Pirógenos

Microbiología Aplicada III

 Objetivos
• Definir el concepto de pirógenos
• Deducir la relación entre Fiebre, pirógenos,
agua y productos farmacéuticos estériles
• Describir la prueba de pirógenos por el
método biológico
 Pirógenos
• Sustancias que producen fiebre en los pacientes (piro =
fuego, y gen = origen)
• Pueden ser de origen interno (pirógenos endógenos) o
externo (pirógenos exógenos) al paciente.
• Esencialmente todos son citocinas (proteínas también
llamadas citoquinas), las cuales forman parte del sistema
inmune.
Endógenos
• Son producidas por los fagocitos y causan el incremento del
punto de regulación de la temperatura ubicado en el
hipotálamo.

• Dos orígenes:
• Microbiano: Productos del metabolismo microbiano (G(-), G(+)
y H y L). Entre los más potentes están las endotoxinas
Exógenos producidas a partir de la pared celular de Bacterias Gram(-).
• No Microbiano: Agentes farmacológicos como Fleomicina o
Colchicina, esteroides pirógenos, cristales de urato, sales de
aluminio, etc.
Historia de los Pirógenos en productos
farmacéuticos

Sieber. 1923.
Evidenció que la fiebre
se originaba por la
presencia de
Wechbelman. 1911. sustancias de origen
Primeras observaciones bacteriano
de las reacciones (pirógenos).
pirogénicas: Desarrollo la prueba
Ocasionales aumentos de pirógenos en
de temperatura en conejos.
pacientes a quien se les
Desde la introducción
administraba
de la terapia
Arsfenamia.
intravenosa, en 1656,
por Sir Christopher
Wren, se tuvo
conciencia de la
presencia de un agente
productor de fiebre
Pirógenos en productos farmacéuticos

El vehículo más usual

de productos
Cualquier cosa a ser
parenterales es el
administrada Apirogenicidad:
agua; por ser el más
parenteralmente tiene ausencia de
abundantemente
que ser estéril y pirógenos.
disponible, barato,
apirogénica.
seguro, no toxico y no
irritante.
 Fuente de pirógenos

Principios
Solventes Excipientes
Activos

Aparatos Método de
almacenamiento
usados en la Contenedores entre preparación
fabricación y esterilización
 ¿Qué hacen los Pirógenos?
Si, involuntariamente , se
inyectan pirógenos en un Eritema en el
paciente; estos pueden sitio de la
ocasionar los siguientes inyección
cambios fisiológicos:

Dolor en Elevación de la
Malestar
piernas y temperatura
general
abdomen corporal
 Mecanismo de inducción de la fiebre
Estas citoquinas son la
El pirógeno
interleucina-1 (IL-1),
endotoxigénico entra
interleucina-6 (IL-6), y
en el torrente
factor de necrosis
sanguíneo.
tumoral-α (TNF).

La unión a las células

Se une a la proteína Estos factores
receptoras causan la
de unión (LPB) de producen la
producción de
lipopolisacáridos inflamación y la fiebre
citoquinas
(LPS).
proinflamatorias.

La LPB lo lleva al Las células receptoras

sistema en el RES son las
reticuloendotelial (RES células
ó sistema fagocítico mononucleares
mononuclear ). circulantes.
 Endotoxinas Bacterianas
Provienen de la membrana
Pirógenos más
externa de BGN y son las
importantes producidos
responsables de su dispersión
por bacterias
a medida que se multiplican y
GramNegativas (BGN)
después de su muerte.

Liberación del
LPS o
endotoxina

Se puede encontrar en: alimentos,

aguas subterráneas, suelos, Están presentes
cristalería de laboratorio, aparatos en todas partes
de investigación, baños maría, en asociadas o no a
lugares donde se encuentre organismos vivos.
humedad.
Naturaleza química de las endotoxinas
bacterianas
• Las endotoxinas bacterianas contienen
lípidos, proteínas y carbohidratos.
• La estructura química primaria es: una
estructura de polisacárido que se une
covalentemente a un lípido (Se denomina
Lipopolisacárido o LPS).
• El Lípido, denominado Lípido A es parte
de la pared de la célula bacteriana.
• El polisacárido sobresale de la superficie
celular y se compone de dos partes:
– un núcleo oligosacárido que está
conectado al lípido A y
– un oligosacárido “O” con cadena
más específica
• El Lípido A es responsable de las
actividades dañinas y útiles de endotoxina
<151> Prueba de Pirógenos (USP)
La prueba de Pirógenos fue introducida en
la Farmacopea de Estados Unidos en 1942 y
fue diseñada para delimitar un nivel de
riesgo aceptable de reacciones febriles en
los pacientes a quienes se les administra
una inyección de un producto en cuestión

Se realiza con productos que pueden

ser tolerados por los conejos de
prueba en una dosis que no exceda
10 mL/Kg inyectado
intravenosamente dentro de un
período de no más de 10 minutos.
Detecta pirógenos de origen
microbiano y no microbiano
 Aparatos y diluyentes
Jeringas, agujas y frascos despirogenizados (250 °C >30
min)

Diluyentes y soluciones de lavado, de dispositivos de

inyección parenteral, libres de pirógenos

Realizar controles periódicos de despirogenicidad

Si se necesita solución salina se debe usar al 0.9% de

NaCL
 Requisitos
Registro de temperatura
• Utilizar dispositivo de
detección de temperatura
preciso: Calibrados para
asegurar una precisión de 0.1,
probados para alcanzar una
lectura máxima en menos de 5
minutos.
• Insertar la sonda de detección
de temperatura en el recto del
conejo de prueba hasta una
profundidad > 7,5 cm, y
después de un período de
tiempo suficiente, registrar la
temperatura corporal del
conejo.
Animales de prueba
• Conejos sanos maduros
• Guardarlos
individualmente a
temperatura uniforme
entre 20 ° y 23 °C y libre
de perturbaciones que
los puedan excitar.
• Antes de utilizar uno
por primera vez en la
prueba, acondicionarlo
al procedimiento.
• Otras
 Procedimiento
• Registrar la temperatura “control” 30 minutos antes de la inyección
(temperatura base).
• Usar conejos cuya temperatura control no difiera en más de 1°C entre
ellos y que sea <39.8°C

• Inyectar la vena marginal de la oreja de cada uno de tres conejos con

10 mL/kg de peso completando la inyección en 10 min.
• Monitorear la temperatura entre 1-3 horas a intervalos de 30 min.
Interpretación de la prueba y continuación
• Considere cualquier disminución de temperatura como
incremento igual a cero.
• ETAPA 1: Tres conejos
• ETAPA 2: Los tres conejos de la etapa 1 más otros cinco conejos.

N° de Requisito 1 Requisito 2
conejos Incremento El materia pasa la prueba si la
individual suma de los incrementos
Máximo máximos no excede
3 (Etapa 1) < 0.5 °C 1.1 °C
(los tres conejos) (los tres conejos)
8 (Etapa 2) ≥ 0.5 °C 3.3 °C
(Máximo 3 conejos) (los ocho conejos)
 ¿Cuándo es apropiado aplicar la
prueba de pirógenos <151>?
• Para algunos productos biológicos indicados en 21
CFR 610.13(b).
• Para medicamentos de uso humano o animal
según indique la USP.
• Para dispositivos y materiales medicamentosos en
los cuales la evaluación de riesgo indique posible
presencia de pirógenos no endotoxigénicos.
• Cuando no se pueda mitigar las interferencias a la
prueba de endotoxinas bacterianas por el método
LAL.
 Bibliografía
• USP 34 <151>. Pyrogen Test.
• Claudi Fauli I Trillo. 1993. Tratado de Farmacia
Galénica. Luzan 5-S.A. de Editores. Madrid.
• FDA. 2012. Guidance for Industry .Pyrogen and
Endotoxins Testing: Questions and Answers.
• Klein D y Prescott L. 1999. Microbiología. 4ed. España,
Editorial Mc Graw Hill Interamericana.
• Pharmainfo Net. Pyrogens. Vijaya Ratna. 2010.
Dirección URL: http://www.pharmainfo.net/pyrogens.
(Consultado en Abril 2013).
Preguntas?