Nombre del catedrático: Dra. Guicela Ramírez Bernal.

Nombre de la materia: Inocuidad y Control microbiano

Practica: Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de

microorganismos patógenos. Método para la estimación de la densidad de Coliformes
Fecales y E. coli por la técnica del NMP presentes en muestras de agua.

Equipo #1

 Espinoza Martínez Eros Ismael Matricula: 260958

 Hernández Reséndiz Demetrio Ossiel Matricula: 267504
 Manzanares Carpintero Héctor Bibiano Matricula: 197876
 Padrón Azua Jonathan Matricula: 265787
 Salas Sánchez Eduardo Matricula: 263339

Fecha de entrega: 25 de febrero de 2019.

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Introducción.

Los coliformes pueden proliferar en gran cantidad de alimentos, en agua y productos lácteos.
Pueden ser fácilmente destruidos por el calor utilizado en las diversas etapas de elaboración.
Si bien el índice de coliformes ha sido aplicado a la evaluación de los alimentos durante
muchos años, en algunos de ellos existen limitaciones.

El diagnóstico de estos microorganismos, requiere laboratorios especializados y representa

varios días de análisis y costos elevados. Como alternativa a estos inconvenientes, se ha
propuesto el uso de indicadores microbianos que se puedan identificar mediante el uso de
métodos sencillos, rápidos y económicos.

Actualmente se utilizan 3 grupos de indicadores microbianos con diferentes aplicaciones. La

detección de bacterias del grupo coliforme se usan como indicador de la calidad sanitaria del
agua o como indicador de las condiciones sanitarias en el procesamiento de alimentos. Los
coliformes totales, fecales y E. coli continúan siendo el indicador de elección que manifiesta
contaminación fecal reciente o condiciones higiénicas inadecuadas.
El método del NMP consiste de una prueba presuntiva y confirmativa. El uso de las series de
tres, cinco y diez tubos va a depender de la contaminación esperada y el grado de exactitud
deseada. El principio de la técnica se basa en la dilución de la muestra en tubos múltiples, de
tal forma que todos los tubos de la menor dilución sean positivos y todos los tubos de la
dilución mayor sean negativos.
El resultado positivo se demuestra por la presencia de gas y crecimiento microbiano
propiedad de los microorganismos coliformes para producir gas a partir de la fermentación de
lactosa a 45.5°C ± 0.2°C (para alimentos) 44.5°C ± 0.2°C (para agua) dentro de las 48h de
incubación (coliformes fecales y E. coli

Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la
lactosa a 44º C en vez de 37 ºC como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del
grupo de los Coliformes presentes en heces están formados por Escherichia coli y ciertas
especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en
las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de
contaminación fecal. Éstos últimos se denominan termotolerantes por su capacidad de
soportar temperaturas más elevadas. Esta es la característica que diferencia a Coliformes
Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino
de los animales homeotérmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de
materia orgánica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador
ideal de contaminación fecal. Su presencia se interpreta como una indicación de que los
organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento
estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.

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Objetivos:

 El alumno sabrá realizar determinaciones de coliformes fecales en agua según la NOM-

210-SSA1-2014, apéndice H.
 Preparación de diluciones y cultivos nutritivos para la inoculación de una carga
microbiana que será analizada y cuantificada por medio del método NMP.

Materiales y Métodos

 Muestras de agua  Probetas

 Asa de siembra  Pipetas estériles
 Tubos de ensayo con tapa esteriles  Mechero Bunsen
 Campanas Durham  Incubadora
 Placa Petri Estériles  Estufa
 Agua destilada estéril  Autoclave
 Gradilla de tubos  Balanza analítica
 Lunas de reloj, espátula  Caldo verde brillante
 Vasos precipitados  Caldo sulfato de lauril
 Matraz Erlemmeyer  Agar Mcconkey

Preparar el caldo indicado en Colocar en un reciente y Una vez finalizado el tiempo

la práctica, se vacía 0.1 ml esterilizar en la en la autoclave, se le
0.01, y colocarlo en cada uno autoclave introdujo (1ml 0.1ml y 0,01
de los 15 tubos teniendo antes ml) haciendo esto con cada 5
las campanas dentro de ellos. tubos una muestra de agua.

Sembrar en el caldo verde Finalizadas las 24 hrs y Se introducen a una

brillante e incubar por 24 observando un desarrollo, incubadora por 24
hrs extras y observar se prepran de nuevo 15 hrs, poniéndolo en un
desarrollo tubos pero ahora con recipiente
caldo verde brillante

Al observar desarrollo en el Incubar por 24 hrs, después

caldo verde brillante sembrar proceder a realizar la tinción
una azada del caldo en cajas de gram (frotis) y observar en
de Petri con agar mcconkey microscopio a objetivo x100
con aceite de inmersión.

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Resultados:

Al pasar las 24 horas del primer sembrado en el caldo lauril se logró observar un desarrollo de
gas en los tubos según el orden de las diluciones se presentaba así: 5-3-1 lo cual provoco que
prosiguiéramos con el sembrado en los tubos con el verde brillante. En el cual se logró
percibir además de un desarrollo de gas y formación de microorganismos, un cambio de
coloración de verde a amarillo lo cual nos indica la presencia del ácido derivado por la
fermentación de los carbohidratos en el medio, ya que este agar es altamente selectivo para
determinar especies diferentes de salmonella.

ejemplo Cantidad de muestra (g o ml) Valores positivos NMP estimado/g o

ml
0.1 0.01 0.001 0.0001 0.00001

A 5/5 5/5 2/5 0/5 0/5 5-2-0 490

B 5/5 5/5 5/5 2/5 0/5 5-2-0 4900

C 0/5 0/5 1/5 0/5 0/5 0-1-0 18

D 5/5 5/5 3/5 1/5 1/5 5-3-2 1400

E 5/5 5/5 5/5 5/5 5/5 5-5-5 ˂160000

Nuestros datos más aproximados fueron 5-3-2, porque en la disolución 1 fueron 3 tubos con
gas, y patógenos, en la disolución 2 fueron 5 y en la disolución 3 fue 1.dando así una
aproximación de 5-3-2

Debido a la inherente complejidad para calcular los límites de confianza de NMP lo más
común es el uso de tablas. Generalmente estas tablas están limitadas al uso de tres, cinco y
diez tubos por dilución, incluso usando un método aceptado, pueden presentarse datos
irregulares o accidentas de laboratorio que causan perdida de uno o más tubos de dilución.
Esto ocurrió debido a que el agua que vertimos en los tubos se encontraba contaminadas, y
para conocer dicho resultado se mantuvo en la autoclave durante 24 horas.
Al observar en el microscopio nuestro desarrollo se identificaron 3 tipos de microorganismos
cocos, bacilos y bacilo-cocos las cuales todas se pintaron de azul lo que las identifica como
gram positivas.

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Evidencias:

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Discusión:

Debido a la diferencia en las disoluciones de nuestros tubos se tomó como referencia el 5-3-2
para hacer énfasis al más cercano marcado en la norma NOM-210-SSA1-2014, apéndice H

De nuestros tubos en la dilución 1 se tomaron 3 tubos con crecimiento, 5 en la segunda

dilución y 1 en la tercera, dándonos una cantidad significativa para el desarrollo y crecimiento
microbiano en el agua muestra que se analizó.

Cabe señalar que en los análisis de diferentes equipos en el laboratorio no hubo desarrollo ni
crecimiento de microorganismos patógenos en sus muestras dando como dato una muestra
limpia y segura para el consumo humano en cuanto a microorganismos se refiere.

Conclusión:

El agua analizada que en este caso fue obtenida de un arroyo cercano a la universidad, nos
arroja un numero de 1400 NMP/ml lo cual es un valor relativamente bajo a comparación de
otros valores estimados en la norma; la evaluación de la calidad del agua se puede realizar a
través de indicadores de contaminación fecal que presentan un comportamiento similar a los
patógenos y que son fáciles rápidos y económicos de identificar. Teniendo asi un análisis
rápido y preciso.En conclusión, teniendo presente lo establecido en la norma según la sección
de tablas se puede decir que el agua no es apta para el consumo o utilización de la misma.

Bibliografia:

 DOF. (2014). NORMA Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, Productos y servicios.

Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores.
Determinación de microorganismos patógenos.. Junio 26, 2015, de Diario Oficial de la
Federacion Sitio web:
http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=5398468&fecha=26/06/2015
 Jay J. Microbiología Moderna de los Alimentos. Editorial Acribia S.A: Zaragoza
(España).2002, 4 edición, 615 pp.
 Vazquez, S., Oneill, S. & Legnani, M.. (2013). IMPORTANCIA DE LOS COLIFORMES
EN LOS ALIMENTOS. Septiembre 15, 2013, de Intendencia de Montevideo Sitio web:
http://www.montevideo.gub.uy/sites/default/files/importancia_de_los_coliformes_en_los
_alimentos.pdf
 Red Iberoamericana de Potabilización y Depuración del Agua. (2009). INDICADORES
DE CONTAMINACION FECAL EN AGUAS. En Agua potable para comunidades
rurales, reuso y tratamientos avanzados de aguas residuales domésticas(pp. 224-229).
España: Universitaria.
 MCD.LAB. (2015). Especificaciones Agar Verde Brillante. Febrero 24, 2019, de
MCD.LAB Sitio web: http://electronic-
systems.com.mx/pdf/AGAR%20VERDE%20BRILLANTE.pdf