EXTRACCION DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA) A PARTIR DE LA

CIANOBACTERIA Nostoc commune PARA LA ELABORACION DE

PLASTICOS BIODEGRADABLES

DESCRIPCION DEL PROBLEMA

La producción excesiva de plásticos a partir de polímeros derivados del petróleo como
el poliestireno y polipropileno ha traído consigo graves problemas ambientales, por lo
que se busca alternativas para suplir este compuesto. Se ha estudiado que los
hidroxialcanoatos presentes en cianobacterias tienen propiedades similares a la de los
polímeros derivados del petróleo, lo cual los hace idóneos para la producción de
plástico, además de que estos biopolímeros presentar mayor biodegradabilidad.

Se propone realizar un estudio de la cianobacteria Nostoc commune, la cual se

encuentra en exceso en el departamento de Puno, cuyo uso es únicamente
gastronómico. El análisis de las condiciones optimas de polihidroxialcanoatos se
llevara a cabo en muestras bajo diversas condiciones, ya que se sabe que bajo
un estrés la cianobacteria produce una mayor cantidad de PHA.
El proceso involucra desde el momento del cultivo, selección y desarrollo de la
cianobacteria, pasando por la extracción de PHA y su aplicación en la producción
de bioplásticos, cuyos procedimientos serán detallados en el siguiente punto.

DIAGRAMA DEL PROCESO

Enfoque general:
METODOLOGIA

1. MATERIALES Y EQUIPOS

- Fotobioreactor de vidrio o plástico metacrilato transparente

(capacidad aprox 3L, 50 cm altura, 15 cm de diámetro)
- Mangueras para el paso de CO2
- Erlen meyer
- Potenciómetro
- Placas Petri
- Vasos de precipitados

2. MATERIA PRIMA

- Nostoc Muscorum
- Acetato y Propionato

3. EXTRACCION DE POLIHIDROXIALCANOATOS

Análisis cualitativo

METODO: TINCION CON AZUL DE NILO

Es el método mas adecuado ya que por fluorescencia, los PHA
desprenden un poco de brillo (la materia inorgánica se excita a una
determinada longitud de onda), y se puede establecer una diferencia sin
interferencias.

Descripción:
a) Excitar la muestra por fluorescencia, de modo que resalte los PHB.
b) Fijar por calor unas gotas de la muestra en un portaobjetos.
c) Añadir azul de Nilo al 1% a 55°C por 5 minutos,
d) Limpiar la muestra con una dilución al 8% de acido acetico en agua.
e) Dejar secar.
f) Observar en un microscopio de fluorescencia.

Análisis cuantitativo

METODO: CALIBRACION ESPECTROFOTOMETRICA

Es el método mas conocido para hallar la concentración del componente
en estudio del sustrato a partir de su absorbancia.
Descripción:
a) Extraer cierta cantidad de muestra e introducirla en un tubo de DQO.
 b) Añadir 3mL de hipoclorito de sodio al 15% p/v.
c) Añadir 5 gotas de NaOH al 50%.
d) Añadir 3mL de cloroformo.
e) Colocar toda la muestra en baño de agua a 70 – 75°C durante 1 hora
y 30 minutos, agitando con el vortex cada 15 minutos.
f) Centrifugar a 4200 rpm por 5 minutos y descartar el sobrenadante.
g) Añadir 3mL de cloroformo, colocar en baño de agua hirviendo esperar
a que se caliente el cloroformo y agitar con vortex 2 minutos.
h) Centrifugar a 4200 rpm por 3 minutos.
i) Extraer el cloroformo y verterlo en un matraz aforado.
j) Añadir 2mL de cloroformo al tubo.
k) Colocar en agua hirviendo, esperar a que se caliente el cloroformo y
agitar con vortex por 2 minutos.
l) Centrifugar a 4200 rpm por 3 minutos.
m) Extraer el cloroformo, verter en matraz y enrrasar.
n) Evaporar el cloroformo.
o) Añadir 10mL de H2SO4 y poner en baño de agua hirviendo durante 10
minutos.
p) Esperar a que enfrie y agitar.
q) Esperar a que el acido quede sin burbujas y medir en el
espectrofotómetro a longitud de onda de 235nm.
r) Extraer varias muestras en distintas fechas y repetir el procedimiento.

Purificación de la muestra
a) Separar la biomasa del caldo.
b) Añadir un disolvente, para evitar el cloroformo (agente altamente
contaminante) se suele utilizar carbonato de etileno o de propileno, asi
como metodologias de digestion química con hipoclorito de sodio,
acidos o bases.
c) Centrifugar la solución resultante y filtrar.
d) Precipitar el polímero en metanol o etanol.
e) Recuperar el polímero por evaporación.

Análisis de parámetros de control

 pH: Mediante el potenciómetro. El pH del sistema debe ser neutro
entre 7.5 – 8.5.
 Aniones: Corresponden a nitritos, nitratos, fosfatos y sulfatos. El
método de medición es por cromatografía ionica.

4. SINTESIS DE BIOPLASTICO
La norma ASTM- 5488-944, define la biodegradabilidad como la
capacidad de un material en descomponerse en CO2, metano, agua y
componentes orgánicos, por acción de microorganismos.

Clasificación
1. Plásticos biodegradables a base de almidón: Se crea una mezcla
entre almidón y plástico (almidón-polietileno).
2. Polihidroxialcanoatos: (PHA) Son polímeros 100% biodegradables
producidos por microorganismos.
3. Mezclas de polímeros biodegradables: Como los polivinilalcohol
(PVOH) + Policaprolactonas (PCL)
4. Pullulano. Formado por unidades de maltotriosa. (tres unidades de
glucosa unidos por enlace α-1, 4). Las maltotriosas están unidas por
enlace α-1, 6.
PHA:
Los polihidroxialcanoatos más comunes son el P3HB (ácido
polihidroxibutírico), el PLA (Poliácido láctico o poliláctida), el PGA (Ácido
poliglicólico), el P3HV (poly 3-hidroxivalerato) y el P(3-HHx) poli 3-
hidroxihexanoato.