UNIVERSIDAD NACIONAL

“SANTIAGO ANTÚNEZ DE MAYOLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE INGENIERÍA
AMBIENTAL

Tema: INFORME DE CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Docente: MANDUJANO AYLAS IRMA NORMA
Asignatura: MICROBIOLOGÍA
Integrantes:
 ARAGON VALDERRAMA INDIRA
 ARANDA LAZARO GRECIA
 HUAYNATE GAMARRA DARWIN
 JARAMILLO EVARISTO KEVIN
 RAMOS MORIBE FLANKLIN

HUARAZ- PERÚ
2018
INTRODUCCION

En esta oportunidad consideraremos al microorganismo desde otra perspectiva.

Nos ocuparemos de las relaciones de los microorganismos con el hombre.
Empezaremos señalando los agentes y métodos para el control del crecimiento
microbiano.

El control puede efectuarse limitando el crecimiento de los microorganismos,

procesos llamados inhibición; o destruyendo los organismos por esterilización,
muerte o eliminación de todos los organismos viables de un medio de cultivo.

Las medidas de control de los microorganismos son la descontaminación, la

desinfección y la esterilización. [CITATION TMa78 \l 10250 ]

Aunque muchos microorganismos son beneficiosos y necesarios para el bienestar

humano, las actividades microbianas pueden tener consecuencias indeseables,
como la putrefacción de los alimentos y el desarrollo de enfermedades. En
consecuencia, es fundamental poder destruir los microorganismos o inhibir su
crecimiento para minimizar sus efectos destructivos. [CITATION Pre02 \l 10250 ]
OBJETIVOS

 Evaluar la eficiencia de algunos desinfectantes y antibióticos.

 Evaluar el proceso de desinfección solar y la variación en la población
microbiana.
MARCO TEORICO

La esterilización es el proceso por el que todas las células vivas, esporas viables,
virus y viroides son destruidos o eliminados de un objeto o hábitat. Cuando se
realiza la esterilización con un agente químico, el agente se denomina
esterilizante. Por el contrario, la desinfección consiste en la destrucción,
inhibición o eliminación de, al menos, los microorganismos que pueden causar
enfermedad. El principal objetivo es destruir patógenos potenciales, aunque la
desinfección también reduce significativamente la población microbiana total.

El saneamiento tiene una relación próxima con la desinfección. Con este sistema,
la población microbiana se reduce a niveles que se consideran seguros según las
normas de salud pública. Normalmente, es necesario controlar los
microorganismos sobre tejidos vivos con agentes químicos. La antisepsia es la
prevención de una infección o sepsis, y se realiza con antisépticos. Son agentes
químicos que se aplican sobre los tejidos para prevenir una infección, destruyendo
o inhibiendo el crecimiento de agentes patógenos; también reducen la carga
microbiana en general.

Cuando el agente destruye organismos, se dice que tiene efecto un germicida

destruye agentes patógenos y muchos no patógenos, pero no necesariamente
endosporas. [ CITATION Bro98 \l 10250 ]

Cinética de Muerte Microbiana

Una población microbiana no se destruye instantáneamente cuando se expone a

un agente letal. La muerte de una población, al igual que su crecimiento, es
generalmente exponencial o logarítmica, es decir, la población se reduce en
niveles iguales a intervalos constantes (Tabla 1). Si se representa el logaritmo del
número de microorganismos que permanece viable frente al tiempo de exposición
del agente, se obtiene una línea recta. Cuando la población se ha reducido
notablemente la velocidad de destrucción puede disminuir debido a la
supervivencia de algunas variantes más resistentes de los microorganismos
expuestos. Para estudiar la eficacia de un agente letal, hay que saber cuándo
están muertos los microorganismos, tarea no tan fácil como en el caso de
organismos de mayor tamaño (no se puede tomar el pulso a una bacteria). Una
bacteria se considera muerta si no crece ni se multiplica cuando se inocula en un
medio de cultivo adecuado para su crecimiento. Análogamente, consideraremos
que un virus está inactivo cuando no es capaz de multiplicarse en un huésped
apropiado.[ CITATION Pre02 \l 10250 ]

Tabla 1. Experimento Teórico de Destrucción Térmica Microbiana

Condiciones que Influyen sobre la Eficacia de la Actividad de un agente

Antimicrobiano

La destrucción de los microorganismos y la inhibición de su crecimiento no son

asuntos sencillos porque la eficacia de un agente antimicrobiano (agente que
destruye microorganismos o inhibe su crecimiento) depende de al menos seis
factores.[ CITATION Pre02 \l 10250 ]

1. Tamaño de la población. En cada intervalo de tiempo se destruye una

fracción igual de población microbiana, por tanto, una población mayor
necesitará más tiempo para morir que una más pequeña.
2. Composición de la población. La eficacia de un agente varía
considerablemente con la naturaleza de los organismos que se van a tratar
porque éstos difieren sustancialmente en cuanto a susceptibilidad.
 3. Concentración o intensidad de un agente antimicrobiano. A menudo, pero
no siempre, cuanto más concentrado esté un agente químico o más intenso
sea uno físico, más rápidamente se destruyen los microorganismos.
4. Duración de la exposición. Cuanto más tiempo se exponga una población a
un agente microbicida, más organismos se destruirán.
5. Temperatura. La actividad de los agentes químicos aumenta con la
temperatura. Con frecuencia, concentraciones bajas de un desinfectante
pueden ser eficaces a temperaturas más altas.
6. Ambiente local. La población microbiana que debe ser controlada no está
aislada, sino en el contexto de una serie de factores ambientales que
pueden ofrecerle protección o facilitar su destrucción.

Control Microbiano por Métodos Físicos

El calor y otros agentes físicos se suelen utilizar para esterilizar objetos, como lo
demuestra el uso que todavía tiene la autoclave en todos los laboratorios de
microbiología. Los cuatro agentes empleados con más frecuencia como agentes
físicos son: calor, bajas temperaturas, filtración y radiación.[ CITATION Pre02 \l
10250 ]

Los métodos físicos se usan a menudo para lograr la descontaminación

microbiana, la desinfección y esterilización. El calor, la radiación y la filtración son
métodos estándar que emplean para destruir o eliminar microorganismos no
deseables. [ CITATION TMa78 \l 10250 ]

Calor

Imagen 1. Efecto de la temperatura en la viabilidad de una bacteria mesofílica.

El fuego y el agua en ebullición se han utilizado para esterilizar y desinfectar

desde la época de los griegos, siendo el calor aún uno de los métodos más
comunes para destruir microorganismos. Se puede aplicar húmedo o seco.
[ CITATION Pre02 \l 10250 ]
 Para todos los
microorganismos existen una
temperatura máxima de
crecimiento por encima de la
cual mueren. A temperaturas
muy altas, casi todas las
moléculas pierden su
estructura y función, por el
proceso denominado
desnaturalización. [ CITATION
TMa78 \l 10250 ]

La esterilización con vapor se realiza en un Autoclave aparato similar a una olla

a presión. El desarrollo de la autoclave por Chamberland, en 1884, estimuló
enormemente el progreso de la microbiología. Se hierve agua para producir vapor,
que pasa a través de una cubierta al interior de la cámara de la autoclave. Se
expulsa el aire que inicialmente se encuentra en la cámara hasta que ésta queda
llena de vapor saturado y se cierran las salidas. El vapor saturado y caliente
continúa entrando en la cámara hasta que se alcanza la temperatura y presión
deseadas, normalmente, 121 °C y 6.8 kg de presión. A esta temperatura, el vapor
saturado puede destruir en 10-12 minutos todas las células vegetativas y
endosporas presentes en un volumen pequeño de muestra. El tratamiento se
continúa durante 15 minutos para conseguir un margen de seguridad.
Evidentemente, grandes contenedores o recipientes de muestras líquidas
requerirán tratamientos más prolongados.[ CITATION Pre02 \l 10250 ]

Muchos objetos se esterilizan mejor en ausencia de agua mediante esterilización

por calor seco. Los objetos que se van a esterilizar se colocan en una estufa a
una temperatura de 160 a 170 °C durante 2 a 3 horas. La destrucción microbiana
se produce aparentemente como consecuencia de la oxidación de los
constituyentes celulares y la desnaturalización de las proteínas. Aunque el calor
del aire seco es menos eficaz que el húmedo. El calor seco no corroe utensilios de
cristal ni metálicos, como lo hace el calor húmedo y puede emplearse para
esterilizar polvo, aceite y otros materiales diversos. La mayoría de los laboratorios
esterilizan el material de vidrio con calor seco. A pesar de estas ventajas, la
esterilización por calor seco es lenta e inapropiada para materiales
termosensibles, corrió muchos objetos de plástico y goma.[ CITATION Pre02 \l
10250 ].

Bajas temperaturas

Aunque hasta ahora se están discutiendo los sistemas para la destrucción de

microorganismos, a menudo, la técnica de control más conveniente es inhibir su
multiplicación mediante el empleo de la refrigeración o congelación. Este enfoque
es particularmente importante en microbiología de los alimentos. Una de las
causas por la que, en general, los micoorganismos no se multiplican a las
temperaturas de congelación es la ausencia de agua líquida libre. [ CITATION
Bro98 \l 10250 ]

Filtración

La filtración es un método excelente para reducir, incluso esterilizar, la población

microbiana en soluciones termosensibles. Más que destruir directamente los
microorganismos contaminantes, el filtro simplemente los retira. Existen dos tipos
de filtros. Los filtros de profundidad consisten en materiales fibrosos o granulosos
que forman una capa gruesa rellena de canales retorcidos de un diámetro
pequeño. La solución que contiene los microorganismos se aspira a través de esta
capa, quedando las células microbianas retenidas, adsorbidas, en el filtro. Los
filtros de profundidad se pueden fabricar con tierra de diatomeas (filtros de
Berkefield), porcelana no vidriada (filtros de Chamberlain), asbestos o materiales
similares.[ CITATION TMa78 \l 10250 ]

Radiación
Los tipos de radiación y las formas en que daña o destruye a los microorganismos
se han discutido ya previamente. Las aplicaciones de las radiaciones ultravioleta e
ionizante para esterilizar objetos se describen brevemente a continuación.
Radiación y sus efectos sobre los microorganismos (pp. 137-139). La radiación
ultravioleta (UV) de aproximadamente 260 nm es bastante letal, pero no atraviesa
eficazmente el cristal, las películas de suciedad, el agua ni otras sustancias.
Debido a este inconveniente, la radiación UV se emplea como agente esterilizante
en muy pocas situaciones. Las lámparas UV se colocan a veces en los techos de
las habitaciones o en cabinas de seguridad biológica para esterilizar el aire y
cualquier superficie expuesta. Como la radiación UV quema la piel y lesiona los
ojos, las personas que trabajan en estas zonas deben asegurarse de que estas
lámparas estén apagadas cuando trabajen allí. Hay disponibles unidades de luz
UV comerciales para el tratamiento del agua. Los agentes patógenos y otros
microorganismos mueren al pasar una capa delgada del agua contaminada bajo
las lámparas.

La radiación ionizante es un agente esterilizante excelente y penetra en los

objetos. Destruirá endosporas bacterianas y células vegetativas, tanto procariotas
como eucariotas; sin embargo, la radiación ionizante no es siempre tan efectiva
frente a virus. La radiación gamma procedente de una fuente de cobalto 60 se
utiliza para esterilizar en frío: antibióticos, hormonas, suturas y suministros
desechables de plástico, como jeringas. La radiación gamma se ha empleado
también para esterilizar y «pasteurizar» carne y otros alimentos.[ CITATION
Bro98 \l 10250 ]

Control Microbiano por Agentes Químicos

Aunque los objetos se desinfectan a veces con agentes físicos, las sustancias
químicas se utilizan con más frecuencia para la desinfección y la antisepsia.
Muchos factores influyen en la eficacia de los desinfectantes y antisépticos
químicos, como ya se ha expuesto anteriormente. Hay que tener en cuenta
factores como la clase de microorganismos potencialmente presentes, la
concentración y naturaleza del desinfectante que se emplee y la duración del
tratamiento. Las superficies sucias deben limpiarse antes de aplicar un
desinfectante o antiséptico. Un uso apropiado de los agentes químicos es esencial
para la seguridad en los laboratorios y hospitales. [ CITATION Bro98 \l 10250 ]

Alcoholes

Los alcoholes se encuentran entre los desinfectantes y antisépticos más utilizados.

Son bactericidas y fungicidas, pero no esporicidas; destruyen también algunos
virus con envoltura lipídica. Los dos alcoholes germicidas más comunes son el
etanol y el isopropanol, empleados normalmente en una concentración del 70 a 80
%. Actúan desnaturalizando las proteínas y, quizás, disolviendo los lípidos de
membrana. Se requiere una inmersión en estos alcoholes durante 10 a 15 minutos
para desinfectar termómetros y otros instrumentos.

Halógenos

Los halógenos pertenecen al grupo VIIA de la tabla periódica (flúor, cloro, bromo,
yodo y astatino). Existen en forma de moléculas diatómicas en estado libre, y
forman sales con sodio y la mayoría del resto de los metales. Yodo y cloro son
agentes antimicrobianos importantes. El yodo se utiliza como antiséptico cutáneo,
y destruye los microorganismos al oxidar los constituyentes celulares y formar
compuestos de yodo con las proteínas celulares. En concentraciones elevadas,
puede incluso destruir algunas esporas. A menudo se aplica yodo como tintura de
yodo al 2 % o más en una solución de agua y etanol de yoduro potásico. Aunque
es un antiséptico eficaz, puede lesionar la piel, deja manchas y se pueden
desarrollar alergias al yodo. Más recientemente, se ha combinado el yodo con un
adyuvante orgánico para formar un yodóforo. Puede aplicarse como cloro gas,
hipoclorito sódico o hipoclorito calcico, todos ellos producen ácido hipocloroso
(HC1O) y, luego, oxígeno atómico. El resultado es la oxidación de materiales
celulares y la destrucción de bacterias vegetativas y hongos, aunque no de
esporas.

Aldehídos
Los dos aldehídos más utilizados, el formaldehído y el glutaraldehído, son
moléculas muy reactivas que se combinan con ácidos nucleicos y proteínas,
inactivándolos, probablemente al formar puentes cruzados y mediante alquilación.
Son esporicidas y pueden emplearse como esterilizantes químicos. El
formaldehído se disuelve normalmente en agua o alcohol, antes de su uso. Una
solución tamponada al 2 % de glutaraldehído es un desinfectante eficaz. Es
menos irritante que el formaldehído y se utiliza para desinfectar material en
hospitales y laboratorios. El glutaraldehído desinfecta normalmente objetos en 10
minutos, pero requiere hasta 12 horas para destruir todas las esporas.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Agente Físico

- Acción de la temperatura
1. Inoculamos en tubos con caldo de cultivo la muestra bacteriana
indicada.
2. Sometimos la a los tubos en diferentes temperaturas de incubación.

-
Presencia de oxigeno
1. Inoculamos en tubos con caldo de cultivo la muestra bacteriana
indicada.
2. Sellamos uno de los tubos con parafina liquida evitando así el ingreso
de oxigeno (anaeróbico) mientras que el otro tubo queda libre
(aeróbico). Ambos llevamos a incubar a 37°C por 24hrs.
3. Evaluar e interpretar los resultados por la presencia de turbidez en los
tubos.
Agente Químico

- Acción del pH
1. Añadimos a un tubito con caldo nutritivo con 2 gotas de Ácido Sulfúrico y
a otro 2 gotas de Hidróxido de Sodio, alterando de esta manera el pH
normal del medio de cultivo; para comparar se tendrá un tercer tubo con
un pH neutro.
2. Inoculamos en tubos antes mencionados la muestra bacteriana indicada
y llevar a incubar a 37°C por 24hrs.
3. Evaluar e interpretar los resultados por la presencia de turbidez en los
tubos.

- Acción de desinfectantes
1. Se humedeció un hisopo con la solución bacteriana indicada e
inoculamos en la placa de agar recuento, dispersándolo sobre toda la
superficie con la ayuda del hisopo y dejar secar por 5 minutos.
2. Se colocó los discos desinfectantes en forma cruzada con la ayuda de
una pinza y se llevó a incubar a 37°C por 24hrs.
3. Evaluar e interpretar los resultados por la presencia de zonas claras o
halos que aparecen alrededor de cada disco, midiendo el diámetro de
cada uno y explicando cual tuvo mayor efecto.

RESULTADOS:

CUESTIONARIO:
1. ¿Cuáles son los efectos químicos y físicos que ocurren sobre el
crecimiento microbiano?

 Dentro de los efectos físicos se encuentran los cambios de

temperatura y de oxígeno (aerobios y anaerobios)

 Mientras que en los químicos se encuentran los cambios de pH,

acción de desinfectantes, antibióticos y radiaciones, estas últimas
divididas en ionizantes y no ionizantes.

2. Explique ¿de qué manera afectan el oxígeno y la temperatura en el

crecimiento microbiano?

 Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de

crecimiento adecuada. Si consideramos la variación de la velocidad
de crecimiento en función de la temperatura de cultivo, se puede
observar una temperatura mínima por debajo de la cual no hay
crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento
lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo
hasta que se alcanza la temperatura óptima a la que la velocidad es
máxima. Por encima de esta temperatura óptima, la velocidad de
crecimiento decae bruscamente y se produce la muerte celular. El
aumento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se debe
al incremento generalizado de la velocidad de las reacciones
enzimáticas con la temperatura.

En términos generales, la velocidad de las reacciones bioquímicas

suele aumentar entre 1.5 y 2.5 veces al aumentar 10ºC la
temperatura a la que tienen lugar. La falta de crecimiento a
temperaturas bajas se debe a la reducción de estas mismas y al
cambio de estado de los lípidos de la membrana celular que pasan
 de ser fluidos a cristalinos impidiendo el funcionamiento de la
membrana celular. La muerte celular a altas temperaturas se debe a
la desnaturalización de proteínas y a las alteraciones producidas en
las membranas lipídicas a esas temperaturas. Es importante tener en
cuenta que a temperaturas bajas, el metabolismo celular es lento y
las células paran de crecer; aunque suelen morir. Sin embargo,
cuando la temperatura es superior a la óptima, se produce la muerte
celular rápidamente y las bacterias no pueden recuperar su
capacidad de división si baja posteriormente la temperatura.

 O2: Hay microorganismos que requieren ambientes oxidantes para

crecer, mientras que otros necesitan ambientes reductores. El
metabolismo de ambos tipos de microorganismos presenta
diferencias notables. El requerimiento de condiciones oxidantes o
reductoras no debe confundirse con la necesidad de presencia o
ausenciade oxígeno para que se produzca el crecimiento. En
general, cuando un microorganismo requiere un ambiente oxidante
se dice que desarrolla un metabolismo oxidativo (o aerobio) mientras
que los microorganismos que requieren ambientes reductores (o
menos oxidantes) realizan un metabolismo fermentativo (anaerobio).
Hay microorganismos que, aunque viven en presencia de oxígeno,
no son capaces de utilizarlo como aceptor final de electrones y
deben desarrollar un metabolismo fermentativo (los estreptococos,
por ejemplo).Por otra parte, hay microorganismos que pueden
desarrollar ambos tipos de metabolismo. Esto es: en presencia de
oxígeno desarrollan un metabolismo oxidativo yen su ausencia,
fermentativo.

[ CITATION Bro04 \l 10250 ]

3. Frente a la acción de antibióticos ¿a qué nivel actúan estos para evitar el
crecimiento de una bacteria?

 Un Antibiótico es una sustancia química producida por un

microorganismo, que desarrolla una actividad antimicrobiana. Su
origen puede ser:

-Natural o biológico: Se obtiene de cultivos de microorganismos que

pueden ser hongos o bacterias.
-Semisintético. A partir de un núcleo básico de un agente obtenido de
forma natural, se modifican algunas de sus características químicas,
para mejorar sus propiedades, por ejemplo, aumentar su actividad,
ampliar su espectro de acción, facilitar su administración o disminuir
los efectos indeseables. Estos antibióticos como bactericidas
producen la muerte de los microorganismos responsables del
proceso infeccioso.
Actualmente, existen tres categorías de antimicrobianos:
-Los que producen una acción bactericida poco relacionada con la
concentración, como es el caso de los β-lactámicos y los
aminoglucósidos, con los que se obtiene la máxima acción
bactericida.
-Los que se comportan como bacteriostáticos: macrólidos,
tetraciclinas y cloranfenicol, entre otros.
Los mecanismos por los que los antibióticos alteran la biología de los
microorganismos son: Inhibición de la síntesis de la pared celular,
desorganización de la membrana citoplasmática, inhibición de la
síntesis de proteínas, bloqueo de la síntesis de ácido fólico.
[ CITATION Jua90 \l 10250 ]

4. La alteración de pH ¿Qué efecto ocasiona en la bacteria?

 El pH intracelular es ligeramente superior al del medio que rodea las
células ya que, en muchos casos, la obtención de energía
metabólica depende de la existencia de una diferencia en la
concentración de protones a ambos lados de la membrana
citoplasmática. El pH interno en la mayoría de los microorganismos
está en el rango de 6,0 a 8,0.

La bajada del pH se puede deber a varios factores, uno de los cuales

es la liberación de ácidos orgánicos de cadena corta (fórmico,
acético, láctico) por ciertas bacterias. En este sentido, hay que tener
en cuenta que la acción bactericida de estos ácidos orgánicos de
cadena corta es más potente que la debida únicamente a la bajada
del pH que producen. Esto es, los ácidos orgánicos de cadena corta
son tóxicos para algunas bacterias por sí mismos.
El pH intracelular de las bacterias neutrófilas, por ejemplo, debe
permanecer próximo a la neutralidad para evitar la destrucción de las
macromoléculas celulares que son sensibles al acido o al alcalino.
En los acidofilicos o alcalófilos extremos el pH intracelular puede
variar algunas unidades respecto a la neutralidad, pero en la mayoría
de los microorganismos cuyo pH óptimo para el crecimiento está
entre 6 y 8 (neutrofilios), el citoplasma o permanece neutro o muy
próximo a la neutralidad.
[ CITATION Bro04 \l 10250 ]
El pH en un medio afecta directamente a un microorganismo y a
enzimas e influye en la solubilidad de muchas moléculas que de
alguna manera indirecta ejercen alguna influencia sobre el
microorganismo: Solubilidad CO2, velocidad de fotosíntesis,
disponibilidad de nutrientes (NH4, PO4), movilidad de metales
pesados, velocidad de replicación. Funciones que si son alteradas
pueden causar muerte o inhibición del crecimiento de los
microorganismos.
[ CITATION Pre99 \l 10250 ]
5. Explique ¿qué factores inmediatos influyen en el desarrollo de la curva de
muerte de un microorganismo en una muestra de agua residual y en la
superficie de la tierra?

-En una muestra de agua residual: cambio de pH a ácido (para bacterias

alcalófilas y neutrófilas) y a básico (para acidófilas y neutrófilas); presencia
de detergentes, jabones, alcoholes y demás productos desinfectantes
que se encuentren contaminando el agua. Ausencia de O2: Letal para
bacterias aeróbicas estrictas.
-En la superficie de la tierra: también los cambios de pH dependiendo de si
es un suelo fértil con pH estable o son suelos contaminados; presencia de
O2 que no permite el crecimiento a bacterias anaeróbicas estrictas;
Temperaturas: que dependiendo de la ubicación varía mucho y puede dar
muerte a algunas bacterias mientras que otras se desarrollan normalmente:
(termófilas, sicrófilas, extremófilas, etc.) y las radiaciones no ionizantes
(rayos UV) que dependiendo del nivel de radiación alteran la curva de
muerte.

CONCLUSIONES
 Determinamos que la bacteria estafilococos aureus , bacteria de pH básico,
sensible a lejía , jabón cristal violeta y poco sensible a alcohol

 Determinamos que la desinfección por UV es un proceso libre de

sustancias químicas, es decir no necesita reactivos para usarlo, es una
forma de esterilizar, pero con rango menor a la esterilización con autoclave,
porque la luz solo llega a la superficie y no en toda la colonia.
BIBLIOGRAFÍA

Brooks, G., Carroll, K., Butel, J., More, S., & Mietner, T. (1998). Microbiología Medica (6ta Edición
ed.). San Francisco: The McGraw Hill.

Madigan, M., Martinko, J., & Parker, J. (1978). Brock Biología de los Microorganismos (10a Edición
ed.). Mexico: PEARSON.

Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (2002). Microbiologia (Vol. 5ta Edición). Londres: The
McGraw Hill.