RÉGIMEN DE OPERACIÓN:

Discontinua (régimen no estacionario): existe un periodo de alimentación, de

transformación y de descarga (Figura 2.5). En el estado no estacionario las variables de
proceso cambian y esto se debe a que existe alguna acumulación de materia y energía.

En este caso nos encontramos ante un régimen de operación no estacionario, esto debido
a que existe un periodo de alimentación, en el cual en este caso fue cuando la levadura
consumía el sustrato; existe un periodo de transformación en el cual la levadura empieza
a metabolizar el sustrato y generar productos nuevos y/o biomasa; y existe un periodo de
descarga en el cual la levadura ya consumió el sustrato y genero toda la materia posible.
 METODOLOGÍA (PRUEBA DE DNS)

Preparación del Reactivo.

2.- Se prepara una solución madre (SM) de

1.- Disolver los sólidos en la Glucosa en 500ml, en este caso 250mg de
mitad del volumen final, Glucosa disueltos en 500ml de agua
disolviendo primero el NaOH. destilada.

Azúcar Reductor.

1.-Para continuar la práctica de 2.- En el primer tubo se agrega 1ml de la

DNS se prepara una serie de 5 SM y de este tubo se toma 1ml para
tubos de la siguiente manera: agregarlo al siguiente tubo y así
.sucesivamente.

3.-Una vez terminadas las 4.-Posteriormente se llevan a

disoluciones se le agregan 3ml de ebullición por 15min y se dejan enfriar
DNS a cada tubo. a temperatura ambiente.

5.-Se leen las muestras en el

espectrofotómetro con una absorbancia
de 640nm y se procede a graficar los
resultados.
METODOLOGIA (CRECIMIENTO CELULAR Y CONSUMO DE SUSTRATO BMYE):

1. Preparar 1 matraz de 125 ml con 30 ml de 2. En el matraz para el inóculo (YPG) se

medio de cultivo compuesto por glucosa, propaga la levadura y se incuba en agitación
sulfato de amonio, fosfato monobásico de durante 24 h a 28 °C.
sodio y extracto de levadura y se prepara otro
matraz similar al empleado propagación
diluido a la quinta parte. El pH se ajusta a 5.0
y los matraces, se esterilizan.
3. En el biorreactor de fermentación se
inocula el líquido del matraz de propagación
en condiciones de esterilidad y se mantiene
en operación por lote durante 24 h. Tomar
4. Tomar muestras cada hora y determine su muestra inicial de 10mL.
densidad óptica a 600 nm, continue
operando el biorreactor hasta construir la
curva de crecimiento celular. 5. De las muestras tomadas, realizar
centrifugación para determinar peso húmedo
y seco de la biomasa, en centrifuga a 15000
rpm a 25°C.
6. Determinar la concentración de
glucosa por el método de azucares
reductores por DNS y leer a 640nm.
 RESULTADOS
a) Concentración de Biomasa

Muestra Tiempo Abs Concentración g/L

1 0.5 0.7621 0.7027
2 1 0.8578 0.8614
3 1.5 0.9821 1.1222
4 2 1.1856 1.7303
5 3 1.3891 2.6678
6 4 1.5874 4.0681
7 5 1.7508 5.7595
8 6 1.8336 6.8690
9 7 1.9101 8.0831
10 12 2.0599 11.1173

De acuerdo a la ecuación del gráfico, despejando x obtenemos la siguiente formula:

𝑦−0.9279
𝑥=𝑒 0.47

Esta fórmula nos permite determinar la concentración en g/L de la biomasa.

b) Solución de DNS
 Muestra Concentración g/L Abs
5 0.00016 0.0877
4 0.0008 0.0961
3 0.004 0.1100
2 0.02 0.1265
1 0.1 0.2061

Absorbancia de la glucosa a diferentes concentraciones por

DNS
0.2500
y = 1.099x + 0.0978
R² = 0.9755
0.2000
Absorbancia

0.1500

0.1000

0.0500

0.0000
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12
Concentración de la glucosa g/L

De acuerdo a la ecuación del gráfico, despejando x obtenemos la siguiente formula:

𝑦 − 0.0978
𝑥=
1.099
Esta fórmula nos permite determinar la concentración de la glucosa en la solución
problema.
c) Determinación de concentración de glucosa en el medio por DNS

Muestra Concentración g/L Abs

1 2.204549591 2.5206
2 1.555959964 1.8078
3 1.508462238 1.7556
4 1.299818016 1.5263
5 1.265241128 1.4883
6 1.164513194 1.3776
7 1.068243858 1.2718
8 0.975705187 1.1701
9 0.48844404 0.6346
10 0.561146497 0.7145
 d) Biomasa y glucosa
Tiempo Concentración biomasa g/L Concentración glucosa g/L Concentración biomasa g/mL Concentración glucosa g/mL ln de biomasa µ Grado de Multiplicación
0.5 0.7027 2.204549591 0.0007027 0.00220455 -7.2605805 - 3.981441514
1 0.8614 1.555959964 0.0008614 0.00155596 -7.05695159 0.4072578 Rendimiento X/S
1.5 1.1222 1.508462238 0.0011222 0.001508462 -6.79246423 0.5289747 6.337215769
2 1.7303 1.299818016 0.0017303 0.001299818 -6.35946048 0.8660075 Tiempo de Duplicación
3 2.6678 1.265241128 0.0026678 0.001265241 -5.92650112 0.4329594 1.345514491
4 4.0681 1.164513194 0.0040681 0.001164513 -5.50457922 0.4219219
5 5.7595 1.068243858 0.0057595 0.001068244 -5.15690461 0.3476746
6 6.8690 0.975705187 0.006869 0.000975705 -4.98073674 0.1761679
7 8.0831 0.48844404 0.0080831 0.000488444 -4.81797982 0.1627569
12 11.1173 0.561146497 0.0111173 0.000561146 -4.49925283 0.0637454
0.515154