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26-1 DEFINIR
a) ELUCIÓN
Implica el transporte de una especie atreves de una columna por la adicioó n de la fase moó vil.
Procedimiento en el que la fase moó vil se pasa de forma continua a traveó s o a lo largo del lecho
cromatograó fico y la muestra se suministra al sistema de forma discreta, como una pequenñ a
cantidad en un tiempo breve. Es el proceso por el cual todos los solutos terminan por
abandonar la columna.
b) FASE MÓVIL
Es la fase que se mueve en una direccioó n definida. Puede ser un líóquido (cromatografíóa de
líóquidos o CEC). un gas (cromatografíóa de gases) o un fluido supercríótico (cromatografíóa de
fluidos supercríóticos). La muestra que estaó siendo separada/analizada (formada de analito/s y
el disolvente) se inyecta en la fase moó vil que se mueve a traveó s de la columna. En el caso de la
cromatografíóa líóquida de alta resolucioó n, HPLC, la fase moó vil es un disolvente no-polar como
el hexano (fase normal) o bien alguó n disolvente polar (cromatografíóa de fase reversa).
c) FASE ESTACIONARIA
Es la sustancia que estaó fija en una posicioó n durante la cromatografíóa. Un ejemplo es la capa
de gel de síólice en la cromatografíóa en capa fina.
d) COEFICIENTE DE DISTRIBUCION
A móvil ⇔A estacionaria
K = CS/ CM
e) TIEMPO DE RETENCION
Es el tiempo caracteríóstico que tarda un analito particular en pasar a traveó s del sistema (desde
la columna de entrada hasta el detector) bajo las condiciones fijadas. Veó ase tambieó n: IÍndice de
retencioó n de Kovats
f) FACTOR DE RETENCION
Las caracteríósticas de retencioó n de los componentes suelen describirse en la praó ctica por el
factor de retencioó n o factor de capacidad, k', definido como,
k'=masadesolutoS / masadesolutoM=mS/mM
Y relacionado con el coeficiente de distribucioó n y los voluó menes de fase moó vil y fase
estacionaria por:
K=AS/AM=mS/VM /mM/VM=mS/mM*VM/VS=k'VM/VS
Donde VM y VS son los voluó menes de fase moó vil y estacionaria respectivamente. La relacioó n
VM/VS se denomina relacioó n de fases, β, y es uno de los paraó metros que se utilizan para
caracterizar una columna cromatograó fico, particularmente en cromatografíóa de gases.
g) FACTOR DE SELECTIVIDAD
El factor de capacidad α de una columna, como su nombre lo indica, es un teó rmino que define
que tan selectiva es una columna para separar dos picos. Es de hacer notar, que la columna
puede ser selectiva a una separacioó n, que se identifica por un valor alto de este factor, pero si
no se considera la mejora de los paraó metros que pueden afectar el ancho de un pico, aun asíó
no se lograríóa la separacioó n de los mismos.
Entonces el factor de selectividad de una columna para dos especies A y B se define como:
α = k’B /k’A
Donde k’B es el factor de capacidad del compuesto B, que es el maó s retenido y k’ A es el factor de
capacidad del compuesto A, que es el menos retenido.
h) ALTURA DE PLATO
Se utilizan dos teó rminos afines con frecuencia como medida cuantitativa de la eficacia de una
columna cromatograó fica: la altura equivalente de plato teoó rico o H y el nuó mero de platos
teoó ricos N. Los dos estaó n relacionados por la ecuacioó n:
N=L/H
La eficacia de la columna cromatograó fica aumenta cuando mayor es el nuó mero de platos, y
cuando menor es la altura de plato.
H = LW2/ 16 tR2
N = tR16 (tR/W)2
i) DIFUSIÓN LONGITUDINAL
Este es un teó rmino maó s importante en cromatografíóa de gases. Se debe a que las moleó culas del
soluto se mueven en distintas direcciones en la fase estacionaria debido a la porosidad de las
partíóculas que la forman. Esto hace que algunas moleó culas del soluto salgan retrasadas de la
columna respecto a la mayoríóa
j) DIFUSIÓN EN REMOLINO
Se debe a los distintos caminos que toman las moleó culas del soluto al atravesar la fase
estacionaria. Aquellas partíóculas de soluto que atraviesen canales maó s amplios, viajaraó n maó s
raó pido con la fase moó vil, y aquellas que vayan por canales maó s estrechos viajaraó n maó s
lentamente.
Rs = 2[(tR)B – (tR)A] / WA + WB
Estadíósticamente se puede demostrar que una resolucioó n de 1,5 permite una separacioó n
esencialmente completa de los dos componentes, mientras que no es asíó con una resolucioó n de
0,75, por supuesto siempre y cuando las bandas sean gausseanas, es decir simeó tricas en
ambos lados. Asíó con una resolucioó n de 1,0; la zona de A contiene aproximadamente 4% de B,
y la zona B contiene una cantidad similar de A. Con una resolucioó n de 1,5, el solapamiento es
del orden de un 0,3%
l) ELUYENTE
Eluyentes polares: Arrastran maó s eficazmente los compuestos maó s retenidos en la fase
estacionaria. Arrastran maó s raó pidamente a los compuestos.
La siguiente figura muestra unos cromatogramas hipoteó ticos para una mezcla de seis
componentes formada por tres pares de sustancias que difieren ampliamente en sus
coeficientes de distribucioó n y por tanto en sus factores de retencioó n. En el cromatograma (a),
las condiciones se han ajustado de tal forma que los factores de retencioó n de los componentes
1 y 2 estaó n en el intervalo oó ptimo de 2 a 5. Sin embargo, los factores de retencioó n
correspondientes a los otros componentes estaó n muy alejados del intervalo oó ptimo. De este
modo, los picos de los componentes 5 y 6aparecen tras un tiempo desmesurado; ademaó s esos
picos estaó n tan ensanchados que puede ser difíócil identificarlos inequíóvocamente. Como se
muestra en el cromatograma (b), el cambio de las condiciones para optimizar la separacioó n de
los componentes 5 y 6 hace que los picos de los cuatro primeros componentes se agrupen de
tal modo que su resolucioó n no sea satisfactoria. Sin embargo, en estas circunstancias el tiempo
de elucioó n resulta ser ideal. En una tercera serie de condiciones en las que los valores de k’
son oó ptimos para los componentes 3 y 4 se obtiene el cromatograma (c). De nuevo, la
separacioó n de los otros dos pares de componentes no es enteramente satisfactoria.
El fenoó meno ilustrado en la figura anterior se da con la suficiente frecuencia como para darle
un nombre el problema general de la elucioó n.
La teoríóa cineó tica considera que el ensanchamiento de las bandas (o picos) cromatograó ficos se
produce como consecuencia de que los distintos procesos de transferencia de masa durante el
desplazamiento de una especie a lo largo de la columna ocurren a velocidad finita. Seguó n esta
teoríóa, la forma de los picos depende de los siguientes factores:
* Equilibrio del soluto entre las fases moó vil y estacionaria no suficientemente raó pido.
Los tres factores mencionados normalmente se identifican con los paraó metros A, B y C y su
contribucioó n al ensanchamiento de las bandas cromatograó ficas conducen a la ecuacioó n de van
Deemter:
H=A+B/u+Cu
Donde u es la velocidad lineal media de la fase moó vil (u=L/t M; L=longitud de la columna;
tM=tiempo muerto). Este modelo es el claó sico, y puede considerarse anticuado, si bien, se
expondraó aquíó por su sencillez y valor didaó ctico. Por otra parte, la teoríóa se desarrolloó
inicialmente para cromatografíóa de gases con columnas empacadas, pero puede extenderse
sin demasiadas dificultades a otros tipos de cromatografíóa, incluyendo columnas tubulares
abiertas e incluso a cromatografíóa plana.
La cromatografíóa gas-líóquido el meó todo es gas líóquido donde la fase estacionaria es líóquido
absorbido sobre un soó lido el tipo de equilibrio es la distribucioó n entre un gas y un líóquido, en
cambio la cromatografíóa de líóquidos se lo realiza por un meó todo especíófico liquido-liquido o
reparto donde la fase estacionaria es un líóquido absorbido sobre un soó lido y el tipo de
equilibrio es la distribucioó n entre líóquidos inmiscibles.
26-6 ¿QUE VARIABLES SON LAS QUE MAS PROBABLEMENTE AFECTAN AL VALOR DE α
CORRESPONDIENTE A UN PAR DE ANALITOS?
N = 16 (tR/W)2
De este modo, N se puede calcular a partir de dos medidas de tiempo tR y W para calcular H
se ha de conocer tambieó n la longitud del relleno de la columna L.
Otro meó todo para evaluar N, que algunos autores creen maó s fiable se basa en determinar W½,
la anchura del pico a la mitad de su altura maó xima. El nuó mero de platos viene entonces dado
por:
N = 5.54 (tR/W½)2
El nuó mero de platos teoó ricos N y la altura de plato H se utilizan con frecuencia, tanto en la
bibliografíóa como por los fabricantes de instrumentos, para evaluar la eficiencia de la columna.
Para que esos nuó meros tengan sentido en la comparacioó n de dos columnas es esencial que se
haya determinado utilizando el mismo compuesto.
Los míónimos para la cromatografíóa de líóquidos generalmente se dan con caudales bastante
menores que para la cromatografíóa de gases y a menudo son tan bajos que en las condiciones
de trabajo habituales no llegan a observarse. Tal como se indica en la figura siguiente las
velocidades lineales de la fase moó vil en cromatografíóa de líóquidos son significativamente
menores que las que se utilizan en cromatografíóa de gases. Esto significa que las separaciones
por cromatografíóa de gases se completan en tiempos menores que las separaciones por
cromatografíóa de líóquidos.
26-11 ¿QUÉ ES LA ELUCION CON GRADIENTE?
Cuando una muestra estaó constituida por un gran nuó mero de componentes, puede ocurrir que
se consigan las condiciones oó ptimas para la separacioó n de algunos, pero ello vaya en
detrimento de otros. En estos casos suele recurrirse a cambiar las condiciones mientras se
realiza la separacioó n, para lo cual, puede utilizarse la elucioó n con gradiente (variacioó n gradual
de la composicioó n de la fase moó vil durante la elucioó n) o la programacioó n de temperatura
(variacioó n de la temperatura durante la elucioó n).
VM=1.37 mL
VS=0.164 mL
Calcular:
N = 16 (tR/W)2
NA = 16 (5.4/0.41)2 = 2775.49
NB = 16 (13.3/1.07)2 = 2472.04
NC = 16 (14.1/1.16)2 = 2363.97
ND = 16 (21.6/1.72)2 = 2523.31
∑ (N i −Ṅ )2
i=1
s=
n−1
s=
√
(2775.49−2533.7)2+(2472.04−2533.7)2+(2363.97−2533.7)2+(2523.31−2533.7)2
4−1
s = 174.34
H = L/N
24.7 cm −3 cm
H= =9.749 X 10
2533.65
26-13 CON LOS DATOS DEL PROBLEMA 26-12, CALCULAR PARA LOS PICOS A, B, C Y D
a) El factor de retención.
k = (tR - tM)/tM
b) El coeficiente de distribución.
K = k(VM/VS)
KB = 3.3 * 8.35 = 27
KC = 3.5 * 8.35 = 30
KD = 6.0 * 8.35 = 50
26-14 CON LOS DATOS DEL PROBLEMA 26.12 PARA LAS ESPECIES B Y C, CALCULAR
a) La resolución.
2 [(t R )C −(t R) B ]
RS =
W B +W C
RS = (2(14.1-13.3)/(1.07+1.16)) = 0.72
b) El factor de selectividad, α.
( t R )C−t M
∝C ,B =
( t R ) B−t M
αC,B = (14.1 - 3.1)/(13.3 – 3.1) = 1.8
( RS )1 √ N 1 0.717 √ 2534
= = =
( RS )2 √ N 2 1.5 √ N2
N2= 2534 * (1.5)2/(0.717)2 = 11090 platos
26-15 CON LOS DATOS DEL PROBLEMA 26.12 PARA LAS ESPECIES C Y D, CALCULAR
a) La resolución.
2 [(t R )D −(t R )C ]
RS =
W C +W D
N = 16 (tR/W)2
NA = 16 (10/0.76)2 = 2770.08
NB = 16 (10.9/0.82)2 = 2827.13
NC = 16 (13.4/1.06)2 = 2556.92
√
n
∑ (N i −Ṅ )2
i=1
s=
n−1
s=
√ (2770.08−2718.04)2+(2827.13−2718.04)2+(2556.92−2718.04)2
3−1
s = 142.42
2 [ (t R )2−(t R )1 ]
RS =
W 1+ W 2
a) El metilciclohexeno y el metilciclohexano.
RS = (2(10.9-10.0)/(0.82+0.76)) = 1.14
b) El metilciclohexeno y el tolueno.
RS = (2(13.4-10.9)/(1.06+0.82)) = 2.66
c) El metilciclohexano y el tolueno.
RS = (2(13.4-10.0)/(1.06+0.76)) = 3.74
( RS )1 √ N 1
=
( RS )2 √ N 2
L=N*H
K1 = 4.26*62.6/19.6 = 13.61
K2 = 4.74*62.6/19.6 = 15.14
K3 = 6.05*62.6/19.6 = 19.32
( t R )2−t M
∝1,2=
( t R )1−t M
α1,2 = (13.4 – 1.9)/(10.9 – 1.9) = 1.28
La teoríóa cineó tica considera que el ensanchamiento de las bandas (o picos) cromatograó ficos se
produce como consecuencia de que los distintos procesos de transferencia de masa durante el
desplazamiento de una especie a lo largo de la columna ocurren a velocidad finita. Seguó n esta
teoríóa, la forma de los picos depende de los siguientes factores:
* Equilibrio del soluto entre las fases moó vil y estacionaria no suficientemente raó pido.
Constantes de distribucioó n
Tiempo de Retencioó n
La altura de un pico cromatograó fico se obtiene uniendo las líóneas base a cada lado del pico por
una líónea recta y midiendo la distancia vertical desde esta líónea al pico. Esta medida
normalmente se puede hacer con una precisioó n razonablemente buena. Es importante
considerar, sin embargo que las alturas de pico estaó n inversamente relacionadas con las
anchuras de pico. Por ello, con las alturas de pico se obtienen resultados exactos solo si las
variaciones en las condiciones de la columna durante el tiempo necesario para obtener los
cromatogramas de la muestra y de los patrones no alteran las anchuras de pico. Las variables
que deben controlarse estrechamente son la temperatura de la columna, el caudal del eluyente
y la velocidad de inyeccioó n de la muestra. Ademaó s se ha de tener mucho cuidado para evitar la
sobrecarga de la columna. El efecto de la velocidad de inyeccioó n de la muestra es
particularmente críótico para los primeros picos del cromatograma. Al efectuar la inyeccioó n con
jeringa no es extranñ o que se originen errores relativos del 5 al 10 por 100.
VS
k =Kx
VM
kB
∝❑ =
kA
∝ = 2.62/2.54 = 1.03
N= 8.10x104
L=N*H
L = 8.10x104 x 2.2x10-3 cm
L = 1.78x102 cm.
e) Si se utiliza una velocidad lineal de flujo de 7.10cm/min, que tiempo se
necesitara para eluir las dos especies.
u = L/tM
tM = L/u
tM = 1.78x102 cm/7.10cm/min
tM =25.07 min.
26-23 Repetir los cálculos del problema 26.22 suponiendo que K M=5.81 Y KN=6.20.
VS
k =Kx
VM
kB
∝❑ =
kA
∝ = 2.62/2.45 = 1.07
N= 1.60x104
L=N*H
L = 1.60x104 x 2.2x10-3 cm
L = 35.2cm.
tM = L/u
tM = 35.2 cm/7.10cm/min
tM =4.96 min.
26.24 Las aéreas relativas de pico obtenidas por cromatografía de gases para una
mezcla de acetato de metilo, propionato de metilo y n-butirato de metilo fueron 17.6;
44,7 y 31.1, respectivamente.
26-25 LAS AREAS RELATIVAS DE PICO PARA LOS CINCO PICOS OBTENIDOS POR
CROMATOGRAFIA DE GASES EN LA SEPARACION DE 5 ESTEROIDES SE MUESTRAN MAS
ABAJO, ASI COMO LAS RESPUESTAS RELATIVAS DEL DETECTOR A LOS 5 COMPUESTOS.
CALCULAR EL PORCENTAJE DE CADA COMPUESTO EN LA MEZCLA.