VALIDACIÓN DE TRES DISTINTOS MÉTODOS ANALÍTICOS

PARA IDENTIFICAR METALES PESADOS EN DIFERENTES

TIPOS DE AGUA

Validation of three different analytical methods to identify heavy

metals in different types of water

Melquiades, César., Montaño, Gabriela., Morán, Pablo., Rubio, Alexis., Tello, Renzo.,
Facultad de Ingeniería Química. - Universidad Nacional del Callao
pamela.montp.19@gmail.com

RESUMEN
El propósito de este trabajo es evaluar la efectividad y validación de métodos analíticos para determinar
presencia de metales pesados en muestras de diferentes tipos de aguas. Los métodos que se presentan
son: Espectroscopia de absorción atómica (permite la identificación de arsénico y selenio), Azul de
molibdeno por espectrofotometría ultravioleta visible (permite identificar arsénico) y Método electro analítico
por voltamperometría de redisolución anódica (permite identificar plomo y cadmio). El primero cumplió los
límites de exactitud y precisión en su ejecución. El segundo cumple todos los parámetros de validación
normados, lo que garantiza una mayor confiabilidad en el trabajo analítico. Los resultados del último
demostraron que es posible el uso de esta técnica analítica para determinar trazas de estos metales en agua
potable con niveles de detección acorde a las normativas vigentes.

Palabras clave: metales pesados, validación, voltamperometría, espectroscopia, espectrofotometría,

redisolución anódica.

ABSTRACT

The purpose of this work is to evaluate the effectiveness and validation of analytical methods to determine
the presence of heavy metals in samples of different types of waters. The methods presented are: Atomic
absorption spectroscopy, Molybdenum blue by visible ultraviolet spectrophotometry and Electroanalytical
method by voltammetry of anodic redissolution. The first met the limits of accuracy and precision in its
execution. The second one fulfills all the validated parameters of normative validation, which guarantees a
greater reliability in the analytical work. The results of the last one showed that it is possible to use this
analytical technique to determine traces of these metals in drinking water with levels of detection according to
the regulations in force.

Keywords: heavy metals, validation, voltammetry, spectroscopy, spectrophotometry, anodic redissolution.

1
INTRODUCCIÓN
A nuestro planeta le llamamos el planeta azul
porque estamos rodeados de agua: 71 % es agua
y 29 % masa continental. Del total de agua
existente, 97,2 % lo representan los océanos, es
decir, agua salada, la cual no es apta para el
consumo humano; 2,15 % es agua de los
glaciares, cuyo acceso es muy difícil. El resto (0,65
%) es el agua para nuestro consumo.
El porcentaje de agua para el consumo humano se
ve afectado por diversas variables.
Los diversos factores como los usos del suelo, la
producción industrial y agrícola, los aumentos de
población, y sus impactos relacionados, continúan
ejerciendo una gran presión sobre los recursos de
agua alrededor del mundo. Al mismo tiempo, el
aumento de residuos municipales y vertimientos,
aguas de desagüe y productos derivados de la
industria, además de los efectos climáticos
globales y desequilibrios ecológicos comprometen
aún más la calidad del agua.
Los elementos traza, que incluyen a los metales
pesados, llegan a los ecosistemas acuáticos
desde fuentes naturales y antrópicas. Los metales
pesados se encuentran entre los contaminantes
ambientales más importantes debido a su
toxicidad, permanencia y tendencia a acumularse
en los organismos acuáticos, por lo que su estudio
es necesario por el riesgo ambiental que
representan. Las actividades humanas, tanto
industriales como urbanas, así como las prácticas
agrícolas, pueden incrementar la carga de metales
pesados en los ecosistemas acuáticos o alterar
sus ciclos naturales al producir concentraciones
elevadas en algún compartimento particular.
La importancia de la validación de un método
analítico cuantitativo radica en la necesidad de
generar resultados confiables de los análisis de
laboratorio. La validación es el proceso que sirve
para confirmar que el equipo de análisis, método o
sistema para una prueba específica es el idóneo
para el uso previsto (Papadoyannis & Samanidou,
2016).
Un método validado es parte del sistema de
gestión de calidad de un laboratorio, existen varios
métodos como el método espectrofotométrico
basado en la formación del complejo arsénico-
molíbdico de color azul, entre el arseniato y el
molibdato de amino en presencia de sulfato de
hidracina (reductor); el método por espectroscopia
de absorción atómica por generación de hidruros
para la cuantificación de arsénico y selenio y el
2
método mediante voltamperometría de
redisolución anódica para cadmio y plomo.
En el presente trabajo, determinaremos la eficiencia
de tres métodos diferentes para la determinación
de metales pesados en aguas.
MATERIALES Y MÉTODOS
1. Método del azul de Molibdeno
(Determinación de Arsénico)
Se utilizó un espectrofotómetro Genesys UV-
visible con celdas de 1 cm de camino óptico.
Para este método se utilizó un volumen de 50 mL,
donde se añadió dos gotas de metil de naranja en
solución y se neutralizó con hidróxido de amonio
diluido, hasta color amarillo del indicador.
Posteriormente, se añadió, gota a gota, ácido
clorhídrico hasta color rojo, 10 mL de ácido
clorhídrico diluido y 1 mL de solución de bromato
de potasio. Luego, se calentó a temperatura de 50
°C para oxidación del metilo naranja y del
arsénico; se adicionaron 5 mL de molibdato de
amonio y se homogeneizó la solución.
Finalmente, se añadieron 2 mL de solución de
sulfato de hidracina y se mantuvo durante 10
minutos en baño de agua hirviendo; se dejó enfriar
a temperatura ambiente y se enrazó.
Curva de calibración
Para la preparación de la curva de calibración se
utilizó una disolución patrón de arsénico a partir de
la cual se prepararon patrones en el intervalo de
concentración comprendido entre 0,02 y 0,20
mg/L. Se tratan los patrones igual que a la
muestra. Se midió la absorbancia a una longitud
de onda de 660 nm.
Los parámetros de validación determinados fueron
linealidad, límite cuantificación, límite detección y
precisión expuesto en la Norma Cubana (NC TS-
368:2010. Guía para la validación de métodos de
ensayo químicos para alimentos) [1].
2. Método por voltamperometría
deredisolución anódica (Determinación de
Cadmio y Plomo)
Se utilizó un electrodo de trabajo de carbón vítreo,
electrodo de referencia Ag/AgCl (1M KCl) y contra
electrodo de platino, llevados a cabo en una celda
de un compartimiento y tres electrodos, conectada
a un potenciostato CH Instruments 1220B tipo
portátil.
Parámetros de validación: Las curvas de
calibración fueron realizadas en dos rangos de
concentración, de 2 μg.L-1 a 10 μg.L-1 y 40 μg.L-1
a 120 μg.L-1, los análisis fueron realizados por
quintuplicado para determinar diferencias no
significativas con una confianza estadística del
95%.
Los ensayos de reproducibilidad fueron realizados
durante 5 días diferentes. La determinación de
exactitud se llevó a cabo mediante el análisis de %
recuperación mediante adición estándar en
muestras reales. La comparación de resultados
fue llevada a cabo mediante el análisis estadístico
de varianza ANOVA y pruebas paramétricas.
Reactivos y muestras reales:
 Solución buffer acetato pH 4,6 (medio
electrolito).
 Solución patrón de 1000 mg.L-1 para
preparar las curvas de calibración de Cd y Pb.
 Reactivos de grado analítico, como agua
desionizada tipo II.
 Potenciostato portátil.
Se recolectaron 25 muestras de agua potable
tomadas en puntos aleatorios de la ciudad de
Machala-Ecuador; fueron tomados volúmenes de 1
litro en sub-volúmenes de 100 ml, en intervalos de
5 minutos en cada caso, que fueron recolectados
directamente del grifo de cada punto de muestreo
en envases de polietileno nuevos y previamente
lavados con ácido nítrico 1%, agua desionizada, y
secados. Las muestras fueron acidificadas a pH=2
antes de su transporte al laboratorio (American
Public Health Asociation, 1999). Para la
determinación se realizaron 5 determinaciones
diarias durante 5 días [2].
3. Método por espectroscopía de absorción
atómica mediante generación de hidruros
(Determinación de Arsénico y Selenio)
Se utilizó baño de María (que alcance no menos
de 90°C), espectrofotómetro de absorción atómica
Thermo Elemental, Solar M5, generador de
hidruros, Thermo Elemental, VP-90, Celda T de
cuarzo, calentador eléctrico EC-90, lámparas de
3
cátodo hueco del elemento a analizar (Arsénico o
Selenio).
El Método de referencia aplicado es el descrito en
la edición 22 de los Métodos Normalizados para el
Análisis de Aguas Potables y Residuales, métodos
3030 F, 3114 B y C y 3500-Se A. APHA-AWWA-
WEF (2012), es aplicable a todo tipo de aguas; las
muestras y patrones deben tratarse en igual
manera, en especial en lo relativo a la matriz
ácida.
Los equipos y materiales
-Baño de María que alcance no menos de 90°C,
espectrofotómetro de absorción atómica Thermo
Elemental, Solar M5, generador de hidruros,
Thermo Elemental, VP-90, Celda T de cuarzo,
calentador eléctrico EC-90, lámparas de cátodo
hueco del elemento a analizar (Arsénico o
Selenio).
Las muestras se colectaron en frascos de plástico
limpios con ácido nítrico. Las muestras con
turbiedad alta deben ser filtradas por papel de filtro
o membrana de 0,45 μm antes de analizarse, con
el fin de eliminar la materia suspendida. Pueden
almacenarse a temperatura ambiente hasta seis
meses, previa filtración (de ser necesaria) y
acidificación con HNO3 a pH < 2.
Para la preparación de reactivos, patrones y
muestras, se empleó agua desionizada. Los
reactivos son de grado analítico, Ácido clorhídrico
concentrado, Ácido nítrico concentrado,
Borohidruro de sodio: disolver entre 0,6 y 0,9 g de
NaBH4 y 0,1 g de NaOH en 100 mL de agua.
Solución patrón trazable del analito
correspondiente y Solución reductora de KI ó NaI
al 10 % m/v.
En la Reducción-digestión de las muestras, aguas
potables o naturales no contaminadas, se hizo una
reducción para garantizar estados de oxidación 3 y
4 para As y Se, respectivamente
 Para Arsénico, se coloca 50 mL de
muestra en un erlenmeyer o vaso de precipitados
de 200 - 400 mL, adicionar 5 mL de HCl
concentrado, mezclar, adicionar 5 mL de KI al 10
% y dejar reposar al menos 30 minutos.
 Para Selenio, colocar 30 mL de muestra
en un tubo de ensayos o vaso de precipitados,
adicionar 15 mL de HCl concentrado, mezclar,
calentar por un período de 15 min a 90 - 100°C y
dejar enfriar; para aguas residuales o naturales
contaminadas, el volumen de muestra a digerir
depende de que se determinen ambos elementos el modelo ajustado explica el 99.36 % de la
o no: 50 ó 100 mL para uno o ambos, variabilidad en la absorbancia.
respectivamente.
En la digestión previa para determinar As y Se ANALISIS DE PRECISION Y EXACTITUD
totalmente recobrable, se mezcla la muestra y
transferir el volumen apropiado a un vaso de Para determinar el comportamiento de la
precipitado de 200 - 400 mL, adicionar 5 mL de repetibilidad se realizaron cinco replicas a una
HNO3 concentrado y cubrir con vidrio de reloj, muestra de concentración 0.10 mg/l y se calculó la
ebullir suavemente en placa de calentamiento casi concentración la desviación estándar y el
a sequedad evitando que ocurra precipitación, coeficiente de repetibilidad de los resultados
después de atemperadas las muestras, repetir obtenidos, obteniendo lo siguiente:
etapas 2 y 3, enfriar a temperatura ambiente,
adicionar 10 mL de HCl 1:1 y 15 mL de H2O,
calentar aproximadamente a 100°C en plancha por Arsénico
15 minutos, dejar enfriar a temperatura ambiente,
transvasar cuantitativamente a volumétrico de 50 ó
100 mL; si considera necesario, filtrar la muestra y %CVr 6.56
reducir la muestra.
Para la preparación de la curva de calibración,
utilizar al menos tres patrones que abarquen el
intervalo de concentraciones esperado en las
muestras, Someterlos al mismo proceso de
digestión-reducción de las muestras. El coeficiente
de correlación de la curva obtenida debe ser ≥
0,995.
Donde este valor del coeficiente de variación de
RESULTADOS Y DISCUSIÓN repetibilidad es menor que el 22 % para el nivel de
concentración estudiado, según la Guía para la
1. Método del azul de Molibdeno validación de ensayos químicos para alimentos; por
(Determinación de Arsénico) lo que este valor resulta ser lógico y por lo tanto es
aceptado [3].
Para este método la curva de calibración de hizo en
base a la absorbancia medida por
espectrofotometría y la concentración del complejo 2. Método por voltamperometría de
arsénico molíbdico formado. redisolución anódica (Determinación de
Cadmio y Plomo)

ANALISIS DE LINEALIDAD

En el método electroanalítico para determinar

cadmio y zinc en agua potable, se hizo una curva
de calibración de corriente circulada versus
concentración de Cd o Pb para cinco muestras,
con el objetivo de comparar el coeficiente de
correlación (R2) de la curva con el valor
establecido.

Se realiza el cálculo del coeficiente de correlación

R2 dando un valor de 0.9936, el cual es mayor al
valor establecido (0.99), lo que implica además que

CURVA DE CALIBRACION PARA CADMIO (RANGO ALTO 4-120 μg.L-1)

 20%, lo que va de acorde a los resultados

CADMIO PLOMO

%RECUPERACION 117.75 % 103.33%

obtenidos.
La exactitud en este método fue determinada,
mediante el porcentaje de recuperación arrojando
los siguientes valores:

Estos valores según el códex alimentario donde se

CURVA DE CALIBRACION PARA CADMIO (RANGO BAJO 2-10 μg.L ) -1 señala que el porcentaje de recuperación para el
cadmio esta entre 80-120 % y de plomo de 90-107
%, los cuales si los comparamos con los valores
Como se evidencia el R2 en los 2 casos es mayor obtenidos vemos que estos son cumplidos con lo
que 0.99(valor establecido), lo que indica que se cual el agua potable estudiada es apta para su
puede trabajar en cualquiera de los rangos de
consumo.
concentración seleccionados de los analitos, ya
sea en un rango alto o en un rango bajo.
3. Método por espectroscopía de absorción
ANALISIS DE PRECISION Y EXACTITUD atómica mediante generación de hidruros
(Determinación de Arsénico y Selenio)
Se determinó si se tuvo buena precisión en
términos del coeficiente de variación de
repetibilidad y reproducibilidad tanto para el rango ANALISIS DE PRECISION Y EXACTITUD
de concentración baja de cadmio y plomo.
Con relación a la exactitud, según el Instituto de
Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
(IDEAM) y Mollabs se obtiene:
CADMIO PLOMO
Rango de Rango de Rango de Rango de -Para Arsénico:
concentración concentración concentración concentración
bajo alto bajo alto
%CVr 9.074 - 14.109 - Resultados satisfactorios en, 2007 (80 puntos),
10.154- 2006, 2008 y 2009 (70 puntos).
%CVR - 2.023-3.679 -
10.601
Resultados insatisfactorios en 2004 (50 puntos),
2010 (40 puntos) y 201 (30 puntos); tendencia a
Acorde al códex alimentario o código de alimentos, sesgo positivo para las muestras altas.
el porcentaje de repetibilidad o coeficiente de
-Para Selenio:
repetibilidad CVr 15% y para le reproducibilidad en
Resultados satisfactorios desde 2004: 100 puntos
los rangos del coeficiente de reproducibilidad CVR (2004, 2006 a 2009), 90 puntos (2010) y 80 puntos
(2011).

5
Para el hallazgo de precisión, se utilizó la
reproducibilidad interna, los datos de se muestran
en la siguiente tabla, al comparar respecto a los
criterios de ésta según Horwitz, los resultados son
satisfactorios. Se expresada como CV%, se obtuvo
del análisis con muestras certificadas (QCI) y de
control interno (Low y High), realizadas durante
días diferentes y en ocasiones también por más de
un analista.
Se halló también para precisión, la repetibilidad,
con base a muestras digeridas fundamentalmente
de aguas residuales, en la Tabla se ilustra los
resultados, Los resultados son satisfactorios con
base al criterio de Horwitz.
En ambos casos, se considera satisfactoria la
precisión obtenida. Lo cual nos indica que el
método produce resultados confiables.
Dado que, las concentraciones máximas
permisibles en agua potable son de 0,01 mg/L,
demás las concentraciones características no
sobrepasan 0,001 mg/L (As) y 0,002 mg/L (Se), y el
menor patrón de las curvas de calibración es de
0,005 mg/L; se establece 0,002 y 0,003 mg/L como
la concentración (mínima) a reportar para As y Se,
respectivamente.
6
CONCLUSIÓN
Observamos que es posible la utilización de
distintos métodos analíticos para identificar algunos
metales pesados en diferentes tipos de agua.
- El método de determinación de Arsénico
estudiado cumple con los parámetros
estadísticos preliminares calculados, por lo
que es efectivo para su uso en las aguas
residuales.
- Los resultados obtenidos en la determinación
de cadmio y plomo mediante voltamperometría
de redisolución anódica demuestran que es
posible el uso de esta técnica analítica para
determinar trazas de estos metales en agua
potable con niveles de detección acorde a las
normativas vigentes.
- En el método por espectroscopía de absorción
atómica mediante generación de hidruros
podemos evidenciar una técnica fiable y
rápida, presenta adecuadas características de
desempeño al ser preciso (coeficientes de
variación < 10 %), con un adecuado intervalo
de concentración y una concentración mínima
a reportar se estima en 0,002 y 0,003 mg/L
para As y Se, respectivamente.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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