A CARA

G USO FUNDAMENTO FORMULA INCUBA CTERI RESULTADOS

A CIÓN STICA
R S

M Este medio se En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes  Peptona: 17.0 Durante Medio  Fermentadores de lactosa:
A utiliza para el necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato  Pluripeptona: 3.0 18-48 prepara colonias rosadas- rojizas. Puede
C aislamiento de de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal  Lactosa: 10.0 horas, a do: rojo observarse halo de precipitación
bacilos Gram violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de  Mezcla de sales 35-37 ºC, púrpura biliar.
C
negativos de fácil gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentación de la biliares: 1.5 en
O desarrollo, aerobios lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un atmósfera
 Cloruro de sodio:  No fermentadores de lactosa:
N y anaerobios viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en aeróbica colonias de color media,
5.0
K facultativos. las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los incolaras.
 Agar: 13.5
E Permite diferenciar microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
 Rojo neutro: 0.03
Y bacterias que incoloras.
 Cristal violeta:
utilizan o no,
0.001
lactosa. Todas las
especies de la  pH final: 7.1 ± 0.2
familia
Enterobacteriaceae
desarrollan en el
mismo

S Medio de cultivo Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.  Pluripeptona: 5.0 Durante2 Medio  Fermentadores de lactosa:
S utilizado para el La selectividad, está dada por las sales biliares y el verde  Extracto de 4-48 prepara colonias rosadas o rojizas.
aislamiento de brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas. Es carne: 5.0 horas a do: rojo
Salmonella spp. y diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación  Lactosa: 10.0 35-37 °C, naranja.  No fermentadores de lactosa:
de algunas de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos  Mezcla de sales en colonias del color medio,
especies de microorganismos fermentadores de lactosa capaces de biliares: 8.5 aerobiosis incoloras.
Shigella spp. desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador  Citrato de sodio: .
de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo 8.5  Microorganismos productores de
rojizo. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como  Tiosulfato de SH2: colonias con centro centro.
colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de sodio: 8.5
hierro.
 Citrato férrico:
1.0
 Agar: 13.5
 Verde brillante:
0.00033
 Rojo neutro:
0.025
 pH final: 7.0 ± 0.2
C Medio utilizado En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente  Citrato de sodio: A 35-37 Medio  Positivo: crecimiento y color azul
I para la de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. 2.0 ºC, prepara en el pico, alcalinidad
T diferenciación de Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es  Cloruro de sodio: durante do:
enterobacterias, en cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance 5.0 24-48 verde.  Negativo: el medio permanece de
R
base a la osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira  Fosfato horas, en color verde debido a que no hay
A capacidad de usar al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial aerobiosis
dipotásico: 1.0 desarrollo bacteriano y no hay
T citrato como única ya que los microorganismos capaces de utilizar citrato como . cambio de color.
 Fosfato
O fuente de carbono y única fuente de carbono, usan sales de amonio como única monoamónico:
energía. fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de 1.0
alcalinidad.  Sulfato de
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias magnesio: 0.2
poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido  Azul de
tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, bromotimol: 0.08
oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio
 Agar: 15.0
alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como
 pH final: 6.9 ± 0.2
fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos.
El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la
producción de citrato permeasa.

T Medio En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona,  Extracto de A 35-37°C Medio  Pico alcalino/fondo ácido (pico
S universalmente aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. carne: 3.0 durante prepara rojo/fondo amarillo): el
I empleado para la La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono  Pluripeptona: 24 horas, do: rojo microorganismo solamente
diferenciación de fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para 20.0 en fermenta la glucosa.
enterobacterias, en la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio,  Cloruro de sodio: aerobiosis
base a la es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido 5.0 .  Pico ácido/fondo ácido (pico
fermentación de sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de  Lactosa: 10.0 amarillo/fondo amarillo): el
glucosa, lactosa, fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el  Sacarosa: 10.0 microorganismo fermenta
sacarosa y a la balance osmótico. Por fermentación de azúcares, se producen  Glucosa: 1.0 glucosa, lactosa y/o sacarosa.
producción de ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el
 Sulfato de hierro
ácido sulfhídrico. cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se  Pico alcalino/fondo alcalino (pico
y amonio: 0.2
reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal rojo/fondo rojo): el
 Tiosulfato de
de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. microorganismo es no
sodio: 0.2
 Rojo de fenol: fermentador de azúcares.
A: ácido
K: alcalino 0.025
 Agar: 13.0  La presencia de burbujas, o
ruptura del medio de cultivo,
 pH final: 7.3 ± 0.2
indica que el microorganismo
produce gas.

 El ennegrecimiento del medio

indica que el microorganismo
produce ácido sulfhídrico.
L Medio de cultivo En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura  Peptona de En Medio  Decarboxilación de la lisina:
I utilizado para aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es gelatina: 5.0 aerobiosis prepara - Prueba Positiva: Pico
diferenciar el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato  Extracto de , durante do: color violeta/fondo violeta.
A
microorganismos, utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa levadura: 3.0 24 horas violeta. - Prueba Negativa: Pico
especialmente y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de  Glucosa: 1.0 a 35-37 violeta/fondo amarillo.
Salmonella spp., sodio, son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico.  Lisina: 10.0 °C.
basado en la El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de  Citrato de hierro y  Desaminación de la lisina: Pico
decarboxilación / color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH amonio: 0.5 rojizo/fondo amarillo. Esto sucede
desaminación de la igual o mayor a 6.8.  Tiosulfato de con cepas del género Proteus,
lisina y en la Por decarboxilación de la lisina, se produce la amina cadaverina, sodio: 0.04 Providencia y alguna cepas de
producción de que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al Morganella spp.
 Púrpura de
ácido sulfhídrico. color violeta. La decarboxilación de la lisina, tiene lugar en medio
bromocresol:
ácido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente  Producción de ácido sulfhídrico:
0.02
fermentada. Prueba positiva: Ennegrecimiento
 Agar: 15.0
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero del medio (especialmente en el
que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la  pH final: 6.7 ± 0.2
límite del pico y fondo)
totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de
incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo
de las peptonas, y el fondo amarillo.
La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el
ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de
hierro.

S Es un medio El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas  Tripteína: 20.0 Durante Medio  Cepas móviles: producen
I semisólido peptonas, y particularmente de la tripteína, que puede ser  Peptona: 6.1 24 horas, prepara turbidez del medio, que se
M destinado a oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso  Sulfato de hierro a 35-37 do: extiende más allá de la línea de
verificar la interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol y amonio: 0.2 °C, en ámbar. siembra.
movilidad, producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o  Tiosulfato de aerobiosis
producción de indol de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas sodio: 0.2 .  Cepas inmóviles: el crecimiento
y de sulfuro de móviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que  Agar: 3.5 se observa solamente en la línea
hidrógeno en un producen alrededor de la punción de siembra, mientras que  pH final: 7.3 ± 0.2 de siembra.
mismo tubo. aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la
Es útil para formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del  Cepas SH2 positivas:
diferenciar tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a ennegrecimiento a lo largo de la
miembros de la 7.2. línea de siembra o en todo el
familia medio.
Enterobacteriaceae
.  Cepas SH2 negativas: el medio
permanece sin cambio de color.

 Cepas indol positivas: desarrollo

de color rojo luego de agregar el
reactivo de Kovac´s o de Erlich.
  Cepas indol negativas: sin
cambio de color.

LACTOSA
 Lac+: bacterias Lac+ como Escherichia coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual baja el pH bajo 6,8 lo que tiene
como consecuencia la aparición de colonias de color rosadas o rojas. Algunas bacterias en cambio fermentan la lactosa de manera
lenta, estas siguen siendo Lac+ por ejemplo: Serratia y Citrobacter.

 Lac-: Bacterias que no fermenten la lactosa como Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando
amoníaco, lo cual incrementa el pH del agar, formando colonias blancas o incoloras.

CATALAZA
La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y cataliza la reacción de descomposición del
peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.
 Si el resultado es positivo, se observará la formación de burbujas.
 Si es negativo, no se observará nada.

GRAM
 El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas a través de la pared bacteriana.
 El lugol actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana.
 La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración. Los organismos gram positivos no se decoloran,
mientras que los gram negativos sí lo hacen.
 Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células gram
negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen violetas.

 GRAM POSITIVAS: Gruesa capa de peptidoglicano además de dos clases de ácidos teicoicos anclado a la membrana interna de la
pared celular (mureina).

 GRAM NEGATIVAS: Membrana externa de peptidoglicano muy delgada.

La clave es el peptidoglicano ya q es el material que le da rigidez a la pared celular.

DECOLORACION:

 GRAM NEGATIVA, es susceptible a los compuestos orgánicos como por ejemplo la mescla de alcohol/cetona. la capa es muy
delgada como para poder retener cristal violeta/yodo, este complejo se escapa perdiéndose el cristal violeta.

 GRAM POSITIVAS, su pared celular es más resistente no es susceptible a compuestos orgánicos sino q actúa deshidratando los
poros serrados lo que impide que escape el cristal violeta y manteniendo el cristal violeta.