Antibiograma

ANTIBIOGRAMA

I. INTRODUCCIÓN

ANTIBIÒTIOS

Un antibiótico ha sido definido como una sustancia química producida por un microorganismo
capaz de inhibir el desarrollo de otros microorganismos. Un agente antimicrobiano es activo
contra los microorganismos y puede ser producido en forma natural por microorganismos o
sintéticamente en el laboratorio.

El aislamiento de un agente infeccioso a partir de un paciente no es con frecuencia suficiente

para establecer la terapia adecuada. Muchas bacterias y algunos hongos presentan resistencia a
los agentes antimicrobianos y algunos virus han desarrollado resistencia a los agentes antivirales
más actuales.

Ya que no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias, hongos y virus a los agentes
antimicrobianos, con frecuencia es necesario estudiar la sensibilidad individual de cada patógeno
a estas drogas, pudiéndose elegir entonces el agente apropiado (el más activo contra el
patógeno, el menos tóxico para el huésped, con las características farmacológicas apropiadas y
el más económico), que proporciona mayores posibilidades de una evolución favorable.

Un concepto importante sobre el que es necesario insistir es que no se pueden realizar pruebas
de sensibilidad in vitro con cultivos mixtos, sólo los cultivos puros proporcionarán resultados
válidos sobre la eficacia de un antibiótico.

En líneas generales y en función sobre su forma de actuar sobre los microorganismos, hablamos
de dos grandes grupos de antibióticos

Antibióticos primariamente bactericidas:

Ejercen una acción letal e irreversible sobre el microbio (Fosfomicina Vancomicina. B-

lactámicos Polimixina. Aminoglucósidos Rifampicina. Acido Nalidíxico Quinoleinas.
Nitrofurantoinas)

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o Mecanismo de acción de los betalactámicos:

Inhiben la síntesis de la pared bacteriana, tienen que llegar a la membrana plasmática y para
ello sólo tienen que atravesar la pared (en gram +) o atravesar la pared, además de pasar
una membrana externa que tiene unas proteínas de membrana llamadas porinas (en gram -).
En la membrana plasmática existen proteínas a las que se unen las penicilinas y son las
PBP (proteínas de unión a penicilina). Al inhibirse la síntesis de la pared celular se produce
la muerte de la bacteria, ya que la pared protege a la bacteria del medio externo.

Los betalactámicos son eficaces contra bacterias que tengan pared celular pero no lo son
contra bacterias intracelulares: Mycoplasma, Rickettesia, Chlamidia, tampoco lo son contra
bacterias con estructura externa compleja como Mycobacteriae.

o Resistencia contra betalactámicos:

Aparece porque las bacterias sintetizan unas enzimas que son las betalactamasas, que
rompen el anillo betalactámico. Son más eficaces las betalactamasas de las gram negativo
que las de la gram positivo.

o Clasificación de los betalactámicos

PENICILINAS:

1. Naturales: Penicilina G. Fue la molécula original descubierta por Fleming. A partir

de ella se han sintetizado todas las demás. Su espectro se reduce a gram + y
anaerobias. No se administran por vía oral porque el ácido del estómago las
destruye.

2. Acido-resistentes: Penicilina V. El espectro es el mismo que el de la G pero se

da por vía oral.

3. Aminopenicilinas: Ampicilina y Amoxicilina. Se administran por vía oral, tienen

una vida media larga y se administran cada 8 horas. Son eficaces también contra
algunos gram negativo.

4. Antiestafilococica: Meticilina y Cloxaciclina. Se administran por vía oral y son

resistentes a las betalactamasas del Estafilococos.

5. Antipseudomonas: Ticarcilina. Es eficaz contra Pseudomonas y otros tipos de

bacterias, pero no se usa comúnmente.

6. Amidinopenicilinas: Mecilinam. Eficaz contra las gram (-) como la E. Coli y

otras bacterias del tubo digestivo.

7. Resistentes a betalasas gram negativo: Temocilina. De uso hospitalario para

infecciones graves. Se administran por vía parenteral.

CEFALOSPORINAS:

1. Primera generación: Cefalexina (se administra por vía oral) y Cefazolina (vía
parenteral).

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3. Tercera generación: Cefotaxina. De uso hospitalario.

2. Segunda generación: Cefuroxina. De uso hospitalario.

OTROS BETALACTAMICOS:

1. Monobactamicos: Aztreonam.
2. Tienamicinas: Imipenem.

o Inhibidores de betalactamasas:

Se dan junto a un antibiótico. El inhibidor bloquea la bectalactamasas, mientras que el

antibiótico ejerce su acción. Acido clavulánico, que se asocia con Amoxicilina.

Antibióticos primariamente bacteriostáticos:

Inhiben el crecimiento pero no matan al microorganismo, permitiendo que las propias

defensas del huésped puedan eliminar a las bacterias (Tetraciclina Cloranfenicol.
Sulfonamidas Trimetroprim. Linco)

EL ANTIBIOGRAMA

Las técnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para

estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de
las infecciones.

Se considera como antimicrobiana cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos

de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilización como
tratamiento en los pacientes. La historia moderna de los antibióticos comienza con el
descubrimiento de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros
microorganismos. La utilización de antibióticos supuso un avance enorme en la esperanza
de vida de las personas que padecías procesos infecciosos, aunque desgraciadamente
también supuso un aumento en los niveles de resistencia antibiótica.

El antibiograma tiene cuatro fines principales:

 La instauración de un tratamiento antibiótico correcto al paciente. Es necesario

conocer si el microorganismo responsable de la infección posee mecanismos que le
confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no incluirlo como terapia.

 En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la instauración,

también resulta útil en el seguimiento e incluso en la confirmación de tratamientos
empíricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el
tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma
tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.

 Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la epidemiología. Es

necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos
clínicos para tomar medidas correctoras.

 Por otro lado también puede tener un fin diagnóstico porque el perfil de resistencia
puede en algún caso orientar en la identificación bacteriana.

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Por qué realizar un antibiograma

 El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa

bacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o varios
antibióticos.

 El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolución de las resistencias

bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiológico, a escala de un servicio, un
centro de atención médica, una región o un país, es como puede adaptarse la
antibioterapia empírica, revisarse regularmente los espectros clínicos de los
antibióticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de
programas de prevención en los hospitales.

Sensibilidad bacteriana a los antibióticos

La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la base de la medida de la

sensibilidad de una bacteria a un determinado antibiótico. La CIM se define como la menor
concentración de una gama de diluciones de antibiótico que provoca una inhibición de cualquier
crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una
escala de actividad del antibiótico frente a diferentes especies bacterianas.

Hay diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de manera
semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodos automatizados o semiautomatizados).
Estos diferentes métodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en función de
su sensibilidad frente al antibiótico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia (I)
o Resistente (R) al antibiótico.

Para un determinado antibiótico, una cepa bacteriana es, según la NCCLS:

 Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un

tratamiento a la dosis habitual.
 Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es
de esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento.
 Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir
efecto terapéutico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o
aumento de la posología).

Ciertas moléculas son representativas de un grupo de antibióticos. Los resultados (S, I, R)

obtenidos con estas moléculas pueden ser ampliados a los antibióticos del grupo, que en ese
caso no es necesario ensayar.

Factores de influencia

Para la correcta realización e interpretación de las técnicas de antibiograma deben considerarse

los siguientes factores:

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 Inoculo. El número de microorganismos aplicados en el ensayo debe reproducir lo

más posible las condiciones en el paciente. El inóculo estandarizado es de 108
células/ml. Inoculo mayores o menores pueden derivar en falsos niveles de
resistencia o sensibilidad.

 Medio de cultivo. El medio de Mueller-Hinton es el estandarizado para los métodos

de antibiograma. Se dispone en forma líquida y sólida. En función de los
requerimientos del microorganismo puede enriquecerse con sangre.

 Antibiótico. Ha de tener la concentración previamente establecida. Debe

conservarse en buenas condiciones. Si pierde actividad cepas sensibles pueden
informarse como resistentes.

 Incubación. Las estandarizadas son 37ºC y 20-24 h en atmósfera aerobia o rica en

CO2 según el microorganismo.

 En ocasiones la actividad antimicrobiana de dos antibióticos se potencia si se

administran simultáneamente. Esta circunstancia se conoce como sinergia y se
produce por ejemplo con los antibióticos ß-lactámicos y los glicopéptidos
(vancomicina). Otras veces el efecto es el contrario, se produce antagonismo entre
los dos antibióticos. En las terapias combinadas hay que tener muy presentes los
posibles efectos sinérgicos y antagónicos.

Interpretación de un Antibiograma

Ciertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in vitro, cuando se inscriben en el

DNA bacteriano. Su expresión en el organismo, en donde las condiciones en cuanto a medios
son diferentes, expondría al riesgo de fracaso terapéutico. Para evitar esto, el antibiograma debe
ser interpretado de manera global a fin de descubrir, a través de la comparación de las
respuestas para cada antibiótico, un mecanismo de resistencia incluso débilmente expresado.
Así, gracias a la interpretación, una cepa que aparece como falsamente sensible será
categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiella pneumoniae productora de BLSE
puede aparecer sensible in vitro a las cefalosporìnas de 3" generación. El resultado de Sensible
debe ser corregido a Intermedio o Resistente, ya que la utilización de estos antibióticos correría
el riesgo de provocar un fracaso terapéutico).

 Métodos de antibiograma

Métodos de antibiograma basados en difusión

Los métodos de difusión se basan en la distribución homogénea del antibiótico sobre los medios
sólidos de cultivo. En términos generales los antibióticos se impregnan en discos de papel que
se colocan sobre placas de medio de cultivo en las que previamente se ha extendido la bacteria
que se considera. Tanto la cantidad de antibiótico como el número de bacterias (inóculo) deben
controlarse cuidadosamente. El antibiótico difunde por el agar creando un gradiente de
concentración decreciente según se aleja del disco. La bacteria si resulta susceptible no crece en
las inmediaciones del disco y forma un halo de inhibición. Dicho halo es más grande cuanto
mayor es el grado de sensibilidad de la cepa al antimicrobiano.

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Esta técnica, denominada de disco-difusión es fácil de realizar, barata, aceptada por los
organismos de estandarización y abierta en el sentido que permite analizar cualquier
microorganismo y cualquier antibiótico. Incluso puede aplicarse directamente sobre muestras
clínicas en infecciones graves como la meningitis.

Los discos con antibiótico deben conservarse en frió. El inóculo para sembrar las placas suele
ajustarse por turbidez y debe corresponder con el nivel 0,5 en la escala arbitraria de McFarland.
Tras la incubación se miden los diámetros de los halos de inhibición y se interpretan los
resultados con ayuda de los puntos de corte establecidos internacionalmente para cada
microorganismo y para cada antibiótico.

El principal inconveniente es su carácter sólo cualitativo y su limitación en bacterias anaerobias y

de crecimiento lento. También presenta problemas con antibióticos molecularmente grandes que
difunden poco sobre el agar.

El sistema Epsilon-Test es un ingenioso método de antibiograma por difusión que en lugar de

discos utiliza tiras de papel graduadas con valores de CMI e impregnadas con un antibiótico en
forma de gradiente de concentración. La intersección del halo de inhibición con la tira de papel
indica la CMI del microorganismo para dicho antibiótico.

Métodos de antibiograma basados en dilución

Son los métodos clásicos de antibiograma. En términos generales consisten en fabricar varios
tubos de medio de cultivo con diferentes concentraciones del antibiótico en cuestión e inocularlos
con la cepa que se estudia. Pueden utilizarse medios líquidos o sólidos. La CMI corresponde con
el tubo de concentración más baja que logre inhibir el 90% del crecimiento bacteriano.

En función del soporte donde se realizan los sistemas de dilución se consideran métodos de
macro dilución con tubos independientes y métodos de micro dilución que usan placas
integradas con múltiples pocillos en cada uno de los cuales se coloca una concentración
diferente de antibiótico Los sistemas automatizados de antibiograma se basan en métodos de
micro dilución.

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Los métodos de dilución son en muchos casos los de referencia por su mayor exactitud y por su
carácter cuantitativo (CMI). Se utilizan para confirmar resultados de difusión y en los estudios de
sinergia y antagonismo antibiótico.

La lectura del antibiograma se realiza por turbidez si el medio de cultivo es líquido y por recuento
de colonias en medios sólidos. Una vez obtenida la CMI correspondiente a cada antibiótico se
interpreta siguiendo los puntos de corte establecidos y la cepa se clasifica como sensible o
resistente a efectos clínicos.

Sistemas automatizados

Los laboratorios grandes con muchas muestras clínicas están obligados a realizar muchas
pruebas de antibiograma y necesitan sistemas automatizados que ahorren tiempo. Aunque
existen muchos todos ellos se parecen bastante entre sí. La inoculación, la incubación y la
lectura están automatizadas. Se basan en métodos de micro dilución e incluso algunos integran
en el mismo panel pruebas bioquímicas de identificación de modo que ofrecen resultados
completos de diagnóstico.

II. OBJETIVOS

 Aprender a realizar la técnica del antibiograma

 Interpretar los diferentes halos de inhibición
 Conocer a que antibiótico es sensible un determinado microorganismo
 Llegar a determinar el Grado de sensibilidad de la colonia bacteriana a un
determinado antibiótico

III. MATERIALES

 Agar Mueller-Hinton

 Balanza

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 Matraz

 Cocina

 Asas se siembra

 Placas petri

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IV. PROCEDIMIENTO

 Separamos el agar MH para ello, pesamos en (4g/100ml) para dos matraces

 Luego de homogenizarlo en el calor por medio de la cocina lo vertimos en las placas

petri

 En un tubo con SSF hicimos una suspensión del cultivo de Miguel y profesor hasta
encontrar una turbidez similar al tubo control.(esto con una anticipación de 18 horas )

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 Luego se vierte la suspensión sobre la superficie del agar MH mediante hisopado se

coloca en la estufa por 10 minutos para que seque la superficie del agar.

 Luego de 5 min colocamos los discos antibióticos manteniendo una distancia de

separación uno de otros (22mm)

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 Luego de 5 min más incubar a 370C por 18-24 horas

 Luego realizamos la medida de los halos de inhibición en milímetros

MIGUEL

MUESTRA DEL PROFESOR (MC257A)

 La lectura fue interpretada en términos de susceptible, resistente y sensibilidad

intermedia

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V. RESULTADOS

Finalmente de acuerdo al tamaño del halo observado, se presenta los resultados siguientes: (se
nombran las siglas de los diferentes quimioterápicos utilizados)

MIGUEL

o CXT:18mm
o AK:18 mm
o AMP:10 mm
o AMC:21 mm
o CTX:31 mm
o AZT:33 mm
o CRO:27 mm
o FEP:31 mm
o IPM:28 mm
o CN:20 mm
o CAZ:27 mm
o TZP:25

MUESTRA DEL PROFESOR (MENTEROBACTER CLOACAE)

o AK:22 mm
o AMP:11 mm
o AMC:24 mm
o CTX:35 mm
o AZT:30 mm
o CRO:37 mm
o FEP:39 mm
o IPM:31 mm
o CN:19 mm
o CAZ:33 mm
o TZP:30 mm

VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 la lectura interpretada del antibiograma, es imprescindible, en una primera

aproximación, para el estudio de los mecanismos de resistencia.
 Este proceso debe ser complementario a la categorización clínica de los resultados de
sensibilidad, ya que de su aplicación no sólo derivan beneficios microbiológicos sino
también clínicos, importantes para el tratamiento antimicrobiano y el control de las
enfermedades infecciosas.

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 Es evidente que con la lectura interpretada del antibiograma, la gestión de los

resultados microbiológicos es más adecuada y se facilita la participación del
microbiólogo en la toma de decisiones. En este proceso se vuelcan, además del
conocimiento de los mecanismos de resistencia, otros relacionados con la farmacología
del antimicrobiano y con los resultados contrastados de la experiencia clínica
 La lectura interpretada del antibiograma debe dejar de ser un ejercicio intelectual de
unos pocos y plantearse como una necesidad clínica del microbiólogo en el laboratorio

 LA MUESTRA DE MIGUEL es sensible a todo, resistencia a penicillium debido a la

presencia de halo más pequeño, tiene betalactamasa clásica, no hay BLEE.

 MUESTRA DEL PROFESOR (MENTEROBACTER CLOACAE) sensible a todo,

resistencia a ampicilina) presenta betalactamasa clásica .no hay BLEE.

VII. CONCLUSIONES

 Se pudo realizar y aprender la técnica del antibiograma de manera correcta

 Se Interpretretó los diferentes halos de inhibición
 Se vio la sensibilidad y resistencia a un determinado antibiótico como penicilina

VIII. BIBLIOGRAFÍA

 VALDEZ FERNANDEZ-BACA, Luis Manuel. Resistencia antibiótica. Rev Med Hered,

oct. 2003, vol.14, no.4, p.155-157. ISSN 1018-130X.

 CALVO A, Mario. Antibiograma rápido en neumonía asociada a ventilación

mecánica.Rev. chil. infectol., Santiago, v. 24, n. 3, jun. 2007

 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioAntibioticos.htm

 http://www.portalesmedicos.com/publicaciones/articles/2870/1/Video-Antibiograma.html

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