorpha es similar a la de

biología estructural [111112].

5.1. Aplicaciones técnicas

llegar a $ 1.3 mil millones para el año 2015.

así como en presencia de los diversos componentes de los detergentes en polvo.

mucho más bajas y utiliza menos agua que el método clásico.

drogas y como ingredientes cosméticos.

5.2. Las enzimas en la industria de alimentos

5.3. Las enzimas de procesamiento de comida

Fusarium oxysporum; todo se produce en A. oryzae [ 135 136].

de ternero (quimosina) en recombinante A. niger var awamori

nivel de producción de 15 millones de toneladas por año [142].

5.4. Las enzimas en los procesos químicos y farmacéuticos

Beta-lactamas constituyen el 60% -65% del mercado total de antibióticos.

agente, lovastatina, simvastatina a [162].

racémicos por lipasas de Candida antarctica

demostró ser más eficiente.

6. Conclusión y perspectivas futuras

reacción más suaves, con rendimientos mejorados y reducir la generación de residuos.

mediante la creación de (o evolución) enzimas con propiedades catalíticas mejoradas.

catalizan una reacción química deseada.

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

Crit. Rev. Biotechnol. 2013, 33, 365-378.

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