Microbiología, Universidad del Tolima

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO, METODOS DE PREPARACIÓN Y TIPOS DE

SIEMBRA.
Docente: Maryeimy Varón López
Barrero CI, Gaitán JII, Orjuela JIII, Pérez AIV

INTRODUCCIÓN Los medios de cultivo se pueden clasificar

según su estado físico en líquido, sólido y
Las bacterias son microorganismos
semisólido según la cantidad de agente
procariotas, es decir, unos microorganismos
solidificante agregado; según su propósito en
unicelulares sencillos, sin membrana nuclear,
selectivos (Favorecen el crecimiento de
mitocondrias, aparato de Golgi ni retículo
alguna bacteria), diferenciales (Comparar
endoplasmático que se reproducen por
diferentes organismos), mantenimiento
división asexual (Murray et al, 2014).
(Posee condiciones constantes), enriquecidos
Presentan plásmidos, cuerpos de inclusión y
(Poseen nutrientes extras) y de transporte
algunos poseen pelos sexuales, flagelos y
(Desplazamiento de muestras evitando el
endosporas. Para observar el desarrollo de las
crecimiento); según su composición en
bacterias, se requiere un medio de cultivo.
naturales, sintéticos y semisinteticos
(Brock 2009)
dependiendo si se conoce o no la cantidad de
Un medio de cultivo es un sustrato o una sus compuestos. (Casado et al, 2012)
solución de nutrientes que permite el
El organismo humano está habitado por miles
desarrollo de microorganismos. Los
de especies bacterianas distintas; mientras
microorganismos pueden ser aislados y
algunas mantienen una relación parasitaria
propagados por diferentes métodos: su
temporal, otras habitan en el ser humano de
utilización varía según el propósito y tipo de
manera permanente. También se encuentran
microorganismo que se deseen aislar. Para su
bacterias en el ambiente, como el aire que se
identificación se utilizan diferentes métodos
respira, el agua que se bebe y los alimentos
como son el estudio de su morfología que
que se comen; aunque muchas de ellas son
también incluye sus reacciones frente a
relativamente avirulentas, otras son capaces
diferentes colorantes y el tipo de estructura
de provocar enfermedades potencialmente
que pueden poseer como endosporas, cápsula,
mortales. (Murray et al, 2014)
entre otros. Así mismos son de gran utilidad
sus productos metabólicos ya que muchos de Es importante el reconocimiento de bacterias
estos son típicos para cada especie y pueden debido a su relación con los humanos, y para
ser utilizados para su identificación; estas ello se emplean los medios de cultivo. Se
sustancias metabólicas pueden ser detectadas tiene como objetivo reconocer y diferenciar
por medio de una serie de pruebas que se los medios de cultivo, sus componentes, las
conocen como reacciones bioquímicas. reacciones que presentan con diferentes
(Gómez & Acevedo, 2001) bacterias y cuáles de estas pueden verse
favorecidas o inhibidas bajo las condiciones
dadas por cada medio de cultivo.

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MATERIALES Y METODOS
Se realizó cada medio de cultivo inicial con
una estrategia y componentes diferentes:
 Agar Sangre
Primero se realizó el pesaje del
precursor del Medio Agar Sangre, el
cual es el Medio TSA, se pesó 4,8 gr
de Agar TSA en polvo, y se diluyó en
120 ml de agua destilada, aplicando
poco a poco calor para realizar una
dilución total del medio de cultivo en
el agua; después se llevó al autoclave
a una temperatura de 121 °C, durante
15 minutos; una vez finalizado el
proceso, se llevó el medio a una
temperatura de aprox. 45°C, en la que
los glóbulos rojos todavía no entran
en hemolisis, y en la cámara de flujo
laminar, previamente desinfectada, se
le adicionó un 5% de sangre humana,
con el fin de poder evidenciar la
hemolisis realizada por los
microorganismos al sembrar. Se
realizó una dilución de la sangre en el
medio y se sirvieron 20 ml
aproximadamente de la solución
resultante en las cajas de Petri; se
eliminaron las burbujas resultantes
del vertido en las cajas con una aguja
esterilizada y se esperó hasta su
solidificación, almacenando
posteriormente para su uso.
 Agar Chocolate
Se realizó el pesaje del precursor del
Medio Agar Chocolate, el cual es el
Medio TSA, se pesó 4,8 gr de Agar
TSA en polvo, y se diluyó en 120 ml
de agua destilada, aplicando poco a
poco calor para realizar una dilución
total del medio de cultivo en el agua;
después se llevó al autoclave a una
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temperatura de 121 °C, durante 15
minutos; una vez finalizado el
proceso, se llevó a una temperatura
entre 65 y 80°C, donde la temperatura
es un factor que ayuda a la hemolisis
de los glóbulos rojos, liberando los
compuestos que permitirán el
crecimiento de las bacterias
fastidiosas, y en la cámara de flujo
laminar previamente desinfectada se
le adicionó un 5% de sangre humana.
Se realizó una dilución de la sangre en
el medio aún caliente, y se sirvieron
20 ml aproximadamente de la
solución resultante en las cajas de
Petri, se eliminaron las burbujas
generadas por el vertido con una aguja
esterilizada; se esperó hasta su
solidificación, almacenándose
posteriormente para su uso.
 Agar Baird Parker
Se realizó el pesaje de 7.2 gr de Agar
Baird Parker y se diluyó en 120 ml de
agua destilada, se calentó hasta que la
solución quedó sin aglutinaciones, y
se llevó al autoclave a una
temperatura de 121°C durante 15 min;
finalizado el proceso de esterilización,
se dejó reposar el medio de cultivo, y
en la cámara de flujo laminar
previamente desinfectada, se le
adicionó yema de huevo y telurito de
potasio al medio, como factores que
dan la diferenciación de las colonias a
sembrar, se realiza una dilución de los
componentes en el medio, y se
agregan 20ml aproximadamente de la
solución a cada caja de Petri, se
eliminan las burbujas generadas por el
vertido por medio de una aguja
esterilizada y se almacenan para su
posterior uso.
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 Agar MacConkey
Se realizó el pesaje de 6 gr de Agar
MacConkey y se diluyó en 120 ml de
agua destilada, se calentó hasta que la
solución quedó sin aglutinaciones, y
se llevó al autoclave a una
temperatura de 121°C durante 15 min;
finalizado el proceso de esterilización,
se dejó reposar el medio de cultivo, y
en la cámara de flujo laminar,
previamente desinfectada, se procedió
a realizar el servido de 20 ml
aproximadamente de medio en las
cajas de Petri y con una aguja
esterilizada se retiran las burbujas que
pudieron quedar, para su posterior
uso.
Posteriormente, se realizó un medio de
cultivo para aislamiento:
 Agar Nutritivo
Pesar 3 gr de Agar Nutritivo en la
balanza, y adicionar 120 ml de agua
destilada para realizar la dilución, se
aumentó la temperatura para disolver
completamente el medio en el agua, y
se agitó hasta dejar sin aglutinaciones;
después se llevó a autoclavar durante
15 min a una temperatura de 120°C;
finalizado el proceso, se dejó reposar
el medio de cultivo, y en la cámara de
flujo laminar previamente
desinfectada, se procedió a servir 20
ml aproximadamente de medio de
cultivo en cada caja de Petri, retirando
las burbujas provocadas por el vertido
con una aguja esterilizada, para su
posterior almacenaje.
Después, se realizaron medios de cultivo para
las pruebas bioquímicas:
 Medio TSI
Se pesaron 3,25 gr de medio TSI en
una balanza, y se suspendieron en 50
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ml de agua destilada, aumentando la
temperatura y agitando para eliminar
los grumos presentes en el medio;
después de la dilución completa, se
sirvieron aproximadamente 9 ml de la
solución en tubos de ensayo, y se
llevaron a la autoclave a una
temperatura de 121°C durante 15 min;
finalizado el proceso, se colocaron los
tubos en una posición inclinada y se
dejó solidificar.
 Medio BHI
Se pesaron 1,85 gr de medio BHI y se
suspendieron en 50 ml de agua
destilada, se aumentó la temperatura y
se agitó para eliminar grumos y lograr
una dilución uniforme del medio de
cultivo; después se sirvieron
aproximadamente entre 9 ml de medio
de cultivo en tubos de ensayo, y se
llevó al autoclave a una temperatura
de 121°C durante 15 min. Se
almacenaron para su posterior uso.
 Medio BRILA
Se pesaron 2 gr de medio BRILA y se
suspendieron en 50 ml de agua
destilada, se aumentó la temperatura y
se agitó para eliminar aglutinaciones
y lograr una dilución uniforme del
medio de cultivo; después se sirvieron
aproximadamente 9 ml de medio de
cultivo en tubos de ensayo, y se llevó
al autoclave a una temperatura de
121°C durante 15 min. Se
almacenaron para su posterior uso.
 Medio SIM
Se pesaron 1,5 gr de medio de cultivo
SIM y se suspendieron en 50 ml de
agua destilada, se aumentó la
temperatura y se agitó para eliminar
grumos y lograr una dilución
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uniforme del medio de cultivo;

después se sirvieron
aproximadamente 9 ml de medio de
cultivo en tubos de ensayo, y se llevó
al autoclave a una temperatura de
121°C durante 15 min. Finalmente, se
almacenaron para su posterior uso.

 Caldo de Asparagina
Se pesaron 0,5 gr de Asparagine
Pseudomonas Broth, y se disolvieron
en 30 ml de agua destilada;
adicionalmente, se agregaron 0,3 ml Grafica 1. Diagrama de flujo del proceso de
de glicerol al medio de cultivo; se siembra de la muestra en diferentes medios
sirvieron aproximadamente de 5 a 6 sólidos.
ml de la solución en tubos de ensayo, Al obtener resultados en el Agar Mac
y se llevó a la autoclave durante 15
Conkey, se aisló un morfotipo de este y se
min a una temperatura de 121°C. Se
sembró en Agar Nutritivo. Seguidamente, se
almaceno para su posterior uso.
usaron las colonias del Agar nutritivo para la
siembra en los diferentes medios usados para
 Agar ENDO
Se realizó el pesaje de 4,8 gr de Agar las pruebas bioquímicas. El proceso se indica
ENDO, y se diluyó en 120 ml de agua en la Grafica 2.
destilada, después se calentó y se
agitó hasta eliminar la presencia de
grumos de la solución, posteriormente
se introdujo al autoclave y se realizó
el proceso de esterilización durante 15
minutos a 121°C, al finalizar el
proceso, se dejó reposar el medio de
cultivo, y en la cámara de flujo
laminar previamente desinfectada, se
sirvieron aproximadamente 20 ml de
la solución en cajas de Petri.
Finalmente, se almacenaron para su
posterior uso.
Finalizado el proceso de elaborar los medios
de cultivo, se procedió a sembrar en cada uno
de estos como lo muestra la Grafica 1.
Grafica 2. Diagrama de flujo del proceso de
aislamiento y siembra de la muestra de Agar
MacConkey para pruebas bioquímicas.

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RESULTADOS
Al realizar la siembra en los medios de cultivo
se obtuvo:

 Agar Sangre
Presencia de dos morfotipos.
Presencia de hemolisis α.
Aproximadamente más de 200
colonias.

Grafica 5. Resultado obtenido de la

siembra en Agar Baird Parker.

 Agar MacConkey
Presencia de un morfotipo.
Fermentadores de lactosa,
precipitación de sales biliares.
Crecimiento abundante.
Grafica 3. Resultado obtenido de la
siembra en Agar Sangre.

 Agar Chocolate
Presencia de un morfotipo.
Crecimiento abundante.

Grafica 6. Resultado obtenido de la

siembra en Agar MacConkey
Posteriormente, se aisló un morfotipo del
Agar MacConkey y realizó la siembra en
Agar Nutritivo. Posteriormente, se realizó
una tinción de Gram a una colonia del Agar
Grafica 4. Resultado obtenido de la
Nutritivo y se obtuvo lo siguiente:
siembra en Agar Chocolate.
 Agar Nutritivo
 Agar Baird Parker Presencia de un morfotipo.
Presencia de dos morfotipos: Con y
sin halo.
Aproximadamente más de 450
colonias.

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Grafica 7. Resultado obtenido del

aislamiento y siembra en Agar Nutritivo.
Grafica 9. Resultado obtenido de la siembra
en Medio TSI.

 Medio BHI
Turbidez leve.
Presencia de sedimento
Ausencia de película.

Grafica 8. Tinción de Gram negativa para

muestra tomada de Agar Nutritivo.
Para las pruebas bioquímicas, sembradas con
las muestras obtenidas del Agar Nutritivo, se
consiguió:

 Medio TSI
Presencia de gas.
Grafica 10. Resultado obtenido de la siembra
A/A – Fermentadores de glucosa,
en Medio BHI.
lactosa y sacarosa.
Ausencia de Ácido Sulfhídrico.

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 Medio BRILA  Caldo Asparagina

Turbidez leve. Ausencia de Pseudomona.
Presencia de gas.

Grafica 13. Resultado obtenido de la siembra

Grafica 11. Resultado obtenido de la siembra en Caldo de Asparagina
en Medio BRILA.

 Medio SIM  Agar ENDO

Presencia de movilidad. Fermentadores de lactosa.
Presencia de Indol. Presencia de colonias verdes
Ausencia de Ácido Sulfhídrico. metálicas iridiscentes.

Grafica 14. Resultado obtenido de la siembra

en Agar ENDO.
Grafica 12. Resultado obtenido de la siembra
en Medio SIM.

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DISCUSIÓN
Agar Sangre
Es un medio de cultivo enriquecido y
diferencial utilizado para el aislamiento de
numerosos microorganismos. Al ser
suplementado con sangre, permite el
crecimiento de microorganismos
nutricionalmente exigentes y la clara
visualización de reacciones de hemólisis. Su
composición es de Infusión de musculo de
corazón y peptona como nutrientes para el
crecimiento, cloruro de sodio para mantener
el balance osmótico, sangre a 40° para
observar las reacciones de hemolisis y agar
como agente solidificante (Britania, 2016)
Existen 3 tipos de hemolisis:
 Hemolisis alfa (α): Se produce una
lisis parcial de los glóbulos rojos. Se
puede observar un halo de color
verdoso alrededor de la colonia en
estudio debido a la oxidación de la
hemoglobina a metahemoglobina por
el peróxido de hidrogeno generado
por los microorganismos.
 Hemolisis beta (β): Se produce una
lisis total de los glóbulos rojos. Se
observa un halo claro, brillante y
transparentado alrededor de la colonia
en estudio.
 Hemolisis gamma (γ): No se produce
una lisis de los glóbulos rojos. El
medio de cultivo no presenta
modificaciones de color y aspecto
alrededor de la colonia en estudio.
(Britania, 2016)
La hemolisis se produce debido a la presencia
de hemolisinas en las bacterias, que son
sustancias que producen lisis en los
eritrocitos por la producción de poros en la
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membrana citoplasmática. (Geny & Popoff,
2006) Al realizar el proceso de siembra en el
Agar Sangre, se observó hemolisis alfa (Ver
Grafica 3), que puede ser producto de
microorganismos como Streptococcus
pneumoniae, quienes producen una lisis
parcial de los glóbulos rojos en el medio
(Cultimed, 2012). Sin embargo, se considera
la posibilidad de que no sea Streptococcus
debido a su dificultad para cultivar en el
laboratorio, las exigencias nutricionales
complejas, aislamiento y condiciones
ambientales que necesita. (Murray et al,
2014). La hemolisina puede ser un factor de
virulencia en Staphylococcus aureus, Vibrio
parahemolyticus, Streptococcus pyogenes,
entre otras. (Lemichez & Barbieri, 2013).
Agar Chocolate
El Agar Chocolate es un medio enriquecido
para cultivo y aislamiento de
microorganismos exigentes, conocidos como
bacterias fastidiosas, especialmente de
Neisseria y Haemophilus spp. Su
composición es similar al Agar Sangre, con
extractos y peptonas como nutrientes para el
crecimiento, cloruro de sodio para el balance
osmótico, agar como agente solidificante y
sangre con una temperatura de 60 – 80° C
(Melguizo, 2009).
La sangre llevada a altas temperaturas
produce la lisis completa de los glóbulos
rojos, liberando hemoglobina que aportara
hemina como suplemento vitamínico para el
crecimiento de las bacterias fastidiosas.
(Melguizo, 2009).
Al finalizar el proceso de siembra, se obtuvo
un morfotipo de bacterias que puede
corresponder a Staphylococcus spp o
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Streptococcus spp (Ver Grafica 4). Sin
embargo, al igual que en el Agar Sangre,
debido a la complejidad de Streptococcus spp
para crecer en los medios de cultivo en el
laboratorio, debido a sus exigencias
nutricionales, ambientales y de aislamiento
(Murray et al, 2014), se disminuye la
probabilidad de que fuese dicha bacteria.
Agar Baird Parker
Es un medio de cultivo de alta especificidad,
selectivo y diferencial, para el aislamiento y
recuento de Staphylococcus spp. Está
compuesto por peptona y extractos como
fuente de carbono, nitrógeno y nutrientes para
el crecimiento junto con la glicina y el
piruvato, agar como agente solidificante,
telurito de potasio y cloruro de litio como
inhibidores de bacterias acompañantes, yema
de huevo para mostrar la actividad
lecitinásica de las bacterias. (Britania, 2016)
Debido a la presencia del telurito de potasio,
las bacterias pueden o no reducirlo: Si lo
reducen a teluro las colonias toman un color
grisáceo-negro, pero por el contrario, si no lo
reducen, las colonias se tornan del color del
medio, siendo transparentes.
También gracias a la yema de huevo que se
encuentra en el medio, es posible observar la
actividad lecitinasica de las bacterias: Cuando
presentan actividad lecitinásica se presenta un
halo claro en el medio de cultivo alrededor de
las colonias, pero en ausencia de la actividad
lecitinásica, no hay presencia de halo claro
alrededor de las colonias. (Britania, 2016)
El teluro es un elemento que no presenta
toxicidad, pero que combinado con otros
elementos se transforma en telurito, que es
muy dañino para los seres vivos. La reducción
del telurito de potasio puede deberse a una
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enzima llamada Glutatión reductasa presente
en varios microorganismos, y que actúa para
evitar la toxicidad de la molécula y evitar la
lisis de la célula. Cuando este proceso ocurre,
el toxico es transportado al interior de la
célula, generando teluro no toxico, y
adquiriendo un color negro la célula. (Godoy,
2015).
La actividad lecitinasica en Staphylococcus
spp se debe a la presencia de la enzima
lecitinasa, que usa la lecitina y algunas
lipoproteínas de la yema de huevo para sus
procesos metabólicos (Casilla et al, 1998)
(MacFaddin, 2003).
Según los morfotipos, actividad lecitinasica y
reducción del telurito a telurato, se presume
la presencia de Staphylococcus aureus y
Staphylococcus epidermidis (Ver Grafica 5),
ya que S. aureus presenta actividad
lecitinasica y reducción de telurito de potasio
a diferencia de S. epidermidis que igualmente
reduce el telurito pero no presenta actividad
lecitinasica (Cultimed, 2014).
Agar MacConkey
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial
usado para el aislamiento de bacilos Gram
Negativos de fácil desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos. También pueden
desarrollarse especies de la familia
Enterobacteriaceae. Se compone de peptonas
siendo los nutrientes para el desarrollo
bacteriano, lactosa como carbohidrato
fermentable, cristal violeta y sales biliares
como inhibidores de Gram positivos y rojo
neutro como indicador de pH (Britania,
2016).
El medio indica si los microorganismos son
fermentadores o no de la lactosa. En caso de
ser fermentadores se presentan colonias
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rosadas – rojizas, y se forma un halo de
precipitación biliar. Si por el contrario, no son
fermentadores, las colonias permanecen del
color del medio o incoloras (Britania, 2016).
Las bacterias fermentadoras de lactosa
(Lac+), excretan en el medio gran cantidad de
ácidos orgánicos, lo que provoca que sus
colonias, y sus alrededores aparezcan de color
rojo intenso, debido al viraje del rojo neutro;
además, se forma un halo turbio a cierta
distancia de estas colonias, fenómeno
ocasionado por la precipitación de las sales
biliares inducida por la acidez. En cambio, las
bacterias Lac-, al no poder usar la lactosa,
recurren como fuente de C a las peptonas, a
las que desaminan: incorporan el esqueleto
carbonado, excretando iones NH4+, que
alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se
traduce en que el indicador rojo neutro vira a
amarillo. (Moran et al, 2016)
El resultado demuestra presencia de un
morfotipo de bacterias fermentadoras de la
lactosa (Ver Grafica 6), que puede
corresponder a Escherichia coli o Klebsiella
pneumoniae. (Cultimed, 2014)
Agar Nutritivo
Es un medio de cultivo usado normalmente
para propósitos generales y aislamiento de
todo tipo de bacterias con pocas exigencias
nutritivas. No presenta inhibidores, lo que
permite el crecimiento general de
microorganismos. (Casado et al, 2012)
Está compuesto por peptona y extractos como
nutrientes para el desarrollo de las bacterias,
agar como agente solidificante y cloruro de
sodio para mantener el balance osmótico.
(BD, 2014)
I-II-III-IV Programa de Biología, Facultad de Ciencias, Ibagué, 2016.
Se presume que el microorganismos aislado
en este medio en el laboratorio corresponde a
Escherichia coli por la observación con
Tinción de Gram que se realizó (Ver Grafica
7 y 8).
Medio TSI
Es un medio empleado para la diferenciación
de enterobacterias en base a la fermentación
de los hidratos de carbono: glucosa, lactosa y
sacarosa; y según la producción de ácido
sulfhídrico. Posee extractos y peptonas como
nutrientes para el desarrollo bacteriano,
lactosa, sacarosa y glucosa como
carbohidratos fermentables, tiosulfato de
sodio como sustrato necesario para la
producción de ácido sulfhídrico, sulfato de
hierro y amonio como fuente de iones Fe+3,
los cuales con el ácido sulfhídrico producen
sulfuro de hierro de color negro; rojo de fenol
como indicador de pH, cloruro de sodio que
mantiene el balance osmótico y agar como
agente solidificante (Britania, 2016).
La producción de Ácido Sulfhídrico se
presenta con una tonalidad negra en el medio,
y se debe a condiciones acidas en el medio
donde algunas bacterias actúan produciendo
acido de glucosa y otros componentes.
(García & Silva, 2004)
La fermentación de los azucares se puede
presentar de diferentes formas:
 Superficie alcalina/ profundidad acida
(Pico rojo/fondo amarillo) indica que
el microorganismo solo fermenta la
glucosa.
 Superficie acida/Profundidad acida
(Pico amarillo/fondo amarillo) indica
que el microorganismo fermenta los
tres azucares.
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 Superficie alcalina/profundidad
alcalina (Pico rojo/fondo rojo) indica
que el microorganismo no es
fermentador de azucares.
También es posible presentar la
producción de gas, al presenciarse
burbujas o ruptura del medio de cultivo
(Britania, 2016)
Según los resultados y la gráfica 9, se
obtuvo una fermentación completa de los
tres azucares, producción de gas y sin
producción de ácido sulfhídrico, lo que
puede indicar la presencia de Escherichia
coli o Klebsiella pneumoniae. (Cultimed,
2012).
Medio BHI
Es un medio líquido usado para el cultivo de
bacterias aerobias y anaerobias, de
microorganismos exigentes como
estreptococos, neumococos y otros
microorganismos de difícil desarrollo
(Britania, 2016)
Permite visualizar el crecimiento de las
bacterias gracias a la turbidez. Con un
incremento de las sales, se convierte en un
medio selectivo para Streptococcus spp.
Posee Infusión Cerebro Corazón y peptonas
como nutrientes para el desarrollo de las
bacterias, glucosa como hidrato de carbono,
fosfato dipotasico de hidrogeno como
solución Buffer y cloruro de sodio para
mantener el balance osmótico. (MDM, 2013)
Como se puede observar en la Grafica 10, el
medio BHI obtuvo una leve turbidez,
confirmando el crecimiento de
microorganismos, con producción de
sedimento y ausencia de película. (Cultimed,
2012)
I-II-III-IV Programa de Biología, Facultad de Ciencias, Ibagué, 2016.
Medio BRILA
Es un medio enriquecido para coliformes
totales y fecales, y en algunos casos de
Salmonella spp. Posee peptona que aporta los
nutrientes para el desarrollo bacteriano, bilis
y verde brillante como agentes selectivos que
inhiben el crecimiento de Gram positivos y
Gram negativos a excepción de coliformes,
lactosa como hidrato de carbono fermentable
(Britania, 2016).
Si se encuentra presencia de gas en la
campana de Durham y turbidez se considera
un resultado positivo. Pero si no hay turbidez
ni presencia de gas, se considera un resultado
negativo para el crecimiento. En algunos
casos, el desarrollo bacteriano genera virajes
en el color del cultivo. (Britania, 2016). El gas
se presenta debido a la fermentación del
azúcar presente en el medio – lactosa – y es
indicador del crecimiento de los
microorganismos. (Erra-Balsells, 2014)
Los resultados obtenidos indican presencia de
gas y turbidez leve, que puede ser indicador
de Escherichia coli o Klebsiella pneumoniae
(Ver Grafica 11) (Cultimed, 2012).
Medio SIM
Es un medio semisólido destinado a verificar
la movilidad, producción de indol y de ácido
sulfhídrico por los microorganismos. Está
compuesto por tripteina y peptona que
aportan los nutrientes para el desarrollo
microbiano, el triptófano que es metabolizado
por algunas bacterias para formar indol por su
característica aminoacidica con gran carga de
peptonas y tripteinas; tiosulfato de sodio para
la generación de ácido sulfhídrico y agar
como agente solidificante. (Britania, 2016).
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El indol es uno de los componentes de la hidroliza la asparagina, convirtiéndola en

degradación metabólica del aminoácido
triptófano; las bacterias que poseen la
triptofanasa son capaces de hidrolizar y
desaminar el triptófano con producción de
indol, acido pirúvico y amoniaco. La prueba
se basa en la formación de un complejo rojo
cuando el indol reacciona con el grupo
aldehído del p-dimetilaminobenzaldehido
(Principio activo de los reactivos de Kovacs y
Ehrlich, utilizados para la identificación de
producción de indol por parte de los
microorganismos) (Pachón, 2009).
En presencia de tiosulfato en el medio o la
degradación de proteínas liberando
aminoácidos azufrados, algunos
microorganismos formas H2S gaseoso, por
medio de enzimas tiosulfato reductasas y
cisteína desulfurilasa. El gas incoloro H2S
reacciona con el citrato de amonio férrico,
produciendo un precipitado negro. (Erra-
Balsells et al, 2014)
Según la gráfica 12, se presencia movilidad,
positivo para la prueba de Indol y ausencia de
ácido sulfhídrico, indicador directo de
Escherichia coli.
Caldo de Asparagina
Es un medio que permite el aislamiento,
detección y diferenciación de Pseudomona
aeruginosa. Posee Asparagina como fuente
de nitrógeno, la peptona y tripteina como
única fuente de nutrientes, glicerina como
productora de pigmentos, fosfato dipotasico
para ayudar a la producción de fluorescencia
y sulfato de magnesio que aporta cationes que
incrementan la fluorescencia. (Conda, 2010)
ácido aspártico. La aparición de crecimiento
mediante turbidez (aparezca o no
pigmentación fluorescente) se considera
presuntiva de la presencia de Pseudomonas
aeruginosa. En caso del resultado obtenido,
como se observa en la gráfica 13, no hay
turbidez y respondió negativamente a la luz
U.V, confirmando la ausencia de P.
aeruginosa.(Conda, 2010)
Agar ENDO
El medio Agar Fucsina Lactosa es un medio
selectivo y diferencial para el aislamiento de
enterobacterias y coliformes. Se encuentra
conformado por sodio sulfito y la fucsina
básica que inhiben a las bacterias Gram
positivos, lactosa como hidrato de carbono
que puede ser fermentado, fosfato dipotasico
de sodio como agente Buffer, agar como
solidificante y peptona como los nutrientes
que permitirán el crecimiento de las bacterias
(Erra-Balsells et al, 2014).
Escherichia coli y algunas coliformes utilizan
lactosa para formar aldehído y ácido, donde
el aldehído libera fucsina a partir de la
combinación fucsina-sulfito, lo que da lugar a
la coloración roja de las colonias. En el caso
de Escherichia coli la reacción es tan intensa
que la fucsina llega a cristalizar confiriendo a
las colonias un brillo metálico estable, de
reflejo verde. (Erra-Balsells et al, 2014)
Según la Grafica 14, se puede presenciar
colonias con un brillo metálico verde
iridiscente, que puede señalar la presencia de
E. coli (BD, 2014).

En principio, sólo los Gram negativos no

fermentadores pueden crecer en estas
condiciones. Pseudomonas aeruginosa

I-II-III-IV Programa de Biología, Facultad de Ciencias, Ibagué, 2016.

 Microbiología, Universidad del Tolima

CONCLUSIONES siembra por extensión en superficie. Primera

edición. Instituto Ecuatoriano de
Los medios de cultivo son una base
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fundamental para el estudio de las bacterias,
ya que permiten el reconocimiento de estas, Conda – Conda Laboratorio. Obtenido de:
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descubrir nuevos métodos para su tratamiento
Cultimed. Instrumentación Científica
y control. Aunque muchas bacterias no son
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perjudiciales para el hombre, en altas
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concentraciones pueden llegar a ser muy
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Existen diversos medios de cultivo para
Erra-Balsells R, Couto A, Ramírez J &
aislar, nutrir y permitir el crecimiento de
Fernández V. Microbiología de alimentos.
diferentes microorganismos; el correcto uso
Universidad de Buenos Aires. Departamento
de los medios de cultivo, conocer su
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composición y analizar los resultados que
otorgan correctamente, es relevante en la vida Francisco Soria Melguizo S.A. Difco.
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identificaciones bacterianas requeridas.
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pueden provocar errores en los análisis e
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inducir a problemas prácticos en las
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